NORMA DE INDICACIÓN Y TOMA DE MUESTRAS PARA HEMOCULTIVOS.

HEMOCULTIVO: Es un examen microbiológico que permite la detección en el laboratorio, de una bacteremia, lo cual contribuye a adecuar la terapia antimicrobiana de acuerdo al microorganismo aislado y a la sensibilidad in vitro que éste presente, ya que la terapia, generalmente se plantea en forma empírica. Hemocultivos positivos pueden indicar : 1.-Bacteremia real por agente patógeno: •Bacteremia primaria: sin foco evidente de infección en otro sitio. •Bacteremia secundaria: existe foco de infección primaria con el mismo agente, como : Infección del tracto urinario, Infección respiratorio, Infección de herida operatoria. Otros. 2.-Bacteremia transitoria: Instrumentación de mucosas contaminadas. Cirugía de áreas contaminadas. 3.-Contaminación: La incidencia de bacteremia, varía de acuerdo al tipo de infección que la origina, por ejemplo: Porcentaje de Bacteremia : Endocarditis bacteriana 77-100 % Neumonia Bacteriana 20-30 % Artitis séptica 10-60 % Neutropénicos febriles 20-30 % Meningitis bacteriana 45-55 % Haemophilus influenzae tipo b 80 % Neisseria meningitidis 33 % Streptococcus pneumoniae 52 % Niños febriles menores de 2 años 6 % La detección en el laboratorio de una bacteremia depende de numerosos factores: -Indicación del examén -Número de muestras cultivadas -Volumen de sangre cultivada -Dilución de cultivo -Aditivos del medio. INDICACION CLINICA DE HEMOCULTIVO: -Infección del SNC. -Lactante menor de 03 meses con hipertermia (mayor de 39.5) -Síndrome febril de más de 04 días de evolución, sin foco clínico evidente. -Pleuroneumonias. -Paciente inmunodeprimido, con fiebre -Sospecha clínica de septicemia. -Cardiopatía, con fiebre, sin foco clínico evidente. -Osteoartritis aguda. -Celulitis facial en niño menor de 05 años.

• Ambas muestras pueden ser obtenidas en el mismo momento. lo cual generalmente coincide con un periodo de calofríos. EVITAR CONTAMINACION: Debido. • En pacientes con terapia antimicrobiana la muestra debe ser obtenida inmediatamente antes de la próxima dosis de antimicrobiano. Se ha demostrado que en un episodio bacterémico la positividad de una. Paciente con sospecha de Endocarditis bacteriana: obtener 2 muestras para hemocultivo. puede plantear problemas en la interpretación del examen. a que el aislamiento de microorganismos habituales de la flora bacteriana de piel. se recomienda tomar un volumen total de 20 ml en las 2 muestras. •Niños: El volumen es variable según edad: Edad Recién Nacidos Lactantes de 1mes a 2 años Mayores de 2 años Adolescentes INTERVALO DE TOMA DE MUESTRA: Se ha documentado que el mejor momento para obtener la muestra de sangre es entre 2 horas a 30 minutos antes del peak febril. si estos van negativos a las 24 horas . disminuye la positividad diagnóstica y la evaluación de contaminación. dos y tres muestras para hemocultivo es de 91%. VOLUMEN DE MUESTRA: •Adultos: Por la baja incidencia de las bacteremias en los adultos. 98% y 99% respectivamente. existe una relación directa entre el volumen de sangre cultivada y el porcentaje de bacteremias detectadas. En ningún momento está recomendado la obtención de una muestra de sangre para hemocultivo en forma aislada. para evitar su contaminación. . • Se debe obtener los 2 hemocultivos en un periodo máximo de 24 horas.NÚMERO DE MUESTRAS CULTIVADAS: La mayoría de las bacteremias. son intermitentes y de baja magnitud. de diferentes sitios de punción. al no existir diferencia significativa al tomar 2 o 3 muestra se indicará: Adultos: 2 muestras. obtener un segundo set de 2 hemocultivos más. (07-10ml por muestra). • Volumen 1-2 ml 2 a 3 ml 5ml 10ml . no siendo necesario fijar plazos determinados entre una muestra y otra. por lo tanto. Niños : 2 muestras. con excepción de las asociadas a endocarditis bacteriana e infecciones intravasculares y las que se producen en los niños. se hace necesario extremar las precauciones en la toma de muestra.

Medicina Infantil. La contaminación de hemocultivos no debe superar el 3% SISTEMA AUTOMATIZADO DE HEMOCULTIVOS BACTEC 9050 Recepción de Muestras: La recepción se realizará las 24 hrs. * Pielonefritis. * Síndrome febril de más de 04 días de evolución. * Paciente inmunodeprimido. decoloración u oscurecimiento o el tampón hinchado o hundido. en un lugar seco. • Para la toma de muestra se puede utilizar sistema de extracción al vacío.C.C. Infecciosos y U. del día. sin foco clínico evidente. fuera de la luz directa del sol. . de acuerdo a Norma de toma de muestras para hemocultivos. * Lactante menor de 03 meses con hipertermia (mayor de 39.5ºC). el frasco se debe devolver a Laboratorio Central. -Lavado de piel del paciente con agua y jabón. cuando los frascos que se usan. El método autoanalizador Bactec 9050. Indicaciones: * Infección bacteriana del S. Se sabe que los porcentajes de contaminación se reducen.I. * Sospecha clínica de septicemia.Se recomienda: -Técnica aséptica en la toma de la muestra. (Meningitis purulenta). el frasco de cultivo debe estar a temperatura ambiente. -Uso de antiséptico.N. está actualmente implementado para los servicio de: Medicina Adulto. Toma de muestras: • La muestra debe extraerse utilizando técnica aséptica para reducir la posibilidad de contaminación. *En el momento de la toma de muestra. *Se debe examinar cada frasco antes de usarse para ver si presenta indicios de daño. si es así. La implementación de este método para otros servicios clínicos será informada oficialmente en el momento que se produzca. * Celulitis facial en niño menor de 05 años. * Osteoartritis aguda. están cerrados con tapón de goma a través del cual se inyecta la sangre.. *Conservar entre 2ºC y 25ºC. * Pleuroneumonias. turbidez. con fiebre. contaminación o deterioro como: derrames. con fiebre sin foco clínico evidente. * Cardiopatía. Frascos de cultivo: (frascos BACTEC) *Serán entregados a cada servicio por Laboratorio Central.

se enviará al 5º día de cultivo. Informe : * Informe final negativo. cuidando no escribir sobre el código de barras. En general existen 3 tipos de sistemas de hemocultivos: . del día.05% de polianetol sulfonato de sodio (SPS) como anticoagulante.Automatizados Manual: El medio de cultivo debe contener 0.N° MUESTRAS : Adultos : 02 (I-II) Niños : 02 (I-II) Volumen x muestra : Volumen x muestra : Adultos : 08 – 10 ml De acuerdo a tabla de volumen según edad. En los sistemas manuales la elección del medio de cultivo. * Informes positivos.2%. Peptostreptococcus. además inactiva el complemento. este efecto puede ser neutralizado suplementando el medio con gelatina 1.Semi-automatizados: Lisis-centrifugación .Manuales o convencionales . • Los frascos deben identificarse con el nombre del paciente en el lugar señalado en la etiqueta. Gardnerella y algunas cepas de Neisseria spp. son inhibidas por el SPS. Una desventaja de este sistema con relación al automatizado es el mayor riesgo de contaminación por la manipulación de las botellas al realizar los procedimientos de tinción y traspasos. la temperatura y atmósfera de incubación es decisión del microbiólogo basado en el diagnóstico clínico. se comunicarán inmediatamente.025 a 0. Recepción de muestras: La recepción se realizará las 24 hrs. . neutraliza lisozimas y algunos antibióticos del grupo de aminoglicósidos. este inhibe la actividad bactericida del suero contra muchas bacterias y la fagocitosis.

se considera el método de elección en bacteriemias por Micobacterias (pacientes HIV) y permite realizar hemocultivos cuantitativos que son útiles para diagnóstico de bacteriemia relacionada a Catéter Venoso Central (CVC) 2. saponina como agente lítico de eritrocitos. En general. Sin embargo dado que este momento no se puede predecir.SISTEMAS SEMI AUTOMATIZADOS: LISIS-CENTRIFUGACIÓN Consiste en un tubo de lisis cuyo contenido es polianetol sulfonato de sodio como anticoagulante. tintura de yodo o con clorhexidina alcohólica. con un aumento de los falsos positivos de 1. siempre por una nueva punción y debe ser la primera muestra que debe obtenerse si existe indicación de otros exámenes. La desinfección de la piel se realiza con povidona yodada. momento que puede ser precedido por calofríos (Figura Nº3). si se trata de un paciente que va a requerir inicio inmediato de antimicrobianos. se hace una tinción de Gram y se informan precozmente. leucocitos y macrófagos. de diferentes sitios de punción. se recomienda en forma arbitraria obtener dos hemocultivos en 24 horas separados por 30 a 90 minutos o bien obtener los dos hemocultivos al mismo tiempo. fluorométricas y/o colorimétricas.7 a 3.2 MÉTODO DE OBTENCIÓN DE LA MUESTRA La muestra debe obtenerse por punción periférica (venosa o arterial).0 TOMA DE LA MUESTRA 4. este método permite mejorar en un 25 a 50% la detección de hongos levaduriformes y filamentosos. con gluconato de clorhexidina al 2-4% o con agua y jabón. La muestra obtenida por catéter venoso central esuna muestra inadecuada. anaeróbicos. 4.6). aplicado en forma excéntrica desde el sitio de punción elegido. lavador quirúrgico. la piel debe ser lavada con povidona yodada. El computador asociado a los equipos relaciona las mediciones con índices y/o gráficas de crecimiento microbiano que dan un aviso cuando la detección sobrepasa un punto de corte. la recuperación de microorganismos en el hemocultivo obtenido a través del catéter puede corresponder al arrastre de las bacterias que están colonizando la superficie interna más que a la presencia de bacterias en el torrente sanguíneo. micobacterias y con resinas que captan antibióticos) que se incuban en equipos que agitan constantemente las muestras y que poseen modernos sistemas de detección microbiana.1 MOMENTO DE LA OBTENCIÓN DE LA MUESTRA Se ha documentado que el mejor momento para obtener la muestra de sangre es entre 2 horas a 30 minutos antes del peak. Después de la palpación de la vena. Luego se somete a la muestra a una centrifugación a alta velocidad que permite la concentración de microorganismos en el sedimento que se siembra en medios de cultivo específicos (9. prácticamente no existe la posibilidad de que los hemocultivos se contaminen en el laboratorio. según lo que se haya utilizado como lavador. hongos. 4. ya que en la actualidad con los sistemas automatizados de hemocultivos que evitan la manipulación de los mismos. polipropilenglicol como antiespumante y un fluoroquímico inerte de alta densidad. ya que estudios de microscopía electrónica revelan que el 100% de los catéteres se colonizan con microorganismos de la piel a las 48 horas de instalados (25).3 SISTEMAS AUTOMATIZADOS Los sistemas automatizados consisten básicamente en botellas con diversos medios de cultivo (aeróbicos.3 PREPARACIÓN DE LA PIEL Este aspecto es esencial si se quiere evitar la contaminación de los hemocultivos. Se . espectrofotométricas. Por esto. Las botellas se descargan. Estos se basan en la detección de productos del metabolismo bacteriano (CO2) mediante técnicas radiométricas.8% (10). 4.

En ningún caso se recomienda la obtención de sólo un hemocultivo y en el último tiempo se ha considerado la evaluación de los hemocultivos solitarios (únicos) como un instrumento para evaluar el control de calidad en microbiología (29). 3 a 5 ml para niños mayores de 2 años y 10 ml para adolescentes. 4. se debe destapar el frasco para inocular la muestra.5 INOCULACIÓN DE LAS BOTELLAS En el caso de los sistemas automatizados. 4. un meta-análisis reciente demuestra que el cambio de aguja disminuye el porcentaje de contaminación (33). En el caso de los sistemas manuales que no son sellados. Este procedimiento tiene riesgo de contaminación por lo que se debe tener máxima precaución en no tocar las paredes exteriores de la botella con la aguja. obtener un segundo set de 2 hemocultivos más.4 VOLUMEN DE LA MUESTRA Se considera actualmente una de las variables más críticas en el aumento de la positividad de los hemocultivos. se debe retirar completamente con agua para evitar quemaduras. esta dilución permite neutralizar las propiedades bactericidas de la sangre y de los agentes antibacterianos que puedan estar presentes en la muestra. 2 a 3 ml para lactantes de 1 mes a 2 años.6 NÚMERO DE LOS HEMOCULTIVOS La obtención de 2 hemocultivos en 24 horas. que deben ser estériles cuando se requiere nuevamente la palpación de la vena. Siempre la punción debe ser efectuada con guantes.debe esperar que el antiséptico se seque para que ejerza su acción residual (30). Si se utiliza tintura de yodo. Si se sospecha endocarditis infecciosa. se debe descontaminar el tapón de goma antes de puncionar la botella con alcohol y esperar que se seque. Para la gran mayoría de los sistemas automatizados este volumen es de 10 ml para adultos y es variable para los niños según la edad: 1 a 2 ml para recién nacidos. Dado que la mayoría de las bacteriemias son de baja magnitud (< 1 a 10 ufc/ml) a mayor volumen de muestra obtenido. no sólo aumenta la probabilidad de recuperar las bacterias a partir de la sangre sino que también permite diferenciar una bacteriemia verdadera de una contaminación. Por esto es que las recomendaciones son obtener el máximo de volumen que la botella sea capaz de tolerar manteniendo la relación 1:5 a 1:10 entre la muestra y el volumen de medio de cultivo. . ya que el fabricante no garantiza la esterilidad de éste. 4. mayor es la sensibilidad del hemocultivo. Se sabe que por cada ml adicional de muestra que se inocule en la botella aumenta la positividad entre un 2 a 5%. se recomienda obtener el primer set de 2 hemocultivos y si estos van negativos en las primeras 24 horas.

.0 MANTENCIÓN Y TRANSPORTE DE LAS BOTELLAS Mantener a temperatura ambiente y enviar rápidamente al laboratorio. En ese momento hacer tinción de Gram directo de la siguiente forma: homogeneizar el contenido del frasco de hemocultivo por agitación suave.(Tabla Nº3).Realizar subcultivos ciegos aunque no se observen evidencias de desarrollo a las 24 horas y al 7º día de incubación.1 PROCEDIMIENTOS GENERALES Mantener las precauciones de bioseguridad universales para nivel II para el manejo de líquidos corporales. colonias. en la toma de muestra y en el transporte (Tomo Bioseguridad). Subcultivar a una placa de agar chocolate suplementado y a una placa de agar sangre de cordero al 5%.5. independientemente del aspecto macroscópico que presente la botella. Nunca refrigerar. (Tabla Nº2).Observar diariamente el aspecto macroscópico en busca de signos que indiquen desarrollo bacteriano: hemólisis. turbidez. etc. Las muestras se transportan a temperatura ambiente. . presencia de gas. 6.0 PROCEDIMIENTO 6. La incubación a 35ºC debe realizarse lo antes posible.. pudiendo darse como máximo de tiempo 2 horas desde que se tomó la muestra. colocar una gota en el extremo del porta objeto y extender con un cubre objeto en ángulo 45º. c.Los hemocultivos corrientes se incuban por 7 días a 35ºC en atmósfera normal y en endocarditis bacteriana subaguda hasta 14 días.. a. b.

c. b.05-0.) b. 6.. Algunos medios usados para hemocultivo son: Caldo cerebro corazón. 6. e.Sistema bifásico (Brucella spp.001%. aureus. a.Efectuar las pruebas bioquímicas y estudio de susceptibilidad antimicrobiana que corresponda al tipo de aislamiento. d. caldo soya tripticasa.Medios específicos para anaerobios: Caldo Tioglicolato.. a 35ºC.. Los cultivos para Leptospira deben incubarse en oscuridad a 28-29ºC por 4-6 semanas.001% o L-cisteina. Métodos alternativos. a 35ºC. d.1 Streptococcus NUTRICIO-DEFICIENTES Algunas cepas de Streptococcus viridans son dependientes de Piridoxal para su crecimiento.Medios específicos para aislamiento de micobacterias...2.Observar la presencia de pequeñas colonias satélites alrededor de S. 6.. a. Al parecer el Piridoxal (vitamina B6) presente en la sangre humana permite el desarrollo de estos microorganismos en el medio de hemocultivo.Sembrar cruzando la superficie del agar con Staphylococcus aureus e incubar 18 hrs. el medio de cultivo es un medio enriquecido que consiste en un caldo adicionado de suero de conejo. pero como este elemento no se encuentra presente en los medios en que se realiza el subcultivo. incubar en atmósfera normal por 7 días.3 EXAMEN DE LOS CULTIVOS . caldo peptonado suplementado.2 MICROORGANISMOS DE PARED DEFICIENTE Se sospecha frente a un paciente con endocarditis bacteriana que presenta hemocultivos negativos.Incubar la placa por 18 hrs. 6. Se debe sospechar la presencia de estos microorganismos cuando se observan al Gram la presencia de cocáceas y no se obtiene desarrollo en los subcultivos en diferentes atmósferas (aerobio-anaerobio).. Otros medios son: a.2.Subcultivar hemocultivos positivos en agar sangre cordero al 5% suplementado con Piridoxal al 0..Observar características macroscópicas de las colonias y hacer tinción de Gram directo.1% o ambos. Para hemocultivos anaeróbicos si se utilizan medios comerciales específicos.d. c..Observar la presencia de colonias satélites alrededor del disco.Colocar asépticamente un disco de Piridoxal (catálogo Remel Nº21-137) en el área con mayor inoculo..2. o L-cisteina al 0.Medios específicos para aislamiento de hongos. caldo Brucella. c. PROCEDIMIENTOS ESPECÍFICOS En sospecha de Brucelosis incubar hasta 30 días en atmósfera con 5-10% CO2. caldo Columbia. estos deben ser suplementados con Piridoxal al 0..Inocular una placa de agar sangre con varias gotas del medio suplementado que contiene el microorganismo sospechoso.. Para efectuar el aislamiento se recomienda incorporar al medio de cultivo sacarosa o manitol al 10%. b.

* y Carlos Pérez C. HEMOCULTIVOS Profesionales de la Sección Bacteriología General. Brucella. Se debe notificar al clínico todos los resultados.0 ENVÍO AL LABORATORIO DE REFERENCIA Enviar al Laboratorio de Referencia del Instituto de Salud Pública en caso de aislamiento debacterias como: Salmonella spp. Patricia García C. para confirmación y vigilancia epidemiológica de acuerdo a lo indicado en el reglamento N° 712 sobre notificación de enfermedades transmisibles. 10. Streptococcus pneumoniae provenientes de cuadros invasores.2 INFORME DEFINITIVO Indicar el período de incubación durante el cual no se observó desarrollo cuando se emite un informe negativo. 9. indicando: cantidad. Haemophilus influenzae. Leptospira (solo muestras de suero). Para un hemocultivo positivo informar el microorganismo identificado con su respectiva susceptibilidad a antimicrobianos cuando corresponda.9. Si dispone de sistemas automatizado.. Neisseria meningitidis. Dra. incluidos los presuntos contaminantes. informe las horas transcurridas hasta la positividad.* *Pontificia Universidad Católica de Chile . morfología y agrupación.0 INFORME DE RESULTADOS 9.1 PREINFORME Informar de inmediato al médico si se observan bacterias al Gram.

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