Captulo 5. INTRODUCCIN A LA BIOQUMICA.................................................................................... 122 5.1. CLASIFICACIN GENERAL DE LOS MICROORGANISMOS .................................................... 122 5.2. METABOLISMO MICROBIANO .....................................................................................................

125 5.3. FUNDAMENTOS DE BIOQUIMICA ............................................................................................... 134 5.3.1. Caractersticas de las enzimas ...................................................................................................... 135 5.3.2. Propiedades de las enzimas. ......................................................................................................... 136 5.3.3. Mecanismos de la accin enzimtica............................................................................................ 136 5.3.4. Clases principales de enzimas ...................................................................................................... 138 5.4. C O F A C T O R E S .......................................................................................................................... 138 5.5. TRAZAS Y ELEMENTOS MAYORES............................................................................................. 139 5.6. BIOQUIMICA DE LOS CARBOHIDRATOS ................................................................................... 139 5.7. BIOQUIMICA DE LAS PROTEINAS ............................................................................................... 141 5.8. BIOQUIMICA DE LAS GRASAS Y ACEITES ................................................................................ 142 5.9. SULFORREDUCCIN Y SULFATACIN ...................................................................................... 144 5.9.1. SULFORREDUCCIN................................................................................................................ 145 5.9.2. SULFATACIN. ......................................................................................................................... 147

Captulo 5. INTRODUCCIN A LA BIOQUMICA

El campo de la ingeniera ambiental ha desarrollado los procesos de tratamiento de efluentes con una gran cobertura en procesos biolgicos que utilizan microorganismos para descomponer las grandes molculas orgnicas que conforman los seres vivos, en molculas ms pequeas que puedan ser fcilmente retiradas del vertimiento. Estos tratamientos se basan en las reacciones qumicas que los microorganismos realizan en su metabolismo y por esta razn se plantea este capitulo que introduce las bases elementales de la

bioqumica, de los microorganismos y de su accin. Tambin los microorganismos actan en la naturaleza y manejan reacciones que pueden llegar a producir contaminaciones de aguas y fenmenos de fsicos que cambian los compuestos inorgnicos para producir su energa estableciendo de paso los ciclos de cada elemento de acuerdo a su interaccin natural.

5.1. CLASIFICACIN GENERAL DE LOS MICROORGANISMOS

Para entender mejor las reacciones bioqumicas es importante tener en cuenta la accin de los microorganismos y su metabolismo que hace posible las degradaciones de los compuestos orgnicos presentes en el agua. La bioqumica esta de la mano de la microbiologa y su desarrollo es complementario. CLASIFICACIN GENERAL (12): Grupo
Eucariticos

estructura celular
eucaritica

caracterizacin
multicelular. gran Diferencia entre clulas Tejidos.

miembros representativos
plantas y animales

Unicelular. Sin diferenciacin o muy poca de tejidos. Eubacterias procariticos sin membrana nuclear qumica celular. Parecidos a las eucarioticos. qumica celular distinta

algas, hongos, protozoos

La mayora de las Bacterias

Arqueobacterias procarioticas

metanogenicas, halofilos,

122

Termoacidofilos.

Las clulas de los organismos mayores estn recubiertas por membranas celulares compuestas por protenas y lpidos, protegen a la clula de materiales txicos. El citoplasma contiene protenas y cidos nucleicos principalmente, las protenas son

sintetizadas en el ribosoma celular, el ncleo de la clula es el centro de control de los procesos, contiene el ADN.

Los procesos de metabolismo energtico se llevan a cabo en la mitocondria donde carbohidratos protenas y grasas son metabolizados para obtener dixido de carbono, agua y energa. El mejor ejemplo de respiracin celular es la oxidacin de la glucosa:

C6H12O6 + 6O2

6CO2

+ 6H2O + energa

A diferencia de las clulas de los animales, las clulas vegetales tienen pared celular compuesta de celulosa que le da la rigidez y la fortaleza a la planta. Las clulas que manejan la fotosntesis contienen cloroplastos que absorben energa de la luz para convertirla en energa qumica (alimento), parte de este alimento se almacena como almidn.

Las clulas vegetales que utilizan la luz del sol como fuente de energa y el dixido de carbono como una fuente de Carbono, son llamadas autotrofas y siguen bsicamente la reaccin: 6CO2 + 6H2O + luz solar C6H12O6 + 6O2

para producir azcares con alto contenido de energa. Estos azcares pueden convertirse en almidn insoluble en agua, celulosa para la pared celular y otros materiales y sirve como fuente de energa bsica para el resto de los procesos de la planta.

Las clulas animales pueden depender de materiales orgnicos manufacturados por las plantas y de sus alimentos. Estas clulas son llamadas heterotrofas, ellas actan como

123

medio en la reaccin qumica entre el oxgeno y el material alimenticio utilizando la energa de la reaccin para desarrollar sus procesos biolgicos.

Los mayores reactivos biolgicos son protenas, carbohidratos y lpidos y el catalizador de las reacciones bioqumicas se denomina enzima.

Estructura tpica de microorganismos celulares: a) eucariotico b) procariotico. (12)

124

5.2. METABOLISMO MICROBIANO Los microorganismos desarrollan actividades qumicas en forma organizada a travs de las clulas que comprenden la produccin y utilizacin de energa, proceso que se conoce con el nombre de metabolismo.

La bioenergtica estudia las formas de producir y consumir energa por parte de las clulas. Gran cantidad de clulas obtienen energa atravs de una serie de reacciones qumicas que liberan energa. Otras utilizan la luz como fuente energtica pero, deben convertirla a energa qumica para poder utilizarla.

Para estudiar los distintos procesos metablicos se debe partir del concepto de energa libre G o sea la cantidad de energa liberada o consumida durante el desarrollo de una reaccin qumica; teniendo en cuenta que la energa til es el cambio en energa libre. Una reaccin es endergnica cuando requiere energa y G es positiva, y una reaccin es exergnica cuando libera energa siendo G negativa. G se relaciona con la constante de equilibrio de la reaccin, as: G a 25C y 1 atm. = - R T Ln Keq. Donde R= constante de los gases y T= temperatura absoluta

La energa puede obtenerse de una reaccin qumica en la forma de potencial elctrico. La energa elctrica es generada cuando la oxidacin ocurre por remocin de electrones; se produce energa cuando los electrones caen atravs de una diferencia de potencial. G = - n F E Siendo n = nmero de electrones transferidos, F= constante de Faraday y E= diferencia de potencial de oxido-reduccin estndar.

Para la vida es esencial que la energa liberada de una reaccin exergnica sea usada para efectuar las reacciones endergnicas. Este acoplamiento de reacciones se basa en el

125

principio de un reactante comn. Los reactantes comunes son muy tiles a las clulas y se denominan compuestos de transferencia de alta energa. Entre los principales estn: el ATP adenosin trifosfato; el GTP guanosintrifosfato; el UTP uridintrifosfato; el CTP o citidintrifosfato; el cido fosfoenol pirvico y el acetil fosfato. Por ejemplo para el ATP(1):

ATP + H2O ADP + H2O AMP + H2O

ADP + H3PO4 AMP + H3PO4 ADENOSINA + H3PO4

G = -7,3 Kcal/mol G = -7,3 Kcal/mol G = - 2 Kcal/mol

Los procesos metablicos comprenden la oxidacin: o sea la remocin de electrones o de tomos de hidrogeno, con ayuda de la coenzima A, la cual es reducida y convertida en NADH; y la Fosforilacin oxidativa o sea cuando los electrones son transferidos del NADH atravs de una serie de reacciones utilizando coenzimas, hasta el aceptor final de electrones.

Durante estas transferencias una parte de la energa disponible es transferida al ADP (adenosin difosfato), y otra parte se pierde como calor, debido a una transferencia ineficiente.

126

Parte del ATP puede formarse directamente en las transformaciones orgnicas, como en la transformacin de glucosa en piruvato.

El nitrato puede utilizarse como aceptor final de electrones por organismos facultativos que viven en condiciones intermedias entre aerobias y anaerobias, llamadas anoxicas, las cuales se caracterizan por producir finalmente CO2, H2O y Nitrgeno gaseoso y no producen metano, dixido de carbono y cido sulfhdrico como en condiciones anaerobias.

La oxidacin es la prdida de electrones y la reduccin la ganancia de los mismos, muchas reacciones de oxidacin son deshidrogenaciones. La oxidacin incluye la transferencia de electrones por una sustancia reducida denominada donador de electrones a una sustancia oxidada llamada aceptor de electrones.

Pueden ser donadores de electrones: los alimentos, el amoniaco NH3, el cido sulfhdrico H2S, el Hidrogeno H2 y el Hierro ionico Fe. La materia orgnica es utilizada como alimento por las bacterias y los hongos como lo hacen los animales mayores. Sinembargo algunas bacterias utilizan materia inorgnica reducida, como fuente de energa.

Se llaman heterotrofas las que necesitan oxidar materia orgnica como fuente de energa y autotrofas (capaces de mantenerse a s mismas) las que oxidan materia inorgnica que toman del medio como Nitrgeno, Azufre, Fsforo, dixido de carbono e Hidrgeno.

La energa es transferida

del donador de electrones al organismo por una serie de

reacciones enzimticas, para sntesis y mantenimiento. ADP + fosfato + energa ATP + H2O

127

Aceptor de eProductos finales ENERGA Donador de

CO2

CLULAS

OXIDACIN BIOLGICA

El ADP utiliza la energa liberada en la oxidacin para formar un enlace con fosfato y formar otro nucletido: ATP que viaja atravs de la clula y entrega esa energa.

128

En la respiracin aerobia el aceptor final de electrones es el oxgeno, en la anaerobia, el aceptor final puede ser uno de los siguientes compuestos: fumarato, NO3-, SO4-2 el CO3-2. En la fermentacin, el aceptor final de electrones es un compuesto orgnico. En la transferencia de energa el ATP desempea el papel de unidad de cambio, similar al de una moneda, y por lo tanto el nmero de molculas de ATP que se forman constituye el factor crucial de la reaccin productora de energa.

Por medio de los procesos de fermentacin, una molcula de glucosa da lugar a dos de ATP, y en cambio en el proceso de respiracin se forman 38 molculas de ATP.
GLUCOLISIS Condiciones aerobias: GLUCOSA Ferm METABOLITOS INTERMEDIOS resp. O2 Piruvato CO2 + H2O

Condiciones anaerobias Glucosa a. pirvico productos de fermentacin

C6H12O6 + 2NAD + 2ATP + 2Pi Glucosa fsforos inorgnicos

2CH3COCOOH + 2NADH + 2ATP cido pirvico

Parte del ATP puede formarse directamente en las transformaciones orgnicas, como en la transformacin de glucosa en piruvato.

El nitrato puede utilizarse como aceptor final de electrones por organismos facultativos que viven en condiciones intermedias entre aerobias y anaerobias, llamadas anoxicas, las cuales se caracterizan por producir finalmente CO2, H2O y Nitrgeno gaseoso y no producen metano, dixido de carbono y cido sulfhdrico como en condiciones anaerobias.

Las reacciones balanceadas para estas oxidaciones y reducciones pueden ser obtenidas por combinacin de las reacciones medias de la siguiente tabla tomada de Sawyer:

129

Reaccin media

Go (W) Kcal/e equ.

Reacciones para sntesis celular (Rc) Amonio como fuente de nitrgeno 1. 1/5 CO2 +1/20 HCO3- +1/20 NH4+ +e = 1/20 C5H7O2N + 9/20 H2O nitrato como fuente de nitrgeno 2. 1/28 NO3- +5/28 CO2 + 29/28 H+ + e = 1/28 C5H7O2N + 11/28 H2O reacciones para aceptores de electrones (Ra) Oxigeno 3. O2 + H+ + e 1/5 NO3-2

= 1/2 H2O nitrato

+

-18.675

4.

+ 6/5 H + e
+

= 1/10 N2 + 3/5 H2O sulfato = 1/16 H2S +1/16 HS- + 1/2 H2O = 1/8 CH4 + 1/4 H2O

-17.128

5.

1/8 SO4

+ 19/18 H + e

5.085

dixido de carbono (fermentacin metanognica) 6. 1/8 CO2 + H+ + e 5.763

reacciones para donador de electrones (Rd) donadores orgnicos(reacciones heterotroficas) residuos domsticos 7. 9/50 CO2 + 1/50 NH4+ + 1/50 HCO3- + e 6/33 CO2 + H+ + e carbohidratos (celulosa, almidn, azucares) 9. CO2 + H+ + e lpidos (grasas y aceites) 10. 4/23 CO2 + H+ + e acetato 11. 1/8 CO2 + 1/8 HCO3- + H+ + e etanol 12. 1/6 CO2 + H+ + e piruvato 13. 1/5 CO2 + 1/10 HCO3- + H+ + e metanol 14. 1/6 CO2 + H+ + e Fe+3 + e 1/2 NO3 + H + e
+

= 1/50 C10H19O3N +9/25 H2O = 1/66 C16H24O5N4 + 27/66 H2O = CH2O + 1/4 H2O = 1/46 C8H16O + 15/46 H2O =1/8 CH3COO- + 3/8 H2O =1/12 CH3CH2OH + 1/4 H2O = 1/10 CH3CoCOO- + 2/5 H2O = 1/6 CH3OH + 1/6 H2O = Fe+2 =1/2 NO2+ 1/2 H2O

7.6

protenas (aminocidos, protenas, nitrgeno orgnico) 8. 7.7

10.0

6.6

6.609

7.592

8.545

8.965

donadores inorgnicos (reacciones autotrofcas) 15. 16. -17.780 -9.43

130

17. 18. 19. 20. 21. 22. 23.

1/8 NO3- +5/4 H+ + e 1/6 NO2- + 4/3 H+ + e 1/6 1/8

+

= 1/8 NH4+ + 3/8 H2O = 1/6 NH4+ + 1/3 H2O = 16 S + 2/3 H2O = 1/16 H2S + 1/16 HS + 1/2 H2O = 1/8 S2O3-2 + 5/8 H2O = 1/2 H2 = 1/2 SO3
-2 -

-8.245 -7.852 4.657 5.085 5.091 9.670

SO4-2 SO4-2 +e SO4-2

+ 4/3 H + e + 19/16 H + e
+

1/4 SO4-2 + 5/4 H+ + e H 1/2 + H +e

+

+ 1/2 H2O

10.595

tanto los reactivos como los productos tienen una actividad unitaria excepto el Hidrogeno = 10-7. ( )

por ejemplo se pueden plantear las diferentes reacciones que desarrolla el acetato de etilo en diferentes condiciones para conocer los niveles de energa intercambiados en cada proceso, as: Reacciones para el acetato: Aerobias:
1/8

CH3COO- + 1/4 O2

1/8

CO2 + 1/8 HCO3 - + 1/8 H2O G = -25,28 Kcal/mol

anoxicas:
1/8

CH3COO- +1/5 NO3- + 1/5 H+ 1/8 CO2 +1/8 HCCO3- + 1/10 N2 + 9/40 H2O G = - 23,74 Kcal/mol.

Anaerobias:
1/8 1/8

CH3COO- + 1/8 H2O

1/8

CH4 + 1/8 HCO31/8CO2

G = - 0,85 Kcal/mol G = -1,52 Kcal/mol.

CH3COO- +1/8SO4-2 + 3/16 H+

+1/8HCO3-+1/16H2S+1/16HS- +1/8H2O

La energa libre estndar encontrada en cada reaccin para el acetato indica que se obtiene mas energa en los procesos de crecimiento biolgico aerobio y anxico que en las reacciones anaerobias.

En el diseo de sistemas biolgicos para tratamiento de aguas residuales el ingeniero necesita conocer todas las transformaciones que tienen lugar, por ejemplo qu parte del donador de electrones podra convertirse en energa y as, determinar la cantidad de oxgeno, nitratos o sulfatos que se necesiten o tambin la cantidad de metano que se

131

producir. Para adicionar el nitrgeno y el fsforo se requiere conocer la cantidad de material celular o sea que se necesita realizar un balance de materia del sistema.

Las reacciones qumicas balanceadas para toda la conversin biolgica pueden ayudar en la realizacin de este balance y se puede considerar que la transformacin total incluye una parte para sntesis celular, otra para el donador de electrones y otra para el aceptor de electrones, se puede calcular a partir de las reacciones pertinentes y la relacin siguiente:

R = Fs Rc + fe Re - Rd

fe + Fs = 1

Donde el subndice s se refiere a la sntesis de material celular El subndice indica la energa en los cambios para el aceptor de electrones Y el subndice d para el donador de electrones.

Rc representa las reacciones medias para sntesis de clulas bacteriales y podra ser la primera o segunda reaccin de la tabla anterior.

Los valores de Fs(max) pueden utilizarse a partir de la siguiente tabla presentada por Sawyer(1 ):
Donador de electrones Reacciones heterotroficas: Carbohidratos aceptor de electrones O2 NO3SO4-2 CO2 O2 CO2 O2 SO4-2 CO2 NO3CO2 O2 O2 NO3O2 O2 CO2 O2 Fs(max) 0.72 0.6 0.3 0.28 0.64 0.08 0.59 0.06 0.05 0.36 0.15 0.21 0.21 0.20 0.10 0.24 0.04 0.07

Protenas Acidos grasos

Metanol Reacciones autotroficas: S S2O3-2 NH4+ H2 Fe+2

132

Como ejemplo de la utilizacin de las reacciones medias en los balances podemos encontrar la ecuacin balanceada para la fermentacin de glucosa a etanol, asumiendo que el amonio esta presente como nutrientes y que fs es igual a 0.15: Fe = 0.85 12 Fs Rc : 0.15 R1
0.03 CO2 + 0.0075 HCO3- + 0.0075 NH4+ + 0.15 H+ + 0.15 e = 0.0075 C5H7O2N + 0.675 H2O feRe : 0.85R9 0.142 CO2 + 0.85 H+ + 0.85 e -Rd (+inverso de R12) 0.25 CH2O + 0.25 H2 reaccin final: 0.25 CH2O + 0.0075HCO3- + 0.0075 NH4+ = 0.0708 CH3CH2OH + 0.0075 C5H7O2N + 0.078 CO2 + 0.03 H2O = 0.25 CO2 + H+ + e = 0.0708 CH3CH2OH + 0.2125 H2O

para Rc tomamos la reaccin 1; Para Rd la reaccin 9 y para Re la reaccin

________________________________________________________________________________

Con base en esta reaccin se pueden realizar los balances de materia y calcular los requerimientos de nutrientes que deben adicionarse al reactor para que las bacterias puedan desarrollar estas transformaciones.

133

5.3. FUNDAMENTOS DE BIOQUIMICA La bioqumica trata de los cambios realizados en los organismos vivos. Las molculas orgnicas que contienen carbono forman los componentes esenciales de todo organismo vivo. Los tomos de carbono establecen uniones fuertes con Hidrogeno, Oxigeno, Nitrgeno y otros tomos de Carbono. Estos tomos constituyen el 99% de la masa de los organismos vivos.

La composicin de los microorganismos presenta cuatro clases principales de compuestos: carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos.

CARBOHIDRATOS:

Cn(H2O)n.

Azucares simples. Son polihidroxialdehidos o

polihidroxicetonas. Los monosacaridos forman enlaces glucosdicos para formar polisacaridos y se unen con otros elementos como el fsforo con enlaces esterfosfatados.

LIPIDOS: Insolubles en agua y solubles en compuestos no polares como cloroformo. Componen las membranas bioqumicas formando barreras semipermeables. Lpidos complejos: cidos grasos ligados a un alcohol (triglicrido). Lpidos simples: esteroides. Los fosfolpidos se ubican en las membranas biolgicas.

PROTEINAS: Grandes macromolculas que van de 6.000 a varios millones de peso molecular. Estn compuestas de aminocidos unidos por enlaces peptidicos (grupo carboxilico de un aminocido unido a un grupo amino de otro aminocido). Su funcin ms importante es la de servir de enzimas.

ACIDOS NUCLEICOS: Grandes macromolculas compuestas de nucleotidos.

Las reacciones bioqumicas entre estas molculas son esenciales para el metabolismo, el desarrollo y la reproduccin microbiana.

134

Las reacciones pueden ser extracelulares o intracelulares. Las hidroliticas son generalmente extracelulares. Ellas reducen los compuestos orgnicos complejos hasta un tamao que permita atravesar la pared celular (membranas).

Las reacciones de oxidacin ocurren dentro de la clula y producen energa de acuerdo a la energa libre de la reaccion particular. Las reacciones bioqumicas ocurren entre 0 y 60 C de temperatura y se denominan as: Psicrofilicas Mesofilicas Termofilicas de 0 a 10 C de 10 a 40 C cuando ocurren a una temperatura mayor de 40 C.

La clula debe ser capaz de tomar los nutrientes externos a ella, degradarlos para obtener energa y obtener los precursores necesarios para la sntesis de nuevo material celular.

Estos cambios pueden lograrse por la actividad de las enzimas que son sustancias que se hallan presentes en muy pequeas cantidades al interior de la clula. Son catalizadores sensibles a la temperatura, de naturaleza orgnica, elaboradas por las clulas vivas y capaces de una accin interna o externa a ellas.

5.3.1. Caractersticas de las enzimas 1. Aceleran la reaccin. 2. No afectan el equilibrio de la reaccin reversible. 3. Son especificas para determinada reaccin. 4. Son compuestos orgnicos producidos por los organismos vivos. 5. Pueden actuar al interior de la clula intracelulares-endoenzimas o al exterior extracelulares-exoenzimas. 6. Estn determinadas por las condiciones ambientales de la clula y por su constitucin gentica.

135

5.3.2. Propiedades de las enzimas. Son protenas o protenas combinadas con otros grupos. 1. Son desnaturalizadas por el calor. 2. Se precipitan en etanol o en altas concentraciones de sales inorgnicas. 3. No son dializables.

5.3.3. Mecanismos de la accin enzimtica.

ENZIMA E + SUSTRATO S ENZIMA-SUSTRATO ES PRODUCTO P+ ENZIMA E

Este proceso se repite hasta consumir todas las molculas de sustrato. La principal funcin de una enzima es disminuir la energa de activacin. Energa de activacin: cantidad de energa requerida para llevar una sustancia al estado reactivo.

La enzima se combina con el sustrato para producir un estado de transicin que requiere una energa de activacin menor para que la reaccin se efecte. Nivel de energa Estado de transicin
Sin Enzi. Estado de transicin Con E reactantes Estado inicial Estado final productos

Progreso de la reaccin.

136

La actividad enzimtica esta afectada por: 1. 2. 3. 4. La concentracin de la enzima. Concentracin del sustrato pH La temperatura.

Formacin de productos Con 2X

Velocidad de reaccin vel. mxima

Con X

1/2Vmax.

Sin enzima Tiempo concentracin de sustrato

Actividad de la enzima

Actividad de la enzima

10

12 pH

14

10

20

30 40 50 60 temperatura

Cada enzima tiene un rango de pH donde trabaja bien. La mayora trabaja a pH neutro.

La

rata de reaccin se duplica al incrementar 10C la temperatura. La temp. Influye en el tiempo de retencin, en las necesidades de oxigeno y en la solubilidad del O2.

137

5.3.4. Clases principales de enzimas

1. OXIDOREDUCTASAS Reacciones de transferencia de electrones o tomos de hidrogeno.

2. TRANSFERASAS 3. HIDROLASAS 4. LIASAS

Transfieren grupos funcionales. Reacciones hidroliticas (+agua para romper enlaces) Formacin de dobles enlaces y remocin de grupos qumicos por reacciones no hidroliticas.

5. ISOMERAZAS 6. LIGASAS

Reacciones de isomerizacin. Formacin de enlaces con el consumo de ATP.

5.4. C O F A C T O R E S

Algunas enzimas requieren un agente para actuar que no tiene estructura protenica y que es llamado cofactor. Los cofactores pueden ser iones metlicos o complejos orgnicos llamados coenzimas. Algunas veces se necesitan ambos factores para la actuacin de las enzimas.

Los cofactores metlicos ms comunes son: Zn, Mg, Mn, Fe, Ca, P, Na. Son estables con la temperatura.

Se conocen doce coenzimas, entre ellas estn: NAD transfiere tomos de hidrogeno o electrones y participa en la oxidacin de materia orgnica. NADP tiene tres tomos de fsforo en vez de dos que tiene el NAD. COENZIMA A trabaja en la sntesis y metabolismo de los cidos grasos. Una parte integral de una coenzima es una vitamina.

138

5.5. TRAZAS Y ELEMENTOS MAYORES

Las bacterias son los organismos vivos ms simples, su tejido celular tiene una formula emprica aproximada a C5H7NO2 donde el nitrgeno es cerca del 12 %. Se conocen por su capacidad de sintetizar protenas a partir de materia orgnica. Requieren nitrgeno para su reproduccin y fsforo y azufre para la formacin de algunas protenas conjugadas, por esto el nitrgeno el fsforo y el azufre se consideran nutrientes mayores.

Para el metabolismo de las bacterias se necesitan trazas de otros elementos como: calcio, cobalto, cobre, hierro, magnesio, manganeso, potasio, selenio y zinc. Las bacterias que fijan nitrgeno requieren Molibdeno.

Las aguas residuales domesticas (ARD) proveen todos los elementos que necesitan las bacterias para su estabilizacin, lo que no ocurre con las aguas residuales industriales, a las que se debe agregar nitrgeno y fsforo para realizar tratamientos biolgicos que reduzcan la materia orgnica polutante.

5.6. BIOQUIMICA DE LOS CARBOHIDRATOS Los carbohidratos sirven como fuente de energa en animales mayores y en los microorganismos pueden ser utilizados, adems, para sintetizar grasas y protenas.

Se usan para construir el tejido celular y pueden almacenarse como polisacaridos dentro o fuera de la clula. El mecanismo es el mismo que en las plantas y los animales mayores.

La primera etapa es la hidrlisis, la cual se puede resumir en el siguiente cuadro:

139

Su degradacin puede progresar hasta llegar a la etapa de los Disacaridos antes de salir de la clula. En la pared, el azcar simple puede usarse para sntesis o produccin de energa.

La va por la cual las bacterias metabolizan el azcar en energa depende de si las condiciones son aerobias o anaerobias. En cada caso, la conversin inicial es a cido pirvico, as: =O 2CH3C-COOH cido pirvico

C6H12O6

bacterias enzimas

+ 4H

Condiciones aerobias:

cido pirvico + 4H + 6O2 bacterias Enzimas Oxidacin

6CO2 + 6H2O

140

En condiciones anaerobias, esta oxidacin es posible y las bacterias descargan diferentes productos en la solucin, de acuerdo a las bacterias y a las condiciones en que se realizan las reacciones. Pueden ocurrir los siguientes casos:
-OH 2CH3C-COOH cido pirvico + 4H CH3CH2COOH + CH3COOH + HCOOH 2CH3CH2OH + 2CO2

Que la oxidacin produzca cidos, alcoholes o cetonas con la intervencin de enzimas y bacterias en cada caso.

Los cidos disminuyen el condiciones aerobias.

pH

y pueden llegar a terminar la actividad biolgica en

5.7. BIOQUIMICA DE LAS PROTEINAS Son esenciales en las dietas de animales mayores, se usan en la construccin del tejido celular. Si se consumen en mayor cantidad se usan para producir energa o convertirse a carbohidratos y grasas.

Las bacterias saprofiticas (spapros = muerte; phytos = planta) requieren menos protenas, las sintetizan del nitrgeno orgnico y de materia orgnica no proteica, como carbohidratos, grasas y alcoholes. Caracterstica importante en el tratamiento de residuos lquidos de las industrias de alimentos, que son bajos en protenas.

La primera etapa en la utilizacin biolgica de las protenas es la hidrlisis, que se desarrolla en etapas, as:
protenas peptonas polipeptidos + dipeptidos - aminocidos

141

se producen - aminocidos antes de atravesar la pared de la clula.

Deaminacin: En condiciones aerobias:

NH2 R- C - COOH + O2 H O: NH2 R - C - COOH H OH R - C - COOH + NH3 (cidos hidroxilicos) H bac + enzimas R - COOH + CO2 + NH3 (cidos saturados)

+ H2O

bac + enzimas

En condiciones anaerobias:
NH2 R - C - COOH + H2 H O: NH2 R - CH2 - C - COOH H bac + enzimas R - CH = CH - COOH + NH3 (. Insaturados) bac + enzimas R - CH2COOOH + NH3 (cidos saturados)

5.8. BIOQUIMICA DE LAS GRASAS Y ACEITES

La degradacin o asimilacin de la materia grasa es afectada por su insolubilidad, en los animales mayores la bilis secretada por el hgado las emulsiona, pero esto no lo pueden realizar las bacterias. Las grasas al tener menor densidad que el agua flotan y complican los tratamientos con lodos activados.

La degradacin de las grasas se inicia con la hidrlisis produciendo glicerol y cidos grasos; luego viene la oxidacin, que se realiza por -oxidacin, teora de Knoop, en etapas activadas por la coenzima A. b. y e. R - C - C - COOH -2H + H2O OH R - C - C - COOH -2H bye

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=O R - C - C - COOH + H2O

R - COOH + CH3COOH

La ruptura de las molculas se da en la etapa final con la formacin de una molcula de cido actico y un nuevo cido con dos carbonos menos que sigue la -oxidacin hasta cido actico.

Se remueven cuatro hidrgenos por cada molcula de cido actico producido, los cuales se oxidan para formar agua en condiciones aerobias as: 4H + O2 2 H2O

en condiciones anaerobias, esto no es posible, se sigue otro procedimiento general.

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5.9. SULFORREDUCCIN Y SULFATACIN El azufre existe en gran variedad de estados como producto de la oxidacin de los compuestos orgnicos e inorgnicos y las reacciones de oxidorreduccin mediadas por microorganismos, las que cambian los estados de oxidacin del azufre presente en varios compuestos y establecen el ciclo del azufre.

Lazo inorgnico

lazo orgnico

oxidaciones quimiolitotroficas SO3

2

sulfatasas SO4-2 Sulfato oxidacin desasimilacin reductora del sulfato R-SO3H Asimilacin del sulfato PAPS esterificacin R-OSO3H esteres sulfato

sulfito
S2O3
2

tiosulfato
S0 oxidacin sulfdica por fotosntesis H2S

. Sulfonicos
oxidacin

asimilacin del sulfato

azufre elemental
asimilacin sulfdica R-SH desulfuracin

cido sulfhdrico

tioles

Algunos microorganismos son capaces de remover azufre de los compuestos orgnicos: Bajo condiciones de aerobiosis la remocin del azufre o desulfuracin de los compuestos orgnicos origina formacin de sulfatos. Sulfatacin. Bajo condiciones de anaerobiosis se produce normalmente cido sulfhdrico a partir de la mineralizacin de los compuestos orgnicos sulfurados. Sulfo reduccin.

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5.9.1. SULFORREDUCCIN Se puede formar cido sulfhdrico por medio de las bacterias reductoras de sulfatos que lo utilizan como aceptor final de electrones durante la respiracin anaerobia. Las bacterias del genero sulfobivrio son ejemplo de este proceso que puede encontrarse en los sedimentos marinos ricos en sulfatos y se muestra tambin en los procesos de corrosin.

El anin sulfato es muy estable qumicamente y su reduccin no tiene lugar espontneamente en la naturaleza sino bajo condiciones ambientales normales. La reduccin de sulfato a sulfuro se efecta mediante diversos estados de oxidacin intermedios de los cuales el sulfito ha sido identificado con toda seguridad.

El paso inicial en la reduccin del sulfato implica la activacin del anin sulfato con ATP dando lugar a la formacin del Adenosil fosfosulfato (APS) y esta activacin es la reaccin biolgica fundamental para la sulforreduccin. Una vez activado se efecta fcilmente la reduccin a sulfito mediante el NAD reducido. El sulfito por s mismo es mucho mas fcilmente reducido que el sulfato, llevndose a cabo esta reaccin qumicamente o por diversas bacterias. Otros estados de oxidacin intermedia del azufre, el tiosulfato y el tetrationato, pueden ser intermediarios en la reduccin desasimiladora del sulfato, aunque se ignoran los detalles.

Otro caso de sulforreduccin lo presentan las bacterias del gnero cromatium cuando se colocan en la oscuridad, el azufre elemental almacenado dentro de sus clulas les puede servir como un aceptor de electrones siendo reducido a sulfuro. Los electrones provienen de un producto de almacenamiento, el glucgeno. Las bacterias almacenan tanto su aceptor de electrones, azufre elemental, como su donador de electrones, el glucgeno, en forma de polmeros intracelulares.

Una reaccin efectuada por muchas bacterias reductoras es la reduccin del sulfato con el lactato como donador de electrones, donde dos moles de carbono orgnico son necesarias para reducir un mol de sulfato a sulfuro.

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Esta situacin es impactante en sedimentos marinos donde la cantidad de reduccin del sulfato puede ser aumentada notablemente por la adicin de materia orgnica, dando lugar a un aspecto importante en contaminacin marina porque todos los desechos de aguas negras, lodos de drenaje y basura que llegan al ocano aumentan la materia orgnica en los sedimentos generando una excesiva formacin de cido sulfhdrico que es potencialmente txico para muchos microorganismos.

Un factor importante en la determinacin del destino y la incidencia del HS- ambiental, es la disponibilidad de hierro y metales pesados en el medio, ya que la mayora de los metales forman sulfuros altamente insolubles, de forma espontnea. El hierro es comn en todos los sedimentos y por tanto la reduccin del sulfato casi siempre dar lugar a la formacin del sulfuro de hierro, de color negro caracterstico de las aguas donde se han efectuado procedimientos anaerobios. Si estn presentes metales pesados, por ejemplo cobre o mercurio, tambin son precipitados como sulfuros y slo cuando se han agotado estas fuentes se iniciara la formacin de H2S libre.

Como consecuencia de la reduccin bacteriana del sulfato se han formado cierta cantidad de depsitos de minerales econmicamente importantes. Los depsitos de sulfuro mineral biognicos se encuentran caractersticamente en capas delgadas estratiformes en asociacin con otras rocas sedimentarias por ejemplo pizarra. Deben diferenciarse los depsitos de sulfuro mineral de origen volcnico de los de origen hidrotermal que no son estratificados y que estn asociados con la actividad volcnica en el rea inmediata. Depsitos de mineral de sulfuro estratiforme fsicamente biognicos son aquellos del monte Isa en Australia y del norte de Rodhesia en Africa.

Tambin presentan reduccin de azufre la echericha coli por reduccin asimilatoria del sulfato hasta azufre elemental y la proteus que reduce el azufre orgnico a sulfuro en procesos de putrefaccin y desulfuracin. Todas las bacterias sulforreductoras son anaerobias obligadas.

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5.9.2. SULFATACIN. La sulfatacin o la oxidacin hasta sulfatos de especies reducidas de azufre como el H2S, S, Tiosulfato, se realiza de acuerdo con la cantidad de Oxgeno y su relacin con el azufre, de la concentracin de sulfuros y la presencia de metales como catalizadores pudiendo detenerse en compuestos intermedios.

Este proceso es importante en la generacin de ATP de los microorganismos autotroficos, una parte de los cuales, los quimiautotroficos o quimiolitotroficos, usan la energa derivada de la oxidacin de compuestos inorgnicos como el azufre para suministrar la energa necesaria en la sntesis del ATP.

Se han cultivado solo cuatro gneros consistentemente thiobacilus, thiomicrospira, thermothrix y sulfolobus asociados los dos ltimos a manantiales hidrotermales y reservorios geotrmicos.

Pueden distinguirse dos amplias clases ecolgicas de bacterias oxidantes de azufre, las que viven en pH neutro y las que viven en pH cido. Muchas de las formas que viven en pH cido tienen la capacidad de crecer en forma litotrofica empleando hierro ferroso como donador de electrones.

Thiobacilus. Este gnero contienen los bacilos gramnegativos con flagelo polar, que son capaces de derivar su energa de la oxidacin del azufre elemental, sulfuros y tiosulfato.

La oxidacin de sulfuro y azufre requiere primero l reaccin de stas sustancias con los grupos sulfhidrilos de la clula como glutacin con la formacin de un complejo sulfurosulfhidrilo. El azufre luego se oxida a sulfito por la enzima sulfuro-oxidasa.

Existen dos formas en las que se pueden oxidar el sulfuro para producir enlaces de fosfato de alta energa. En la primera se oxida a sulfato por un sulfito oxidasa ligada al citocromo, con la formacin de ATP mediante la fosforilacin por transporte de electrones. Este ciclo se presenta universalmente en los tiobacilos. En la segunda el sulfito reacciona con AMP,

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dos electrones se eliminan y se forma el adenosin fosfosulfato APS. Los electrones eliminados se transfieren al oxgeno por medio del sistema citocromo, originando enlaces fosfato de alta energa mediante la fosforilacin a nivel de sustrato, el APS reacciona con fsforo y se convierte en ADP y sulfato. El tiosulfato (S2O3-2) que puede verse como un sulfuro o un sulfito se desdobla en sulfuro y sulfito. El sulfito se oxida a sulfato con la produccin de ATP y el otro tomo de azufre se convierte en azufre elemental insoluble. Otro gnero de organismos oxidantes de azufre es el sulfolobus. Los miembros de ste gnero no son solo acidoflicos, sino tambin termoflicos. Crecen sobre el nivel de pH de 1 a 5 (ptimo de 2 a 3), y a un lmite de temperatura de 60 a 85C (ptimo de 70 a 80C).

Sulfolobus tiene una forma generalmente esfrica y produce distintos lbulos. Las clulas se adhieren con fuerza a los cristales de azufre donde pueden visualizarse con microscopa empleando tinciones fluorescentes. La membrana de los sulfolobulos no es de dos etapas de fosfolpidos, sino una capa que consiste en una cadena de hidrocarbones larga, realmente un isoprenoide, conectado a ambos extremos por enlace de ester, a residuos de glicerol.

El gnero thiomicrospira consta de dos especies, ambas son littrofos obligados, una de ellas puede crecer en forma anaerbica con el nitrato como aceptor de electrones.

Los Thermotrix son bacterias pequeas en forma de espiral, filamentosas que habitan en manantiales azufrosos calientes, con pH neutro o ligeramente cido. Los cultivos de thermotrix crecen en forma aerbica y anaerbica, con nitrato como aceptor de electrones, a temperaturas entre 55 y 85C.

Aunque el cido sulfhdrico es txico para muchos microorganismos, las bacterias fotosintticas sulfricas lo utilizan como donador de electrones para generar coenzimas reducidas durante su metabolismo. Algunas depositan azufre elemental y otras sulfatos como producto de la oxidacin.

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El drenaje en las minas es consecuencia del metabolismo de bacterias oxidantes del azufre y del hierro. El carbn en los depsitos geolgicos, muchas veces se encuentra asociado con piritas y cuando las actividades mineras de extraccin exponen el mineral con pirita al oxgeno atmosfrico la combinacin de la autooxidacin con azufre microbiano y con la oxidacin del hierro produce grandes cantidades de cido sulfrico como parte de la recuperacin de las acciones minerales. El cido que drena de las minas destruye la vida acutica y hace que el agua ya no sea adecuada como fuente para beber o para uso recreativo.

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