Molecules 2005, 10, 1286–1291

molecules
ISSN 1420-3049 http://www.mdpi.org

Aislamiento y explicación de la estructura de un nuevo pigmento amarillo de la bacteria marina Pseudoalteromona tunicata
Ashley Franks 2, Peter Haywood 1, Carola Holmström 2, Suhelen Egan 2, Staffan Kjelleberg 2 and Naresh Kumar 1,*
1

School of Chemistry and 2 School of Biotechnology and Biomolecular Sciences, The University of New South Wales, Sydney NSW 2052 Australia

* Author to whom correspondence should be addressed; e-mail: n.kumar@unsw.edu.au Received: 12 December 2004; in revised form: 21 April 2005 / Accepted: 4 May 2005 / Published: 31 October 2005

Abstract: El medio marino es una de las principales fuentes de muchos nuevos compuestos naturales. Se ha aislado un nuevo pigmento amarillo de la bacteria marina P. tunicata e identificado como un nuevo miembro de la clase de compuestos tambjaminas. La identificación estructural se logró mediante una combinación de espectroscopia de RMN 1D y 2D, y datos de alta resolución de espectrometría de masas. Keywords: Pseudoalteromonas tunicata, marine bacterium, tambjamines

Introduction Los miembros del género bacteriano Pseudoalteromonas se encuentran comúnmente asociados a la vida y las superficies inertes en el medio marino [1]. La especie Pseudoalteromona produce una gran variedad de compuestos biológicamente activos que tienen actividad contra los organismos marinos comunes. Estos incluyen compuestos para bacterias objetivo, larvas de invertebrados, algas esporas, pastos de protozoos y hongos, y se cree que proporcionan protección para los organismos huésped marinos colonizados por especies Pseudoalteromonas. En una pantalla preliminar de diez especies Pseudoalteromonas, Holmström et al. [6] encontró que P. tunicata tiene la gama más alta y más amplia de actividades biológicas.

nudibranquios y ascidias [9-10]. que incluyen compuestos de tetra-pirrol. El extracto de metanol se redujo al vacío y se dividió con diclorometano-agua (1:1 v / v). Las muestras se ejecuto en modo de iones positivos en condiciones de alta resolución (<2 ppm). poseen una amplia gama de actividades biológicas incluyendo antibióticos [12].1287 Molecules 2005. y un grupo metoxi adyacentes en el C3. incluyendo los briozoos. Se componen de un (2. el análogo de la tambjamina. 100% de cloroformo. espectrómetro de masas de resonancia con una fuente de ionización electrospray Analítica. Como parte de nuestra investigación en curso sobre los compuestos biológicamente activos producidos por P. amarillo y morado [8]. Las fracciones pigmentada amarilla (90 mg) (en la fracción de cloroformo 100%) fueron más fraccionado en otra columna Altec SPE. La muestra se cargó con DCM y se eluyó con 2% de alcohol isopropílico (IPA) / cloroformo. Este pigmento es una nueva clase del compuesto tambjamina. El nitrógeno enamina normalmente sustituido por dos o cuatro carbonos alquilo de cadena saturada. que co-eluyeron con el pigmento amarillo. Una banda de color púrpura también se aisló de la mezcla de crudo. y se eluyó con diclorometano. La banda pigmentada amarilla fue raspada de la placa de sílice. Por otra parte. antitumoral [13] y las actividades de inmunosupresores [14]. 10 Estas actividades están vinculadas a la producción de pigmentos no identificados. y 4 de isopropanol / cloroformo. Experimental General Con un Espectro de masas de alta resolución fue adquirido metanol mediante un Bruker BioApex IIe 7 T Transformada de Fourier Ion ciclotrón. un 10% de acetato de etilo% / hexano. se evapora y se carga en una columna de SPE Altec con éter dietílico. La evaporación del disolvente al vacío produjo un compuesto como un aceite amarillo (11 mg). mientras que los experimentos de RMN en dos dimensiones se realizaron en un espectrómetro Bruker DMX600. La columna se eluyó con incrementos de 100% de hexano. En algunos casos se emplearon las placas de preparación que contienen gel de sílice se mezcla con acetato de sodio al 12%. La fracción DCM se separa. Otros miembros de esta clase. BE-18 591. contiene una cadena de doce carbonos saturada de alquilos se ha aislado de los cultivos de Streptomyces sp [11]. 1H y 13C-NMR espectros se realizaron en CDCl3 neutralizado (preparado por pasar CDCl3 través de una capa de carbonato de potasio anhidro) en un espectrómetro Bruker AMX300. tunicata. se presenta el aislamiento e identificación de este pigmento amarillo producido por P. tunicata. Bacterial culture conditions and isolation of the yellow pigment Se cultivo (100 litros) P.2 '-bipyrrole) sistema de anillos que contienen un resto de enamina en la posición C2 del anillo de pirrol. BE-18 591 también ha demostrado inhibir immuno-proliferación y gastritis en conejos [15]. La fracción amarilla resultante se sometió a cromatografía preparativa sobre placas de capa delgada de vidrio recubiertas con gel de sílice para eliminar la gran cantidad de ácido oleico. Los alcaloides tambjamina han sido aislados previamente de las bacterias e invertebrados marinos. Las células se liofilizaron y se extrajo con metanol. . tunicata [16] en medio VNSS [17] a la fase estacionaria (12 horas) y se cosecho por centrifugación.

25.06. El CH enamina apareció en δ 7.2 '-bipyrrole se estableció desde el TOCSY COSY. Tabla 1) y la comparación con los desplazamientos químicos de 1H y 13C informó de tambjaminas [9. respectivamente (Tabla 1). y experimentos NOESY (Figura 1. 6. TOCSY (TOtal Correlation SpectroscopY). Figure 1:Selected 2D NMR Data . NOESY (Nuclear Overhauser Effect SpectroscopY HMQC (Heteronuclear Multiple Quantum Correlation). La estructura se deduce a través de un amplio uso de los experimentos nucleares de alta resolución espectroscopia magnética incluyendo TOCSY COSY. H4.1 ppm. La presencia de un grupo metoxi en el C3 fue confirmada por una camiseta de protones en δ 3.9 ppm. La estructura del compuesto amarillo fue identificada como sigue. 9 COSY (COrrelation SpectroscopY). 6. y el pigmento amarillo como un alcaloide nuevo de tambjamina. 1H-13C y 1H-15N experimentos HMBC.10]. La comparación de los datos espectrales de la tambjamine nuevo con estructuras tambjamine informó indicaron la presencia de una cadena más larga y un doble enlace entre C10 y C11 átomos de carbono. H3 y H4. 10 128 El compuesto fue identificado como púrpura viola-ceína por comparación. El espectro de 1H-RMN de 1 mostró señales de los protones en δ bipyrrole 7. El nitrógeno enamina se encontró que ser sustituido por una cadena de carbono insaturados doce alquilo. NOESY. 17 15 13 11 1 La presencia de un sistema de anillos de 2. HSQC (Heteronuclear Simple Quantum Correlation).269605 [MH +]).70 y 5.270484 [MH +] que corresponde a una fórmula molecular de C22H33N3O (CALC: 356. Results and Discussion Un ESI-HRMS (Resolución de espectrometría de masas) del compuesto 1 dio un ión molecular de m / z 356.90 ppm y el carbono C3 en 163.95 ppm correspondiente a los protones H5.29 ppm en el espectro de protones con la señal de carbono correspondientes a 141. HSQC.Molecules 2005. HMBC (Heteronuclear Multiple Bond Correlation).

35. Una gran gama multiplete a δ 1.3 163.9 91.46 ppm y mostró a través del espacio de acoplamiento a H6 y directa a través de la correlación enlace a C9 CH2. m 51.29.5 27.1 6.21-1.5 124.1 7. m 5.8 3.8 Hz y una correlación NOESY entre H9 y H12. Ambos H8 y H9 mostraron 3-enlaces heteronucleares correlacionados con el doble enlace. 10 El grupo C8 CH2 junto a un nitrógeno enamina apareció en δ 3.Table 1: 1H and 13 C chemical shifts for 1 Yellow Pigment Position 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 – 18 19 20 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 123.06. protones a C8 y C9 mostraron largo alcance 1H-15N acoplados al N7 confirmando la vinculación de la cadena de alquilo (Figura 1). t 3.70 0.21-1. s 13c 1 H 15N 142 Por otra parte.55.01.70 ppm representa los protones de metileno C13-C18 con el grupo metilo terminal que aparece en δ 0. m 1.86. La larga union constante entre C6 protón y el NH enamina (J = 14 Hz) confirmó la disposición trans-antiplanar de la enamina.46.25.1 134.1289 Molecules 2005.2 28.70.8 26. 11 = 10.90.4 141. s 155 111. m 2. dt 2.6 143.95. dt 5. El doble enlace entre C10 y C11 en la cadena de alquilo se encuentro mediante experimentos COSY / TOCSY y se asigna una configuración cis con una constante de acoplamiento J10.86 ppm como un triplete.5 58.5-27.5 113. m 7. El CH2 en C12 mostró uniones de largo alcance a ambos átomos de carbono doble enlace.7 14. .0 110. m 6. H8 mostro la union a C10 y H9 a C11. d 132 5.8 124.46.

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