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SESIN #

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RECEPTORES CITOSOLICOS Y NUCLEARES COMO BLANCOS FARMACOLGICOS

Ttulo original: Nuclear Hormone Receptors as Drug Targets. I.D. Morris, J.A. Morley. Software development by K. Huckbody and K. Sewell. An interactive tutorial produced by pharma-CAL-ogy. British Pharmacological Society, 2003*

*Traduccin y adaptacin: Ruth Jaimez Melgoza, Luz Elena Pelez Garca, Mara Elena Martnez Enrquez. Departamento de Farmacologa Facultad de Medicina, UNAM. 2012

I. INTRODUCCIN La presente prctica contiene un men principal del cual puedes elegir la informacin acerca de los receptores nucleares hormonales en el cono de nuclear hormone receptor y al final contestar las preguntas utilizando el cono multiple choice test. Tambin contiene una parte donde se describen los objetivos objetives y otra donde viene un tutorial de ayuda para utilizar el programa help. Una vez que hayas terminado puedes salir con el cono exit.

i. Objetivos: Al finalizar el ejercicio el alumno ser capaz de describir: 1. El mecanismo de accin de hormonas y frmacos que actan a travs de receptores intracelulares y regulan la transcripcin de genes especficos. 2. La conformacin de los receptores intracelulares y la funcin de cada dominio. 3. El mecanismo de accin de frmacos agonistas y antagonistas utilizando como ejemplo el receptor de estrgenos. ii. Contenido del Programa: 1. Los receptores nucleares hormonales se localizan en el interior de las clulas. 2. Receptores de Glucocorticoides. 3. Receptores de estrgenos. 4. Efectos biolgicos de la activacin de receptores de estrgenos. 5. Cuales son los efectos de los estrgenos? 6. Velocidad de la respuesta por la activacin de receptores nucleares. 7. Estructura del receptor de estrgenos. 8. Los receptores nucleares inactivos estn asociados a protenas de choque trmico o calrico (HSP90). 9. El sitio de unin al DNA- los dedos de zinc. 10. Los receptores se unen al DNA en una forma cara a cara. 11. El receptor unido es fosforilado. 12. El receptor activado facilita la transcripcin del genes 13. El receptor es muy especifico para estrgenos. 14. Los antagonistas del receptor de estrgenos. Tamoxifen y fulvestrant (ICI 182780). 15. Uso clnico de estrgenos y sus antagonistas.

iii. Resumen iv. Mapa Conceptual v. Referencias vi. Examen de Opciin Mltiple Para iniciar d clic en nuclear hormone receptors

En su pantalla aparecer la siguiente imagen:

Cada nmero (1 al 14 y el resumen) contiene informacin que puede ser leda en forma ascendente o al azar. 1. Los receptores hormonales se localizan en el interior de la clula (receptores citoslicos y nucleares) Diversas hormonas y frmacos, por ejemplo, los esteroides regulan sus efectos dentro de las clulas. Los esteroides son transportados en la sangre a su sitio de accin unida a protenas de unin especficas de hormonas esteroides. Los esteroides se disocian de su protena transportadora y difunden al interior de la clula en donde reconocen a su receptor especfico. D clic en el nmero 2.

Los receptores de esteroides son usados como modelo para todos los receptores nucleares hormonales, pero hay que recordar que existen diferencias entre cada miembro de familia. Los diferentes tipos de receptores de esteroides se encuentran en diferentes partes de la clula. Los receptores para glucocorticoides se localizan en el citosol de la clula. Los receptores para estrgenos se localizan en el ncleo de la clula. Para obtener mas informacin puede dar clic en cualquiera de los conos more about glucocorticoid receptors o more about oestrogen receptors. 2. Receptores de Glucocorticoides Los esteroides glucocorticoides (por ej. Cortisol y corticosterona), son secretados por la corteza adrenal y tienen efectos catablicos sobre el metabolismo. Cuando los receptores de glucocorticoides estn desacoplados, fluyen entre el ncleo y el citoplasma. Los receptores se unen con los glucocorticoides en el citoplasma. 3. Receptores de Estrgenos Los estrgenos (por ejemplo estradiol y estrona) son esteroides secretados por los ovarios y son responsables del crecimiento de tejidos sexuales femeninos principalmente.

Cuando los receptores de estrgenos estn desacoplados ellos fluyen entre el citoplasma y el ncleo, pero la gran mayora estn siempre dentro del ncleo. Los estrgenos se encuentran con su receptor en el ncleo. Para continuar d clic en el nmero 3. 4. Efectos biolgicos de la activacin de receptores de estrgenos Un buen ejemplo de un receptor nuclear es el receptor de estrgenos, el cual esta presente en altas concentraciones en el tero. Los estrgenos provocan engrosamiento del endometrio durante el ciclo reproductivo femenino. La mayora de los efectos de los estrgenos estn regulados por la expresin de genes. Por ejemplo el aumento en la concentracin de receptores de progesterona uterinos se lleva acabo por la induccin de la expresin del gen del receptor de progesterona. D clic en el folculo ovrico. El folculo ovrico libera estrgenos al torrente circulatorio. D clic al vaso sanguneo. El estrgeno es transportado a sus clulas blancas. D clic al endometrio. Los estrgenos producen engrosamiento del endometrio.

Para continuar d clic en el nmero 4. 5. Cules son los efectos de los estrgenos? Los estrgenos actan en diversos rganos: glndula hipfisis, crvix, cerebro, hueso.

D clic en cada rgano para ver los efectos que producen los estrgenos.

En la glndula hipfisis los estrgenos disminuyen la secrecin de gonadotropinas. En el crvix producen un aumento en la secrecin de fluidos. En el cerebro regula la conducta sexual y en hueso estabiliza su diferenciacin y crecimiento. D clic en why para conocer porque los estrgenos producen estos efectos diversos. Los efectos tejido-especficos se llevan a cabo a travs de la expresin diferencial de los subtipos de receptores y cofactores. Los principales subtipos del receptor de estrgeno son el ER-alfa y ER-beta. Para continuar d clic en el nmero 5. 6. Velocidad de respuesta producida por la activacin de receptores nucleares. Hay un tiempo medible entre la unin del ligando al receptor y la respuesta bioqumica de la clula. Este tiempo es variable, dependiendo del tipo de receptor. Utilizando su conocimiento del curso de accin hormonal decida en cuanto tiempo se podra detectar el crecimiento uterino despus de la unin del estradiol con su receptor. a) Menos de 100 milisegundos b) Entre 1 a 10 segundos c) Mas de 30 minutos Arrastre el blanco hasta la casilla que corresponda con el tiempo de respuesta hormonal.

Para continuar d clic en el nmero 6. 7. Estructura del receptor de estrgenos

El receptor de estrgeno es un miembro de la familia de receptores hormonales nucleares. Este grupo incluye receptores para esteroides, vitaminas y algunos xenobiticos.

D clic en el receptor para ver un diagrama simplificado.

Los receptores son protenas grandes divididas en seis regiones, sealadas desde la A a la F. La secuencia primaria de aminocidos de la regin C, muestra un alto grado de homologa entre los miembros de la superfamilia de receptores nucleares. Aunque la unin de las regiones C y D son similares, las regiones A/B son diferentes.

Arrastre el receptor de estrgenos sobre los dems, para compararlo con otros receptores de esta familia.

D un clic en cada dominio del receptor para conocer sus funciones:

El dominio TAF-1 (A/B) contiene la secuencia responsable en la activacin transcripcional independiente de la hormona.

El dominio C contiene el dominio de unin al DNA. Esta regin forma un dedo de Zinc, similar a otros factores de transcripcin. Tambin hay una secuencia involucrada en la dimerizacin, por ejemplo, el la unin de dos receptores.

El dominio E es el ms grande. Su principal funcin es unir a la hormona- en el caso del receptor de estrgenos ste se unir al 17-estradiol. La secuencia aminocido de esta regin del receptor es diferente para cada tipo de receptores hormonales nucleares y solamente se unir a su ligando especfico. El sitio de unin a estrgenos es solamente una parte pequea de la molcula del receptor. La regin TAF-2 se encuentra en este dominio, su funcin es la activacin de la transcripcin dependiente de hormona. Otras funciones de este dominio son la dimerizacin y la localizacin nuclear. Factor de activacin de la transcripcin (TAF): es una regin de la protena receptor la cual interacta con la protena co-activadora para iniciar la transcripcin. Para continuar d clic en el nmero 7 del men principal

8. Los receptores intracelulares inactivos estn asociados con protenas de choque trmico (HSP90) El receptor est presente en el citoplasma de la clula asociado a protenas de choque trmico (Heat Shock Protein 90). Aunque est protena esta ligada con el receptor, no interacta con el sitio de accin.

D un clic en el ncleo para ver en detalle la interaccin del receptor con la protena

El receptor est presente en la clula formando un complejo con las protenas de choque trmico.

El complejo con HSP90 impide cualquier interaccin entre el receptor y el DNA. La unin con la hormona causa la disociacin del complejo receptor-HSP90. La hormona se une a una molcula hidrofbica de la regin del receptor E, causando disociacin del complejo receptor-HPS90. Con el cursor, mueva la molcula de 17-estradiol al sitio de unin del receptor.

Sin embargo, no todos los receptores de hormonas nucleares forman complejos con protenas de choque trmico. D clic en las letras que aparecen el color rojo para saber cuales hormonas forman complejos con HSP90 y cuales no lo hacen.

Los receptores que pueden unirse a este tipo de protenas son: los estrgenos, progesterona, andrgenos, glucocorticoides y los receptores mineralocorticoides. Los receptores que no forman complejos con las protenas de choque trmico incluyen la hormona tiroidea, vitamina D y receptores del cido retinoico. D click en continue. El receptor sufre cambios conformacionales en el sitio de unin al ligando y permite que la interaccin se lleve a cabo. Estos cambios tambin ocurren en el sitio de unin al DNA. D clic al sitio de unin al DNA.

En el dominio C de unin al DNA, se encuentran presentes los dedos de zinc, que son factores importantes en la unin del receptor al DNA. D clic al dominio de unin al DNA para ver los dedos de zinc.

El sitio de unin a la hormona tambin promueve la formacin de los dmeros.

D clic sobre el receptor donde te mostrar la formacin del dmero.

Los dmeros son formados por dos receptores de estrgenos llamados homodmeros debido a la presencia de un solo receptor. El dmero es necesario para la unin a una regin especfica en el DNA. Los heterodmeros se forman entre diferentes receptores nucleares por ejemplo el receptor para hormona tiroides con el receptor para vitamina A. Para continuar d clic en el nmero 8. 9. El sitio de unin al DNA- los dedos de zinc. El receptor de estrgenos es un ejemplo de un factor de transcripcin dependiente de hormonas Dos tomos de zinc se asocian con cada receptor para formar dos dedos de zinc. El zinc y las protenas interactan para formar dos hlices alfa y no son lineales como lo seala la figura.

D clic sobre los dedos para ver su secuencia de aminocidos.

D clic sobre algn tomo de zinc para ver con ms detalle.

Cada tomo de zinc est coordinado por cuatro molculas de cisterna, esto permite que la cadena de pptidos del receptor forme estructuras parecidas a dedos, que son ideales para la unin del DNA. La unin es funcionalmente similar a la unin disulfuro encontrado entre los residuos de cistena. Para continuar d clic en el nmero 9. 10. Los receptores se unen al DNA en una forma cara a cara Los receptores se unen a regiones especficas en el DNA a travs de sus dedos de zinc. Estas regiones en el DNA son conocidas como elementos de respuesta.

D clic en cada dedo de zinc para conocer su funcin:

La estructura de cada dedo de zinc difiere en cada tipo de receptor nuclear y determina a que parte en el DNA se unir, por ejemplo los estrgenos se unen a su elemento de respuesta, pero no al elemento de respuesta a andrgenos. D clic en continue. Elija el dedo de zinc con el nmero 2. Este dedo de zinc es importante para la dimerizacin de los receptores. Ahora d clic en la molcula de DNA para ver los elementos de respuesta de estrgenos.

D clic al receptor para poder observar la interaccin Ahora veremos con mayor detalle el modelo simplificado de DNA y su unin con el receptor

Los elementos de respuesta son secuencias palindrmicas de cidos nucleicos. El trmino palindrmico significa que las bases son las mismas cuando se leen en ambas direcciones. Esto es vital para que se lleve a cabo la unin del receptor de estrgenos en forma de dmero. Con el cursor arrastra los dedos de zinc a cada elemento de respuesta. La regin de los dedos de zinc se adhiere a la regin palindrmica por la interaccin de una protena helicoidal entre los dedos de zinc y el surco mayor del DNA. Un espaciador de tres pares de bases est presente (muestra aqu en azul) y separa las secuencias repetidas. D clic en este espaciador de tres pares de bases.

Estas bases pueden estar compuestas de cualquier cido nuclico. La presencia de este espaciador es necesaria para la unin del receptor de estrgeno. Los receptores de estrgenos se dimeriza cara a cara y as se puede unir a su elemento de respuesta. El elemento de respuesta est presente en una regin especfica del DNA cerca al gen que va a ser regulado. Para continuar d clic en el nmero 10. 11. El receptor unido al DNA es fosforilado Despus de la unin al DNA, el receptor Esto aumenta su accin como un factor de transcripcin. D clic a la protena cinasa para que fosforile al receptor. de estrgeno es fosforilado.

El receptor activado se ver as:

D clic en 11 para continuar. 12. El receptor activado facilita la transcripcin de genes. El receptor de estrgenos estimula la transcripcin de genes especficos. El elemento de respuesta a los estrgenos se encuentra cuesta arriba de estos genes, proporcionando una regin estable en el que el receptor de estrgeno puede recurrir a otros factores de transcripcin. Esta regin promotora del gen tambin contiene secuencias que son responsables de la unin de estos factores de transcripcin por ejemplo, la caja TATA.

Haz clic en las flechas para poder observar la caja TATA y la regin del gen a transcribir. Haz clic en la caja TATA para ver la descripcin.

Los factores de transcripcin se asocian y disocian espontneamente de la caja TATA por un corto perodo de tiempo. Para estabilizar los factores de transcripcin, arrastra el receptor activado hacia la caja TATA.

D clic para marcar a los factores de transcripcin.

Las protenas que unen al receptor dimerizado forman un puente entre el receptor y el complejo transcripcional y promueven o inhiben la transcripcin. En la pantalla podrs ver un puente rojo y uno azul. El puente rojo es un co-regulador que estabiliza la asociacin de los factores de transcripcin a travs de sus interacciones con la regin TAF-2 que activa las funciones de sus dominios E. Cuando la hormona se une a su receptor, TAF-2 es revelado debido a un cambio conformacional.

D clic sobre TAF-2 para iniciar la transcripcin y la produccin de RNA mensajero, al activarse la polimerasa II. Contine en el nmero 12 13. El receptor es muy especfico para estrgenos La hormona ms importante, la cual se asocia con los receptores de estrgenos es el agonista 17-estradiol. Haz clic sobre la estructura plana del estradiol para ver su estructura tridimensional. La estructura plana de esta molcula significa que cambios en los grupos puede alterar significativamente su forma.

La estructura tridimensional de la hormona es crucial para la activacin del receptor. Cambios muy pequeos en los grupos de unin a la estructura bsica de esteroides, altera la unin a los receptores de estrgeno. Esta especificidad significa que molculas muy similares, tales como la progesterona y testosterona no pueden activar el receptor de estrgeno. Comienza por la progesterona, luego con la testosterona y finalmente con el estradiol para verificar la especificidad de sitio de unin para estrgenos.

Para continuar haga clic en el nmero 13. 14. Los antagonistas del receptor de estrgenos- tamoxifen y fulvestrant (ICI 182 780) Los antagonistas de estrgenos han sido sintetizados, algunos son estructuralmente similares al 17estradiol. Estos compuestos bloquean la accin de los agonistas lo que significa que no actan como agonistas en ninguna forma. Se han identificado dos clases diferentes de antagonistas de los estrgenos: 1) Antagonistas no esteroideos como el tamoxifen. Aunque no es un esteroide, partes de la molcula de tamoxifeno se asemejan al estradiol, por lo que le permite interactuar con el receptor 2) Antagonistas no esteroideos como el fulvestrant (ICI 182780). Este antagonista tiene una estructura esteroidea, y se diferencia del 17--estradiol por la adicin de una cadena lateral voluminosa.

D clic en antagonistas no esteroideos para ampliar la informacin

Traslapa la molcula de tamoxifen con la de estradiol para hallar similitudes

Aunque el tamoxifen no es un esteroide hay partes de su molcula que son parecidas al estradiol. El tamoxifen permite que los receptores de estrgeno se dimericen y se unan al elemento de respuesta a estrgenos, pero el cambio en la conformacin del receptor no es total. El factor de activacin de la transcripcin TAF-2 no es expuesto y no pueden contactar apropiadamente con co-activadores proteicos, para estabilizar el complejo de transcripcin. El antagonismo estrognico del tamoxifen tiene dos componentes: 1) El antagonista compite con el agonista por el sitio de unin al ligando. 2) El complejo antagonista/receptor dimerizado compite con el agonista por le unin del dmero al elemento de respuesta. A pesar de ello, el tamoxifeno muestra actividad de agonista parcial, esto significa que ocurre la transcripcin, pero no de igual forma que con el agonista. Esta actividad est mediada por otro factor de transcripcin el TAF-1 que se encuentra en el dominio de unin A/B del receptor. El TAF-1 no se afecta por el tamoxifen unindose al dominio E del receptor de estrgenos.

Haz clic en antagonistas esteroideos para conocer mas informacin.

Este antagonista posee estructura esteroide y se diferencia del 17-estradiol por la adicin de una cadena larga. Arrastra la molcula del fulvestrant para ver similitudes con el 17-estradiol

Los antgonistas puros como el fulvestrant compiten con el estradiol por el sitio de unin al ligando y causa un impedimento estrico. Los receptores monmeros no se unen a los elementos de respuesta y no se lleva a cabo la transcripcin. La cadena larga impide la activacin y dimerizacin del receptor. D clic en el nmero 14 para continuar 15. Uso clnico de estrgenos y sus antagonistas. Estradiol, 17-etinilestradiol, dietilestilbestrol (no esteroide, ya no se usa): Terapia de reemplazo, menopausia, anticoncepcin, cncer de prstata. Moduladores selectivos del receptor de estrgenos (SERMs) Tamoxifen: cncer de mama, clomifeno: infertilidad

Fulvestrant: usado en Estados Unidos y pronto en Reino Unido: cncer de mama, infertilidad. Raloxifeno: osteoporosis D clic en la palabra SUM para revisar el resumen de lo que ha ledo. III. RESUMEN

1. Los receptores nucleares se encuentran en el interior de la clula. 2. Los receptores nucleares pueden encontrarse tanto en el citoplasma como el ncleo. 3. El receptor de estrgenos es un buen ejemplo de receptor nuclear. 4. Los estrgenos afectan una gran variedad de rganos. 5. La velocidad de la respuesta es lenta: mas de 30 minutos. 6. El receptor de estrgenos consiste en 6 regiones que comprenden de A a F. 7. El receptor inactivado es asociado con HSP90. La unin al ligando libera al receptor y permite que se dimerice. 8. El sitio de unin al DNA contiene dedos de zinc. 9. Los receptores se unen al DNA como dmeros cara a cara. 10. El dmero es activado por fosforilacin. 11. El dmero activado facilita la transcripcin de genes. 12. El receptor es altamente especfico por el estrgeno el cual es una molcula casi plana. 13. El tamoxifen y el fulvestrant son antagonistas de estrgenos. 14. Los usos clnicos de los estrgenos incluyen: anticoncepcin y terapia hormonal de reemplazo.

IV. MAPA CONCEPTUAL: __________________________________________________________________________________

Regresa el men principal y elige realizar el examen que consta de 10 preguntas de la informacin que acabas de revisar. Algunas preguntas puede tener mas de una respuesta correcta y solo podrs continuar cuando hayas contestado correctamente todas las respuestas posibles. Cada respuesta correcta es un punto y ser vlida siempre que haya sido contestada correctamente en el primer intento.

______________________________________________________________________________ V. EXAMEN DE OPCIN MLTIPLE ______________________________________________________________________________ 1 de 10. Un ejemplo de receptor nuclear es (hay ms de una respuesta correcta): A. Receptor de estrgenos B. Receptor de vitamina D C. Receptor de dioxina D. Receptor de insulina E. Receptor de tiroxina

2 de 10. En que tipo de molcula se clasifican los dedos de zinc? A. Protena cinasas B. Histonas C. Factores de transcripcin D. Receptores acoplados a protenas G

3 de 10. Los receptores nucleares, como el de estradiol se encuentran en: A. Membrana celular B. Citoplasma C. Ncleo D. Mitocondria

4 de 10. Los receptores nucleares activados comprenden: A. Una estructura grande de dos protenas que incluyen una regin de unin al DNA. B. Una regin intracelular derivada de un receptor membranal con actividad de tirosina cinasa la cual fosforila protenas reguladoras. C. Una protena doble de tamao mediano con actividad de protena cinasa. D. Una protena con un sitio de unin al ligando y regiones que confieren actividad de unin para otras protenas necesaria para su activacin.

5 de 10. El receptor nuclear tiene seis dominios estructurales: A, B, C, D, E, F. En cual dominio se encuentra el sitio de unin al ligando?

6 de 10. Los receptores nucleares se pueden encontrar en (hay ms de una respuesta correcta): A. Utero B. Prstata C. Timo D. Cerebro

7 de 10. El tamoxifen, es un antagonista con actividad agonista parcial debido a que: A. Se une al receptor de progesterona B. Inhibe la dimerizacin del receptor al prevenir la formacin del complejo activo. C. Previene la unin al complejo receptor al elemento de respuesta en el DNA. D. Es un agonista debido a la activacin del TAF-2.

8 de 10. Un ejemplo de antagonista sinttico del receptor de estrgenos es: A. Estradiol B. Estilbestrol C. Tamoxifen

9 de 10. Un ejemplo de un agonista sinttico del receptor de estrgenos es: A. Estradiol B. Estilbestrol C. Tamoxifen

10 de 10. Las protenas de choque trmico (HSP) estn unidas a muchos receptores nucleares y: A. Mantienen al receptor en su forma inactiva. B. Son importantes cofactores para la unin del receptor al DNA. C. Bloquean la unin de la hormona a la protena receptora.

______________________________________________________________________________ VI. REFERENCIAS ______________________________________________________________________________ Jordan VC. Antiestrogens and selective estrogen receptor modulators as multifunctional medicines. 1 Receptor interactions. J Med Chem, 2003, 46: 883-908. de Groot LJ and JL Jameson JL. Ed. Endocrinoligy, 4th Ed. Publisher WB Saunders, 2001. McKenna N.J. & OMalley BW. Mini Review: nuclear receptor coactivators. Endocrinology, 2002, 143:2461-2465.