TEMA 2. ESPECTROSCOPA DE ABSORCIN 1. Interaccin radiacin-materia 1.1. Naturaleza de la radiacin electromagntica 1.2. Formas de energa molecular.

Restricciones cunticas y distribucin de Boltzmann 1.3. Absorcin de radiacin. Grupos comforos 2. Espectroscopa de absorcin. Generalidades 2.1. Medida de la absorcin. Componentes fundamentales de un espectrofotmetro 2.2. Ley de Lambert-Beer 2.2.1. Absorbancia y coeficiente de extincin 2.2.2. Desviaciones. Punto isosbstico 2.2.3. Estudios de mezclas de cromforos. Espectroscopa de derivadas 3. Espectroscopa en la regin de infrarrojo (IR) 3.1. Espectros de vibracin de enlace 3.1.1. Los enlaces como osciladores armnicos 3.1.2. Espectrofotometra IR. Preparacin de muestras 3.2. Aplicaciones bioqumicas 3.2.1. Bandas de absorcin tpicas de cidos nucleicos y protenas 3.2.2. Intercambio deuterio-protio 3.2.3. Dicrosmo IR 3.3. Otras formas de espectroscopia vibracional (FTIR y Raman) 4. Espectroscopa en la regin ultravioleta-visible (UV-V) 4.1. Espectros electrnicos 4.1.1. Saltos electrnicos. Grupos cromforos en la regin UV-V 4.1.2. Espectrofotometra UV-V. Caractersticas 4.2. Aplicaciones bioqumicas 4.2.1. Absorcin de las protenas en el UV-V. Espectroscopa diferencial de perturbacin 4.2.2. Absorcin de los cidos nucleicos en el UV-V. Efecto hipercrmico 4.2.3. Valoracin de actividades enzimticas. Reacciones acopladas. Sustratos artificiales 4.2.4. Colorimetra. Cuantificacin de protenas

Naturaleza ondulatoria de la radiacin electromagntica

Un campo magntico y un campo elctrico perpendiculares entre s que oscilan sinusoidalmente a medida que se propagan en el espacio

Longitud de onda, : Distancia entre dos puntos consecutivos en el mismo estado de oscilacin (nm)
Interaccin radiacin-materia

El espectro de radiaciones electromagnticas

Interaccin radiacin-materia

Transiciones electrnicas

Interaccin radiacin-materia

Formas de energa molecular

Interaccin radiacin-materia

Espectrofotmetro

Espectroscopa de absorcin. Generalidades

Espectros de absorcin

Interaccin radiacin-materia

Ley de Lambert-Beer

La prdida de intensidad diferencial en una distancia diferencial es proporcional a la concentracin de la muestra, c, y a la intensidad en ese punto, I: -(dI)/(dl) = KcI -(dI)/I = Kcdl

Integrando entre I0 e I y entre 0 y l: ln (I0/I) = Kcl A = cl

Espectroscopa de absorcin. Generalidades

log (I0/I) = Kcl

Transmitancia y Absorbancia

Espectroscopa de absorcin. Generalidades

Coeficiente de extincin
A = lc

= A/lc
es una medida de la cantidad de luz absorbida por unidad de concentracin. Un compuesto con un alto valor de coeficiente de extincin molar es muy eficiente en la absorcin de luz de la longitud de onda adecuada y, por lo tanto, puede detectarse por medidas de absorcin cuando se encuentra en disolucin a concentraciones muy bajas

= 100000 L mol-1 cm-1

A = lc

A = 1

l = 1 cm

c = 1 x 10-5 mol L-1 = 20 L mol-1 cm-1 A = lc A = 1 l = 1 cm

c = 0.05 mol L-1

Espectroscopa de absorcin. Generalidades

Factores que influyen en la absorcin

Espectroscopa de absorcin. Generalidades

Punto isosbstico

Espectros de absorcin de (A) carboxihemoglobina, (B) hemoglobina reducida y (C) y muestra de sangre de paciente intoxicado con monxido de carbono. Se observa un punto isosbstico a 580 nm

Espectroscopa de absorcin. Generalidades