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Fundamentos de Microbiolog a

Tcnicas de esterilizaci n y medios de cultivo

Dra. Dolores Castro Departamento de Microbiologa Universidad de Mlaga

Esterilizacin
Es el proceso de destruccin de todas las formas de vida. En sentido microbiolgico, un objeto est estril cuando est libre de microorganismos Muerte de un microorganismo es la prdida irreversible de la capacidad de reproducirse

Mtodos de esterilizacin
Flameado: accin directa del fuego acci Incineracin: eliminacin de residuos Incineraci eliminaci Horno de esterilizacin (horno Pasteur): esterilizaci Pasteur): oC, 90 min 170 Autoclave: 121oC, 20 min (1 atmsfera atm de presin de vapor de agua) presi Tindalizacin: 100 C, 30 min, 3 das Tindalizaci min, d consecutivos No ionizantes (UV, 253,7 nm): origina dmeros nm): d de timina. Poco poder de penetracin penetraci

Seco Calor Hmedo

Fsicos

Radiaciones

Ionizantes (alfa, beta, gamma, X): causa ruptura del esqueleto azcar-fosfato del ADN. Alto az contenido energtico y poder de penetracin energ penetraci Requiere altas medidas de seguridad

Autoclave
121 C, 15 min

Mtodos de esterilizacin
xido de etileno (0,5-1%): lquido (0-4oC), o gas l (>10,7oC). Inestable y txico. Se usa a nivel industrial t

Qumicos

Glutaraldehdo activado: solucin acuosa al 2% (p/v), Glutaraldeh soluci inmersin inmersi !-propiolactona: solucin acuosa (2-5 mg/l) propiolactona: soluci mg/l) Formaldehdo: solucin acuosa o gas Formaldeh soluci

Mecnicos: filtracin

Membranas filtrantes: para soluciones de compuestos termolbiles (azcares, suero, vitaminas, antibiticos). Los termol (az antibi microorganismos quedan retenidos en el filtro (0,2 o 0,45 m), se recoge el filtrado en condiciones aspticas as Filtros HEPA (de aire particulado de alta eficiencia): filtracin de aire en quirfanos, cabinas de flujo laminar filtraci quir

Categoras nutricionales de los microorganismos


Fuente de energa Fotoauttrofos Fotohetertrofos Quimioauttrofos Luz Luz C. inorgnicos reducidos Fuente principal de carbono CO2 Compuestos orgnicos CO2 Compuestos orgnicos

Quimiohetertrofos Compuestos qumicos

Necesidades de nutrientes especficos


Prottrofos Auxtrofos

Medio de cultivo
Sustrato ptimo para el crecimiento y/o mantenimiento de microorganismos en el laboratorio

Condiciones generales: Cubrir los requerimientos nutricionales de los microorganismos para los que fue diseado Poseer un pH, condiciones osmticas y Eh en el margen de tolerancia del microorganismo a cultivar Estril y preservado de contaminacin Recin preparado (hidratacin)

Componentes de los medios de cultivo


Agua Peptonas: hidrlisis (qumica o enzimtica) de material proteico. Fuente de N y C Infusiones y extractos: material hidrosoluble poco definido. Fuente de N y C Azcares: fuente de C (1g/l) o sustrato de prueba (10-20 g/l) Az Sales minerales: mantenimiento de presin osmtica (NaCl !5 g/l) o tampones
(fosfato o carbonato)

Indicadores de pH: azul timol, prpura bromocresol, azul bromotimol, rojo fenol,
rojo neutro

Indicadores de oxido-reduccin: azul de metileno, cloruro de trifenil tetrazolio oxido-reducci Agentes selectivos: colorantes, sales biliares (bilis de buey, desoxicolato sdico),
detergentes, azida sdica, ClNa (>5 g/l), pH extremos, antimicrobianos Suplementos: sustancias orgnicas que favorecen el crecimiento de microorganismos con requerimientos nutricionales complejos (sangre, hemina) Agentes solidificantes: agar Agentes reductores: eliminan el oxgeno disuelto (cido ascrbico, cistena, tioglicolato sdico) Agentes quelantes: evitan la aparicin de sales insolubles (EDTA)

Clasificacin de los medios de cultivo


Segn su composicin qumica:
Definidos o sintticos: slo compuestos qumicamente definidos sint qu Indefinidos o complejos: algn ingrediente de composicin qumica alg composici qu desconocida

Segn el origen de sus componentes:


Artificiales ( o sintticos): todos los componentes artificiales sint Naturales: todos los componentes naturales Mixtos: componentes naturales y artificiales

Segn su estado fsico:


Lquidos (caldos): sin agente solidificante Slidos: agar (10-15 g/l) Semislidos: agar (3-7 g/l) Semis

Clasificacin de los medios de cultivo


Segn su uso o aplicacin:
Comunes: para el crecimiento de variedad de microorganismos (ej. agar nutritivo) ej. Especiales: diseado para una finalidad determinada dise Medios enriquecidos Medios selectivos Medios diferenciales Medios de prueba Medios de recuento Medios de caracterizacin bacteriana Medios de mantenimiento