Está en la página 1de 5

C. R.

Chimie 7 (2004) 10571061

Mmoire / Full paper

Proprits antioxydantes de lhuile essentielle des feuilles de Clausena anisata (Wild) Hook
Flicien Avlessi a, Justine Dangou a, Valentin D. Wotto a, Guy A. Alitonou a, Dominique K. Sohounhloue a,*, Chantal Menut b
a

Laboratoire de recherche en chimie et biologie appliques, cole polytechnique dAbomey-Calavi, universit dAbomey-Calavi, 01 BP 2009 Cotonou, rpublique du Bnin b Laboratoire de chimie biomolculaire, ENSCM, 8, rue de lcole-Normale, 34296 Montpellier cedex 5, France Reu le 8 novembre 2003 ; accept le 21 novembre 2003 Disponible sur internet le 12 septembre 2004

Rsum Lhuile essentielle des feuilles de Clausena anisata (Rutaceae) collecte Akassato (Bnin) a t extraite par hydrodistillation et analyse par CG et CG/SM. Les constituants majoritaires sont des mthyl-chavicols : estragole (66,2 %) et (E)-anethole (17,6 %). Les activits antiradicalaires et antioxydantes de lhuile ont t dtermines et compares celles trouves pour les composs de rfrence. Pour citer cet article : F. Avlessi et al., C. R. Chimie 7 (2004). 2004 Acadmie des sciences. Publi par Elsevier SAS. Tous droits rservs. Abstract Antioxidant activities of essential oil from Clausena anisata (Wild) Hook. The volatile oil from leaves of Clausena anisata (Rutaceae) collected at Akassato (Benin) were obtained by hydrodistillation and analysed by GC and GC/MS. The major constituents were methyl-chavicols: estragole (66.2%) and (E)-anethole (17.6%). The radical scavenging ability and antioxidant activity of samples were found to be very close to those of the reference compounds. To cite this article: F. Avlessi et al., C. R. Chimie 7 (2004). 2004 Acadmie des sciences. Publi par Elsevier SAS. Tous droits rservs.
Mots cls : Clausena anisata ; Rutaceae ; Estragole ; Anthole ; Activits antiradicalaire et antioxidante Keywords: Clausena anisata; Rutaceae; Estragole; Anethole; Radical scavenging ability; Antioxidant activity

* Auteur correspondant. Adresse e-mail : ksohoun@bj.refer.org (D.K. Sohounhloue). 1631-0748/$ - see front matter 2004 Acadmie des sciences. Publi par Elsevier SAS. Tous droits rservs. doi:10.1016/j.crci.2003.11.015

1058

F. Avlessi et al. / C. R. Chimie 7 (2004) 10571061

1. Introduction Toutes les matires grasses subissent, au cours de leur conservation ou de leur transformation, des altrations de type oxydatif lorsquelles sont extraites de leur contexte de protection naturelle. Lauto-oxydation des lipides est un phnomne purement chimique trs complexe, mettant en jeu des ractions radicalaires capables de sauto-entretenir et qui ne ncessitent que la prsence doxygne atmosphrique. Elle est responsable de la formation de produits chimiques nuisibles aussi bien pour la sant des animaux que des hommes. Dans les industries agroalimentaires, le formulateur tient compte du fait que loxydation des corps gras est un phnomne spontan dont la cintique dapparition peut tre acclre ou ralentie sous leffet de diffrents paramtres, dont lajout dantioxydant. Un antioxydant est une substance qui, ajoute faible dose un produit naturellement oxydable lair, est capable de ralentir le phnomne doxydation en augmentant le temps au bout duquel intervient une altration dcelable du produit [1]. Lutilisation des molcules anti-oxydantes de synthse tant actuellement remise en cause en raison des risques toxicologiques potentiels (cest le cas du buthylhydroxyanisol BHA, du buthylhydroxytoluene BHT, du tertiobutylhydroquinone TBHQ...) [2,3], de nouvelles sources vgtales dantioxydants naturels (carvacrol, eugnol, tocophrol, thymol...) sont recherches par les industriels. Les travaux rcents, en particulier ceux de Chimi [4,5], attestent le rle de certains composs phnoliques de lolive sur la bonne rsistance loxydation radicalaire des huiles dolive vierge : il sagit principalement de loluropeine, du tyrosol, de lhydroxytyrosol et de lacide cafique [6]. Dans cet ordre dide, les proprits antioxydantes des extraits volatiles des plantes aromatiques ont fait lobjet de maintes investigations dans le but de protger les acides gras insaturs dorigine animale [7]. Ainsi, lextraction par le CO2 supercritique a permis Djamarti et coll. [8] dobtenir, partir du romarin et de la sauge, un extrait riche en carnosol et ramanol, molcule dont le pouvoir antioxydant peut tre quivalent ou mme suprieur celui du BHT. Dans le prsent travail, nous nous sommes intresss la composition chimique, aux proprits antioxydantes de lhuile essentielle des feuilles de Clausena

anisata collectes au Bnin en vue de la valorisation de cette plante aromatique. Une comparaison avec les diffrentes valeurs trouves pour les composs de rfrence (buthylhydroxytolune BHT, carvacrol et thymol) a t tablie. 2. Partie exprimentale 2.1. Matriels, mthodes dextraction et analyse de lhuile essentielle 2.1.1. Matriel vgtal et mthode dextraction Clausena anisata (Rutaceae) est une plante trs connue en Afrique centrale et en Afrique de lOuest, o elle est recherche pour ses proprits insecticides et pharmaceutiques [913]. Les feuilles de Clausena anisata ont t collectes Akassato en octobre 2002. Lhuile essentielle a t extraite par hydrodistillation sur un appareil de type Clevenger avec un rendement de 0,14 %. 2.1.2. Analyse de lhuile essentielle CG. Lanalyse des huiles essentielles a t effectue laide dun chromatographe Varian CP-3380, muni dun dtecteur ionisation de amme quip dune colonne capillaire en silice fondue de 30 m 0,25 mm, de type DB1. La programmation de temprature va de 50 200 C, avec un gradient de 5 C/min. Les tempratures dinjection et de dtection sont respectivement de 220 et 250 C. Le gaz vecteur est lazote, avec un dbit de 0,8 ml/min. Les indices de rtention des constituants sont calculs par comparaison des temps de rtention avec ceux dune srie dalcanes et le pourcentage de chaque constituant dans lhuile est dtermin par lintgrateur lectronique. CG/SM. Le couplage a t effectu sur un appareil Hewlett-Packard de type 5970, quip dune colonne capillaire en silice fondue de 30 m 0,25 mm de type DB1 (30 m 0,25 mm), oprant sous pression dhlium avec un dbit de 0,6 ml/min., et muni dun dtecteur slectif quadripolaire, dans lequel le potentiel dionisation est x 70 eV. La programmation de temprature va de 70 200 C, avec un gradient de 10 C/min. Les tempratures dinjection et de dtection sont respectivement de 180 et 210 C. 2.1.3. Identication des constituants Lidentication des constituants a t faite sur la base de la comparaison de leurs indices de rtention et

F. Avlessi et al. / C. R. Chimie 7 (2004) 10571061

1059

spectre de masse avec ceux des composs de rfrence de la littrature [1416] et gurant dans la banque de donnes. 2.2. Activit antiradicalaire Plusieurs mthodes sont utilises pour mesurer les activits antioxydantes des extraits volatils des plantes aromatiques [17,18]. Pour valuer les activits antiradicalaires et antioxydantes, nous avions utilis la mthode du DPPH [1921] et au b-carotne propose par Miller [22]. Lexprience a t effectue dans un spectrophotomtre multicuve UV-mc2 SAFAS Monaco la longueur donde de 517 nm. La solution de DPPH est obtenue en dissolvant 2 mg de la poudre dans 50 ml de EtOH. 100 l de la solution contenant les antioxydants de rfrence (BHT, thymol ou carvacrol) sont ajouts 2 ml de la solution prcdente de DPPH diffrentes concentrations. Lhuile essentielle teste a t prpare par la mme mthode. La mesure de la variation de labsorbance a t faite 30 min aprs lintroduction des cuves dans le spectrophotomtre. Le graphique de la variation de labsorbance en fonction de la concentration a permis de dterminer le SC 50 (concentration correspondant 50 % dinhibition). 2.3. Activit antioxydante Lvolution de lactivit antioxydante met en jeu la dgradation oxydative du b-carotne en prsence dacide linolique. 2 mg de b-carotne sont dissous dans 10 ml de chloroforme. On prlve 1 ml de cette solution dans une ole contenant pralablement 200 mg de Tween 40 et 20 l dacide linolique. Cette solution est vapore au rotavapor jusqu disparition de lodeur du chloroforme (environ 40 min). Lactivit antioxydante a t value par la mesure 470 nm de la cintique de dcoloration du b-carotne en labsence ou en prsence dantioxydants (BHT, thymol ou carvacrol), qui sont les composs de rfrence. 3. Rsultats et discussion 3.1. Rendement de lhuile essentielle Le rendement en huile essentielle est de 0,14 %

3.2. Composition chimique Les rsultats des analyses par CG et CG/SM de lhuile essentielle extraite des feuilles de Clausena anisata collecte Akassato sont prsents dans le Tableau 1, dans lequel les composs identis sont lists suivant lordre dlution de leur indice de rtention. Cet chantillon dhuile essentielle extraite des feuilles de Clausena anisata collectes Akassato est caractris par un taux lev destragole (66,2 %) et de (E)-anthole (17,6 %). Par sa composition, cette huile est diffrente de celles obtenues des feuilles de Clausena anisata collectes Abomey-Calavi [23] et Houin [24].

3.3. Activit anti-radicalaire La mesure de labsorbance (ou densit optique DO) a t effectue par spectrophotomtrie 517 nm. Le spectrophotomtre est coupl un enregistreur qui afche les diffrentes valeurs obtenues. partir de ces
Tableau 1 Constituants de lhuile essentielle des feuilles de Clausena anisata de Akassato (Bnin) avec leur pourcentage IR 939 975 982 987 1003 1031 1043 1058 1091 1193 1279 1403 1441 1475 1499 1507 1516 1536 1561 1583 Total Constituants a-pinne sabinne b-pinne myrcne b-phellandrne 1,8-cinole (E)-b-ocimne c-terpinne linalool estragole (E)-anthole b-elmne b-caryophyllne a-humulne germacrne D b-bisabolne germacrne A d-cadinne germacrne B caryophyllne oxyde Pourcentage 2,6 2,4 0,2 0,3 0,1 2,3 0,4 0,2 0,3 66,2 17,6 1,3 2,1 0,6 1,0 0,1 0,1 0,2 0,1 0,1 98,2

1060

F. Avlessi et al. / C. R. Chimie 7 (2004) 10571061

Fig. 1. Pourcentage dinhibition en fonction de la concentration de lhuile.

valeurs, on calcule les pourcentages dinhibition en utilisant la formule suivante [25] : SC = Absorbance tmoin Absorbance Absorbance tmoin 100

Fig. 2. Pourcentage dinhibition (activit antioxydante) en fonction de la concentration de lhuile.

antioxydant

Les valeurs obtenues ont permis de tracer la courbe de la Fig. 1, qui reprsente la variation du pourcentage dinhibition en fonction de la concentration de lhuile essentielle. On a dtermin graphiquement la concentration correspondant 50 % dinhibition (SC50), qui constitue lactivit anti-radicalaire de lhuile essentielle de Clausena anisata. Cette valeur est compare celle trouve pour les composs de rfrence (BHT, thymol et carvacrol). SC50 (BHT) = 8,8 mg/l SC50 (thymol) = 335 mg/l SC50 (carvacrol) = 375 mg/l SC50 (C. anisata) = 1,67 mg/l 3.4. Activit antioxydante La mesure de la variation de labsorbance (densit optique) a t effectue au spectrophotomtre 470 nm. Ledit spectrophotomtre coupl un enregistreur tudie les constantes de vitesse de dgradation du b-carotne suivant lexpression : A = A0 e
kt

Les valeurs obtenues ont permis de tracer la courbe de la Fig. 2, qui reprsente le pourcentage dinhibition en fonction de la concentration de lhuile essentielle avant dduction de la concentration correspondant 50 % dinhibition (IC50). En comparant les rsultats de lactivit antioxydante celle des composs de rfrence, on obtient : IC50 (BHT) = 42 g/l IC50 (thymol) = 333 g/l IC50 (carvacrol) = 666 g/l IC50 (C. anisata) = 3,4 g/l

4. Conclusion Lhuile essentielle de Clausena anisata tudie est riche en estragole (66,2 %) et en (E)-anthole (17,6 %) Lactivit antioxydante de lhuile essentielle est faible par rapport celle des composs de rfrence. Mais les valeurs trouves (SC50 = 1,67 g/l et IC50 = 3,4 g/l) prsentent un intrt pour lutilisation de cette huile des ns thrapeutiques et pour des applications cosmtiques.

+C Remerciements Les auteurs tiennent remercier la Coopration franaise pour son soutien nancier, ainsi que le Pr. J.-L. Montero, directeur du laboratoire de chimie biomolculaire de luniversit Montpellier-2, pour leur avoir permis deffectuer ces travaux dans son laboratoire.

o les paramtres A, A0, K et C sont dtermins lordinateur partir du logiciel Curve Expert 1.3. Les diffrentes valeurs de ces paramtres permettent daccder au pourcentage dinhibition au moyen der lexpression : % %I = KT K
antioxydant

KT 100

avec KT la constante de vitesse du tmoin.

F. Avlessi et al. / C. R. Chimie 7 (2004) 10571061

1061

Rfrences
F.O. Gunstone, F.A. Norris, Lipidsin foods-chemistry, Biochemistry and Technology, Pergamon Press, 1983, p. 161. [2] Y. Lu, Food Chem. 68 (2000) 81. [3] C.A. Rice-Evans, J. Sampson, P.M. Branley, D.E. Hollowa, Free Radic. Res. 26 (1997). [4] H. Chimi, A. Sadik, B. Le Tutour, M. Rahmani, Rev. Fr. Corps Gras 89 (1988) 339. [5] H. Chimi, J. Cillard, P. Cillard, M. Rahmani, J. Am. Oil Chem. Soc. 68 (5) (1991) 307. [6] G. Papadopoulos, D. Bokou, J. Am. Oil Chem. Soc. 68 (9) (1991) 669. [7] G.C. Deans, C.R. Noble, A. Mac Pherson, L. Penzes, G.S. Imre, G. Hofecker, M. Skalicky (Eds.), Vienna Ageing Series, Vol. 4, Facultas Press, Vienna, 1994, p. 173. [8] Z. Djamarti, R.M. Jankov, E. Schwirtlich, B. Djulinag, A. Djordjevic, J. Am. Chem. Soc. 68 (10) (1991) 731. [10] K.H. Koumaglo, M. Moudachirou, I. Addae-Mensah, F. Garneau, H. Gagnon, F.I. Jean, Rev. Ital. EPPOS, Actes des 13es journes internationales Huiles essentielles , DignesLes-Bains, France, 1995, p. 339. [11] E. Olusegun, B.O. Oguntinein, F.J. Hammerschmidt, J. Planta Med. 6 (1986) 505. [12] M.B. Ngassou, L. Jirowetz, G.J. Buchbauer, J. Essent. Oil Res. 11 (1999) 231. [1]

[13] J.A.O. Ojewole, J. Ethnopharmacol. 81 (2002) 231. [14] R.P. Adams, Identication of Essential Oils Components by Gas Chromatography/Quadrupole Mass Spectrometry, Allured Publishing Corporation, Carol Stream, USA, 2001. [15] F.W. Mc Lafferty, Wiley Registry of Mass Spectral Data, 5th Edition, John Wiley & Sons Inc., New York, 1989. [16] D. Joulain, W.A. Knig, The Atlas of Spectral Data Sesquiterpene Hydrocarbons, E.B. Verlag, Germany Hamburg, 1998. [17] S. Mc Donald, P.D. Prengler, M. Autolovich, K. Robards, Food Chem. 73 (2001) 73. [18] M.B. Arnao, A. Cano, M. Acosta, Free Rad. Res. 31 (1999) 89. [19] W. Brand-William, M.E. Cuvelier, C. Berset, Lebensm. Wiss. Technol. 28 (1995) 25. [20] N. Cotelle, J.-L. Bernier, J.-P. Catteau, J. Pommery, J.-C. Wallet, E.M. Gaydou, Free Radic. Biol. Med. 20 (1) (1996) 35. [21] G. Hsiao, F.-N. Ko, C.-N. Lin, C.-M. Teng, Protein Structure and Molecular Enzymology, Biochim. Biophys. Acta 1298 (1) (1996) 119. [22] H.E. Miller, J. Am. Oil Chem. Soc. 48 (1971) 91. [23] M.A. Aydoun, J.G. Houenon, P.V. Sossou, C. Menut, G. Lamaty, J.-M. Bessire, J. Essent. Oil Res. 9 (1997) 247. [24] D.K. Sohounhloue, J. Dangou, J.G. Houenon, B. Gnonhossou, Ann. Univ. Ouagadougou IV (1996) 283. [25] A. Yildirims, A. Mavi, A.A. Kara, J. Agric. Food. Chem. 49 (2001) 4083.

También podría gustarte