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Banco de sangre Recepcin Entrega de solicitud y cuestionario Toma de muestra Calibracin de las venas para revisar si estn aptas

para la donacin Si son aprobadas se toman los tubos pilotos, signos vitales del paciente y BHC Se pasa el paciente a la entrevista con la doctora encargada Se realiza la asepsia, se coloca lidocana y se procesa a la extraccin de la donacin Al paciente se le da una colacin Procesamiento de la unidad Se rotula la unidad poniendo el nombre completo del paciente, el grupo sanguneo y la hora. Se centrifuga Se fraccina en formula roja y plasma Despus el plasma se fraccina en plasma y plaquetas Se taran y se etiquetan las unidades Pruebas Tipeo sanguneo VIH Heptitis B y C Chagas Reginas Brucela (rosa de bengala) Pruebas cruzadas

Grupo sanguneo 1) Se rotulan 9 tubos de la siguiente manera: A, B, AB, RH, CRH, AT, A1, B1, O1. 2) Se agregan una gota de globulos rojos ya lavados a cada tubo: A, B, AB, RH, CRH, AT. 3) Se agregan dos gotas a de suero a problema a los tubos: AT, A1, B1, O1. 4) Al tubo A se le agrega una gota del antisuero A al tubo B se le agrega una gota del antisuero B al tubo AB se le agrega una gota del antisuero AB al tubo RH se le agrega una gota del reactivo RH al tubo CRH se le agrega una gota del reactivo CONTROL RH. Al tubo A1 s ele agrega una gota de clulas A al tubo B1 s ele agrega una gota de clulas B al tubo O1 se le agrega una gota de clulas O 5) Se centrifugan los 9 tubos por 15 segundos. 6) Se sacan los tubos y se interpreta uno por uno su clasificacin en la hoja de reportes para grupos sanguneos.

Lavado de eritrocitos y preparacin de solucin de eritrocitos al 2%. Equipo: 1) 2) 3) 4) 5) Serofuge Tubos 10x75 mm. Pipetas Pasteur, o pipetas transfer. Bulbos de succin Parafilm.

Reactivos: Solucin salina isotnica (SSI).

Material biolgico: Glbulos rojos problema.

Tecnica 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) 10) Centrifugar la muestra a examinar por 3 minutos. Rotular nmero de problema a examinar en otro tubo. Con la pipeta transfer aspirar tres gotas del paquete globular y pasarlo al tubo ya rotulado. Agregar la SSI hasta 2/3 partes del tubo, por la paredes de este para no hacer espuma o burbujas. Tapar la boca del tubo con parafilm mezclar por inversin 6 veces asta tener una solucin homognea. Centrifugar de acuerdo a la calibracin de serofuge (lavado de glbulos rojos). Eliminar el sobrenadante, resuspenda suavemente el botn de eritrocitos. Agregar SSI hasta 2/3 partes del tubo, cubrir con parafilm, agitar 6 veces suavemente. Centrifugar nuevamente y repetir los pasos 7 y 8 por 2 ocasiones (el lavado de eritrocitos se lleva a cabo 3 veces). En el ultimo lavado decantar todo el sobrenadante y tomar una gota del paquete de eritrocitos lavados a otro tubo, agregarle 2 ml de SSI,, para preparar una suspensin al 2%.

Pruebas cruzadas 1) Separar el suero de los eritrocitos del paciente 2) Realizar un lavado de glbulos rojos con SSF al 0.9%. 3) Se rotulan 3 tubos de la siguiente manera: D (prueba mayor) R (prueba menor) AT 4) Al tubo D agregar una gota de glbulos rojos del DONADOR y dos gotas de suero del RECEPTOR 5) Al tubo R agregar una gota de glbulos rojos del RECEPTOR y dos gotas de suero del DONADOR. 6) Al tubo AT agregar una gota de globulos rojos y dos gotas de suero del RECEPTOR. 7) Se ponen a centrifugar los tubos en la serofuge por 15 segundos 8) Se sacan los tres tubos y se anotan en su hoja correspondiente el resultado. 9) Se agregan dos gotas de ENLISST (o de albumina) y se centrifugan por 15 segundos. 10) Se lee su interpretacin y se anota con tubo en mano en su hoja de reporte. 11) Se incuban por 10 minutos a 37 grados centgrados si es con ENLISST (si es con albumina la incubacin es por 30 minutos a 37 grados centgrados). 12) Se sacan los tubos y se centrifugan nuevamente por 15 segundos, y se lee su interpretacin con tubo en mano, se registra en su hoja de reporte. 13) Se aforan los tubos ala mitad con SSF por tres ocasiones. En el ultimo lavado se decanta totalmente el remanente de SSF. 14) Se agregan dos gotas de suero antiglobulina (COOMBS), y se centrifuga por 15 segundos. 15) Se lee su interpretacin y se registra con tubo en mano en su hoja de reporte. 16) Para validar la prueba por ltimo se agrega una gota de CELULAS CONTROL DE COOMBS, y se centrifuga por un minuto. 17) Se sacan los tubos y se lee su interpretacin anotando con tubo en mano en la hoja de reporte. ESTA FASE DEBE DE DAR LOR TRES TUBOS CON AGLUTINACION.

Determinacin del fenotipo Rh El sistema consta de varios antgenos siendo 6 los principales, uno de ellos hipottico, denominados C, D, E, c-, e- (d- es hipottico). El ms importante por su frecuencia es el D ( 94 % de la poblacin es D positivo y 6% es negativo). La tipificacin habitual del sistema Rh con antisuero D, indica que el sujeto investigado presenta o carece de antgeno D ( este es el mas inmunogenico del sistema ), son inmunogenicos en orden decreciente c-, E, C, e-, por lo que se vuelve necesaria su investigacin en quienes resultan D negativos.

Objeitvo: Identificar la presencia de antgenos C, D, E, c-e-, en la membrana del eritrocito.

Fundamento: El contacto de antisuero especifico ( anti C, anti D, anti E, anti c-, anti e- ) con un glbulo rojo que posea el antgeno, provoca aglutinacin macroscpica.

Material: El mismo para la identificacin de Rh.

Reactivos: Sueros anti C, anti D, anti E, anti c-, anti e-.

Tcnica: 1) Rotule tubos de 10x75mm. Como C , D , E , c- , e- . 2) Preparar una solucin del 2-5% de eritrocitos previamente lavados. 3) Agregue una gota de anti C al tubo C Agregue una gota de anti D al tubo D Agregue una gota de anti E al tubo E Agregue una gota de anti c- al tubo cAgregue una gota de anti e- al tubo e4) Agregue una gota de eritrocitos a cada uno de los tubos y mezcle bien. 5) Centrifugue por 15 segundos.

6) Resuspenda suavemente el botn completo en cada uno de los tubos observando la aglutinacin. 7) Grade la aglutinacin en cruces y regstrela en la hoja de reporte de fenotipo Rh.

Interpretacin El fenotipo de Rh se hereda en bloques de 3 antgenos, siendo CDe el fenotipo mas frecuente. El fenotipo de los sujetos Rh negativo es cde. Un sujeto puede ser D negativo, pero si en su fenotipo presenta C o E, su factor de Rh es positivo.

Deteccin de anticuerpos irregulares 1) Rotule un tubo como 1, otro como 11 y otro como AT 2) Agregue una gota de clulas 1 al tubo 1 agregue una gota de clulas 11 al tubo 11 agregue una gota de eritrocitos problema al tubo AT. 3) Agregue dos gotas de suero problema a cada tubo. 4) Agitar suavemente y centrifugar por 15 segundos en serofuge, resuspenda el botn de clulas suavemente, leer la aglutinacin, graduar en cruces y registrar en la hoja de resultados de anti irregulares. 5) Agregar una gota de de LISS o albumina si se emplea LISS se incuba por 10 minutos a 37 grados centgrados, si se emplea albumina se incuba por 25 minutos. 6) Sacar los tubos del incubador y centrifugar por 15 segundos en serofuge. 7) Examine cada uno de los tubos en busca de posible hemolisis, resuspenda el botn, lea la aglutinacin, grade en cruces, o si es negativo registre en la hoja de resultados. 8) Lave las clulas tres veces despus del ltimo lavado decante completamente. 9) Agrague dos gitas del suero de COOMBS, a cada uno de los tubos, agite suevamente. 10) Centrifugue 15 segundos en serofuge. 11) Resuspenda el botn lea si hay aglutinacin, grade en cruces y registre en registre en la hoja de resultados de deteccin de anticuerpos irregularres. 12) ESTA FASE SIEMPRE DEBE DAR POSITIVO. Una reaccin positiva, esta es la aglutinacin o una hemolisis en cualquier tubo hasta el paso 11, indica que el suero problema se encuentra uno o varios anticuerpo irregulares.

Actividades a realizar en el banco de sangre 1) Al iniciar checar la temperatura del refrigerador y registrarla en la hoja, si la temperatura marca arriba de 8 grados centgrados la unidades deben llevarse a otro refrigerador , checar la temperatura en el refrigerador del laboratorio , si la temperatura es adecuada, se mantendrn en el laboratorio mientras se soluciona el problema. 2) Se realizara diario el control de calidad de antisueros. ( especificidad y avidez). 3) Checar en la hoja de programacin cirugas, para realizar las pruebas cruzadas. se debe revisar si el paciente pas al banco de sangre. 4) Cuando se realicen extracciones se anotara en la hoja de peso/volumen los datos: fecha, numero de donador, numero de bolsa y peso. apuntar en la hoja de ingresos, adems si fue donacin familiar o volluntaria. 5) En caso de intercambio, registrar la institucin de donde proviene la unidad, y anotarla en la libreta todos los datos del componente que ingresa. 6) Todos los donadores se deben registrar en la carpeta de serologa. 7) A los donadores diariamente realizarles: grupo sanguneo, anticuerpos irregulares, RPR, rosa de Bengala, en caso de urgencias se realizaran las pruebas especiales (HIV,HCV, AgsHB). En caso de contrario se realizaran los jueves. 8) Toda unidad que se extraiga se debe poner en el refrigerador en posicin vertical. Para su sedimentacin por gravedad. 9) A toda unidad se le registra con nombre completo del donador, numero de bolsa, numero de donador, grupo sanguneo y anotar resultados pendientes. As como fecha de extraccin y caducidad.

Fraccionamiento Preparacin de concentrados eritrocitarios La separacin de globulos rojos se realiza por centrifugacin entre 3400-4000 rpm, por 10 minutos. La temperatura debe ser de 4-6C. Tcnica: 1. Coloque la bolsa de sangre centrifugada o sedimentada (segn sea el caso) en el extractor de plasma. 2. Liberar suavemente el mecanismo de presin del extractor. 3. Cerrar con una pinza hemosttica el tubo que comunica ambas bolsas o hacer un nudo prefabricado, liberar el sellado de la bolsa primaria suavemente, retirndola pinza hemosttica y dejar fluir el plasma. 4. Cerrar nuevamente con la pinza o cerrar el nudo, cuando se haya hecho la remocin de plasma, aplicar en este momento las grapas de cada lado de la pinza. Y cortar con las tijeras, en medio de las dos grapas. 5. Identificar la unidad de plasma anotando datos del tipo de componente que es plasma fresco o envejecido. En caso de ser envejecido se pondr en el anaquel de debajo de refrigerador, para darlo de baja. 6. En caso de ser plasma fresco se pesa y se guarda en el congelador. Se procede a pesar el concentrado de eritrocitos, anotando en la hoja de peso y volumen. 7. Se procede a realizar el hematocrito del C.E. debe de estar entre 70-80%. Preparacion de plaquetas Consideraciones importantes. A) La puncion venosa debe ser limpia, atraumatica y la sangre debe de fluirrapidamente. B) El tiempo de recoleccin no debe ser mayor de 10 minutos, preferentemente de 8 minutos. C) Mantener la sangre a temperatura del laboratorio, no refrigerarla ya que esto puede inducir cambios importantes en su sobreviva, presentndose a los 10-15 minutos de exposicin al frio. D) Es muy importante que nuestro donador no este muy nervioso, ya que esto influye tambin en la funcin de las plaquetas. Una vez separada las plaquetas, se conservara a temperatura ambiente en agitacin constante en el rotador para plaquetas, hasta su transfusin se realiza con filtro especial, el cual banco de sangre lo proporciona.

Componentes sanguneos Descripcin e indicaciones La donacin y transfusin sangunea son procedimientos mdicos bien establecidos, virtualmente inocuos para el donador y esenciales para los enfermos que requieren algunos de los componentes sanguneos. La eleccin cuidadosa del elemento a transfundir favorece el aprovechamiento optimo de la sangre es decir, la donacin de una persona, puede beneficiar a cuatro pacientes al separarse en concentrado eritrocitario, plasma fresco, concentrado plaquetario, erioprecipitado. La disposicin de la sangre por componentes sanguneos ha simplificado los criterios de indicacin de cada uno de ellos, lo que ha su vez permite brindar al enfermo lo que realmente necesita, adems con esto se ha logrado tener un mejor control de calidad y disminuir el riesgo potencial de efectos adversos. Sangre total La sangre obtenida inicialmente de un donador es sangre total, que contiene todos sus componentes activos dentro de las primeras 8 horas de haberse extraido. Indicaciones: La sangre total de menos de 7 dias de extraccin puede ser empleada para exsanguinotransfusion. De hecho en la actualidad la sangre total puede ser indicada en deficiencia sintomtica de la capacidad transportadora de oxigeno con hipovolemia marcada asociada a choque, sangrado activo con perdidas del volumen circulante, pacientes con sangrado activo que han recibido cuando menos cuatro unidades del concentrado eritrocitario, en transfusin masiva. (siempre y cuando la sangre total sea fresca menos de 8 horas de haber sido extraido). Volumen aproximado: 405-495ml Tiempo de infusin: de 3-4 horas Concentrado eritrocitario Los eritrocitos son transfundidos para mejorar la capacidad de transportacin del oxigeno. Los criterios para el empleo de paquete globular debe ser definido y bien establecido de acuerdo a los criterios mdicos y en conjunto con banco de sangre que incluyan categoras de pacientes considerando el riesgo, edad, funcin cardiopulmonar y renal. Indicaciones: y y Anemia sintomtica en un paciente normovolemico, considerando el nivel de hemoglobina no corregibles por otros medios. Perdida aguda (>15%) del volumen sanguneo total estimado.

y y

Nivel de hemoglobina preoperatorio 8 gr asociado a ciruga mayor con perdida de sangre en gran cantidad. Nivel de hemoglobina 9g/dl en pacientes con un rgimen de transfusin crnica.

Caractersticas del concentrado eritrocitario: y y y y y y La unidad produce un incremento de 1 gramo de hemoglobina, 3% de hematocrito. Contiene un volumen entre 180-350ml. El hematocrito de cada concentrado es de 70-80% Su tiempo de infusin es de 2-3 horas. Su tiempo de preservacin, es de acuerdo al anticoagulante utilizado, el mas utilizado es actualmente CPDA-I con 35 dias, o CPDA-I con manitol 45 dias. Para su transfusin se utiliza filtro normal, dependientes de antecedentes de reaccin transfusional se usara filtro especial SEPACELL R500.

Plasma fresco congelado El plasma fresco congelado es el obtenido y congelado a menos de 40C dentro del intervalo de 8 horas siguientes a la donacin. Si elplasma es obtenido despus de 8 horas de colectada la sangre total se denomina plasma envejecido y su concentracin de los factores de coagulacin V y VIII se reducen considerablemente. Indicaciones teraputicas y y y y y y y y y Deficiencia de factores de coagulacin (factor II, V, VII, IX, XI, XIII). Hemofilia B (en sustitucin del concentrado purificado de F.IX). Coagulacin intravascular. Defectos multiples de factores. Intercambio plasmtico en la purpura trombocitopenica/sndrome hemoltico urmico). Revertir el efecto de los anticoagulantes orales. Reemplazamiento de anticoagulantes naturales (deficiencia de T-III, deficiencia de protena C y S). Enfermedad heptica. Sndrome de transfusin masiva.

No se debe usar plasma fresco como expansor del volumen o suplemento nutricional Tecnicas de transfusin La bolsa de plasma se mantiene a balo maria a 37C, la descongelacin de la bolsa no debe durar mas de 30 minutos, la bolsa se mantiene dentro de una bolsa. Una vez descongelado el plasma se debe de transfundir entre las primeras 12 horas. El plasma se transfunde con filtro normal. Caractersticas del plasma fresco congelado

El plasma contiene un volumen entre 180-350ml, el plasma contiene 250 a 400 mg de fibringeno por unidad y 100 a 150 UI/dl de factor VIII. La dosis recomendada es de 10-15 ml/kg de peso. La sobrecarga circulatoria puede ocurrir cuando se exceden dosis de 30 ml/kg/dia. Crioprecipitado Uso teraputico Los crioprecipitados se emplean en pacientes con hemofilia A, suceso que permite mejorar la calidad en la atencin de estos pacientes al transfundirse especficamente la cantidad de factor VIII, con el transcurso del tiempo y con el conocimiento de las protenas presentes en los crioprecipitados, su uso teraputico se amplio a las enfermedades como: enfermedad de von Willebrand, deficiencias de fribrinogeno, disfibrinogenemias, CID y deficiencias de factor XIII. Dosis: Una unidad de F.VIII x Kg de peso incrementan en 2% la actividad plasmtica del F.VIII y la cantidad del F.VIII requerida depende del sitio e intensidad de la hemorragia. En los pacientes con CID en general se recomienda la transfusin de 10 bolsas de crioprecipitados para un aporte de fibringeno entre 2000 y 2500 mg. Las complicaciones asociadas al uso de los crioprecipitados se presentan en caso de una transfusin de una gran cantidad de bolsas, que por la carga de fibringeno y fibronectina pueden ocasionar disfuncin plaquetaria potencialmente hemorrgica. Concentrado plaquetario: La transfusin de concentrados plaquetarios es un tratamiento til en pacientes conenfermedades oncohematolgicas y hematolgicas. El objetivo de la transfusin de plaquetas es prevenir la morbilidad y mortalidad secundaria a hemorragia que pueden ocurrir en pacientes cuando la quimioterapia o la historia natural de la enfermedad producen trombocitopenia severa. Las indicaciones de de plaquetas incluyen profilaxis y tratamiento de hemorragia. Es importante considerar es efectiva en prevenir episodios de hemorragia, sin embargo tambin es cierto que el riesgo de la infeciones transmitidas por la transfusin y la aloinmunizacin y la refractariedad a plaquetas son un riesgo importante. Indicaciones teraputicas: Hemorragia clnicamente significativa debida a trombopenia y trombopatia . PROFILACTICAS. Trombopenias severa reversible: PLAQUETAS MENOS DE 10,000/microL ( no en PTI). Trombopenia menor de 30,000/microL y riesgos asociados (fiebre, hipertensin y drogas).

Recuento de plaquetas menor a 50,000/microL en pacientes que van a ser sometidos a ciruga mayor.

Rendimientos y dosis: La dosis habitual es de una unidad por cada 10 kg de peso cada unidad debe producir un incremento de 5,000 plaquetas por microL. Una transfusin de plaquetas es efectiva si se corrige la hemorragia activa o si existe un incremento en la cuenta de plaquetas. El efecto hemosttico no es inmediato comenzando entra las cinco y siete horas post transfusin, siendo la duracin media del efecto en condiciones normales dos a tres das. El control de plaquetas post transfusin se debe realizar a la hora de haber transfundido el ultimo paquete.

Tipificacin ABO: prueba inversa Centrifuga serolgica Gradilla Tubos de ensayo de 12x75 mm Pipetas de transferencia Marcadores Material Biologico : Eritrocitos del grupo A1 suspendidos al 2% Eritrocitos del grupo B suspendidos al 2% Eritrocitos del grupo O suspendidos al 2% TECNICA: 1) Colocar tres tubos de 12x75 y rotularlos como A1 , B , o 2) Agregar una gota de eritrocitos A1 al tubo A1 agregar una gota de eritrocitos B al tubo B agregar una gota de eritrocitos O al tubo O 3) Agregar dos gotas de suero problema a cada tubo, agitar suavemente para homgenizar. 4) Centrifugar en serofuge por 15 segundos, resuspenda suavemente, leer la aglutinacin tubo por tubo, gradue en cruces y registre los resultados en la hoja de reporte con tubo en mano, como prueba inversa. INTERPRETACION: La aglutinacin de lo eritrocitos por el plasma correspondiente demuestra la presencia del anticuerpo correspondiente en el plasma estudiado. Clulas A1 O+ 4-3+ O 4-3+ Clulas B 4-3+ 0 O 4-3+ Clulas O 0 0 0 0 Gpo. indentificado A B AB O

Determinacion del subgrupo de A (A1 y A2) EQUIPO: Centrifuga serolgica Gradilla Tubos de ensayo de 12x75 mm Pipetas de transferencia Marcadores REACTIVOS: Lectina Anti A1 ( extracto de Dolichus Biflorus) MATERIAL BIOLOGICO: Eritrocitos problemas suspendidos al 5% TECNICA: 1) 2) 3) 4) 5) Colocar un tubo de 12x75 mm y rotularlo como A1 Agregar una gota de lectina Anti A1 al tubo A1 Agregar una gota de eritrocitos problema al tubo A1 Agitar suavemente para homogenizar y centrifugar en serofuge por 15 segundos Resuspenda suavemente, lea la aglutinacin, grade en cruces y registre en la hoja de tipificacin como lectina A1 con tubo en mano.

Nota : De 2-4+ el subgrupo identificado es A1 De 0-1+ probablemente A2 u otro subgrupo de A Las persona con subgrupo de A2, prensentan reduccin en la cantidad de N-acetilgalactosaminil transferasa, por lo que presenta ms antgeno H (substancia H) en la superficie de los eritrocitos. A1 y A2 constituyen los grupos mayores de A (99%). De ellos aproximadamente el 80% es A1 y el 20% es A2.

Determinacin el antgeno D ( factor Rh) OBJETIVO: Identificar la presencia del antgeno D (Rh) en la membrana del glbulo rojo. Material y equipo: El mismo utilizado en la determinacin del grupo ABO Reactivos: Suero anti D Suero control Rh ( debe ser de la misma marca que el suero Anti-D) Anti globulina humana ( suero de coombs) Material biolgico: Eritrocitos problema suspendidos al 5% y Clulas control de coombs. Tecnica: 1) 2) 3) 4) 5) 6) Colocar en la gradilla dos tubos de 12x75 mm. Y rotularlos como D y CRh Agregar una gota de suero Anti-D al tubo D Agregar de control Rh al tubo CRh Agragr una gota de eritrocitos problema a cada tubo Agite suavemente, centrifugar en serfuge por 15 segundos Se resuspende suavemnete, leer la aglutinasion, graduar en cruces y resgitrar tubo por tubo en la hoja de reporte de tipificasion ABO. Asegurarse de resuspender completamente todo el botn antes de decidir que no a ocurrido aglutinacin. 7) Si al reaccin de aglutinacin en el tubo, D es de 4+, 3+, o 2+; reportar como Rh positivo. Aqu concluye la prueba. el tubo CRh no debe mostrar aglutinacin. Si esto ocurriese debe comunicarse al responsable del banco. Se debe repetir la prueba con reactivos nuevos, Anti-D y Control de Rh. 8) Si no se observa aglutinacin en el tubo D , o si esta es <2+, repetir el procedimiento desde 1, si se repiten los resultados 9. Tecnica N5 Tipificaion de la variante Du.

9) Sila reaccin de aglutinacin es menor de 2+ incube los tubos D y CRh a 37C por 30 minutos en el termoblock. 10) Saque los tubos agtelos suavemente para homogenizar y centrifuge por 15 segundos en serofuge, resuspenda suavemente, lea la aglutinacin gradue en cruces registre en la hoja de tipificasion ABO Rh como albumina a 37C, si ocurre aglutinacin reportar como Rh positivo, si no ocurre aglutinacin pasa al numero 11. 11) Lave las clulas con SSF. Tres veces asersiorandose de suspender el botn completamente. En el ultimo lavado decante completamente. 12) Agregue dos gotas de suero coombs a cada tubo 13) Agite suavemente para homogenizar, centrifuge 15 segundos en serofuge. 14) Resuspenda suavemente, lea la aglutinacin, gradue en cruces y registre en lahoja de resultados ABO Rh. si ocurre aglutinacin registre como Du positivo, debe considerarse como Rh positivo. si no ocurre aglutinacin registre como Du negativo debe considerarse Rh negativo. debe practicarse fenotipo de Rh. 15) Para validar la prueba ; agregue una gota de clulas control de coombs. agite suavemente, centrifugue 15 segundos en serofuge resuspenda suavemente, lea la aglutinacin, gradue en cruces y registre en la hoja de reporte ABO Rh. si no ocurre aglutinacin, debe repetirse toda la prueba desde el lavado de eritrocitos.

Anti-D 4+, 3+, 2+ 2+, 1+,0

CRh 0 0

Conclusin Rh positivo ?

Despus de la incubacin Anti-D Aglutina No aglutina CRh No aglutina No aglutina Conclusin Rh positivo Pasa a fase de coombs

Fase de coombs Anti-D Aglutina No aglutina CRh No aglutina No aglutina Conclusiones Du positivo Du negativo

Determinacin de hematocrito ( tcnica de microhematocrito) Fundamento: El hematocrito es el volumen de eritrocitos expresados como un procentaje del volumen del sangre total de una muestra. El hematocrito venoso coincide estrechamente con el obtenido por puncin cutnea. La muestra puede obtenerse de tubos con o sin anticuagulante, en caso de anticuagulante se aceptan la heparina, oxalato o EDTA. Material y equipo: 3-5 de sangre venosa en tubos con EDTA. O sangre venosa obtenida de muestra directa por puncion capilar. Tcnica: 1) Mezclar por inversin 6 veces el contenido del tubo 2) Llenar le tubo de microhematocrito por atraccin capilar, ya sea a partir del punto de atraccin capilar o tubo de sangre venosa 3) Permitir que la sangre fluya libremente en el tubo capilar inclinndolo un poco. 4) Llenar el capilar a tres cuartos de su capacidad. 5) Retirara el capilar limpiando el extremo que estuvo en contacto con el punto de muestra. 6) Sellar el capilar por el extremo con la marca sin pasar la marca 7) Colocar en la microcentrifuga el capilar con el extremo sellado dirijido hacia afuera 8) Centrifugar de acuerdo ala calibracin dela microcentrifuga 9) Leer el hematocrito con la ayuda de un lector o con regla graduada en centmetros 10) Registre el resultado en la hoja de seleccin de donador y en libro de donadores. Resultados: Valores aceptados NOM-003-SSA2-1993 Sexo Masculino femenino Hematocrito 0-1500 SNM 41% 38%

Preparacin de eritrocitos sensibilisados (clulas control de coombs) Equipo y material: Tubos de 12x75mm Pipetas de transferencia Termoblock a 37C Serofuge Reactivos: SSF 0.9% Albumina bobina al 22% Antiglobulina humana ( suero de coombs). Material biolgico: Eritrocitos grupo O Rh positivo Tecnica: 1) Centrifugar 2 ml de sangre O positivo 2 minutos en serofuge. Eliminar el sobrenadante. 2) Lavar los eritrocitos con SSF 4 veces, en el ltimos lavado eliminar todo el sobrenadante. rotular como tubo 1 3) En otro tubo mezclar 4 gotas de suero Anti-D 16 gotas de albumina bobina al 22%, rotular como tubo 2 4) Agregar todo el contenido del tubo 2 al tubo 1, cubrir con parafilm,mezclar suavemente 6 veces por inversin 5) Incubar en termoblock a 37C durante 30 minutos 6) Lavar los eritrocitos 3 veces con SSF 7) Tomar una gota de eritrocitos y diluir al 5% con SSF ( una gota de eritrocitos + un ml de SSF). 8) Practicar control de calidad: En un tubo de 12x75 colocar dos gotas de eritrocitos sencibilisados mas tres gotas de suero de coombs agitar suavemente, centrifugar variando el tiempo de 5 segundos a partir de 15 segundos resuspender suavemente, lea la aglutinacin, gradue en cruces y registre en la hoja de control de calidad de reactivos y clulas CCC. calibre de acuerdo al tiempo optimo hasta obtener una aglutinacin de 3-4 cruces. conservar los eritrocitos a 4-6C durante 4 o 5 dias, o hasta que se observe hemolisis

Prueba de coombs directo Funadamento: el antisuero de coombs utilizado en esta prueba contiene una inmunoglobulina (IgG) y fracciones del complemento (C3d) dirijidas cntra anticuerpos IgG unidos ala membrana del eritrocitos. Un resultado positivo se obtiene por medio de una reaccin antgeno-anticuerpo la cual es visible al efectuarse la aglutinacin en los eritrocitos. Material y equipo: El utilizado en la determinacin de ABO Reactivos: SSF .9% Suero de coombs ( anti IgG) poliespecifico Clulas control de coombs (CCC) Material biolgico: 2 ml con EDTA ( centrifugar el tubo y tomar las dos gotas de paquete globular). Tcnica: 1) Colocar dos gotas de la muestra problema en un tubo 12x75 mm, debidamente identificado 2) Agrega dos ml de SSF 3) Colocar dos gotas de las suspensin anterior en un tubo identificado como CD 4) Lavar tres veces con SSF; en el ultimo lavado eliminar todo el sobrenadante colocando la boca del tubo sobre una gasa. 5) Adisionar dos gotas de suero de coombs y homogenizar 6) Centrifugar 15 segundos segn el tiempo obtenido en la calibracin del serofuge; fase antiglobulina. 7) Leer la aglutinacin, graduar en cruces. Anotar resultados en la libreta correspondiente. 8) Si se observa aglutinacin reportar; coombs directo positivo. 9) Si no se observa aglutinacin, agrega una gota de CCC y repetir los pasos 6 y 7 10) Para validar la prueba el resultado de la CCC debe ser positivo una cruz o dos cruces

interpretacin: Positivo Negativo invalido Aglutinacin en el paso numero 8 No aglutinacin en el paso numero 8 CCC aglutinan No se observa aglutinacin: CCC no aglutinado repetir proceso

Rosa de bengala Introduccin: El rosa de Bengala es una tcnica de aglutinacin en portaobjetos o placa para la deteccin cualitativa y semicuantitativa de anticuerpos Anti-brucela en suero humano. Las suspensin bacteriana y coloreada, es aglutinada por Ac, IgG o IgM presentes en el suero del paciente. Equipo y material: Agitador mecanico rotatorio de velocidad regulable a 80-100 RPM Pipetas de plstico incluidas en el kit Placas de plstico con fondo blanco incluidas en el kit Aplicadores de madera Cronometro Centrifuga Reactivos: Rosa de bengala Control positivo Control negativo Muestra: Suero fresco. Estable 7 dias 2-8 C o 3 meses a -20C la muestra con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de la prueba. No utilize muestras altamente hemolisadas o lipemicas. Tcnicas: Antas de inicar a temperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a temperatura baja. 1) Centrifugar la muestra a utilizar por 4 minutos y separa el suero y rotular numero de muestra 2) Depositar una gota d ela muestra con la pippeta incluida en el kit y una gota de cada uno de los controles positivos y negativos, sobre crculos distintos en la placa incluida en el kit.

3) Homogenizar suavemente el reactivo de rosa de bengala antes de usar. Depostitar una gota con el gotero del kit junto a cada una de las gotas anteriores 4) Mezclar las gotas con un palillo procurandi extender l amuestra por toda la superficie interiro del circulo. Emplear palillos distintos para cada muestra 5) Situar la placa sobre el agitador rotatorio a 80-100 RPM durante 4 minutos Importante el exeso de tiempo de agitacin puede originar la aparision de falsos positivos. Interpretacin: Examinar microscpicamente la presencia o ausencia de aglutinacin imedientemente despus de retirar la placa del agitador a presencia de aglutinacin indica una concentracin de anticuerpos Anti-brucela igual o superior a 25 uL/ml. Control de calidad: Se recomienda utilizar el contro positivo y negativo para controlar la funsionalidad del reactivo. Interferencias: Hemoglobina (10g/L) lpidos y factores reumatoides no interfieren. La bilirrubina interfiere a partir de 2.5mg/dl.

RPR Prueba rpida de Reagina (sfilis) La prueba de RPR es una prueba de floculasion no treponemica macroscpica que es utilizada para detectar y cuetificar reaginas , un anticuerpo anti-lipidico encontradi en el suero o plasma de las personas con sfilis y ocasionalmente en personas con infecciones agudas o crnicas en otras condiciones de la sfilis. El antgeno utilizado en el equipo es una modificacin del antgeno VDRL el cual contiene macropartculas de carbn para realzar la diferencia entre un resultado positivo y uno negativo. Si una muestra contiene reaginas, ocurre la floculacin con las partculas de carbn contenidas en la suspensin del antgeno, la cual aparece como un acumulo negro. Las muestras no reactivas se observan con un ligero color gris material y equipo: pipeta de plstico placa de plstico con circulo pipetas agitadoras aguja numero 18 sin bisel ( utilizada para dispensar aproximadamente 17 ml de la suspensin del Ag) rotor de 100 RPM cronometro reactivos: suspensin de antgeno RPR control positivo de RPR control negativo de RPR material biolgico: suero o plasma con EDTA nota: evitar la hemolisis si la muestra esta severamente lipemica de manera que se oscurece es el estado de las partculas de antgeno la muestra no debe ser utilizada. Tecnica Prcedimiento cualitativo : 1) lleve a temperatura la suspensin del antgeno de RPR 2) rotular en la tarjeta de identificacin de las muestras y de controles 3) con la pipeta de plstico tome una gota de la muestra problema y en posicin vertical colocar una gota de muestra en el sitio correspondiente. Utilizando el extremo plano de la pipeta, extienda la muestra para cubrir el total de la superficie del crculo. Repetir el mismo procedimiento para cada muestra. 4) Colocar una gota de los controles positivo y negativo en el sitio correspondiente

5) Agite el frasco de suspensin del antgeno antes de utilizarlo, colocando una hota de suspensin de antgeno sobre cada muestra NO EXTIENDA. 6) Agite por 8 minutos a 100 RPM en el rotador 7) Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y agtela breve y suavemente 8) Lea macroscpicamente bajo la luz intensa Resultado: REACTIVO: presencia de floculos grandes o pequeos en el centro o la periferia del circulo de la prueba . DEBIL REACTIVO: presencia de floculos pequeos pero definidos. NO REACTIVO apariencia lisa, uniforme pero sin floculos visibles. Los resultados positivos deben ser confirmados mediante pruebas de las muestras utilizando procedimientos cuantitativos. Se recomiendan pruebas serolgicas confirmativas tales como el ensayo microaglutinasion para anticuepros treponemicos (MHA-TP). El diagnostico final debe estar en base ala correalsion de los resultados de prueba junto con otros hallazgos clnicos. Las muestras que son no reactivas pero dudosas, se deben de repetir y cuantificar ya que se pueden detectar reacciones poco frecuentes en prozona.

Substancias interferentes Como todo el antgeno tipo cardiolipina, pueden ocurrir resultados falsos positivos. Estos resultados pueden ser causados enfermedades tales como lepra lupus eritrematoso mononucleosis infecciosa, malaria y neumona viral. Varios reportes indican la presencia de resultados falsos positivos en el embarazo. Enfermedades autoinmunes y adicciones narcoticas pueden dar reacciones falsas positivas.