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El papel de los TLR en la activacin de los neutrfilos.

Los neutrfilos son las principales clulas inmunes efectoras, que son rpidamente reclutadas a los sitios de infeccin y de inflamacin para aportar una defensa temprana contra los microorganismos invasores. Esta funcin se ve facilitada por la expresin de los Toll-like , miembros de la familia del receptor (TLR) de los neutrfilos, lo que permite el reconocimiento de un amplio repertorio de patgenos asociados (PAMP patrones moleculares) y lo que desencadena la respuesta a patgenos invasores. La activacin de TLR da lugar a importantes procesos celulares, incluyendo las especies reactivas del oxgeno (ROS) de generacin, la produccin de citoquinas y aumento de la supervivencia, lo cual puede contribuir a la patognesis de la inflamacin crnica, cuando la sealizacin se convierte en mal regulada. En los resultados de lesiones a su vez, la inflamacin y el tejido en la liberacin de TLR ligandosendgenos, conocida como daos patrones

moleculares asociados (Damps), que son una clase de rpido crecimiento de potentes estmulos inflamatorios. Damps actan de forma autocrina, alertando a la gran cantidad de daos, pero tambin puede amplificar la inflamacin que conduce a mayores daos al tejido. Esta revisin destaca la reciente literatura sobre la funcin de los neutrfilos TLR y la regulacin durante la enfermedad, y proporciona una visin general de la zona recientemente emergente de las respuestas de los neutrfilos a Damps.

Introduccin
La inflamacin neutroflica es un componente crucial de nuestra respuesta a los antimicrobianos, sin embargo, el potencial de esta respuesta inflamatoria de producir un dao tisular local y an ms la inflamacin tambin est bien descrito . Producen alrededor de 108 clulas por minuto y representa aproximadamente el 70% de la circulacin de los glbulos blancos, neutrfilos representan nuestras 'unidades de respuesta rpida de cuando se enfrentan a la infeccin. Una parte apical de esta respuesta es la deteccin de microbios invasores a travs de patrones moleculares asociados a patgenos (PAMP) por receptores de tipo Toll (TLR), que tanto la amenaza de decodificacin (bacterias Gram-positivas o negativas, virus, hongos) y adaptar la requeridos a los antimicrobianos
respuesta. Los neutrfilos expresan la mayora de los miembros de la familia TLR, que slo le faltan los receptores intracelularesTLR3 y TLR7. Dado que los neutrfilos sobre todo defenderse de las bacterias, son los TLRs situados en la superficie celular que son los que ms ha estudiado bien en los neutrfilos la biologa TLR, sin embargo, los TLR intracelular tambin puede jugar un papel importante en las respuestas de los patgenos. Tambin ganando la atencin es la capacidad de TLRs para detectar molculas endgenas asociadas con nombre dao-patrones moleculares (Damps), que son producidos por las clulas en respuesta a la lesin o infeccin. Esta revisin tiene como objetivo poner de relieve la literatura reciente (por lo tanto en algunas de las crticas circunstancias ocupan el lugar de las referencias originales) en funcin de TLR de neutrfilos y la regulacin durante la enfermedad, y proporcionar una visin general de las respuestas de los neutrfilos a HUMEDECE. TLR de la superficie celular TLR2 y TLR4 se el ms estudiado de todos los TLRs de neutrfilos, la mediacin de las respuestas a las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas,

respectivamente. TLR2 heterodimerises conTLR1 para detectar pptidos triacilados o TLR6 para detectarpptidos diacilados, mientras que el TLR4 reconoce el lpido Acomponente del lipopolisacrido (LPS) Los neutrfilos tambin expresan TLR co-receptores, incluyendo CD14 y CD11b/CD18, que cooperan con TLR4 y TLR2 en la la membrana plasmtica. Finalmente, TLR5 reconoce flagelina bacteriana.

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La ligadura de los TLR de la superficie celular se ha demostrado que tiene efectos mltiples y de gran alcance sobre los neutrfilos, incluyendo la produccin de citoquinas, especies reactivas del oxgeno (ROS) de generacin, el cebado, la expresin del receptor y la fagocitosis [7]. Un elemento especialmente crtico de la funcin de los neutrfilos es la regulacin de los neutrfilos vida. Los neutrfilos son de corta duracin y constitutivamente clulas mueren por apoptosis, un mecanismo anti-inflamatorio de la eliminacin de clulas. La inhibicin de la apoptosis de los neutrfilos, por ejemplo, en el sitio de la infeccin, permite que estas clulas permanecen funcionalmente competente, sin embargo, esto tambin puede conducir a la liberacin del contenido de clulas txicas y finalmente lesiones inflamacin y el tejido. Incluso antes de su reconocimiento como un ligando TLR4, LPS fue un mediador, as se describe de la supervivencia de los neutrfilos [8,9]. Hemos demostrado que en LPS de hecho ejerce un efecto de supervivencia temprana (4 h), pero es un factor de mal supervivencia de los neutrfilos en los puntos ms tarde (22 h), y proporcion pruebas de que las observaciones anteriores relativas a la LPS como un factor clave deneutrophilsurvival puede haber sido, en parte, debido a los efectos indirectos sobre las clulas monocitos presentes en las culturas de neutrfilos Esto puede

representar un mecanismo de proteccin que la generacin de preventsthe de larga duracin, las poblaciones deneutrfilos altamente activados sino que tambin proporcionauna funcin de los monocitos / macrfagos en la regulacin de la inflamacin. Por otra parte, hemos demostrado que TLR4 y los componentes de sealizacin corriente abajo MyD88 y TIR de dominio que contienen el adaptador inductor de interfern-b(TRIF) (vase ms abajo la seccin "la sealizacin TLR ') son necesarios para la supervivencia temprana de neutrfilos, lo que indica la sealizacin involucra tanto los brazos de la va TLR4[11]. en apoyo de esto, TLR4 bloqueo de anticuerpos fueron eficaces en la inversin de supervivencia de los neutrfilosinducida por la enfermedad pulmonar obstructiva crnica(EPOC) de lquido bronquial, lavado broncoalveolar (LBA) in vitro[12]. Este aumento de neutrfilos suggeststhat esperanza de vida observada en los pulmones de los pacientes con EPOCpuede ser, en parte, mediada byTLR4 agonistas. TLR intracelular Los TLRs intracelulares son principalmente de la deteccin de ARN y ADN patgenos dentro del endolysosome. TLR3 detectavirus de doble cadena (ds) RNA, TLR7 y TLR8 reconocen virusde cadena sencilla (ss) de ARN, mientras que TLR9 detectaunmethylated dinucletidos CpG en el ADN bacteriano [2]. Los neutrfilos son sensibles a TLR8 y ligandos TLR9, pero no responden a los activadores de la TLR3 o agonistas TLR7ssRNA virales que

actan a travs de TLR8 se ha demostrado que inhiben la apoptosis de los neutrfilos humanos [16], estimular la produccin de citocinas, inducen ROS ydegranulacin [14] y el primer para la biosntesis de mediadores inflamatorios lpidos [13]. Los neutrfilos tambin expresan constitutivamente otros receptores intracelulares antivirales de reconocimiento de patrones incluyendo acidinducible retinoicoI-gen (RIG-I) y protenas melanoma differentiationassociated 5 (MDA-5), que detectan la presencia de ADN bacteriano dsRNAactiva los neutrfilos a travs de TLR9, mejorando la funcin fagoctica, causando regulacin de las molculas de adhesin, la generacin de citoquinas (principalmente la interleucina (IL) -8, pero tambin IL-6 y factor de necrosis tumoral a (TNF)), ROS yespecies reactivas de nitrgeno (RNS) la sntesis y la supresin de la apoptosis de los neutrfilos (un nuevo examen en el) .
la sealizacin TLR Dadas las limitaciones de estudiar las vas intracelulares de los neutrfilos humanos primarios, las vas de sealizacin TLRcomplejos han sido ampliamente estudiado en otras clulas yson objeto de muchas crticas elegantes (por ejemplo). En resumen, el inicio de la sealizacin a travs de la unin del ligando / receptor de dimerizacin es seguido por la contratacindel adaptador, que a grandes rasgos se divide la sealizacin TLR en dos vas distintas. La va MyD88 dependiente es utilizada por todos los TLR, con la excepcin de TLR3, y conduce a la activacin del receptor de interleucina-1 asociado quinasa (IRAK) familia de quinasas y posteriormente TNF receptor del factor asociado (TRAF6) y TRAF3. La sealizacin de TLR2 y TLR4 de sealizacin requieren, adems, el peaje adaptador de puente receptor de la interleucina-1 (TIR) de dominio que contiene protena adaptadora (TIRAP) / adaptador como MyD88(Mal) para vincular los receptores de MyD88. La va dependiente de TRIF es utilizado por TLR3 y TLR4 a travs de la molcula adaptadora adaptador de puente TRIFrelacionados (TRAM), y conduce directamente a la activacin deTRAF3 y TRAF6. Tanto las vas en ltima instancia resultar enla translocacin nuclear de uno o ms factores de transcripcin(en su mayora el factor nuclear (NF) kB, la protena quinasaactivada por mitgenos (MAP) y los factores reguladores de interfern). La activacin del factor de transcripcin conduce a la expresin de las protenas efectoras, en particular, las citoquinasy quimioquinas. Aunque hay muchos puntos en comn entre la va de sealizacin, diferentes ligandos activar mltiples vas endiferentes tipos de clulas que permiten una respuesta altamente adaptado celular. La funcin de un nmero de estos miembros de la va de sealizacin dentro de los neutrfilos se ha confirmado mediante natural o generado laboratorio gen knockouts. Por ejemplo, los neutrfilos humanos primarios de los individuos con una deficiencia autosmica recesiva IRAK4 han proporcionado informacin sobre el papel de esta quinasa en la fagocitosis, quimiotaxis y la generacin de ROS. IRAK4 es una parte central del programa de muerte bacterianaen los sistemas humanos, jugando un papel clave en la defensa inmune contra microorganismos pigenos importantes, en particular, Staphylococcus aureus y la Pseudomonas aeruginosa[23,24]. Van Bruggen et al. espectculo IRAK4 se requiere para todas las

respuestas TLR con la excepcin de TLR9, aunqueinteresante, IRAK4 deficientes en los neutrfilos no se altera ensu capacidad de matar S. aureus, P. aeruginosa o Candida albicans, lo que sugiere que el mecanismo de muerte neutrfilos es independiente de TLRs /IRAK4 en sistemas de clulas individuales, aunque in vivo, la activacin de TLRs directa o indirectamente todava se puede suponer que contribuyen a las respuestas eficaces neutrfilos a estos patgenos. Los neutrfilos tomadas de IRAK4 o ratonescon deficiencia de TRIF muestran que IRAK4, pero no TRIF, es crucial para la exocitosis de los orgnulos secretorios de neutrfilos en respuesta a LPS [27]. Los ratones deficientes enMyD88 o ratones con deficiencia de TRIF tambin han proporcionado pruebas de la funcin fundamental de los adaptadores de estos en la destruccin bacteriana, y enmodelos de infeccin, las dos cepas de ratn knockoutdemostraron que la supervivencia con discapacidad reduce la eliminacin de bacterias, inflamacin de las vas y el aumento dela expresin de citoquinas [28]. Adems, MyD88 ratones deficientes son incapaces de reclutarneutrfilos al sitio de una infeccin [28,29]. Hemos descrito anteriormente la importancia de las redes de citoquinas dependientes entre las clulas del tejido residentes y clulas mononucleares en la regulacin del reclutamiento de neutrfilos y la funcin [30,31]. Por lo tanto, parece factible que la falta de MyD88 en los no neutrfilos (clulas epiteliales, monocitos) se traducir en la reduccin de patgenos, la respuesta inflamatoria y de sealizacin de IL-8 de produccinde estas clulas, lo que tendr consecuencias importantes parael reclutamiento de neutrfilos. Neutrfilos TLRs y la enfermedad Se sabe mucho sobre los cambios funcionales de los neutrfilosdespus de la ligadura de TLR por los agonistas sintticos o componentes patgenos [3,32-37], y la investigacin en esta rea contina para describir los efectos proinflamatorios de laabrumadora mayora agonistas TLR. Ms recientemente una gran cantidad de investigacin se ha centrado en los efectos de la activacin de TLR por el patgenoconjunto. La regulacin directa y selectiva de los neutrfilos y la activacin de la expresin de TLR por las tres clases de agentes patgenos (bacterias, hongos, virus) que se ha descrito. Por ejemplo, la bacteria Gram negativo Helicobacter pylori aumentaTLR2 y TLR4 expresin en la superficie de los neutrfilos humanos, y el bloqueo de estos receptores inhibe la infeccin por H. pylori inducida por la produccin de IL-8 e IL-10, pro-inflamatorias y antiinflamatorios cytokinesrespectively [38]. El impacto recproco de regulacin de la expresin de TLR y laproduccin de citoquinas despus de la infeccin por H. pylorian no se ha descrito. El hongo Paracoccidioides brasiliensistambin aumenta TLR2 expresin en la superficie de los neutrfilos, pero regula a la baja la expresin de TLR4 [39].Curiosamente P. brasiliensis utiliza TLR4 en lugar de TLR2 para acceder a los neutrfilos humanos [39], lo cual sugiere que la regulacin de la expresin de TLR es una respuesta del huspeda la infeccin en lugar de una meta directa del patgeno. RLDbloqueo, particularmente TLR4, se ha demostrado que inhibenparcialmente la produccin de neutrfilos IL-8 e IL-10 en respuesta a la infeccin por P. brasiliensis [39]. Adems, la IL-8se ha mostrado de participar en el

retraso de la muerte celularde neutrfilos a la infeccin por P. brasiliensis mediando unefecto anti-apopttico, y permitiendo que el hongo de persistirintracelularmente, lo que sugiere que los TLRs puede ser utilizada por el hongo de garantizar su propia multiplicacin [39]. TLR4 es tambin downregulated en la sangre perifrica y BAL neutrfilos aislados de nios con severa por virus sincicial respiratorio (VSR) bronquiolitis en comparacin con los controles [40]. TLR4 reconoce VRS a travs de su fusin superficial (F) de protenas [41]. Los datos presentados en forma de resumen indican que las protenas de RSV se unen a la sangre y los neutrfilos BAL, y cidos nucleicos virales se han detectado dentro de los neutrfilos que indican infeccin activa de estas clulas [40,42].Sin embargo, la consecuencia de los neutrfilos TLR regulacin durante la bronquiolitis por VRS es desconocida. Se desprende de los estudios antes de que quedan muchas preguntas acerca de la importancia de la regulacin de la expresin de TLR la superficie de los neutrfilos en respuesta a estmulos patgenos. Por ejemplo, TLR4 se cree que permanecer funcional incluso a niveles extremadamente bajos de expresin de superficie, por ejemplo unos pocos cientos o menos receptores por clula en clulas dendrticas inmaduras [43], as que la importancia funcional de los niveles de expresin de los receptores son upregulated o downregulated puede ser modesto . Otros factores a considerar son la capacidad de los agonistas de TLR a primera o la funcin tolerise neutrfilos.Cebado de neutrfilos puede mejorar su capacidad para el hogar de los tejidos, prolongar la vida til y por tanto la capacidad funcional en el lugar de infeccin, y causar un aumento dramtico en la respuesta de estas clulas a un agente de activacin alternativa [44]. Aumentado expresin de cebado asociadas marcadores ha sido inform sobre los neutrfilos de sangre perifrica durante severa exacerbaciones de la EPOC, probablemente debido a lo local eventos inflamatorios y expresin de estos imprimacin Los marcadores se reduce al tratamiento [45,46]. Tiene recientemente han reportado que TLR4 expresin (pero no TLR2) es upregulated sobre la infiltracin de neutrfilos detectadas en el LBA de pacientes con EPOC [12]. Adems, el bloqueo TLR4 aumento de la apoptosis de neutrfilos que sugiere un papel para TLR4, y potencialmente de cebado, en el aumento de neutrfilos esperanza de vida durante la enfermedad [12]. Sin embargo, la exposicin previa de TLR ligandos tambin pueden causar la tolerancia, un estado transitorio de la refractariedad a la impugnacin posterior, que puede en Por un lado proteger contra la hiperactivacin pero tambin puede hacer que el husped susceptible a infecciones posteriores (Revisado en [47]). La tolerancia de neutrfilos a LPS ha sido inform in vitro, y mientras este se asoci con disminucin de la superficie celular TLR4 expresin es importante tener en cuenta que una parlisis global de funcin de los neutrfilos hizo no ocurre [48]. Por otra parte la expresin de TLR4 es comparable inform sobre los monocitos normales y LPS tolerante-[49].

As, mientras la expresin de TLR se ha demostrado que sealtera durante una serie de enfermedades [40,50-53], las implicaciones de esta regulacin requieren una mayor clarificacin. Las humedades y los TLRs activacin de los neutrfilos tambin pueden detectar molculas endgenasDAMPS llamados, los cuales son producidos a partir de tejido oclulas del sistema inmune en respuesta a una lesin o una infeccin (Tabla 1). Adems de iniciar las respuestas de proteccin, vapores han sido implicados en la patognesis de las infecciones agudas tales como sepsis [54] y enfermedades inflamatorias crnicas como la enfermedad pulmonar [55,56] y la artritis reumatoide [57-59]. El concepto de HUMEDECE por primera vez a la palestra con la identificacin de las protenas de choque trmico 60 (Hsp60)como un ligando TLR4 [60]. Hay ahora HUMEDECE muchosconocidos para activar TLR2 y TLR4, incluyendo otros HSP y componentes de ECM, por ejemplo cido hialurnico (HA) ysulfato de heparina (elegantemente crtica en, aunque no est claro en qu medida la contaminacin microbiana juega unpapel en algunos de estas observaciones [62] TLR Otrostambin se han asignado ligandos hmedas:. TLR1 / 2 para b-defensinas-3 [63] y los TLRs virales (TLR3, TLR7 y TLR8) para la deteccin de auto-cidos nucleicos.