UACJ

ICB
PROGRAMA DE QUÍMICA

BIOLOGÍA CELULAR

1

Universidad Autónoma de Ciudad Juárez Instituto de Ciencias Biomédicas Departamento de Ciencias Químico Biológicas

Manual

Francisco Javier Vázquez González

Ciudad Juárez Chihuahua Fecha:
2

Contenido
Introducción general ---------------------------------------------------------------------------- 4 Prácticas
1. 2. 3. 4. 5. 6.

Microscopio ------------------------------------------------------------------------------ 6 Preparación de frotis bacteriano --------------------------------------------------- 11 Observación de bacterias ------------------------------------------------------------ 14 Tinción Gram ---------------------------------------------------------------------------- 18 Observación de protistas de vida libre -------------------------------------------- 20 Reproducción celular. Reproducción asexual por gemación en levaduras ---------------------------------------------------------------------------------- 22

7. 8.

Observación microscópica de hongos --------------------------------------------- 24 Observación microscópica de un tejido vegetal: tejido epidérmico de cebolla ------------------------------------------------------------------------------------- 27

9.

Observación microscópica de un tejido vegetal: tejido epidérmico del puerro ------------------------------------------------------------------------------------------------ 29

10. 11. 12. 13.

Observación de células vegetales: células de la pulpa de tomate ---------- 31 Observación de células de tejido adiposo----------------------------------------- 33 Observación de la epidermis en hojas de Zebrina ------------------------------ 35 Observación del citoesqueleto y fagocitosis en protistas acelulares: Tetrahymena ----------------------------------------------------------------------------- 38

14. 15.

Observación de células sanguíneas ------------------------------------------------ 41 Observación de las células epiteliales de nuestra boca ----------------------- 44

3

16. Velasco Tarelo por su valiosa aportación para la elaboración de este manual. --------------------------------------------------------------------. Observación de la fotosíntesis en la planta Elodea sp. 19. Campaña Lozoya por sus valiosas sugerencias 4 . al Biol.49 Estudio de la mitosis en células de la raíz de cebolla -------------------------.46 17.55 Bibliografía --------------------------------------------------------------------------------. -----------------------. 18.58 Anexo ---------------------------------------------------------------------------------------59 AGRADECIMIENTOS A la Maestra Paula M. Jonatan I. 20. Observación de los cloroplastos y pared celular en hojas de la planta acuática Elodea sp.

El orden y la limpieza deben presidir todas las experiencias de laboratorio. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para asegurarse de que es el que se necesita y de los posibles riesgos de su manipulación. No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados sin consultar con el profesor. al terminar cada práctica se procederá a limpiar cuidadosamente el material que se ha utilizado. Cada grupo de prácticas se responsabilizará de su zona de trabajo y de su material. Los resultados deben ser siempre anotados cuidadosamente apenas se conozcan. 3. 4. 2. fundamento y técnica. 5. 1. Antes de realizar una práctica. debe leerse detenidamente para adquirir una idea clara de su objetivo. 5 . En consecuencia.INSTRUCCIONES GENERALES Para el desarrollo de las prácticas es conveniente tener en cuenta algunas normas elementales que deben ser observadas con toda escrupulosidad.

éter. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama. deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos. como lupas y microscopios. 14. Las pipetas se cogerán de forma que sea el dedo índice el que tape su extremo superior para regular la caída de líquido. etc. siempre al contrario: ácido sobre agua. No tacar con las manos y menos con la boca los productos químicos.) deberá hacerse con cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o los vestidos. cuando se observe que se 6 .6. alcohol. el frasco que lo contiene se inclinará de forma que la etiqueta quede en la parte superior para evitar que si escurre líquido se deteriore dicha etiqueta y no se pueda identificar el contenido del frasco.) deben mantenerse alejados de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos. nunca directamente a la llama. 8. 11. Se debe utilizar la bomba manual. Nunca se verterán bruscamente en los tubos de ensayo. Al enrasar un líquido con una determinada división de escala graduada debe evitarse el error de paralaje levantando el recipiente graduado a la altura de los ojos para que la visual al enrase sea horizontal. nunca se debe echar agua sobre ellos. No pipetear nunca con la boca. Los productos inflamables (gases. 15. se hará al baño María. Cuando se quiera diluir un ácido. etc. 12. especialmente los aparatos delicados. sino que se dejarán resbalar suavemente por su pared. El tubo de ensayo se acercará a la llama inclinado y procurando que ésta actúe sobre la mitad superior del contenido y. álcalis. 9. Cuando se manejan productos corrosivos (ácidos. Cuando se vierta un producto líquido. 10. 13. 7. una jeringuilla o artilugio que se disponga en el Centro. Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen líquidos debe evitarse la ebullición violenta por el peligro que existe de producir salpicaduras. Todo el material.

se evitará dirigir la boca del tubo hacia la cara o hacia otra persona. realizando así un calentamiento intermitente. 16. se retirará. acercándolo nuevamente a los pocos segundos y retirándolo otra vez al producirse una nueva ebullición. 7 Partes de un microscopio óptico .(1) PRACTICA 1 MICROSCOPIO OBJETIVO. Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo después de haberlos calentado con el fin de evitar roturas. su uso y su cuidado. Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar que se engrasen.inicia la ebullición rápida. 17. Que el alumno se familiarice con las partes del microscopio. En cualquier caso.

Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación. Esto debe hacerse mirando directamente y no a 8 . DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. Puede ser monocular. ya debería estar en esas condiciones. CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación. Sistema mecánico SOPORTE: Mantiene la parte óptica. 2. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que consigue el enfoque correcto. 4. CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias. MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO 1. PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas. Amplía la imagen de ésta. empleando el tornillo macrométrico. cambiar los objetivos. FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador. binocular. al girar.PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO Sistema óptico OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior. REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite. OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. 3. Para realizar el enfoque: a. Amplía la imagen del objetivo.

d. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente. c. aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande. luz. e. Empleo del objetivo de inmersión: a. Pasar al siguiente objetivo.través del ocular. es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso b. g. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen. 5. Mirando. girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino. Bajar totalmente la platina. aceite. ahora sí. que la lente toca la gota de aceite. b. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del Mirando directamente al objetivo. subir la platina lentamente hasta objetivo de inmersión. b. ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos. f. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima. cuando se observe algo nítida la muestra. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el 9 . Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de camino entre éste y el de x40. ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y. a través de los oculares. 6. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino.

limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación. ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona. Si se ensucian. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. 4. 2. hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo. j. si desea enfocar otro campo. i. Si no se va a usar de forma prolongada. No hay que abusar de este tipo de limpieza.h. En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción. 10 . Cuando no se está utilizando el microscopio. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina. hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica. se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio. Al finalizar el trabajo. 3. con un papel de óptica. pues se mancharía de aceite. Después de utilizar el objetivo de inmersión. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación. 5. Por tanto. MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES 1. hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación. hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3. hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio. mejor. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver.

encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos. secarlo con un paño. DISCUSION Y CONCLUSIONES 11 . Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se mancha de aceite. 7. 9. micrométrico.6. revólver y condensador). No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y. platina.(1) RESULTADO. 8. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. Si se derrama sobre ella algún líquido. limpiarla con un paño humedecido en xilol. al acabar el curso.

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos. ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. REALIZACIÓN DEL FROTIS 1. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. por lo que se puede usar el asa de 12 .PRACTICA 2 PREPARACIÓN DE FROTIS BACTERIANO OBJETIVO. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber. Que el alumno se familiarice con la técnica de tinción directa de bacterias y aprenda a fijar por métodos químicos y físicos. Es necesaria muy poca cantidad de agua. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio.

Una vez realizado el frotis y fijadas las bacterias. aunque carecen de contraste. en condiciones asépticas. 5. Dejar enfriar el porta entre los pases. ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua. Flamear el asa de siembra. tomar. que resulta suficiente. Añadir unas gotas de metanol sobre la extensión completamente seca. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse. Cubrir el frotis con abundante colorante y dejarlos actuar durante el tiempo que indique el protocolo de cada tinción concreta. las preparaciones pueden ser observadas al microscopio. Por calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua. Suele oscilar entre 1 y 5 minutos. 13 .siembra. Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido. FIJACIÓN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS 4. Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado. 3. que se toma con el asa de siembra. no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana. TINCIÓN DEL FROTIS BACTERIANO 6. 2. Con metanol (para bacterias procedentes de medio líquido). Lo normal es continuar con el proceso de tinción. Esperar a que el metanol se evapore completamente. Golpear el portaobjetos por su canto con cuidado contra la mesa de trabajo para retirar de inmediato el exceso de metanol. directamente sobre el portaobjetos.

Se anotará en un extremo del portaobjetos el contenido de la preparación. Secar el portaobjeto presionando entre dos papeles de filtro. Pasar sucesivamente los portaobjetos por las siguientes soluciones manteniéndolos un mínimo de 5 minutos en cada baño. Eliminar la máxima cantidad de agua de los portaobjetos golpeándolos por su canto con cuidado contra la superficie de la mesa de trabajo. pues podría arrastrar parte del frotis consigo. 8. en su caso. pero el objetivo es que la preparación quede totalmente deshidratada. pero teniendo mucho cuidado de que no llegue a hervir ya que se produciría la destrucción de las células. el nombre del alumno. por lo que el tiempo que dure su actuación se deberá sostener el portaobjetos con unas pinzas sobre la llama del mechero para que humee el colorante. Observar la preparación al microscopio llegando hasta el máximo aumento. pero sin que vaya dirigido directamente sobre él. La serie de alcoholes puede modificarse en función de la disponibilidad de los reactivos. Lavar la preparación con agua para eliminar el colorante. a b c d e Alcohol de 70º Alcohol de 95º Acetona pura Acetona-xilol (1:1) Xilol 14 . 10.En ocasiones el colorante tiñe sólo en caliente. 9. la fecha y. pero en ningún caso se debe frotar el porta. Escurrir bien el reactivo antes de introducirlo en el siguiente baño. Si se quiere montar de forma definitiva no se debe usar ahora el aceite de inmersión. Esta operación se realiza inclinando el portaobjetos y aplicando el chorro de agua en su parte superior de manera que resbale sobre el frotis. MONTAJE DEFINITIVO DE LA PREPARACIÓN La técnica siguiente es de aplicación para cualquier preparación microscópica que se desee montar de forma definitiva. 7.

Montar la preparación.11. Utilizar preferiblemente cubreobjetos de 22x22 mm. DISCUSION Y CONCLUSIONES PRACTICA 3 OBSERVACIÓN DE BACTERIAS 15 .(1) RESULTADO. Emplear bálsamo de Canadá. euparal o algún medio de montaje sintético.

5% c) Azul de metileno al 1% .Colorantes para tinción: a) Solución de cristal violeta al 1% b) Solución de safranina al 0. Observar la morfología bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones que existen. 4.Muestras bacterianas de origen natural: yogur. sarro dental. A escala industrial se realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus.OBJETIVOS 1.Microscopio y aceite de inmersión BACTERIAS DEL YOGUR El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche.Asa de siembra o aguja enmangada . suelo.Pinzas . . 2. MATERIAL . por tanto. 1.Mechero Bunsen o de alcohol . muy acidificante. Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qué casos se recomienda una u otra. vinagre. poco productor de ácido. observar dos morfologías bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos. pero muy aromático. Además. Realizar el frotis disolviendo una mínima porción de yogur en una pequeña gota de agua. En esta preparación se podrán. 16 . Realizar una tinción simple de bacterias procedentes de distintas muestras naturales 2. y el Lactobacillus bulgaricus. Fijar con metanol para eliminar parte de la grasa. etc. el tamaño del lactobacilo (unos 30μm de longitud) facilita la observación aunque no se tenga mucha práctica con el enfoque del microscopio. cocos en cadenas arrosariadas).Portaobjetos . Practicar con el microscopio al máximo aumento y con el correcto empleo del aceite de inmersión. 3.

Bacterias del vinagre El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la fermentación espontánea del vino o de bebidas alcohólicas de baja graduación. sales minerales y bacterias junto con sus productos metabólicos. 2. diplococos y bacilos. Con una aguja enmangada tomar una pequeña porción de sarro dental y disolverla en una gota de agua sobre el portaobjetos. Teñir 2-3 minutos. lavar el exceso de colorante y secar. Tomar con una aguja enmangada una pequeña porción de madre de vinagre natural o de la telilla que se forma sobre la superficie de los vinos agriado. muchas de ellas no cultivables en los laboratorios y 17 . 1. Teñir con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 1-2 minutos. Bacterias del sarro dental El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. 2. principalmente Acetobacter aceti. lavar el exceso de colorante y secar. aunque también Gluconobacter.3. pero suelen abundar bacterias saprófitas. 4. Dejar secar y fijar con calor. Se trata de bacilos rectos con flagelos polares. cocobacilos. 1. Extender la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y hacer el frotis. La acetificación del vino es producida por bacterias aeróbicas del ácido acético. Bacterias del suelo La variedad de bacterias que pueden aparecer en una muestra de suelo es prácticamente infinita. Dejar secar y fijar con calor. Teñir 2-3 minutos. 4. pudiéndose observar gran variedad de morfologías: espiroquetas. Observar al máximo aumento del microscopio. Está constituido principalmente por restos proteicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que se den en el momento de hacer la preparación. 3. 3.

incluso.¿Qué fin tiene la fijación de muestras al realizar un frotis bacteriano? 3. Después de varios días.(1) PREGUNTAS 1.. DIBUJOS RESULTADO.¿Qué tipos de morfología y agrupación aparecen en los frotis de los cultivos? 2. así como la parte que no se va a teñir. desconocidas para los microbiólogos.Señale las ventajas y desventajas de la tinción simple respecto del examen en fresco.algunas. Previamente hay que limpiar los bordes del portaobjetos. DISCUSION Y CONCLUSIONES 18 .. las bacterias se habrán adherido al vidrio y sólo habrá que fijarlas por calor y teñirlas con un colorante cualquiera.. Para recoger la muestra y hacer el frotis basta con dejar parcialmente enterrado en vertical un portaobjetos en la tierra de una maceta o de un jardín.

PRACTICA 4 TINCION GRAM OBJETIVO. MATERIAL 19 . Que el alumno aprenda a clasificar las bacterias aplicando una técnica diferencial como es la tinción de Gram.

20 . 2. 10. 6. En un laboratorio de Microbiología. por lo que puede ser necesario ajustar los tiempos. cada vez que se preparan los colorantes. Teñir con safranina 1min. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.• • • • • • • Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Asa de siembra Cubeta de tinción Cultivo bacteriano Pinzas • • • • • • • Frasco lavador Mechero de alcohol Papel de filtro Cristal violeta Lugol Alcohol-acetona Safranina TÉCNICA 1. Examinar al microscopio fijándose sobre todo en el color de cada preparación. Decolorar con alcohol-acetona o simplemente con alcohol hasta que la preparación deje de perder color (30seg) 7. Cada vez que se prepara la batería de colorantes para realizar la tinción Gram presentan algunas diferencias respecto a los preparados en otro momento. 3. Lavar con agua el exceso de Lugol. Lavar con abundante agua el exceso de colorante. Preparar los frotis bacterianos. 8. 9. 4. Teñir con cristal violeta 1min. Los tiempos de exposición a los colorantes son orientativos. se suelen hacer pruebas con cultivos patrón de los dos tipos (Gram+ y Gram-) para ajustar así los tiempos y tener la certeza de que el resultado de todas las tinciones que se hagan mientras duren esos colorantes son fiables. 11. 5. Secar la preparación. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente. Cubrir con Lugol 1min.

pero es mucho más caro.Otra posibilidad es adquirir el equipo completo de colorantes ya preparados. DISCUSION Y CONCLUSIONES PRACTICA 5 OBSERVACIÓN DE PROTISTAS DE VIDA LIBRE OBJETIVO.(1) Dibujos RESULTADO. 21 . El alumno reconozca diferentes protistas de vida libre que se desarrollan en nuestro medio ambiente los cuales varían de acuerdo a las estaciones del año.

La composición de estas comunidades varia a través de los estanques y conforme avanza el año. Componentes celulares: flagelos. Describe con palabras y dibujos los organismos de tu gota de agua. Toma una gota de agua estancada y colócala en un portaobjetos. Cúbrela con un cubreobjetos. RESULTADO.Los estanques en tu escuela o colonia contienen muchos protistas e invertebrados. MATERIAL Gota de agua estancada Porta y cubreobjetos Pipeta Pasteur Microscopio TÉCNICA 1. DISCUSION Y CONCLUSIONES 22 . OBSERVACIONES Aumento Total ____________ Sin/Con tinción ____________ Aumento Total ____________ Sin/Con tinción ____________ PREGUNTAS. Observa al microscopio. cilios y diferentes medios de locomoción. 1.

PRACTICA 6 REPRODUCCIÓN CELULAR: REPRODUCCIÓN ASEXUAL POR GEMACIÓN EN LEVADURAS OBJETIVO. MATERIAL Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Levadura Agua azucarada Aguja enmangada Lactofenol-safranina 23 . El alumno reconozca la reproducción asexual en células eucariontes.

Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio. b) Retrasar un poco el desprendimiento de las células hijas gracias a la acción desfavorable del fenol para la vida normal de las levaduras.(1) 24 . 2. Repetir los pasos anteriores mezclando sobre el portaobjetos la suspensión acuosa de la levadura con una gota de lactofenol-safranina. 3. Disolver con ayuda de una aguja enmangada un poco de levadura sobre un porta que contenga 2 o 3 gotas de agua ligeramente azucarada. teñidas por la safranina. Con este procedimiento se consigue una doble finalidad: a) Ver mejor las células de las levaduras.TÉCNICA 1.

¿Qué hace la safranina? 3. DISCUSION Y CONCLUSIONES 25 . ¿Por qué se realiza la tinción? 2. OBSERVACIONES Aumento Total ____________ Sin/Con tinción ____________ Aumento Total ____________ Sin/Con tinción ____________ PREGUNTAS.REPRODUCCIÓN CELULAR: REPRODUCCIÓN ASEXUAL POR GEMACIÓN EN LEVADURA. ¿Cuál es la función del lactofenol? RESULTADO. 1.

Trozo enmohecido de fruta o pan o un cultivo de hongos .Cubetas de Tinciones .Solución de lactofenol al azul algodón . 26 .Portaobjetos y cubreobjetos (22x22 mm) muy limpios y desengrasados con alcohol . con una solución adecuada. Que el alumno identifique los hongos microscópicos que se encuentran en el ambiente. Observar la morfología de los hongos y distinguir entre hifas septadas y no septadas y entre distintos tipos de esporas y las estructuras que las originan. 1. y las preparaciones en cinta adhesiva. Realizar la misma operación en otro portaobjetos que se usará para lavar la muestra.Microscopio PREPARACIONES EN FRESCO DE MOHOS 1.PRACTICA 7 OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE HONGOS OBJETIVO.Aguja enmangada o lanceta . Realizar preparaciones en fresco y en cinta adhesiva de distintas especies de mohos. Los principales métodos aplicados para la observación microscópica de los cultivos son: la observación en fresco. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solución de lactofenol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparación quede demasiado gruesa. MATERIAL .Cinta adhesiva transparente . 2.

Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o el pan enmohecidos o el borde de una colonia de hongo de un cultivo. 2. PREPARACIONES EN CINTA ADHESIVA 1. 5. 3. Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro.2. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solución de lactofenol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparación quede demasiado gruesa. se aplastarán éstos ligeramente sobre la gota o se seccionarán con un bisturí. Cortar un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2cm. Transportar el material con la lanceta a la gota del segundo portaobjetos que será ya el definitivo. 4. En la zona central de una colonia puede haber una excesiva concentración de esporas. Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos. Con agujas muy finas se distribuye el material en la gota de manera que no quede amontonado. los conidióforos. Tomar el material a observar en una mínima cantidad con agujas finas o lancetas procurando arrancarlo desde la base y disponerlo con cuidado sobre la gota de uno de los portaobjetos. 5. Si se trata de hongos con picnidios (estructuras globosas tapizadas en su interior por los conidióforos). Con esta especie de lavado se consigue desprender el exceso de conidios que casi siempre llenan estas preparaciones y que impiden ver lo que realmente interesa. Colocar el portaobjetos poco a poco y empezando por un lado para evitar que se formen burbujas entre los dos vidrios.(1) OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE HONGOS OBSERVACIONES 27 . 3. 4.

Tipo de estructuras formadoras de esporas que se observan. 1. DISCUSION Y CONCLUSIONES 28 . RESULTADO. Determina si las hifas son septadas o no. 2.Aumento Total ____________ Aumento Total ____________ PREGUNTAS. 3. tamaño y disposición de las esporas. Forma.

añadir una gotas de verde de metilo acético (o azul de metileno) sobre la membrana y dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente. Que el alumno reconozca diferentes estructuras del tejido vegetal. TÉCNICA 2. Escurrir el agua. MATERIAL 1. Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Cubeta Agujas enmangadas Pinzas Escalpelo Verde de metilo acético o azul de metileno Cuentagotas Cebolla Separar una de las hojas interna de la cebolla y desprender la tenue membrana que está adherida por su cara inferior cóncava. estirar el trozo de epidermis con ayuda de dos agujas enmangadas. Depositar el fragmento de membrana en un porta con unas gotas de agua. ¡No debe secarse la epidermis por falta de colorante o por evaporación del mismo! 29 Citoplasma Membrana Núcleo . 3.PRACTICA 8 OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO EPIDÉRMICO DE CEBOLLA OBJETIVO. Pon el porta sobre la cubeta de tinción para que caiga en ella el agua y los colorantes. Si es preciso.

(1) OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA EPIDÉRMICO DE CEBOLLA OBSERVACIONES DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO Aumento Total ____________ Sin/Con tinción ____________ Aumento Total ____________ Sin/Con tinción ____________ RESULTADO. DISCUSION Y CONCLUSIONES 30 . Observa la preparación a distintos aumentos. empezando por el más bajo. Colocar sobre la preparación un cubreobjetos evitando que se formen burbujas y llevarlas al microscopio.4. Con el cuentagotas bañar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante. Observa la preparación a distintos aumentos empezando por el más bajo 7. 6. Identifica las distintas células del tejido epidérmico y las de las hojas del bulbo de cebolla. 5.

Retira una parte pequeña de la epidermis de la hoja de puerro y llévala sobre un porta en el que habrás colocado dos o tres gotas de agua. 2.(1) 31 . Que el alumno reconozca estructuras del tejido vegetal. 3. TÉCNICA Identifica en tu preparación la estructura de las células que aparecen en el esquema. MATERIAL Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Cuentagotas con agua Agujas enmangadas Pinzas Escalpelo Un puerro 1. Pon el cubre y examina la preparación al microscopio. Ten la precaución de que sea una capa incolora y de que esté perfectamente extendida.PRACTICA 9 OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO EPIDÉRMICO DEL PUERRO OBJETIVO.

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO EPIDÉRMICO DEL PUERRO OBSERVACIONES Aumento Total ____________ Aumento Total ____________ PREGUNTAS. DISCUSION Y CONCLUSIONES PRACTICA 10 32 . ¿Qué son los estomas? 2. ¿Cuál es su función? 3. 1. ¿Poseen cloroplastos alguna de las células epidérmicas? RESULTADO.

Lleva la preparación a la platina del microscopio y realiza una observación con pequeños aumentos. 2. MATERIAL TÉCNICA 1. Que el alumno reconozca los organelos membranosos en tejido vegetal. corta en dos mitades el tomate. Coloca encima un cubreobjetos y comprime suavemente del con los de dedos hasta obtener un completo aplastamiento fragmento pulpa de tomate. Deposítalo en el centro de un portaobjetos sin poner agua. Identifica los distintos orgánulos Vacuola Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Escalpelo Pinzas Tomate celulares visibles y dibuja lo que. ayudándote de unas pinzas. 4. Utilizando un escalpelo. 5. 3. un trozo de pulpa de tomate de la zona indicada en la figura de unos 2mm de grosor. Obtén. 6. Selecciona el mejor grupo de células y pasa a mayores aumentos.OBSERVACIÓN DE CÉLULAS VEGETALES: CÉLULAS DE LA PULPA DE TOMATE OBJETIVO.(1) Nucleo Cromoplasto 33 .

OBSERVACIÓN DE CÉLULAS VEGETALES: CÉLULAS DE LA PULPA DE TOMATE OBSERVACIONES Aumento Total ____________ Sin/Con tinción ____________ Aumento Total ____________ Sin/Con tinción ____________ RESULTADO. DISCUSION Y CONCLUSIONES 34 .

cortar una finísima capa de grasa. MATERIAL Tocino u otra grasa animal Bisturí o escalpelo Porta y cubreobjetos Formol Sudán III Frasco lavador Cubeta de tinción Microscopio 1.(1) OBSERVACIÓN DE CÉLULAS DEL TEJIDO ADIPOSO. TÉCNICA Volver a lavar la preparación con agua. Lavar la muestra con agua y cubrirla con unas gotas de Sudán III. Dejar actuar unos 5 minutos. cubrirla con un cubreobjetos y observar al microscopio.PRACTICA 11 OBSERVACIÓN DE CÉLULAS DEL TEJIDO ADIPOSO OBJETIVO. 3. Que el alumno reconozca las estructuras en tejido animal graso. OBSERVACIONES Aumento Total ____________ 35 Aumento Total ____________ . Dejar actuar 4 minutos. Con ayuda de un bisturí. colocarla en un porta y cubrirla con unas gotas de formol. 2.

¿Para qué sirve el formol? RESULTADO. ¿Por qué hay que teñir con Sudán III? 2. DISCUSION Y CONCLUSIONES 36 .PREGUNTAS. 1.

1.PRACTICA 12 OBSERVACIÓN DE LA EPIDERMIS EN HOJAS DE ZEBRINA OBJETIVO. 37 . Utilizando pinzas cuidadosamente toma el borde de la hoja de la epidermis expuesta y desprende una pieza muy pequeña. algunas veces se desenrollan cuando colocas el tejido en el agua. Busca células en pares con forma de labios. Rompe un pedazo de la hoja de Zebrina de manera que un borde irregular de la epidermis aparezca en el lado de debajo de la hoja. pinzas Porta y cubreobjetos Agua Solución salina Microscopio Utilizarás un portaobjetos. ayúdate de las pinzas. 5. En ella podrás ver células guarda que controlan el intercambio de gas y vapor en la planta a través de un poro. 4. Serás capaz de ver el estoma abierto o cerrado en un periodo de varios minutos. En la Zebrina no existen pigmentos rojos presentes en el resto de los tejidos epidérmicos. Estas son las células guarda. TÉCNICA 2. El alumno reconozca la epidermis en las plantas. Coloca un cubre objetos sobre la muestra y observa al microscopio. Algunas veces el tejido se enrosca y se pega a las pinzas si esto sucede. Coloca una gota de agua en el centro del portaobjetos. 6. cubreobjetos. coloca esta pequeña pieza de epidermis en la gota de agua de tu porta objetos. Si no pasa esto. 3. . Ahora se observará la superficie de la epidermis: la capa más externa de una célula vegetal. o estoma. MATERIAL - hojas de Zebrina (o especies alternativas). pinzas y hojas de Zebrina (o especies alternativas).

10. 9. dejando un espacio blanco entre ellas. 11. después de 30 minutos observa los efectos de la solución salina en las células guarda y escribe una descripción de los cambios en la epidermis. y cloroplastos. Dibuja el tejido epidérmico incluyendo las células guarda y los cloroplastos.(2) COMPONENTES CELULARES: LA EPIDERMIS VEGETAL. oxigeno. OBSERVACIONES Aumento Total ____________ Sin/Con tinción ____________ Aumento Total ____________ Sin/Con tinción ____________ PREGUNTAS. estomas. ¿Cómo puede una célula regular el movimiento de dióxido de carbono. Esto bañara de solución salina la muestra de epidermis y las células guarda. Señala las células epidérmicas. coloca un pequeña pieza de papel secante en el lado opuesto del cubre objetos. coloca una gota de solución salina en el portaobjetos adyacente al borde de cubre objetos.7. y vapor de agua hacia fuera y dentro de la hoja? 38 . 1. 8. Localiza pares de células guarda con el estoma abierto las células en forma de labio estarán arqueadas ligeramente. La solución salina sacara agua de las células. células guarda.

DISCUSION Y CONCLUSIONES PRACTICA 13 39 .2. ¿Cómo beneficiaría influenciar en el movimiento de estas moléculas? RESULTADO.

Los cilios son proyecciones de la célula que contienen filamentos del citoesqueleto que se mueven en forma de ola para mantener al organismo en su ambiente líquido. Protistas contienen organismos eucariotas acelulares y otras grupos cercanos.observaras a estas partículas moverse a través de las fibras del citoesqueleto. Mientras investigas la función de los cilios en Tetrahymena trata de imaginar como estos mismos organelos pueden funcionar en tus vías respiratorias. tipo de alimentación utilizado por Tetrahymena. El organismo con que trabajaras es un protozoario ciliado del genero Tetrahymena.OBSERVACIÓN DEL CITOESQUELETO Y FAGOCITOSIS EN PROTISTAS ACELULARES: TETRAHYMENA OBJETIVO. También podrás observar la fagocitosis. MATERIAL - Suspensiones de células de Tetrahymena Pipeta pasteur 40 - . las células especializadas en nuestro sistema inmune utilizan este mismo proceso de fagocitosis para eliminar material infeccioso. desde la traquea en tu garganta hasta los bronquiolos de tus pulmones. Los cilios también se encuentra en las superficie de las células epiteliales en tus vías respiratorias. citoesqueleto y fagocitosis En esta sección. además de observar a Tetrahymena capturando las partículas de tinta . Órganos en forma de pelo en la superficie de Tetrahymena. Aunque no podrás ver el citoesqueleto. A través del microscopio. El alumno reconozca las estructuras externas en células eucariotas: los cilios. En esta actividad colocarás a Tetrahymena en una solución con partículas de tinta. Esto te ayudará a observar la locomoción y hábitos alimenticios de este protozoario. podrás ver el camino por el que se mueven las vesículas que contiene la tinta hacia las áreas de digestión. observaras la acción de los cilios. trabajarás con organismos vivos del reino protista.

y después de 30 min. Habrá suspensiones de células de Tetrahymena en soluciones de proteoseptona al 2% en un matraz de 125ml.(2) COMPONENTES CELULARES: CILIOS Y CITOESQUELETO. Repite el paso 3 de nuevo después de 20 min. coloca un cubreobjetos y observa al menos 5 células. OBSERVACIONES Aumento Total ____________ Sin/Con tinción ____________ 41 Aumento Total ____________ Sin/Con tinción ____________ .- Porta y cubreobjetos Tinta al 1% Microscopio TÉCNICA 1. Toma el tiempo. 2. Pipetea 2mm de tinta al 1% en el mismo tubo y mezcla subvente las dos soluciones. Sin mezclar el fluido. 3. inserta la punta de una pipeta al fondo de la suspensión de células y toma 2mm en un tubo. repite el paso 3 y observa las células en microscopio. Coloca dos gotas de la mezcla de Tetrahymena y la tinta en un portaobjetos. Después de 10min. 4.

PREGUNTAS. además de la captura y procesamiento del RESULTADO. Que el alumno conozca las diferencias estructurales entre células animales y vegetales. DISCUSION Y CONCLUSIONES PRACTICA 14 OBSERVACIÓN DE CÉLULAS SANGUÍNEAS OBJETIVO. MATERIALES Microscopio Portaobjetos Mechero de alcohol Lanceta estéril 42 . Describir alimento. 1. como influencia el citoesqueleto en el movimiento de Tetrahymena en su ambiente.

Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la desecación del colorante agregando más líquido. Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero. Colocar un portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo sobre toda la superficie del porta de manera que se pueda obtener una fina película de sangre. El porta absorbe la gota y la arrastra. 3. TÉCNICA gota de sangre 8. Con la lanceta estéril realizar una punción en un pulgar.- Cubeta de tinción Frasco lavador Alcohol absoluto Hematoxilina Eosina 1. pero sin pasar nunca por encima de ella para no dañar los hematíes. 9. Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante. 2. 6. 43 . Observar al microscopio. Lavar la preparación y añadir unas gotas de eosina dejándola actuar 1 minuto. 4. 7. Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tinción y añadir unas gotas de alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparación. Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos. 5.

redondo. No tienen núcleo y son más delgados por el centro que por los bordes.OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA Al microscopio se verán con un dominio predominante los glóbulos rojos. Monolitos: son los leucocitos mayores. Linfocitos: de tamaño aproximado al de los glóbulos rojos. teñido de morado por la hematoxilina. con abundantes granulaciones teñidas de rojo por la eosina. tienen un solo núcleo que ocupa casi todo el glóbulo. son los más móviles y su función principal es la fagocitosis. Las plaquetas no son visibles ya que precisan una técnica especial de tinción. poco frecuentes normalmente. hematíes o eritrocitos teñidos de color rojo por la eosina. 3. neutrófilos y basófilos. Polimorfonucleares: núcleo fragmentado o arrosariado.(1) OBSERVACIÓN DE CÉLULAS SANGUÍNEAS OBSERVACIONES Aumento Total ____________ Aumento Total ____________ 44 . Los glóbulos blancos o leucocitos se identifican fácilmente por la presencia de núcleo. núcleo grande. 2. Pueden ser eosinófilos. Hay varias clases de leucocitos: 1.

45 . DISCUSION Y CONCLUSIONES PRACTICA 15 OBSERVACIÓN DE LAS CÉLULAS EPITELIALES DE NUESTRA BOCA OBJETIVO. esto volverá visible el material nuclear a través del microscopio. El alumno reconozca diferentes componentes de las células eucariotas humanas. 2. 1. ¿Qué forma tienen los glóbulos rojos? ¿Tienen núcleo? RESULTADO. Identifica en los dibujos los distintos tipos de células sanguíneas. En esta sección.PREGUNTAS. Adicionarás azul de metileno a tu muestra de células. ¿De qué color aparece teñido el núcleo de los leucocitos? 3. prepararás una muestra de tus células epiteliales.

5. Cuidadosamente coloca una pequeña gota de azul de metileno en el centro del portaobjetos. Antes de continuar coloca ese picadiente en un bote de desechos con cloro al 10%. Utiliza pinzas para colocar un cubreobjetos sobre tu muestra y obsérvala al microscopio. así que evita el contacto con tu ropa. 2. Debido a cuestiones de salud. MATERIAL Picadiente Porta y cubreobjetos Azul de metileno Papel secante Pipetas pasteur Cubeta de tinción Microscopio TÉCNICA 1. Antes de continuar coloca tu portaobjetos. portaobjetos. envoltura nuclear y cromatina. es importante que sigas las instrucciones de acuerdo a las normas de seguridad de los picadientes que usarás para colectar tus células epiteliales. 3. Cuidadosamente usa la punta de un picadiente para frotar el tejido epitelial de la mejilla dentro de tu boca. Utilizarás un microscopio. Componentes celulares: membrana plasmática. 4. un cubreobjetos.(2) OBSERVACIONES 46 . Recuerda que es un colorante que penetrará todo lo que toca. sin lavarlo.Nota-Estarás observando células epiteliales de tu propia boca. debajo de tu labio superior. Adiciona una gota de agua a la laminilla. en el bote de residuos punzo cortantes. Si usas demasiado se escurrirá del cubreobjetos ocasionándote problemas. y papel secante. Gira esa parte del picadiente en el centro de tu laminilla.

DISCUSION Y CONCLUSIONES PRACTICA 16 OBSERVACIÓN DE LOS CLOROPLASTOS Y PARED CELULAR EN HOJAS DE LA PLANTA ACUÁTICA ELODEA OBJETIVO. El centro 47 . La cromatina está compuesta. la envoltura nuclear.Aumento Total ____________ Sin/Con tinción ____________ Aumento Total ____________ Sin/Con tinción ____________ PREGUNTAS. La mayoría de las estructuras en las células de las plantas no son visibles a través de la luz del microscopio. El alumno reconozca la pared celular y los cloroplastos en las plantas. RESULTADO. y la cromatina. Dibuja tu célula y señala la membrana plasmática. Son muy delgadas que pueden observarse sus células con un microscopio sin necesidad de cortarlas en secciones delgadas. 2. Las hojas de la planta acuática Elodea sp. en parte. cuando ajustas propiamente el microscopio podrás ver la pared celular y los cloroplastos. Sin embargo. la molécula que contiene toda la información hereditaria en cada una de tus células. de ADN.

de la célula aparecerá vacío ya que está ocupado por una gran vacuola que no es visible a través de la luz del microscopio. Los organelos que son de interés particular en este ejercicio son los cloroplastos; son de color verde, estructura membranosa en el citoplasma entre la membrana plasmática y la vacuola. Como estarás observando células vivas, los cloroplastos se mostrarán en su color y comportamiento natural bajo el microscopio. MATERIAL Hoja de Elodea Bisturí o escalpelo Porta y cubreobjetos agua Microscopio

TÉCNICA
1.

Utiliza pinzas para tomar una hoja joven de Elodea. Las hojas jóvenes están al extremo distal de la punta del tallo.

2. Coloca la hoja extendida en una laminilla. Adhiere una gota o dos de agua y coloca un cubreobjetos. 3. Observa al objetivo 10x y después al de 40x. 4. Usa el micrómetro para moverte a través de los planos de la célula. b) El centro de la célula está ocupado por una gran vacuola que no es visible. La vacuola empuja el citoplasma y los cloroplastos hacia abajo, arriba y a la pared de la célula. c) Si estás enfocando arriba de la célula verás cloroplastos esparcidos a través de la célula. d) Mientras vayas enfocando hacia debajo de la célula, los cloroplastos ocuparán el perímetro de la célula, hacia la pared. Hacia abajo de la célula, los cloroplastos estarán otra vez esparcidos en la célula.
5.

Haz un bosquejo de una célula de Elodea. Anota la pared celular, y los cloroplastos. Aunque parezca que las células estás vacías, realmente están llenas de estructuras no visibles con el microscopio de luz.
48

6.

Si hay movimientos citoplasmáticos, verás los cloroplastos circulando alrededor de la célula. Los movimientos del citoplasma son controlados por microfilamentos en el citoesqueleto de la célula. Estos filamentos de actina y miosina mueven el contenido celular a un proceso activo que usa la energía liberada por el rompimiento de ATP hacia ADP.(2)

COMPONENTES CELULARES: CLOROPLASTOS Y PARED CELULAR

OBSERVACIONES

Aumento Total ____________ Sin/Con tinción ____________

Aumento Total ____________ Sin/Con tinción ____________

PREGUNTAS.
1.

¿Cómo puede beneficiarse una célula al gastar energía en circular su citoplasma?

RESULTADO, DISCUSION Y CONCLUSIONES

49

PRACTICA 17 OBSERVACIÓN DE LA FOTOSÍNTESIS EN LA PLANTA ELODEA SP.
OBJETIVO. El alumno reconozca el proceso de la fotosíntesis determinando la producción de oxigeno. La vida por si misma no puede ser mantenida sin energía. Tal vez la diferencia fundamental entre organismos vivos y substancias no vivas es el nivel tan impresionante de complejidad y la organización entre organismos vivos, una cantidad de energía tremenda es requerida para llevar a cabo las complejas funciones de los organismos. Las funciones más básicas de los organismos-sentir y responder condiciones externas, crecer, desarrollarse, y reproducirse-claramente requieren de energía. Si los organismos vivos son privados de un recurso externo de energía, no son capaces de continuar elaborando estos procesos esenciales y se vuelven inactivos o mueren. Como toda vida requiere una fuente de energía, la vida por sí misma necesita una fuente externa de energía, esta fuente externa viene del sol. La fotosíntesis es el proceso que convierte la energía del sol en energía química, en los enlaces que mantienen juntas las moléculas orgánicas de los organismos vivos. La energía que se requiere para construir proteínas, lípidos, ácidos

50

algas. La luz verde no se utiliza en la fotosíntesis. Tomando todo en cuenta. Como simplemente circulan entre las reacciones. ATP. Aunque todas las formas de vida están compuestas de moléculas orgánicas. las cuales se agrupan en dos reacciones mayores. solamente unas cuantas. 51 . y carbohidratos proviene del sol. Tal vez las más impresionantes de estas reacciones en un organismo vivo son las reacciones de transducción de la fotosíntesis. y algunas bacterias. En esta actividad trabajarás en grupo para diseñar y conducir un experimento que pruebe el efecto de un factor.nucleicos. utilizan el agua y el dióxido de carbono para producir azúcares. y ellos producen oxígeno. estas dos reacciones convierten la energía solar en energía química. en la velocidad de la fotosíntesis. NADP+. o de otros ladrones (cuando comemos animales). La luz verde y roja es utilizada pata excitar los electrones de las moléculas de agua ocasionando que el agua se rompa formando oxígeno. Las reacciones de transducción capturan las longitudes de onda de la luz roja y azul. Esto libera energía la cual es utilizada para elaborar moléculas de glucosa (C6H12O6) del hidrógeno y el dióxido de carbono (CO2). La fotosíntesis es un proceso que incluye muchas reacciones.plantas. La energía de estos electrones excitados es usada en las reacciones de transducción para adicionar un tercer fosfato al ADP para formar ATP y es usado para adherir electrones al hidrógeno del NADP + para formar NADPH.son capaces de fotosintetizar. Las reacciones de fijación de carbono oxidan el ATP y el NADPH que fueron reducidos en la anterior reacción de luz. Las carreras de electrones (ADP. una variable independiente que hayas diseñado. por lo cual la mayoría de los organismos fotosintéticos reflejan la luz verde. la variable dependiente. NADPH) son recicladas de las reacciones de transducción hacia las reacciones de fijación de carbono y de vuelta a las reacciones de transducción. no son incluidas en toda la red de reacciones que describen los reactivos que entran a la fotosíntesis y los productos que salen de la fotosíntesis. El resto debemos robar la energía de estos organismos fotosintetizadores (cuando comemos plantas).

52 . Como Elodea produce oxigeno a través de la fotosíntesis. Midiendo el movimiento del fluido marcador a través de la pipeta. la velocidad de la fotosíntesis. Mientras conduces este experimento cuida de evitar y controlar otros factores que puedan cambiar la presión del aire en tu respirometro e interferir con la medición de la fotosíntesis.Usaras un respirometro para medir la producción de oxigeno de una planta acuática. Figura 4-2. estarás midiendo tu variable dependiente. el oxigeno subirá del agua hacia el espacio aéreo al inicio del tubo. puedes usar la producción de oxigeno como un indicador de la velocidad de la fotosíntesis. La adición de oxigeno al espacio aéreo empujara el fluido marcador hacia la punta de la pipeta. Como el oxigeno molecular es producido solamente en la fotosíntesis. Elodea.

Recorta dos ramas de Elodea de 12cm cada una y coloca una en cada tubo. 3. Lávalo con agua jabonosa y después con agua. 2. no debajo del agua. Atornilla la tapa al respirometro. Si los tapones están secos. Tips para fluidos marcadores #2 53 . 1. Coloca la lámpara a 70cm del baño de agua. 4. coloca un poco de grasa en la tapadera y luego sécala con papel. Rota el respirometro para que los dos agujeros queden equidistantes a la luz.0 y 0. Tips para fluidos marcadores #1 • Si el fluido marcador no se mueve. Baja los tubos hacia los agujeros en la tapa frente a la luz. 7. Los tubos de vidrio salientes de la tapadera necesitan estar en un espacio con aire. 8.TÉCNICA 1. • Si el fluido marcador se quiebra dentro de la pipeta. lávalo con agua. Adhiere dos tapones a los tubos. Anota la posición del fluido marcador de cada pipeta. Llena los tubos con agua o con una solución tratadora aproximadamente 3 cm debajo de la tapadera. Adhiere fluido marcador a cada pipeta e inclina la pipeta boca abajo para colocarla entre 0. 5. 6. Coloca las pipetas en una superficie nivelada como en un estante de tubos. Llena el frasco del respirómetro con agua a temperatura del cuarto (Si cambias la temperatura del agua cuida de no quebrar el frasco cambiando repentinamente la temperatura).15mm. probablemente la pipeta este sucia con otro fluido marcador. probablemente el interior de la pipeta este muy jabonoso. Anota la posición de los marcadores de cada pipeta cada cuatro minutos durante los siguientes 20 minutos. Usa un termómetro para asegurarte que la temperatura del agua en los tubos este alrededor de 2 grados de temperatura del agua del frasco del respirometro.

¿Qué condiciones podrán influir en la disponibilidad de estos requerimientos en un sistema acuático? 4. si lo hace. Tabla 4-2. Por ejemplo una rama de Elodea no es mas sana que la otra. ¿Están los tornillos cerrados? ¿Están las mangueras ajustadas? La tapadera tal vez necesita estar cerrada con un poco de grasa. debes hacer una lluvia de ideas con tu grupo para designar e identificar tu variable independiente. anota esta locación y vuelve a comenzar o pide ayuda. pesa cada rama y anota el peso.• Si el fluido marcador se mueve más allá de la parte graduada de la pipeta antes de tu última lectura. ¿La fotosíntesis utiliza enzimas. Tabla 4-3. Ajusta esto dividiendo cada valor por el peso y anota el resultado acumulativo de la producción de oxígeno por gramo de tejido. 2. la variable que podrás manipular para ver si la velocidad de la fotosíntesis cambia. Ajusta esto y anota el resultado acumulativo de la producción de oxigeno. Mientras desarrollas una lista de posibles variables independientes considera y discute las siguientes preguntas. Tal vez haya un agujero. Tus dos plantas tal vez no eran del mismo tamaño exactamente. Tabla 4-1. no puedes decir si esto fue por tu variable independiente o por otro factor. • Si el fluido marcador no se mueve en 10 minutos pide ayuda.(2) PREGUNTAS. 5. Para obtener una conclusión convincente necesitas repetir tu experimento si hay tiempo. Si tus plantas han fotosintetizado a diferentes velocidades con solo un intento. 2. que factores pueden influir en las reacciones enzimáticas dentro de una planta acuática? 54 . Remueve las ramas de la Elodea. 4. Antes de refinar los detalles de tus métodos y preparar tú experimento. 3. 1. Tus fluidos marcadores tal vez no empezaron exactamente en cero sino en diferentes locaciones. ¿Cuáles son los requerimientos de la fotosíntesis? 3.

DISCUSION Y CONCLUSIONES 55 . RESULTADO. 6. Lee los siguientes métodos y discute con tu grupo como podrías modificarlos para adaptarlos a las necesidades de tu experimento. Una vez que hayas identificado estas variables discute tus favoritas con tu instructor. El siguiente paso en diseñar tu experimento es determinar como planearas manipular tu variable independiente. escribe una lista de posibles variables independientes de tu experimento. ahora podrás diseñar los detalles de tus métodos experimentales. 7. Ahora que has escrito tú variable independiente estas listo para escribir una hipótesis formal sugiriendo de manera general como este factor influye en la fotosíntesis.5. Mientras discutes estas preguntas. En otras palabras.

PRACTICA 18 ESTUDIO DE LA MITOSIS EN CÉLULAS DE LA RAÍZ DE CEBOLLA OBJETIVO. MATERIALES Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Lanceta estéril Cubeta de tinción Aguja enmangada Pinzas Palillos Frasco lavador Tijeras Papel de filtro Vaso de precipitados Vidrio de reloj 56 Mechero de alcohol . Que el alumno se familiarice con las diferentes fases de la mitosis.

hasta la emisión de vapores tenues.TÉCNICA . evitando la ebullición. . Al cabo de 3-4 días aparecerán numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm de longitud. La orceína A reblandece las membranas celulares y la B completa el proceso de tinción. . Colocar el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raíz. Orceína A Orceína B Llenar un vaso de precipitados con agua y colocar un bulbo de cebolla sujeto con dos o tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua. Con el mango de una aguja enmangada dar unos golpecitos sobre el cubre sin romperlo de modo que la raíz quede extendida. añadir una gota de orceína B y dejar actuar durante 1 minuto. Con la presión sobre el porta de la preparación se logra una extensión y difusión de las células del meristemo de la cebolla. . . . Sobre la preparación colocar unas tiras de papel de filtro. Si la preparación está bien asentada no hay peligro de rotura por mucha presión que se realice. Con las pinzas tomar uno de los ápices o extremos de las raicillas y colocarla sobre un portaobjetos. 5 o 6. Cortar con las tijeras unos 2-3 mm del extremo de las raicillas y depositarlo en un vidrio de reloj en el que se han vertido 2-3 ml de orceína A. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA Se realizará a fuertes aumentos. Poner el dedo pulgar sobre el papel de filtro en la zona del cubreobjetos y hacer una suave presión. evitando que el cubre resbale. Observar al microscopio. 57 . Calentar suavemente el vidrio de reloj a la llama del mechero durante unos 8 minutos. .

¿Por qué los cromosomas se tiñen de morado? 3.La preparación presenta el aspecto de una dispersión de células por todo el campo que abarca el microscopio. Se observan células en diversas fases o estados de división celular. descríbelo.(1) ESTUDIO DE LA MITOSIS EN CÉLULAS DE LA RAÍZ DE CEBOLLA OBSERVACIONES Aumento Total ____________ Aumento Total ____________ PREGUNTAS. 2. DISCUSION Y CONCLUSIONES 58 . 1. RESULTADO. ¿Has observado el proceso de citocinesis? En caso afirmativo. Describe las fases de la mitosis que has observado y su significado. Se ven los cromosomas teñidos de morado por la orceína. El aspecto reticulado así como el mayor tamaño de algunos núcleos corresponde a las células que se encontraban en los procesos iniciales de la división mitótica.

John P. Amy L. Alberts. Cortes. 2007 Biología De Los Microorganismos. 2000. Cuarta Edición. Berg. Marion. Biología.. Preeszler. Ed. Ralph W. Introducción a la Microbiología. Ed.Bibliografía utilizada para la elaboración de las prácticas del manual de Biología Celular.. Bray. Tortora.. 2005 http://www. 2003. Michael T. Laura Lowell Haas. 8ª. Octava Edición. Bray. Microbiología. Martin. Manual de Biología General. Mc.com/practicas/index. ED. Bruce Alberts. 1. 59 . Panamericana. Omega. Harley. 9ª Edición. 2006. Funke. 6. Madigan. 2003 5. Lewis 3ª.… 2ª. Solomon. Outernet Publishing. Case. Jack Parker Printice Hall.htm 2.joseacortes. Introducción a la Biología Celular. Graw Hill. Klein. 4.. Bibliografía de consulta para el alumno. LLC. 2008 2. Hopkin. Panmericana. Biología Molecular de LA CELULA. 1. 3. Lansing Prescott. John M. . Donald A. Mcgraw-Hill-Interamericana. José A.. Manual CELLULAR AND ORGANISMAL Biology. Martinko.

.....................................3 g 60 ....... 3....................................................................1.....................................100 ml o Solución B  Ácido tánico............... o Solución de hidróxido potásico al 1%...................................................1 g o Agua destilada.................................................ANEXO Preparación de colorantes 1.........................................................................1 ml o Azul de metileno...................................................................................................... 2..................... sol.... 4.................................2 g  Etanol 95%............... Acido-Alcohol: (decolorante para tinción Ziehl-Neelsen) o Ácido clorhídrico concentrado ..................100 ml Colorante para esporas: o Solución acuosa saturada de verde malaquita Colorante para flagelos de Leifson: o Solución A  Fucsina básica ......................................30 ml o Agua destilada........... 5............3 ml o Etanol 95% . o Azul de metileno...............................................100 ml Azul de metileno de Loeffler: Tinciones simples............................97 ml Azul de metileno: Colorante de contraste para tinción de flagelos.............. saturada en etanol al 95%....................

.................................................... 10......... Cristal violeta: Para tinción Gram y tinción simple.......2 g o Agua destilada.....................................................................10 ml o Agua destilada....................... o Hematoxilina.....3 g o Ácido acético glacial............................100 g o Glicerol.......1 l Lactofenol: Para preparaciones microscópicas en fresco de mohos....5 g o Agua destilada..........100 ml Fucsina diluida: Para tinción Gram y tinción simple.........................................0....................................................................................................................................10 ml o Fenol 5% en solución acuosa....................................................................................100 ml Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen: Para tinción ácido-alcohol resistente....... 7..........................................100 ml o Solución C  Cloruro sódico......................200  61 ....100 ml Eosina: Para observación de células sanguíneas........6......................................................................................................100 ml o Fenol..5 g  Agua destilada.........1 g o Etanol 95%....................................0.......................................................................................... o Cristal violeta (violeta de genciana)................ o Eosina.................................. 9.................. o Ácido láctico...................................................................100 ml Para preparar la solución de uso..............................100 ml Hematoxilina: Para observación de células sanguíneas...................... o Fucsina básica.................................................................................................................................................................................................0............... o Fucsina fenicada de ZiehlNeelsen......1........................................................................................................................ B y C y se guarda en frasco cerrado herméticamente en la nevera donde es estable durante varias semanas.......................................... 8............ 11......025 ml o Agua destilada............... se mezclan cantidades iguales de las soluciones A........................................ Agua destilada..........

............................................................................45.................................. o Yodo............................................................100 ml Lactofenol al Azul Algodón: Para preparaciones en fresco y tinciones de mohos............................................................3 ml o Agua...................... saturada de azul algodón (azul anilina soluble).................. 17.............8 ml o Ácido clorhídrico 1 mol/l............2 g o Agua destilada.......................10 ml  Glicerol......................................................55 ml o Agua........................0..25 g o Agua destilada...........................300 ml Orceína A: Tinción de cromosomas........... o Orceína.................. 13...................................................... o Solución de azul algodón  Sol..........................................................................................................................................................1 g o Yoduro potásico.......12............................ o Orceína....................................... 15..................................................................................................................................................... 8 ml Orceína B: Tinción de cromosomas............8 0 ml Mezclar esta solución con lactofenol a partes iguales Lugol: Solución de yodo para tinción Gram................................ o Alcohol etílico......................... ml o Agua..................................................45................................2 g o Ácido acético..............................................................100 m Sudán III: Tinción específica de grasas...................hasta 62 ............................................................................. 16. o Safranina.......................................2 g o Ácido acético...................................................8...100 ml o Sudán III................................................................55 ml Safranina: Colorante de contraste para tinción Gram (preferible a la fucsina) y esporas......................1 0 ml  Agua............. 14.......................................................................................................................................................

saturación 18. Verde de metilo acético: Igual composición que la eosina (num. 7) 63 .

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