Resumen Dos experimentos con la tcnica del transductor de presin de gas se llevaron a cabo para investigar los efectos

de diferentes tipos y niveles de taninos. muestras de forraje se incubaron en cultivos discontinuos junto con el lquido ruminal y la digestin medio para modelar la dinmica de la fermentacin ruminal in vitro. En el Experimento 1, los niveles de graduado (0, 25, 50, 75 y 100 mg / g de materia seca (MS)) de purificada taninos condensados (TC) obtenidos a partir de cuatro leguminosas arbustivas tropicales taninferos, Flemingia macrophylla, Leucaena leucocephala y dos procedencias de Calliandra calothyrsus (San Ramn y Patulul), se aadieron a una mezcla libre de TC del pasto Brachiaria humidicola y la herbcea leguminosa Vigna unguiculata. Los modelos estadsticos utilizados para la evaluacin de los datos incluidos los dos principales efectos (origen y el nivel de CT) y su interaccin. Aparte de los efectos dependientes de dosis (p <0,001) no estaban claros los efectos especficos de la planta (en su mayora P <0,001) en la dinmica de fermentacin, en la degradacin in vitro de MS- dacin y la aparente degradacin de compuestos que contienen N. Los taninos de C. calothyrsus tuvo la los efectos ms pronunciados sobre la dinmica de la fermentacin y la degradacin de nutrientes, seguida por F. macroPhylla y L. leucocephala. Dentro de C. calothyrsus, CT de la procedencia de San Ramn suprimido. la produccin de gas asinttica y degradacin de la MS en mayor medida (p <0,05) que la TC de la prueba- mantenimiento Patulul. Adems baja (25 mg / g MS) de la TC de C. calothyrsus fue slo ligeramente negativo mientras que niveles altos de CT (75 y 100 mg / g MS) tena efectos claramente negativos sobre la produccin de gas asinttica y DM degradacin. En una primera incubacin en el experimento 2, la hierba, mezcladas con el follaje de los diferentes leguminosas arbustivas taninferos se incub con niveles graduales de polietilenglicol (PEG) correspondientes a 0 / 3, 1 / 3, 2 / 3 y 03/03 de los contenidos de la TC en estas mezclas. En una segunda incubacin, todas las mezclas a base de leguminosas arbustivas taninferos y mezclas que contengan no taninferos leguminosas arbustivas (Cratylia argentea, velutinum Desmodium) o una leguminosa herbcea (V. unguiculata) fueron sometidos a ensayo sin PEG y con 80 g / kg de PEG complementaria. En general, la adicin de PEG no tena efecto (P> 0.05) sobre los parmetros de la fermentacin en taninferos leguminosas no. Con las especies taninferos, curvas de respuesta en los parmetros de fermentacin eran en su mayora no lineales llegar a una

meseta en una PEG: CT- relacin de 01:03-02:03. Una excepcin fue que sin degradar la dieta disminuy (P <0.05) con Adems de aumentar PEG hasta el ms alto nivel. En conclusin, el estudio demostr que en gran medida los efectos de las plantas ricas en TC en fermentacin ruminal in vitro puede ser explicado por la especfica CT propiedades. Adems, aparte de TC vinculante, PEG parece no tener efectos secundarios importantes en fermentacin ruminal, y para la fermentacin de la mayora de las variables y las especies, la suplementacin equivalente PEGvalente al contenido de la TC en las mezclas forrajeras parece suficiente para prevenir los efectos negativos de la TC en parmetros de fermentacin. 2008 Elsevier BV Todos los derechos reservados. Palabras clave: Calliandra, taninos condensados; Flemingia; En la fermentacin in vitro; Leucaena; PEG 1. Introduccin Insuficiente disponibilidad y la calidad de los recursos forrajeros tradicionales en muchos pases tropicales regiones, en particular los que tienen, de baja fertilidad de los suelos cidos y prolongada estacin seca, se los principales obstculos para los agricultores para mejorar la productividad ganadera. Nativas e introducidas mltiples especies leosas se han discutido ampliamente ( Chen e t al;., 1992 Norton, 2000) para ofrecer posibles soluciones. Entre ellas, las leguminosas arbustivas se han considerado un opcin prometedora debido a su rpido crecimiento, alto contenido en protenas y tolerancia a la sequa de buena balance ( Gray, un 970; Paterson et al 1998., ) . Su capacidad para fijar nitrgeno elimina la necesidad de de costosos fertilizantes nitrogenados. El suministro de forraje verde durante la estacin seca hace algunas leguminosas arbustivas un complemento til de los pastos de baja calidad para alimentar al ganado diferentes. Desafortunadamente, muchas leguminosas arbustivas tropicales contienen altas concentraciones de tan condensada Nins (TC), un grupo de diversos compuestos fenlicos con una afinidad distintivo a las protenas, hidratos de carbono y otros componentes vegetales que pueden reducir notablemente la digestibilidad de nutrientes. A pesar del alto contenido en protenas, la propiedad anti-nutritivos de los taninos pueden no- tanto, reducir el valor forrajero y hacer que estas plantas casi intil para la alimentacin animal (por ejemplo, Hess e t al., 2003 ). A pesar de la gran cantidad de estudios sobre taninferos leguminosas arbustivas tropicales ( Topps, 1992; Mueller-Harvey, 2006 ) , varias preguntas siguen sin ser investigados. Una de estas preguntas

ciones est relacionado con la gran diversidad del TAC estructuras actuales a leguminosas y su interaccin con compuestos de plantas, especialmente la fibra como la principal fuente de energa para los rumiantes alimentados forrajes tropicales. Una mejor comprensin de los factores decisivos que afectan a los nutrientes ruminal la dinmica de la degradacin requiere una investigacin detallada del efecto de la TC aislados de plantas de origen. Otra cuestin importante relacionada con los estudios con plantas taninferos, es la cantidad de glicol polietileno (PEG) necesaria para neutralizar completamente CT ( Makkar, 2003) y si no PEG, como tal, afecta a los parmetros de fermentacin ruminal ( Sturm e t al., 2007 ). El objetivo del presente estudio fue probar la hiptesis de que (i) no slo Con CT- sino tambin TC propiedades concentracin son determinantes para la degradacin ruminal de los nutrientes, (ii) PEG es requiere en una cantidad equivalente a la de la TC presentes para neutralizar la TC y (iii) PEG como como no tiene efectos secundarios importantes sobre la fermentacin ruminal. 2. Materiales y mtodos 2.1. Experimental forrajes En los dos experimentos, los mismos lotes de forrajes se utiliza. El forraje basal consisti en la baja calidad del pasto Brachiaria humidicola-tropicales (antes conocida como Brachiaria dictyoneura, CIAT 6133 de la coleccin de germoplasma que se conserva en el Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT)). La prueba incluy cuatro leguminosas arbustivas taninferos: Calliandra calothyrsus San Ramn (CIAT 22310) con contenido de TC intermedios (sobre llamado C. calothyrsus S), C. Patulul calothyrsus (CIAT 22316) muy alto en la TC (C. calothyr- SUS P), Flemingia macrophylla (CIAT 17403), y Leucaena leucocephala (CIAT 734). Este ltimo es un estudiado tropicales leguminosa arbustiva y con contenido de TC moderada (alrededor de 50 g / kg MS) y la alimentacin de alto valor, pero que no tolera los suelos cidos ( Peters e t al., 2003 ). Adems, Vigna unguiculata y arbustos dos no leguminosas que contienen cantidades detectables de la TC, Cratylia argentea (CIAT 8516) y Desmodium velutinum (CIAT 33443), se empleado. Las leguminosas se cultivan en masas puras en un Ultisol (pH alrededor de 4,2) en el CIAT Estacin de Investigacin en Santander de Quilichao (Cauca, Colombia, 990 m de altitud de 1727 mm

La precipitacin anual promedio y 23.7 total de 17 tratamientos que fueron evaluados en tres repeticiones. La composicin de nutrientes de la mezcla de csped y leguminosas se da en la Tabla 1. Para agregar taninos purificada, la mezcla de forraje fue tratada con soluciones acuosas (7 ml / g MS) que contiene las cantidades respectivas de la TC. La mezcla sin taninos se trat con la misma cantidad de agua destilada. Tanino soluciones y el agua destilada se incorporaron por homogeneizacin de la mezcla hasta que el compaero de la plantar mostr una textura hmeda homognea. Posteriormente las mezclas fueron secadas al aire en por la noche. Los taninos se obtuvieron mediante el mtodo de Barahona ( 1999) y purificado de acuerdo el mtodo de Terrill et al. (1992) . En pocas palabras, unos 150 ml de solucin de extraccin Tono: el agua 0.7:0.3, v / v, con 1 g / l de cido ascrbico) se agregaron a 40 g de secas y finamente material vegetal del suelo y se agita durante 75 minutos con un agitador de laboratorio a 50 rondas por minuto a temperatura ambiente. La muestra se filtr a travs de cuatro capas de gasa, que se apret intensamente al final. Con el fin de eliminar los pigmentos de plantas, alrededor de 15 ml de ter dietlico se agregar al filtrado y se agita bien. A continuacin, la parte superior, verde color, la fase orgnica se separ por una bomba de succin y repetir el procedimiento dos veces ms hasta que el lquido era incoloro. Posteriormente, el mismo procedimiento se repiti tres veces con acetato de etilo en vez de ter. Despus de la evaporacin de las restantes cin disolvente orgnico por medio de un concentrador de la muestra a 40 C (Techne SC4, Techne Inc., Burlington, New Jersey), la solucin acuosa fue liofilizado y el slido obtenido se disolvio en metanol acuoso (1:1, v / v), se mezcl y se centrifug, y la solucin fue trasladado en un vaso que contiene 50 g de Sephadex LH-20 (Sephadex lipoflicos, LH-20-100, Sigma-Aldrich) en 300 ml de metanol acuoso (1:1, v / v). Este fue agitada y luego se centrifuga a 2700 g por 5 min. El sobrenadante se desech y el procedimiento se repite hasta que el sobrenadante qued claro. El Sephadex se enjuag con acetona-agua (0.7:0.3, v / v), agita y se centrifuga. El sobrenadante se verti a travs de un vidrio de microfibra filtro Whatman (GF / A Whatman Inc., NJ, EE.UU.). El resultado- solucin cin se liofiliz y taninos fueron almacenados en contenedores apretados al aire a las 4 C hasta utilizados.

2.2. Protocolos experimentales

2.2.1. Experimento 1 Cuatro niveles de taninos purificados (25, 50, 75 y 100 mg / g de materia seca (MS)) obtenidos a partir de C. calothyrsus S, C. calothyrsus P, F. macrophylla y L. leucocephala fueron agregadas a una mezcla de forraje a partir de B. humidicola y V. unguiculata en una proporcin de 2:1 en un DM base. Adems la mezcla de forraje se incub tambin sin taninos. Eso se traduce en total de 17 tratamientos que fueron evaluados en tres repeticiones. La composicin de nutrientes de la mezcla de csped y leguminosas se da en la Tabla 1. Para agregar taninos purificada, la mezcla de forraje fue tratada con soluciones acuosas (7 ml / g MS) que contiene las cantidades respectivas de la TC. La mezcla sin taninos se trat con la misma cantidad de agua destilada. Tanino soluciones y el agua destilada se incorporaron por homogeneizacin de la mezcla hasta que el compaero de la planta rial mostr una textura hmeda homognea. Posteriormente las mezclas fueron secadas al aire en por la noche. Los taninos se obtuvieron mediante el mtodo de Barahona ( 1999) y purificado de acuerdo el mtodo de Terrill et al. (1992) . En pocas palabras, unos 150 ml de solucin de extraccin (asTono: el agua 0.7:0.3, v / v, con 1 g / l de cido ascrbico) se agregaron a 40 g de secas y finamente material vegetal del suelo y se agita durante 75 minutos con un agitador de laboratorio a 50 rondas por minuto a temperatura ambiente. La muestra se filtr a travs de cuatro capas de gasa, que se apret intensamente al final. Con el fin de eliminar los pigmentos de plantas, alrededor de 15 ml de ter dietlico se agregar al filtrado y se agita bien. A continuacin, la parte superior, verde color, la fase orgnica se separ por una bomba de succin y repetir el procedimiento dos veces ms hasta que el lquido era incoloro. Posteriormente, el mismo procedimiento se repiti tres veces con acetato de etilo en vez de ter. Despus de la evaporacin de las restantes cin disolvente orgnico por medio de un concentrador de la muestra a 40

C (Techne SC4, Techne Inc., Burlington, New Jersey), la solucin acuosa fue liofilizado y el slido obtenido se re-disuelto en metanol acuoso (1:1, v / v), se mezcl y se centrifug, y la solucin fue trasladado en un vaso que contiene 50 g de Sephadex LH-20 (Sephadex lipoflicos, LH-20-100, Sigma-Aldrich) en 300 ml de metanol acuoso (1:1, v / v). Este fue agitada y luego se centrifuga a 2700 g por 5 min. El sobrenadante se desech y el procedimiento se repite hasta que el sobrenadante qued claro. El Sephadex se enjuag con acetona-agua (0.7:0.3, v / v), agita y se centrifuga. El sobrenadante se verti a travs de un vidrio de microfibra filtro Whatman (GF / A Whatman Inc., NJ, EE.UU.). El resultadosolucin cin se liofiliz y taninos fueron almacenados en contenedores apretados al aire a las 4 C hasta utilizados. 2.2.2. Experimento 2 En el segundo experimento los siete leguminosas fueron probados en combinacin con B. humidifi- cola en una proporcin de 1:2 (en base seca, con exclusin de completarse PEG). La composicin de nutrientes de estas mezclas se resume en la Tabla 1. En una primera serie, slo se legumbres taninferos prueba y la cantidad de PEG que se aade se calcularon para cada leguminosa en relacin a los contenidos TC medida y las proporciones compuesto de PEG: TC de 0:3, 1:3, 2:3 y 3:3. En una segundo, las cuatro leguminosas taninferos y los tres-taninferos leguminosas no fueron sometidos a ensayo sin PEG o con la solucin con el ms alto nivel PEG aplica en los primeros conjunto (80 mg / g MS para la mezcla que contiene C. calothyrsus P). Esto produjo un total de 16 tratamientos en el primer set y 14 tratamientos en el segundo set. Todos los tratamientos se evaluaron en tres repeticiones cada uno. Las muestras fueron tratadas con 5 ml / g MS de agua destilada o PEG Con soluciones acuosas Taining los importes respectivos de PEG (8000 Da peso molecular medio, Sigma-Aldrich, EE.UU.). Destilados acuosos PEG soluciones y el agua se mezcla manualmente con el suelo material vegetal y secado al aire durante la noche. Posteriormente las muestras se molieron cuidadosamente por mano con un mortero de cermica.

2.3. Operacin de la presin tcnica del transductor de gas dinmica de fermentacin ruminal y la degradacin de los nutrientes fueron evaluados por el gas (presin seguro) tcnica transductor (GTT) segn lo descrito por Theodorou e al t. (1994) . En pocas palabras, el forraje se incubaron en 160 botellas de ml de suero en un medio de la digestin que contiene micro- y macro elementos, un agente reductor y un indicador de reduccin ( Menke un nd Steingass, 1988) . Una cantidad de 10 ml de lquido ruminal se aadi a 90 ml de este medio de la digestin y se incub con forraje de 1 g de MS de las mezclas experimentales respectiva. Adems a las mezclas experimentales, que fueron incubadas por triplicado, seis espacios en blanco que contiene slo el medio de la digestin completa y el fluido ruminal se incluyeron para corregir para el gas y cidos grasos voltiles (AGV), as como para los residuos de fermentacin slida originarios del lquido ruminal. El fluido ruminal mezcla se obtuvo de dos rumen canulado Novillos ceb, el pastoreo de una pradera pasto estrella (Cynodon plectostachyus, la calidad del alimento media). fluido ruminal fue transportado en contenedores de vaco con calefaccin-pre y slidos fueron retirados mediante el filtrado a travs de cuatro capas de gasa. El pH del lquido ruminal fresco fue de 6,4 y el potencial redox se -310 mV para el Experimento 1 y 6,7 y -300 mV para Experimento 2, respectivamente. La temperatura de incubacin fue de 39 C. de presin de gas y el volumen se registrado a los 3, 6, 9, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 96, 120, 144 y (slo para el Experimento 2) 168 h despus de la inoculacin. Con el fin de terminar la fermentacin, las botellas fueron colocadas en hielo despus de la ltima medicin hasta ser tratados posteriormente. Una cantidad de

30 ml del lquido de la fermentacin se centrifug en hielo durante 15 minutos a 30.000 xg. Separa las sub-muestras del sobrenadante se tomaron para determinacin de pH y la concentracin de AGV. Sub-muestras para este ltimo se desproteinizado y conservado con 200 l / ml de cido metafosfrico (250 g / l) y se almacenan a -20 C. La resto del lquido de la fermentacin se filtra al vaco junto con los residuos slidos a travs de un pre-crisol tarado (tamao de poro 40 a 100 m). Las botellas fueron lavadas con poco agua tibia para eliminar todos los residuos slidos. Los residuos fueron secados en el horno a 35 C y almacenadas para su posterior anlisis. 2.4. Anlisis de laboratorio Cada forraje fueron analizadas para DM (24 horas a 105 C), cenizas totales (3 horas a 500 C), N (San + autoanalizador, Skalar, Breda analticos, los Pases Bajos), FDN y FDA ( Van Soest e t al., 1991 ) . La FDN fue determinado sin el uso de la amilasa, ya que no almidn Se esperaba que en las plantas utilizadas, pero con la adicin de sulfito de sodio como se recomienda por Robbins et al. (1987) para el forraje taninferos a fin de eliminar la protena insoluble- complejos tanino. Sin embargo, un cierto sesgo de taninos en la determinacin de la fibra no puede ser excluidos ( Makkar e t al., 1995b ) . Cada forraje se analizaron ms de sulfrico lignina cido (lignina (sa)) por solubilizacin de la celulosa con cido sulfrico ( Robertson y Van S oest, 1981 ) . Los valores de FDN, FDA y lignina (sa) no fueron corregidos por el contenido de cenizas. los residuos de la fermentacin se analizaron para MS y N solamente. Estos datos se utilizaron para calcular degradabilidad de la materia seca in vitro (DIVMS) y la protena de la dieta cruda (PC) al parecer restantes no degradadas (UDN). El contenido de y con destino TC extractables en todas las plantas experimentales fueron analizados por la foto- medicin de espectrometra (absorbancia a 550 nm) de extractos de plantas, taninos purificados, extrados de cada material por el procedimiento de Hagerman y B utler (1980) , se utilizaron como estndares. El pH del lquido ruminal fresco y de lquido de fermentacin despus de la incubacin se analiz por medio de un potencimetro (modelo 720 plus, Orion Research Inc., Beverly, MA, EE.UU.) en combinacin con un electrodo de pH (modelo 8102 Ross, Orion Research Inc., Beverly, MA, EE.UU.). potencial redox del lquido ruminal fresco se determin mediante el potencimetro del mismo ter y un anillo de platino combinacin de electrodos redox (DM140 modelo SC, Mettler Toledo, Greifensee, Suiza). Para la determinacin de cidos grasos voltiles, las muestras descongeladas se centrifugaron durante 10 minutos a 8000 xg. El sobrenadante se filtra a travs de una jeringa de poro microfiltro

(13 mm, 0.45 m) en un frasco estril cubierto con una membrana de goma. Las concentraciones de AGV a continuacin, se determin por HPLC utilizando un Shimadzu LC-10A (Shimadzu Inc., Canby, OR, EE.UU.) equipado con un 300 mm 7,8 mm de dimetro Aguas Amine HPX-87H columna (BioRad Laboratories, Hercules, CA, EE.UU.) de acuerdo con Tjardes y Buskirk (2000) . Un UV-VIS Detector (SPD 10AV UV / VIS Detector, Shimadzu, Canby, EE.UU.) se emple a 210 nm en un temperatura del horno de 60 C y 0,9 ml / min de caudal. Tiempo de duracin se fij a 55 min. 2.5. Clculos y anlisis estadstico datos de produccin de gas se ajustaron a un modelo sigmoidal modificado de Gompertz como se describe por Bidlack y Buxton (1992) que se recomienda para los sistemas de produccin de gas por Lavrencic et al. (1997) un nd Noguera et al. (2004) : y=Ae-Be - Ct donde y es la produccin total de gas acumulado (ml) en el tiempo t (h), A la mxima (asinttica) la produccin de gas (ml / g), B el perodo de latencia antes exponencial la produccin de gas se inicia (en tiempo de diferencia) (H), y C es la tasa de produccin de gases especficos (ml / h) (en representacin de la actividad microbiana). Dentro de los distintos modelos de Gompertz modificado esta es una de las ms generalizadas. En este modelo se asume que la produccin de gas es proporcional a la cantidad de finales del metabolismo productos producidos durante el crecimiento de bacterias segn lo descrito por Beuvink et al. (1992) . Por lo tanto las curvas de produccin de gas se asemejan a las curvas de crecimiento sigmoidal de bacterias cultivadas en lotes cultura ( e Zwietering al t., 1990 ) . Estas curvas se pueden dividir en dos partes que resumen (I) la produccin de gas ritmo ms rpido al principio que resulta de la fermentacin de fcil materiales degradables y (ii) la segunda fase donde el material fermentado lentamente degradable ( Lavrencic et al., 1997 ) . Adicionalmente a la produccin de gas parmetros A, B y C, el punto de inflexin de las curvas se calcul como ln (B) / C, donde la tasa de produccin de gas es mxima y el volumen de gas acumulado es equivalente al 36,8% de A. Los clculos de produccin de gas parmetros se realizaron utilizando el procedimiento PROC NLIN de SAS (versin 8.2 para Linux, SAS Institute, Cary NC, EE.UU.). La DIVMS fue calculada como la diferencia de la MS suministrada y se recuperaron despus de fercin, y se corrigi para la DM se recuper de los espacios en blanco. En el experimento 2, el presente se hizo asumiendo que el PEG fue completamente soluble y por lo tanto los residuos slidos estaban libres de PEG. Esta simplificacin no cuenta para el PEG-complejos tanino que se prohbilmente presentan como objetos en el residuo no digerido ( Makkar e al t;., 1995a Makkar, 2000 ).

Por lo tanto, la degradabilidad de los forrajes complementados mezclas-PEG, que contena leguminosas taninferos que probablemente se subestim. El aparentemente no degradadas CP (UDN) se calcul a partir de la presente el contenido de N en los residuos de fermentacin slida, corregida por N recuperado de los espacios en blanco. Esto se hizo asumiendo que todos los N determinado en el residuo provienen solamente de las plantas no degradadas del PP, a pesar de masa microbiana residual adjunta a los residuos slidos haya podido dar lugar a una sobreestimacin de la UDN. Los datos individuales fueron sometidos a anlisis de varianza utilizando el procedimiento GLM de SAS (versin 8.2). comparaciones mltiples entre las medias se realiz con el Ryan-Einot-Gabriel-gals mtodo (REGWQ). En el Experimento 1, los anlisis se per- formada con respecto a la 4 4 arreglo factorial de tratamientos. Fuente de la TC (leguminosas especies o procedencias), el nivel de la TC (25, 50, 75 y 100 mg / g MS) y los respectivos inter- la accin se considera como fuentes de variacin. Las comparaciones de medias se realiz dentro de especies, incluyendo la mezcla de B. humidicola y V. unguiculata sin tanino adicin como tratamiento control. Para la primera serie de tratamientos en el experimento 2, incluyendo slo Rica en legumbres TC, los anlisis se realizaron sobre el 4 arreglo factorial 4 de los tratamientos. Legumbre especies (o procedencias), el nivel de PEG (0:3, 1:3, 2:3 y 3:3) y el interaccin correspondiente fueron considerados como fuentes de variacin. Adems, en ambos experimentos, lineales y cuadrticas contrastes se establecieron dentro de las especies con el fin de capaz de especificar y efectos no lineales lineales de cualquiera agreg TC o PEG. Para la segunda serie de tratamientos en el experimento 2, donde CT-ricos, as como la no-CT incluir leguminosas, el anlisis de varianza se realiz dentro de las especies para probar dife- diferencias entre el 0 y el PEG de 80 mg / g MS, con PEG-nivel como la nica fuente de variacin. La variacin entre las especies del efecto PEG se determin en un nuevo anlisis de varianza. Para ello, el efecto de PEG se calcul a partir de los valores medidos con Adems PEG (80 mg / g MS) menos el valor medio medido en el control respectivo tratamiento (0 PEG mg / g MS). Los datos obtenidos fueron sometidos a anlisis de varianza con especies como la nica fuente de variacin. 3. Resultados 3.1. Composicin de las plantas experimentales En comparacin con la hierba (43 mg de CP / g MS), todas las legumbres y, entre estos, en particular L. leucocephala y C. argentea, eran ms ricos en N ( Tabla 1) . Las leguminosas no taninferos fueron ms bajos en fibra (FDN y FDA) de la

hierba, pero ms alto que las leguminosas taniniferous. se observan grandes diferencias en el contenido de TC entre las leguminosas taninferos, en C. calothyrsus P fue superior doble de C. calothyrsus S y tres veces mayor los valores de L. leucocephala. 3.2. Efecto de la adicin de taninos purificados (Experimento 1) Todos los parmetros de la fermentacin se influy (P <0,001) por especies de plantas y el nivel de CT, y el efecto del nivel TC vari entre especies (interaccin especie nivel de TC, sobre todo P <0,001) ( tabla 2) . Independiente de las especies de leguminosas de la adicin de TC extrados reducida (P <0,05) la produccin de gas asinttica. Sin embargo, mientras que los efectos negativos de la TC se compara pequea para F. macrophylla y L. leucocephala, la produccin de gas fue sustancialmente

Fig. 1. Effect of addition of purified condensed tannins from Calliandra calothyrsus (San Ramon and Patulul), Flemingia macrophylla and Leucaena leucocephala (Experiment 1) on in vitro dry matter degradation (determined after an incubation period of 144 h) of a mixture of Brachiaria humidicola and Vigna unguiculata (meanS.D., n = 3). (_) C. calothyrsus San Ramon; (_) C. calothyrsus Patulul; (_) F. macrophylla; (_) L. leucocephala.

suprimido con la TC ms alto nivel (100 TC mg / g MS), tanto de C. calothyrsus demostrar- ordenanzas (cuadrtica contrastes, P <0,001). Lapso de tiempo (B) disminuy (P <0.05) con el aumento de los niveles de CT de C. calothyrsus, no mostr ninguna respuesta clara (P> 0.05) debido a la CT de

macrophylla, y se increment (P <0.05) con la TC de L. leucocephala. Produccin de gas tasa (C) se redujo claramente (P <0,001) con el aumento de los niveles de CT en todas las especies. El perodo de hasta el punto de inflexin se alcanz un aumento (P <0,001) con el aumento de los niveles de CT. Con la mayora de los tipos de CT, los valores de inflexin se alcanz que eran de dos a tres veces mayor diferente a la del control sin adicin de taninos. Aparente DIVMS fue afectada (P <0,001), por especies y el nivel de CT y se neg (P <0,001) al aumentar el nivel CT. Sin embargo, la magnitud de este descenso vari entre especies de leguminosas ( Fig. 1; interaccin de las especies nivel de CT, P <0,001). En el tratamiento de control sin taninos, DIVMS promedio de 760 mg / g. Como complemento de 25 mg / g MS de la TC no reducir (P> 0,05) DIVMS, excepto cuando la TC de C. calothyrsus S fueron suplementadas. Con niveles ms altos de DIVMS aparente CT se redujo considerablemente y lleg a niveles tan bajos como alrededor de 350 mg / g cuando la adicin de 100 mg / g de MS de la TC de C. calothyrsus S. La reduccin en DIVMS fue acompaado de un aumento de proporciones UDN diettica total N ( Cuadro 2). El TC nivel ms alto (100 mg / g MS) independiente de especies de leguminosas suprimido aparente degradacin de las protenas casi por completo. En ambas procedencias de C. calothyrsus esto tambin fue el caso de la TC 75 mg / g MS. Con-CT niveles bajos (25 mg / g MS), no hubo (P> 0.05) diferencias en la degradacin de protenas aparente entre las especies. La concentracin total de AGV disminuy (P <0,001) con la TC nivel cada vez mayor sobre todo por a una gran disminucin (P <0,001) de acetato y propionato (datos no mostrados en la tabla). En todos los niveles, CT de C. calothyrsus P diferencias (P <0.05) en su efecto sobre la concentracin total de AGV de los de C. calothyrsus S, F. macrophylla y L. leucocephala. Hubo un aumento de acetato y una reduccin de butirato con el aumento de los niveles de CT de todas las leguminosas, con excepcin de L. wherepropionateproportionincreasedattheexpenseofbutyrate leucocephala. Iso butirato proporcin aument con la adicin de la TC, excepto cuando la TC de C. calothyrsus P fueron agreg. El acetato: propionato variada relacin con el aumento de los niveles de CT, pero en diferente medida en las especies leguminosas individuales (nivel de interaccin especie TC, P <0,001). 3.3. Efecto de la adicin de PEG (Experimento 2) Las diferencias entre las especies de leguminosas en la composicin qumica se refleja en la com- mezclas completa ( Tabla 1) . contenido de nitrgeno variaron entre 11,9 y 18,2 mg / g de MS (CP: 74 y 114 mg / g), y fueron similares entre las mezclas que contengan CT-leguminosas ricas y no CT- leguminosas. Las mezclas experimentales con este ltimo tena mayor contenido de fibra que los

con la rica en especies de CT (640-700 mg / g frente a 540 a 640 mg / g). produccin de gas asinttica (A) aument linealmente (P <0,05) al aumentar el nivel de PEG en C. calothyrsus y F. macrophylla, pero no para L. leucocephala ( Tabla 3) . El perodo de latencia (B) mostraron una respuesta igualmente diferenciada y disminuy (P <0.05) con el aumento de PEG Adems, excepto para los tratamientos con F. macrophylla. Tasa de produccin de gas (C) slo cambi con la adicin de PEG para C. calothyrsus P y F. macrophylla. Del mismo modo el perodo en que el punto de inflexin se alcanz fue afectada (P <0.05) con PEG en todas las especies excepto L. leucocephala. La respuesta en los parmetros de fermentacin de estos tres ltimos en su mayora se produjeron al aumentar el nivel de PEG de 0 / 3 a 1 / 3 y en raras ocasiones cuando se pasa de 1 / 3 a 2 / 3. Independiente del nivel de PEG, DIVMS fue mayor (P <0.05) en L. leucocephala (685 mg / g). No cambi (p> 0.05) debido a la PEG en C. calothyrsus P y L. leucocephala ( Fig. 2.). Incubationswith C.calothyrsus Sshowedanon-linearresponse (quadraticcontrast, P <0.05) con el aumento de los niveles de PEG. En todas las especies, adems de PEG disminuy la proporcin de la dieta N restantes no degradadas (UDN), que ocurri sobre todo de forma lineal (a excepcin de calothyr C.- SUS S, cuadrtica contraste P <0,001). Pero incluso los ms altos, respectivamente dosis de PEG continu para disminuir la UDN ms (P <0,05 en ambos casos). Los efectos de la adicin de PEG en la con concentracin de AGV totales e individuales fueron muy variables. Mientras que los efectos de PEG fueron ausente (P> 0.05) en ambas procedencias de C. calothyrsus y L. leucocephala, en F. macroPhylla total e individual AGV respondi positivamente (P <0,05) al PEG (datos no presentados en tabla). En la tabla 4, los cambios causados por la adicin de PEG de 80 mg / g de MS (gravimetra equi- lenttotheCTcontentofthemixturecontaining C.calothyrsus P) infermentationparameters que se encuentran tras la incubacin de las siete especies de leguminosas individuales se presentan. Hubo grandes diferencias (P <0.05) en la respuesta de las especies de leguminosas experimentales de la adicin de PEG. En consecuencia, el PEG no tuvo ningn efecto en los tres taninferos prueba de las plantas-no (Cratylia argentea, velutinum D. y V. unguiculata), a excepcin de una ligera reduccin de DIVMS y resid mayor nitrgeno individuales en V. unguiculata. En comparacin con las plantas no-CT, los cambios relacionados con el PEG- fueron en general ms grandes (sobre todo P <0.05) en todos los parmetros de fermentacin en el taninferos leguminosas. 4. Discusin

Dos aspectos se consideraron diversas para mejorar la comprensin de los efectos ruminal de la especfica de CT especies frecuentes en leguminosas arbustivas tropicales: (a) la determinacin de la

A pesar de la adecuada el contenido de nutrientes, el valor nutritivo de todas las leguminosas taninferos parece haber sido inferior a la de las leguminosas no taninferos. Esto tambin es cierto si se excluye el efecto de la tomografa por otra parte muy alta de PEG (Experimento 2). Entre las leguminosas taninferos prueba, la clasificacin en la disminucin de la degradabilidad ruminal de los nutrientes se L. leucocephala> F. macrophylla> C. calothyrsus Patulul y C. calothyrsus Ram'on San. Esto significa que incluso con una metodologa altamente eficaz para neutralizar los taninos en la prctica, el valor alimenticio de C. calothyrsus difcilmente podra llegar a la de L. leucocephala o de nontanniniferous leguminosas. Estas diferencias entre las especies de leguminosas fueron ms pronunciados con la tomografa computarizada que se activa (es decir, sin adicin de PEG). Las diferencias entre las especies bsicas en la degradabilidad de nutrientes eran similares a los reportados anteriormente por San MUR et al. (2007), que tambin discuti razones para el valor de la alimentacin contrastantes de L. leucocephala y F. macrophylla, a pesar de su contenido de TC similares. Estas diferencias entre las especies parecen estar relacionados a la lignina (sa) de contenido y al contenido y la composicin de los polisacridos no amilceos como se describe por Barahona et al. (2003). Una variable biolgicamente relevantes para interpretar la dinmica de la fermentacin ruminal medidos en este estudio es el punto de inflexin de la curva de produccin de gas. En el modelo elegido este es establece en el 36,8% de la production.With mxima asinttica de gas alrededor de 20 h de media hasta el punto de inflexin, las leguminosas no taninferos no fue diferente entre las especies y requiere menos tiempo que las leguminosas taninferos. Esto est en buen acuerdo con los resultados de Longland et al. (1995) y Barahona et al. (2003), quien describi que al menos el 50% del gas mxima volumen que se produce a menos de 25 h de incubacin, cuando las leguminosas con y sin taninos, con excepcin de C. calothyrsus que llev ms tiempo. Sin embargo, Barahona et al.(2003) report una degradacin ms rpida inicial de F. macrophylla que hemos encontrado en el Experimento 2. Desde Barahona et al. (2003) utiliz las procedencias igual que en los experimentos actuales con la excepcin de L. leucocephala (Barahona, comunicacin oral), las diferencias podran estar relacionadas con el cultivo

sitio y el tratamiento post-cosecha, factores que se sabe que afectan el contenido de TC y de la actividad (Giner-Chvez et al., 1997). 4.2. Efectos de los taninos condensados de leguminosas arbustivas tropicales sobre la fermentacin ruminal Cuando se trabaja con plantas taninferos, una dificultad importante es la falta de precisin tcnicas de laboratorio para el anlisis de CT (Palmer y McSweeney, 2000). Las cuantificaciones TC en nuestras plantas experimentales vari hasta en un 25% entre las repeticiones que Es por eso que utiliza una media de seis valores obtenidos a partir de tres determinado independientemente duplicado repeticiones. Otra limitacin est dada por el procedimiento utilizado para la purificacin el TC, ya que el TC no se extrae completamente podra reflejar las proporciones originales de polmeros diferentes CT presentes en el material vegetal (Schofield et al., 2001). Sin embargo, diferencias entre las especies de leguminosas en el Experimento 1, donde haba sido TC purificada que se usa, fueron similares a los observados en el experimento 2, que haba llevado a cabo con intacta materiales vegetales. Esto sugiere que las propiedades especficas de la planta CT-donde conserva durante purificacin. En ambos experimentos reportados en este trabajo una relacin entre el contenido de la dieta y CT la disminucin o desaceleracin de la fermentacin del forraje se seal. Esto fue ms pronunciada para la degradabilidad de la protena que se redujo con la adicin de TC 100 mg purificada / g MS. Todos los tipos de TC reduce la concentracin de AGV, lo cual es consistente con la reduccin de nutrientes la degradacin y la formacin de gas observadas. La adicin de la TC tambin dio lugar a ms acetato y butirato y propionato de menos. Una respuesta muy diferentes en la produccin de AGV slo se encontr con la TC de L. leucocephala, que aument la proporcin de propionato de costo de butirato. Parece que el acetato de productores (fibrolticas) microbios fueron menos negativamente afectados por el TC de C. calothyrsus y F. macrophylla de propionato y butirato productores. Sin embargo, hay que sealar que tambin las concentraciones de acetato de absoluta y las cantidades producidas totalmente estaban disminuyendo con el aumento adems de TC. Estas especies diferencias indican que la TC de cada especie podra afectar a la poblacin microbiana del rumen de otra manera. Los resultados encontrados con la TC purificada tambin revel que, aunque la relacin dosis-respuesta a menudo era lineal, haba especies y las variables de fermentacin en el que estos relaciones se cuadrtica. Esto fue particularmente el caso de C. calothyrsus, especialmente con la procedencia de San Ram'on. Hubo grandes diferencias entre los cuatro extractos de la TC en su efecto sobre cada uno solo variables investigadas. Las altas concentraciones de CT de ambas procedencias de C. calothyrsus reduccin de la produccin de gas asinttica y DIVMS en mayor medida que las mismas dosis de la TC de L. leucocephala o F. macrophylla. Junto con la UDN y el tiempo de inflexin estos datos sugieren que los taninos de C. calothyrsus son ms eficaces en la inhibicin de ruminal fermentacin de arbusto forma CT otras leguminosas probado.Estos resultados sugieren que los taninos propiedades pueden ser ms importantes que las variaciones en el contenido de TC en la determinacin de los cambios en parmetros de fermentacin. Los datos de produccin de gas asinttica con y sin adicin de PEG hasta un PEG: CT proporcin de 3:3, segn lo medido en el experimento 2, indican que la TC de L. leucocephala impedido degradacin de la MS slo en una medida insignificante. Su actividad principal, por lo tanto, parece ser relacionados con la proteccin de la protena de la degradacin microbiana, que no es el caso de la TC de otras especies tales como C.

calothyrsus Patulul. Esta procedencia contena mucho moreCT de L. leucocephala, y menor de FDN (~ -100 mg / g), por lo que es posible que despus de presentar TC en la planta se une a las protenas, molculas lo suficientemente TC qued para proteger eficazmente fibra de la degradacin microbiana. Aunque esto podra explicar nuestros resultados, su relevancia en condiciones in vivo tiene que demostrar que todava hay dudas sobre la naturaleza de los derechos consolidados y CT libre en follajes. Por ejemplo, Getachew et al. (1998) y Makkar (2003) argumentan que CT libres y ligados son un artefacto que ocurren despus de la cosecha. 4.3. Uso ptimo de glicol de polietileno en los estudios con arbustos tropicales taninferos leguminosas En experimentos con adicin de PEG, la formacin de artefactos puede ocurrir con la fibra (Makkar et al, 1995a;. Makkar, 2000). Adems, la neutralizacin de taninos incompleta con PEG puede ocurrir (Muetzel y Becker, 2004) debido a la variacin de la TC afinidad con el PEG en funcin de la propiedades estructurales de los taninos y la TC son conocidos por sus interacciones con las protenas (Mole y Waterman, 1987). La observacin de que en el Experimento 2 DIVMS de leguminosas CT-ricos fue slo ligeramente afectada por la adicin de PEG a pesar de la presencia de una mayor claridad la produccin de gas asinttica puede ser visto como una confirmacin de la formacin de artefactos entre ingredientes PEG y forraje, lo que podra resultar en una subestimacin de los efectos de PEG DIVMS. Los resultados del Experimento 2, comparando cero y adiciones muy alta de PEG en nontanniniferous mezclas de gramneas con leguminosas, descartar cualquier efecto importante PEG-obligatorio en mezclas libre de taninos. Las dos nicas variables ligeramente afectado por la adicin de PEG fueron los relacionados a la degradacin aparente de nutrientes (DIVMS, UDN) en el caso de V. unguiculata que se Tambin seal por San MUR et al. (2007). La pregunta abierta es el relacionado con la cantidad de PEG necesario para neutralizar por completo cualquier tipo de TC. Nuestros resultados muestran que una proporcin de 1:1 de PEG: TC no se requiere para eliminar los efectos de la TC en la mayora de los parmetros ruminales de la evaluated.With especies algunas especies de un cociente de 1:3 fue suficiente para neutralizar los efectos de la TC. Sin embargo, hubo una excepcin y que fue la degradabilidad de protena en la dieta.N diettico Aparentemente no degradadas disminuy en todos los TC-las plantas hasta el nivel ms alto de la adicin de PEG. Por lo tanto, la determinacin la cantidad de PEG necesarios para la neutralizacin TC completa o casi completa es difcil. Un tratamiento adicional, no se presenta aqu, demostr que la UDN en C. calothyrsus Patulul incluso disminuy an ms cuando el PEG: relacin de TC se increment de 1:1 a 1.5:1. Este hallazgo es coherente con Muetzel y Becker (2004) quienes encontraron efectos negativos de los taninos en la degradacin de protenas, incluso con niveles muy altos de PEG en el lquido de la fermentacin (10 mg / ml). Estas observaciones sugieren que el PEG puede no prevenir la formacin de taninoprotena complejos in vitro. En general, nuestros datos sugieren que en la mayora de especies de una PEG: relacin del TC de 1:1 debera ser suficiente para disminuir los efectos de TC en todos los rasgos medidos aqu a una medida no residual pertinentes en condiciones in vitro. Sin embargo, las excepciones como C. calothyrsus P parecen hacer necesario para identificar la proporcin requerida siempre antes del juicio cuando se acerque a nuevos especie.

Incluso con dosis muy alta de PEG, algunas diferencias en las propiedades de la fermentacin an persisten entre las diferentes legumbres, lo que indica la presencia de effects.With mediada no-CT la mezcla que contiene L. leucocephala el punto de inflexin de la curva de produccin de gas Se lleg ms rpido (despus de 20,3 h) que con las leguminosas taniniferous otros (22,3 h de media) cuando la TC fueron neutralizados por PEG. Con L. leucocephala el punto de inflexin fue lleg tan rpido como con la V. unguiculata no taninferos. Este comportamiento es la degradacin que pueda tener el resultado de la fibra contenida en las leguminosas de prueba y podra estar relacionado con el hecho de que proporcional a su contenido de FDN, L. leucocephala y V. unguiculata contenidos menos lignina (sa) de C. calothyrsus y F. macrophylla. Esto sugiere que los vnculos entre lignina y los carbohidratos fibrosos (Jung, 1989;. Iiyama et al, 1994) fueron menos pronunciados en L. leucocephala que en las leguminosas taninferos otros. 5. Conclusin Se desprende de este estudio que, adems del contenido de TC en s mismo, el speciesspecific propiedades CT juegan un papel importante en los parmetros que afectan a la fermentacin ruminal. A pesar de las concentraciones de CT similares en F. macrophylla y L. leucocephala, estas dos legumbres diferan considerablemente en las propiedades de su fermentacin. Por otro lado, las dos procedencias de C. calothyrsus variado sustancialmente en su concentracin de TC, pero mostr la fermentacin similares propiedades. El hecho de que los efectos adversos de la actual TC en C. calothyrsus son relativamente pequea cuando se usa en niveles bajos en la mezcla de forraje podra ser til para la utilizacin de esta leguminosa en los sistemas de alimentacin en los trpicos, porque indica que una proporcin pequea de esta especie utiliza para sustituir en parte a fuentes costosas de protenas como de alta calidad anuales leguminosas pueden tener consecuencias negativas. En nuestro estudio, el PEG no tuvo efectos importantes sobre la degradacin ruminal de los nutrientes, adems de vinculante de la TC, y para la mayora de las variables de fermentacin en la mayora de las especies, la suplementacin de PEG equivalentes para el contenido TC parece suficiente para neutralizar el TC.