Manual Completo Bioquimica Clinica

LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA INTRODUCCION
'Laboratorio clnico' es el lugar donde los alumnos aprendern a realizar anlisis clnicos que contribuyen al estudio, prevencin, diagnstico y tratamiento de los problemas de salud de los pacientes. Tambin se le conoce como Laboratorio de Patologa clnica. Los laboratorios de anlisis clnicos, de acuerdo con sus funciones, se pueden dividir en: 1. Laboratorios de Rutina o de seguimiento. Los laboratorios de rutina tienen cuatro departamento bsicos: Hematologa, Inmunologa, Microbiologa y Qumica Clnica (o Bioqumica). Los laboratorios de rutina pueden encontrarse dentro de un hospital o ser externos a ste. Los laboratorios hospitalarios, con frecuencia tiene secciones consideradas de urgencia, donde se realizan estudios que servirn para tomar decisiones crticas en la atencin de los pacientes graves. Estudios tales como citometra hemtica, gases sanguneos. 2. Laboratorios de Especialidad. En los laboratorios de pruebas especiales se realizan estudios ms sofisticados, utilizando metodologas como amplificacin de cidos nuclicos, estudios cromosmicos, citometra de flujo y cromatografa de alta resolucin, entre otros. Estas pruebas requieren instalaciones y adiestramiento especial del personal que las realiza. Con frecuencia, estos laboratorios forman parte de programas de investigacin. Es importante tambin considerar, dentro del proceso de anlisis, la obtencin de las muestras biolgicas. Este proceso conocido como toma de muestras, abarca la flebotoma, proceso por el cual se extre una muestra de sangre; la obtencin de otro tipo de muestras, como orina y heces; y la extraccin de otros lquidos corporales, como lquido cefalorraqudeo o lquido articular. tiempos de coagulacin, glucemia, urea, creatinina y
Ubicacin y Relacin con otros servicios clnicos A los laboratorios acuden pacientes externos, puesto que los exmenes que se requieren de los enfermos hospitalizados se hacen mediante muestras que se toman en las unidades de hospitalizacin. En consecuencia su ubicacin ser preferentemente en la FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA planta baja, con fcil acceso a la seccin de recepcin del Archivo Clnico y en menor grado con el departamento de Consulta Externa. Este servicio deber ubicarse en relacin cercana a los servicios de consulta externa, urgencias, terapia intensiva, quirfano y con fcil acceso hacia las reas de hospitalizacin . reas de Servicio Sala de Espera y Recepcin. Donde los pacientes esperarn cmodamente a ser atendidos. Cubculos de Toma de Muestras. En este punto se obtienen las muestras para luego ser distribuidas a las diversas secciones del laboratorio. Secciones de Laboratorio: Hematologa:En este se efectan diversas pruebas que se resumen para el objeto que persigue este estudio en tres: pruebas de coagulacin, pruebas de contabilidad sangunea y morfologa. Qumica Clnica: Aqu se realizan anlisis que se clasifican de la siguiente forma: Qumica sangunea de rutina Exmenes generales de orina Determinacin de reserva electroltica y bixido de carbono en la sangre
Microbiologa: Las diversas labores que se realizan aqu pueden clasificarse en la siguiente forma:
Coproparasitologa:Tiene por objeto investigar la presencia de parsitos en materias fecales.
Bacteriologa: Consiste en examinar directa o indirectamente la presencia o actividad de organismos microscpicos en sangre,orina, materia fecal, jugo gstrico y exudados orgnicos.
Inmunologa: Realiza pruebas sobre los anticuerpos que revelan la presencia y actividad de microorganismos en el cuerpo humano
Se tendr el rea de Preparacin de medios de cultivo, que por s sola se define, adems, la zona de lavado y esterilizacin de material.
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA En este manual se hallan reunidas las tcnicas de los estudios ms frecuentes en el rea de bioqumica clnica de acuerdo al plan de estudios de los estudiantes
Practica 1 Conocimiento del laboratorio y medidas de seguridad
Introduccin FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
El trabajo en el laboratorio implica un riesgo latente desde el momento en que se pone un pie al interior del mismo .Es una zona donde se rene el mayor numero de reactivos qumicos ,tipos de energa y utensilios especializados ,de todo de estudio , llmese universidad ,centro e investigacin , hospital ,industria o centro de servicios .Es por todo esto que impera la necesidad de abordar este tema al iniciar un periodo de prcticas de laboratorio ,y al mismo tiempo ,iniciar una cultura de la prevencin de accidentes ,de atencin al entorno de trabajo ,y de seguridad como modo de trabajar en cualquier mbito profesional. Pongamos pues las siguientes premisas para plantear un esquema de trabajo hacia la prevencin y la seguridad en el laboratorio o en cualquier rea de trabajo. La seguridad es responsabilidad en lnea jerrquica Todos los accidentes pueden ser evitados Las personas son la base fundamental en la gestin de la prevencin de riesgos Una gestin eficaz de la prevencin de riesgos produce una mejora en el sistema de calidad , as como el aumento de produccin ( das / clase ) La prevencin efectiva de riesgos evita das perdidos debido a las bajas causadas por accidente o por enfermedades derivadas del trabajo
Riesgos especficos A continuacin se enumeran los diferentes riesgos a que se pueden exponer las personas que trabajan en un laboratorio clnico. Exposicin y semen). Exposicin a tuberculosis al trabajar con especmenes que puedan contener tuberculosis y sida. Otros fluidos que pueden ser fuentes potenciales de tuberculosis son esputo, lquido cerebrorraqudeo en la orina, y lquidos recolectados de lavado gstrico o branquial. Exposicin a formaldehdo que es utilizado como fijador y que se encuentra comnmente en la mayora de laboratorios y morgue. Riesgos qumicos. Exposicin a solventes utilizados para fijar tejidos de especmenes y quitar manchas. Se encuentran principalmente en las reas de histologa, hematologa, microbiologa y citologa. Exposicin a PPS debido a heridas con agujas o cortaduras por objetos afilados al trabajar con especmenes, tubos de centrfugas. Exposicin a materiales / organismos infecciosos. Exposicin al ltex y alergia al ltex debido al uso de guantes de ltex. FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS a patgenos presentes en sangre mientras manipulan muestras
contaminadas como sangre o fluidos corporales (ejemplo: lquido cerebroespinal,
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA Riesgo de deslizarse o caerse si lquido o muestras caen al suelo. Dolor muscular en diferentes partes del cuerpo por permanecer tiempos prolongados en una misma posicin, ya sea sentado o de pie, o por realizar movimientos repetitivos al manipular muestras. Riesgo de quemaduras
. Seguridad en el laboratorio En los laboratorios de anlisis clnicos los riesgos que existen pueden evitarse con el uso de una buena tcnica, precauciones sencillas y conocimiento de las medidas a tomar en casos de accidentes leves. Los accidentes sencillos que no se manejen correctamente pueden resultar de consecuencias graves. Los accidentes pueden ser: 1. Incendio y explosin por el uso de solventes, inflamables, etc. Los solventes deben guardarse en lugares frescos, bien ventilados y a prueba de fuego. No deben manejarse cerca de flamas, ni en lugares cerrados donde los vapores pueden acumularse y formar con el aire mezclas explosivas. 2. Reactivos venenosos, corrosivos y custicos. Algunos compuestos no tienen efecto importante sobre la piel; pero su ingestin es peligrosa, por ejemplo: cianuros , alcohol metlico, compuestos de arsnico, mercurio, bario , etc. Debe insistirse en la importancia de rotular correctamente todos los frascos de laboratorio y evitar contaminaciones de pipetas, cigarrillos, etc .dejados sobre la mesa. Por su constante uso estas sustancias se manejas sin la debida precaucin; las quemaduras con cidos y bases fuertes, en manos, ojos y cara son las ms frecuentes. En caso de quemaduras leves deben seguirse las instrucciones de cada reactivo y en casos extremos, atencin medica. 3. Quemaduras y escaldaduras, incluyendo choques elctricos. Generalmente son causadas por objetos calientes y secos, por exposicin prolongada a los rayos ultravioleta o infrarojo. Los choques elctricos en el laboratorio son de pocas importancia; pero si el contacto accidental es intenso, el choque produce perdida de la conciencia y se debe solicitar atencin medica de inmediato. 4. Heridas causadas por manipulacin de vidriera, cuchillas de micrtomo, etc. Son las mas frecuentes en el laboratorio. Los fragmentos de vidrio, especialmente el grueso, presentan un borde irregular que produce heridas graves. Estos accidentes pueden evitarse con la manipulacin cyuidadosa. Medidas de control. Las medidas de control en los laboratorios de anlisis clnicos son de gran importancia, ya que estas determinan la calidad del trabajo. 1. Buen estado de limpieza del material de vidrio:la limpieza se efectuara segn los requerimientos de cada practica. 2. Menejo y comprobacin del buen funcionamiento de los aparatos: antes de usarlos deben leerse cuidadosamente los instructivos. Colocar los aparatos
en lugares adecuados y darles el mantenimiento y limpieza debidos. Verificar su exactitud y buen funcionamiento. 3. Revisin de tcnicas y curvas de calibracin: los pasos en las tcnicas deben seguirse estrictamente, las temperaturas t tiempos de incubacin ,deben usarse controles y curvas de calibracin con soluciones estndar. 4. Conservacin y uso correcto de los reactivos: de acuerdo con las instrucciones de cada reactivo, se tomara en cuenta refrigeracin , descomposicin con la luz, contaminacin , etc.
Limpieza del material de vidrio Los resultados de los experimentos, dependen en gran parte, de la limpieza del equipo: 1) muchos reactivos se usan en miligramos o microgramos, por lo tanto cualquier contaminacin,podra contribur a un porcentaje significativo de la muestra experimental total del experimento. 2) Muchas sustancias son sensible a uno o ms contaminantes, como iones metlicos, detergentes o residuos organicos.
Objetivos: Los alumnos conocern el laboratorio , los materiales , los reactivos, las instalaciones elctricas , de gas ,de agua y el funcionamiento de cada uno de ellos , sus interacciones ,utilidades ,modos de desecharlos ,etc. Con la finalidad de aprender el manejo de los mismos en las practicas a realizar ,en casos extremos de riesgos y contingencias. De igual manera aprendern a usar los utensilios de primeros auxilios y contra incendios ,as como las rutas de evacuacin ,elaborando un plan estratgico de emergencia para cada caso. Rombo de seguridad para sustancias qumicas.
Material Mesas de laboratorio Tomas de gas Agua Electricidad Material de vidrio De metal Aparatos
Instrumental
Reactivos Solidos Acidos Soluciones Alcoholes ,etc.
Procedimiento experimental: A travs de la observacin y conocimiento del equipo de laboratorio, los reactivos y materiales, se plantearan formas de trabajar( vestimenta , organizacin , lentes , guantes) ,de prever posibles accidentes (distribucin de espacio , rutas de evacuacin , anaqueles ), zonas de riesgo , puntos crticos , y todos los casos que requieran revisin y modificacin para mejorar la seguridad al interior del lugar de trabajo
Cuestionario 1. Elabora un proyecto que implique un plan de seguridad para casos de contingencia en el laboratorio, detectando puntos crticos , manejo de reactivos ,posibles soluciones y estrategias para asegurar la estancia y evacuacin de las personas presentes durante el fenmeno correspondiente ( sismo , incendio , accidente ,etc.) 2. Cmo se clasifican los reactivos de laboratorio? 3. Cules son los colores utilizados para diferenciar la reactividad de las sustancias, y que significa cada uno de ellos? 4. Cul es el procedimiento adecuado para tratar un accidente donde hubo contacto con un acido, con una base , con fuego , con electricidad y con agua hirviendo? 5. porque es tan importante el mantenimiento de equipos y reactivos en las tcnicas de anlisis clnicos?
Practica 2
Toma de muestra
OBJETIVOS: 1. Que el alumno aplique las tcnicas estandarizadas ms comunes de obtencin de muestras de sangre perifrica con calidad analtica. INTRODUCCIN: La sangre es una suspensin, en la que aproximadamente el 50% del volumen total de esta corresponde al plasma y el otro 50% de este volumen corresponde a clulas que se encuentran suspendidas en el plasma. La obtencin de muestras de sangre para los estudios hematolgicos requiere de la aplicacin de las recomendaciones internacionales de control de calidad, que garanticen la integridad de la muestra. La puncin venosa es uno de los procedimientos ms comunes para extraer sangre, ya que posibilita la recoleccin de sangre venosa para posteriores anlisis de laboratorio, se requiere que el paciente est en condiciones basales (ayuno de 8 horas). Los sitos para puncin venosa son las venas del antebrazo y fosa antecubital; la vena baslica, ceflica y mediana del antebrazo y radial superficial, cubital superficial y mediana de la fosa antecubital. La obtencin de sangre capilar actualmente est limitada a estudios peditricos, sin embargo anteriormente era el mtodo ideal de extraccin de sangre para realizar frotes sanguneos, ya que inmediatamente despus de la puncin se recoge en las laminillas para realizar los extendidos, sin que haya necesidad del uso de anticoagulantes que puedan alterar la el volumen de la sangre y morfologa celular. Para realizar los extendidos de sangre perifrica, se utiliza sangre venosa anticoagulada generalmente con EDTA (cido etilendiaminotetraactico) FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA preferentemente en su forma seca analizados los extendidos antes de que transcurran 2 horas desde la extraccin de sangre, o bien sangre capilar directamente de la puncin al portaobjetos( es lo ideal). Es recomendable que la sangre anticoagulada sea utilizada inmediatamente para impedir alteraciones morfolgicas. El control de calidad en todas las fases del anlisis hematolgico es indispensable para lograr confiabilidad de los resultados, por lo que se recomienda obtener muestras de sangre con calidad analtica, siguiendo el protocolo para la toma de muestra que sea apropiada al estudio. La calidad de las extensiones de sangre es indispensable y esto depende del anticoagulante usado, el tipo de sangre (venosa o capilar) con o sin anticoagulante.
MATERIAL: 1 gradilla Tubos de ensaye DE 13 X 100 mm con anticoagulante EDTA ( 3 por equipo) 1Pipeta automtica de 10L 5 puntas amarillas Jeringas o dispositivos para extraccin de sangre con tubos al vaco Torundas Torniquete o ligadura de 25 a 30 cm de largo Alcohol al 70% Lancetas estriles Papel absorbente suave Etiquetas para identificar al paciente Contenedor de objetos punzo cortantes Jabn de tocador para lavarse las manos Toallas de papel Franela o esponja Lpiz graso o crayola Reactivos: EDTA (cido etilendiaminotetraactico) Metanol absoluto 100 mL Agua destilada pH 7 Amortiguador de fosfatos pH 6.4 100 mL (1 gotero) Solucin de hipoclorito al 5% para desinfeccin de mesas de trabajo.
Material biolgico: Muestras de sangre total FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
RECOMENDACIONES DE SEGURIDAD: 1.- ponerse la bata y despejar el rea de trabajo dejando sobre la mesa solo el material que va a utilizar en la prctica. 2.- desinfectar la mesa de trabajo con hipoclorito de sodio al 5% (cloro de uso domstico). 3.-seguir las recomendaciones universales para disminuir los riesgos al exponerse a productos biolgicos potencialmente contaminados, en la prctica clnica. Debido a que todos los pacientes pueden ser potenciales portadores de patologas que se transmiten por la va parenteral, sin tener un diagnstico objetivable, LAS PRECAUCIONES UNIVERSALES deben aplicarse en la prctica de la atencin de cualquier paciente en todo momento y en cualquier mbito de la atencin de salud, siendo esto lo que les confiere el carcter de Universales. a) Uso de gafas o tapabocas con visera durante la recoleccin de muestras con riesgo de salpicaduras procedentes de pacientes de con enfermedades infectocontagiosas. b) No re-enfundar agujas y desecharlas en el recipiente adecuado (o desechar la aguja y la jeringa en un galn destinado para tal fin, evitando la manipulacin. c) Preservar la tcnica asptica en la obtencin de muestras mediante procedimientos invasivos (venopuncin perifrica, catter central etc.) PROCEDIMIENTO PARA PUNCIN VENOSA 1.- Lavarse las manos perfectamente con agua y jabn. 2- Verificar que cada muestra est acompaada de informacin que incluya; nombre y apellidos del paciente, edad, sexo, procedencia cuando proviene de otra institucin, tipo de muestra, diagnstico presuntivo, fecha y hora de toma de la muestra, medicacin (si el paciente est recibiendo tratamiento), tipo de estudio a realizar. Por lo que las muestras de los alumnos deben estar acompaadas de esta informacin. 3.- Preguntar al paciente si guard el ayuno adecuado (en caso necesario), preguntar la hora de la ltima ingesta. 4- Tranquilizar al paciente e informarle del procedimiento al que ser sometido. 5.-Colocar adecuadamente al paciente; sentado paralelamente a la mesa de trabajo, apoyar el brazo sobre la mesa colocando una almohadilla bajo el codo y la palma de la mano hacia .arriba. 6.-Verificar el material a utilizar; tubos, jeringas torniquete, torundas etc. 7.-Pedir al paciente que abra y cierre el puo para palpar mejor las venas. 8.-Seleccionar una avena adecuada para la puncin. Evitar tomar la muestra en el brazo donde hay catter. No extraer sangre de la misma extremidad utilizada para la administracin intravenosa de medicamentos, lquidos o transfusiones. Si no existe otro sitio disponible, asegurarse que la puncin venosa se localiza por debajo del catter IV. Evitar las reas edematosas, FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA paralizadas o el mismo lado de una masectoma, al igual que las infecciones y problemas cutneos. La puncin venosa causa infeccin, alteraciones circulatorias o retraso en la cicatrizacin. 9.- Desinfectar el sitio de puncin con una torunda con alcohol al 70%, con movimientos en espiral comenzando por el sitio que se puncionar y prosiguiendo hacia fuera, dejar que la zona se seque y no tocar con ningn objeto que no haya sido esterilizado previamente. 10.- Aplicar el torniquete varios centmetros arriba de la zona de puncin, este no se dejar ms de un minuto. 11.- Fijar firmemente la vena por encima y por debajo del sitio de puncin con ayuda de los dedos pulgar y medio o ndice y pulgar de la mano izquierda. 12.- Realizar la venopuncin; a) Penetrar a travs de la piel con la aguja formando un ngulo de 15 entre el brazo y la aguja con el bisel hacia arriba, seguir la direccin de la vena con la aguja. b) Introducir la guja con suavidad pero con rapidez para reducir las molestias al paciente. c) Si se usa jeringa, tirar del mbolo hacia atrs con tensin lenta y uniforme, a medida que la sangre fluye en su interior, este movimiento no debe ser muy rpido ya que se puede bemolizar la sangre o colapsar la vena. d) Si se utilizan tubos al vaco, en cuanto la aguja haya penetrado la vena, se dirigir el tubo todo lo posible hacia delante en el dispositivo de sujecin, al mismo tiempo sujetar tenuemente la aguja en su lugar. Se debe permitir que el tubo al vaci se llene hasta la marca indicada. 13.-Retirar la ligadura tirando del extremo doblado despus de obtener el volumen de sangre deseado. 14.-Colocar un pedazo de algodn seco sobre la parte donde se encuentra oculta la aguja. Sacar la aguja con un movimiento rpido y depositarla en el recipiente de metal con desinfectante. 15.-Pedir al paciente que presione firmemente el algodn durante 3 minutos, con el brazo extendido. No se recomienda que se flexione el brazo a causa del riesgo que se forme un hematoma. 16.-Mezclar por inversin suave la sangre 15 veces (cuando el tubo colector tiene anticoagulante). 17.-Si la hemorragia de la puncin contina durante un tiempo prolongado, eleve el rea y aplique una curacin con presin. Observe al paciente y verifique si no ha ingerido anticoagulante o cido acetilsaliclico. Si el paciente se marea o tiende al desmayo, haga que coloque la cabeza entre las rodillas o se acueste y pdale respirar profundamente. Aplique una toalla fra en al cabeza o parte posterior del cuello. En caso que permanezca inconsciente, notifique de inmediato al mdico tratante. FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA 18.-Los hematomas se previenen con una tcnica adecuada que consiste en evitar que la aguja atraviese la vena, liberar el torniquete antes de extraer la aguja, aplicacin de suficiente presin sobre el sitio de la puncin y al mantener la extremidad extendida hasta que se detenga la hemorragia.
PROCEDIMIENTO PARA PUNCION CAPILAR: 1.-Si la puncin se realizar a un RN ste debe ser inmovilizado 2.-seleccionar el sitio de puncin 3.- en adultos el sitio adecuado para la puncin capilar es el pulpejo del dedo mediano o anular, cerca del borde, en nios el lbulo de la oreja, y en RN el taln del pie 4.-Se recomienda el lavado clnico de manos y uso de guantes si es necesario 5.-realizar la asepsia de la zona 6.-introducir la lanceta de 2 a 2.5 mm con un movimiento rpido 7.-presionar para extraer la cantidad necesaria de sangre desechando la primera gota 8.-depositar la muestra en capilar o laminilla. 9.-realizar hemostasis en el sitio de puncin y proteger con gasa estril 10.- verificar confort del RN 11.- si se presenta dificultades durante la puncin se recomienda repetirla, sobre todo cuando la muestra es insuficiente y se ha exprimido excesivamente la zona de puncin, ya que puede sufrir una hemodilucin por el lquido hstico.
CUESTIONARIO 1. Cul es el objeto de usar sangre total en los estudios de bioqumica clinica? 2. Explica porque es importante el ayuno de determinadas horas para las diferentes pruebas clnicas. 3. Qu entiende por hemostasis? 4.Una muestra de sangre capilar obtenida del talon de un bebe,Para que estudio se emplea generalmente? 5.Mencione algunas de las precauciones que se deben tomar al trabajar con muestras sanguneas y Por qu? FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
Practica 3 Cuantificacin de glucosa

INTRODUCCIN
El estudio del metabolismo de la glucosa es esencial para poder apreciar las variaciones en la concentracin sangunea de la glucosa que pueden reflejar alteraciones primarias del metabolismo de los carbohidratos al igual que ser manifestaciones secundarias que acompaan otras enfermedades. Absorcin y digestin. Las enzimas (amilasas disacridos) liberadas por las glndulas salivales, el intestino delgado y el pncreas escinden el almidn, que es el polisacrido ms importante de los hidratos de carbono que se ingieren, y los disacridos (maltosa, lactosa y sacarosa), a hexosas (glucosa, fructuosa y galactosa) o pentosas. Los FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA monosacridos son absorbidos por el intestino delgado por difusin (gradiente de concentracin) y por transporte activo (sodio dependiente), pasando la mayor cantidad a la sangre portal para su transporte al hgado. Las enfermedades gastrointestinales que reducen la superficie de absorcin o las enzimas descritas, disminuyen la absorcin de las hexosas. La tiroxina acelera la absorcin de las hexosas de tal manera que las alteraciones y enfermedades de la funcin tiroidea, al igual que la funcin adrenocortical, pueden afectar la velocidad y cantidad de hexosas absorbidas. El metabolismo perifrico de los carbohidratos puede considerarse casi por completo en trminos de glucosa, ya que la utilizacin de fructuosa y galactosa por los tejidos extra hepticos es mnima. Tras la absorcin de la glucosa a la sangre, los niveles normales de ayunas, que oscilan entre 60 y 90 mg/100 ml de sangre, se elevan a 120-150 mg/100 ml o incluso ms. En los sujetos normales, estos niveles de glucosa bajan en seguida de sus valores mximos, de manera que tras 1 hora y 30 min a 2 horas, se vuelvan a alcanzar los niveles que en ayunas. Sin embargo el diabtico es incapaz de utilizar de manera eficiente la glucosa administrada y los niveles hematicos despus de la ingestin de glucosa retornan al nivel basal solo despus de un periodo prolongado de tiempo. La constancia de la concentracin de glucosa entre las comidas, se obtiene a travs de de un equilibrio entre la utilizacin hstica de la glucosa y la glucogenlisis. Una parte de la glucosa sangunea la convierte el hgado en glucgeno (glucognesis). Otra parte se utiliza directamente para obtener energa, pero la mayor parte de la glucosa derivada de la digestin de los carbohidratos de la ingesta es convertida en grasa. El azcar de la sangre es la glucosa, que proviene de tres fuentes: 1) De la digestin de los almidones y azucares que produce azcar que es absorbido en el intestino; 2)De la conversin de precursores no carbohidraticos en la glucosa, por ejemplo, aminocidos, produce intermediarios de la escisin de la glucosa (cidos lctico, piruvico y succnico), y glicerol derivado de la hidrlisis de la grasa neutra; y 3) De la glucogenolisis (hidrlisis del glucgeno depositado en el hgado). La glucosa continuamente filtrada por los glomrulos, vuelve en su totalidad a la sangre ya que es absorbida a nivel de los tbulos renales. La capacidad de los tbulos renal es para reabsorber la glucosa (fosforilizacin) est limitada por la concentracin enzimtica de las clulas tubulares y se realiza a razn de unos 250 mg/100 ml. Por tanto, la glucosuria puede aparecer con hiperglucemia. En individuos con funcin renal normal, la glucosuria ocurre cuando la concentracin de glucosa en sangre excede los 160 gr/100 ml. Esto se describe como el umbral renal de glucosa. Sin embargo, los defectos en el tbulo renal pueden causar glucosuria en presencia de normo glucemia. La glucosuria de origen renal la originan defectos congnitos o adquiridos como consecuencia de enfermedades. Los diabticos con enfermedad renal pueden tener un <<umbral elevado>>, apareciendo entonces la glucosuria solamente cuando la concentracin de la glucemia sobrepasa los 250 mg/100 ml. Una clasificacin de la diabetes se expone en la siguiente tabla:
*Primaria *De origen endocrino Hiperpituitarismo Hiperadrenalismo FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA Hipertiroidismo *Destruccin de los islotes pancreticos *Miscelnea Temperatura con clorotiacidas Stress, ciruga y embarazo Ayuno prolongado y la ingesta pobre en hidratos de carbono Pruebas de seleccin. Las pruebas para la deteccin de la diabetes mellitus en la poblacin comprenden determinaciones de la glucosa en la sangre y orina. Glucosa en la orina Glucemia en ayunas Glucemia postprandial a las 2 horas Curva de tolerancia
Determinaciones en sangre
Glucosa: (Tcnica de Hultman con ortotoluidina) 1. Fundamento La ortotodulina reacciona especficamente con las aldohexosas en solucin actica caliente, para formar una mezcla en equilibrio de glicosilamina y la correspondiente base Schiff. El color verde formado es proporcional a la cantidad de glucosa presente. 2. Material y apartados Sustancias Ortotoludina Ticurea Acido actico glacial Dextrosa Acido benzoico Reactivos Ortotoludina 100 Solucin de glucosa 10 mg en 1 ml Preparacin de reactivos FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA Reactivo 100 a: Tiourea Acido actico glacial 1.5 g 60 ml 940ml
Disolver la tiourea en acido actico glacial y agregar la ortotoludina Solucin de glucosa10 mg en 1 ml Dextrosa 10 g Acido benzoico 0.2 por ciento c.b.p. 1000 ml Disolver yaforar Mtodo Material biolgico: Suero, plasma, lquido cefalorraqudeo u orina Tecnica: a) En un tubo de ensaye de 16 por 150 mm, medio 0.1 ml de suero, plasma, liquido cefalorraqudeo u orina b) Agregar 5 ml de reactivo de ortotodulina y mezclar c) Tapar los tubos y colocarlos en bao maria durante 10 minutos d) Enfriar en bao de hielo durante 10 minutos e) Leer en longitud de onda de 630 micras contra blanco de reactivos antes de que trascurran 30 min
Calibracin De la solucin de glucosa 10 mg en 1 ml medir 5, 7.5, 10, y 20 ml en matraces volumtricos de 10 ml y aforar. Esas soluciones contienen 50, 75, 100, 150 y 200 mg de glucosa en 100 ml Matraz aforado Mililitros de Agua destilada Mililitros en 100 de 100 ml solucin de c.b.p. ml glucosa 10 mg en un ml 1 5.0 100 50 2 7.5 100 50 3 10.0 100 100 4 15.0 100 150 5 20.0 100 200 De cada una de estas diluciones tomar 0.1 ml y proseguir como se indica en la tcnica a partir del paso b) Clculos En caso de que no se disponga de curva de calibracin, se puede proceder de la manera siguiente: Trabajar, al mimso tiempo que el problema, un estanndar que contega 1 mg de glucosa en 1 ml y seguir la misma tcnica que se indico antes. FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA D.O.ProblemaD.O.Estandar x 100 = mg por ciento de glucosa D.O. = Densidad ptica Valores normales 70 100 mg / 100 ml 80 120 mg / 100 ml Es importante consultar los valores normales de acuerdo a la tcnica empleada y el laboratorio , pues estos varian de uno a otro. Cuestionario. 1. para que sirve una prueba de cuantificacin de glucosa? 2. cual es el espcimen que generalmente se emplea para esta determinacin . 3. cuantos tipos de deabetes conoce.? 4. Si un paciente no se presenta en ayunas se veria aletrado su resultado y porque? 5. Mencione las diferentes determinaciones de glucosa que nos sirven para determinar si un paciente es diabtico.
Practica 4 Examen general de Orina Introduccin:

El examen de orina con fines diagnsticos se ha practicado durante siglos y probablemente es el ms antiguo de los procedimientos de laboratorio que hoy en da se usan en medicina. Los antiguos dieron mucha importancia a las caractersticas de la orina en la enfermedad. La escuela de medicina de Hipcrates en el siglo V a.C. probablemente contaba con enseanzas anteriores. Hipcrates se dio cuenta que la cantidad de orina debe ser proporcional a la cantidad de bebidas ingeridas y algo ms densa que el liquido ingerido. Distingui entre los cambios de orina que se producen por una enfermedad generalizada, una observacin que ms tarde seria elogiada por Galeno , en la edad media tambin se realizaban estudios en orina en que se involucraban 20 colores , tres densidades y cuatro zonas para predecir el curso de una enfermedad. Entre 1210-1280 Saliceto relaciono la retraccin del rin con
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA los cambios en la orina, pero fue hasta el siglo XVIII con el desarrollo de la qumica y fisiologa en que el estudio de la orina paso de un mito a una ciencia. Durante muchos ao fue transcurriendo el empleo de la orina y sus componentes como base del diagnostico clnico, pero fue en 1863 que Neubauer y Vogel al igual que Hipcrates en el siglo V a C. exhortaron a los mdicos provistos de los mtodos ms nuevos y ms simples para el anlisis, puede descubrir la presencia de componentes anormales y darse cuenta de la presencia de una enfermedad renal o de otras enfermedades. Este principio tiene vigencia aun en nuestros das.
La orina es un lquido acuoso transparente y amarillento, de olor caracterstico (sui gneris), secretado por los riones y eliminado al exterior por el aparato urinario. En los laboratorios clnicos se abrevia u o uri (del latn urinam). Despus de la produccin de orina por los riones, esta recorre los urteres hasta la vejiga urinaria donde se almacena y despus es expulsada al exterior del cuerpo a travs de la uretra, mediante la miccin.
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Funciones de la orina
Las funciones de la orina influyen en la homeostasis como son::
1. Eliminacin de sustancias txicas producidas por el metabolismo celular como la urea. 2. Eliminacin de sustancias txicas como la ingesta de drogas.
3. El control electroltico, regulando la excrecin de sodio y potasio principalmente.
4. Regulacin hdrica o de la volemia, para el control de la tensin arterial. 5. Control del equilibrio cido-base. 6. Eliminacin de sustancias txicas como la ingesta de drogas. 7. El control Eliminacin de sustancias txicas producidas por el metabolismo celular como
la urea. 8. electroltico, regulando la excrecin de sodio y potasio principalmente.
9. Regulacin hdrica o de la volemia, para el control de la tensin arterial. 10. Control del equilibrio cido-base. FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
Composicin de la orina
En los seres humanos la orina normal suele ser un lquido transparente o amarillento. Se eliminan aproximadamente 1,4 litros de orina al da. La orina normal contiene un 96% de agua, un 4% de slidos en solucin y aproximadamente 20 g de urea por litro. Cerca de la mitad de los slidos son urea, el principal producto de degradacin del metabolismo de las protenas. El resto incluye nitrgeno,cloruros, cetosteroides, fsforo, amonio, creatinina y cido rico. Composicin de la orina en mg/100 ml de fluido - Urea: 2.0 - cido rico: 0.05 - Sales inorgnicas: 1.50 La orina puede ayudar al diagnstico de varias enfermedades mediante el anlisis de orina o el urocultivo.
Contenidos anormales de la orina
Los cristales de urato de amonio son anormales solo si se encuentran en orinas recin emitidas.
Glucosuria: Es la presencia de glucosa en la orina y aparece sobre todo en la diabetes mellitus. Hematuria: Es la presencia de sangre en la orina, debiendo descartarse: infeccin urinaria,litiasis urinaria, glomerulonefritis, neoplasia (cncer de vejiga, urter, rin, prstata, etc.)
Bacteriuria: Es la presencia de bacterias en la orina, cuando normalmente es estril. Piuria: Es la presencia de pus en la orina.

Proteinuria: Es la presencia de protenas en la orina como suele observarse en: glomerulonefritis, infeccin urinaria, intoxicaciones, diabetes, etc.
Produccin de la orina
Se divide en los siguientes pasos: 1. Filtracin: Tiene lugar en una de las mltiples nefronas que hay en los riones, concretamente en los glomrulos. La sangre, al llegar a las nefronas, es sometida a gran presin extrayendo de ella agua, glucosa, aminocidos, sodio, potasio, cloruros, urea y otras sales. Esto equivale a, aproximadamente, el 20% del volumen plasmtico que llega a esa nefrona, es aproximadamente 180 litros/da, que es 4,5 veces la cantidad total de lquidos del cuerpo, por lo que no se puede permitir la prdida de todos estos lquidos, pues en cuestin de minutos el individuo acusara una deshidratacin grave. 2. Reabsorcin: Cuando este filtrado rico en sustancias necesarias para el cuerpo pasa al tbulo contorneado proximal, es sometido a una reabsorcin de glucosa, aminocidos, sodio, cloruro, potasio y otras sustancias. Esta equivale, aproximadamente, al 65% del filtrado. Aunque la mayor parte se absorbe en el tbulo contorneado proximal, este proceso contina en el asa de Henle y en el tbulo contorneado distal para las sustancias de reabsorcin ms difcil. Los tbulos son impermeables al filtrado de la urea. 3. Secrecin: En el tbulo contorneado distal ciertas sustancias, como la penicilina, el potasio e hidrgeno, son excretadas hacia la orina en formacin. Despus el cerebro manda una seal para cuando est lista la orina.
Trminos relacionados

Anuria, falta de produccin de orina. Oliguria, disminucin del volumen de orina por debajo del normal (1,4 l/dia). Retencin urinaria, imposibilidad de eliminacin de la orina acumulada en la vejiga urinaria.
Usos
La orina como fertilizante contiene nutrientes tiles para las plantas como grandes cantidades de nitrgeno en forma de urea y una pequea cantidad en forma de cido rico. Tambin

contiene potasio adems de otros nutrientes necesarios en menor cantidad como el magnesio y el calcio todos ellos de asimilacin rpida. La orina por si sola no es una solucin nutriente completa, por ejemplo para usar en hidropona pues carece de fsforo, en caso de ser usada debera complementarse, por ejemplo, con guano. La composicin de la orina vara segn la alimentacin. La producida por
animales herbvoros suele ser ms alcalina, contiene ms potasio y menos nitrgeno y es la ms adecuada para usar como fertilizante. La de los humanos contiene ms sodio, que las plantas no necesitan en grandes cantidades por lo que podra perjudicarlas. El nitrgeno se encuentra principalmente en forma de urea, que se convierte bastante rpido en amonaco. Si la concentracin es excesiva puede perjudicar a las plantas. Los microorganismos del suelo convierten parte en nitratos y nitritos. A pesar del asco que produce la orina es un lquido estril como el semen o la sangre y contiene menos bacterias que la saliva o lasheces por lo que slo en caso que el animal est enfermo esta puede ser fuente de enfermedades. Es posible almacenarla durante un tiempo para que la subida del pH al formar amonio, mate los posibles patgenos. Aunque al poco tiempo de ser expulsada la orina huele muy fuerte a amonaco, al utilizarla como abono en dosis adecuadas no debera oler. Las plantas y los microorganismos lo deben absorber. Ya en la antigedad era costumbre utilizar la orina para lavarse los dientes. Este tipo de orinoterapia la observaron los romanos, por ejemplo, cuando conquistaron la pennsula Ibrica entre los pueblos del norte (cntabros, galaicos, etc.). De hecho, la orina deLusitania lleg a convertirse en un bien muy preciado en la metrpoli romana, en donde se comercializaba a buen precio, aunque esta se usaba principalmente para blanquear la ropa.
Razones por las que se realiza el examen Un anlisis de orina se puede hacer: Como parte de un examen mdico de rutina para detectar los signos iniciales de una enfermedad. Si la persona tiene signos de diabetes o enfermedad renal, o para vigilar si est recibiendo tratamiento para tales afecciones Para verificar la presencia de sangre en la orina Para diagnosticar infecciones urinarias
Otras afecciones por las cuales se puede realizar el examen son:

Uropata obstructiva aguda bilateral Sndrome nefrtico agudo Necrosis tubular aguda Uropata obstructiva aguda unilateral Alcalosis Sndrome de Alport Nefropata por analgsicos Anorexia nerviosa Enfermedad renal ateroemblica Mixoma auricular Clculos en la vejiga Uropata obstructiva bilateral crnica Glomerulonefritis crnica Infeccin urinaria crnica o recurrente Insuficiencia renal crnica Uropata obstructiva unilateral crnica Uretritis crnica Infeccin complicada de las vas urinarias (pielonefritis) Sndrome nefrtico congnito Cistinuria Delirio Demencia Demencia de origen metablico Diabetes inspida central Nefropata/esclerosis diabtica Enuresis Epididimitis Retraso en el desarrollo Glomeruloesclerosis focal y segmentaria Sndrome de Goodpasture Insuficiencia cardaca Sndrome urmico hemoltico (HUS) Prpura de Henoch-Schoenlein Diabetes mellitus insulinodependiente (DMID)

Nefropata por IgA (enfermedad de Berger) Lesin del rin y del urter Nefritis intersticial Vejiga irritable Insuficiencia cardaca izquierda Nefritis lpica Hipertensin maligna (nefroesclerosis arteriolar) Nefropata qustica medular GN membranoproliferativa I GN membranoproliferativa II Nefropata membranosa Mielomeningocele (nios) Vasculitis necrosante Sndrome nefrtico Diabetes mellitus no insulinodependiente (DMNID) Orquitis Cncer de ovario Hemoglobinuria paroxstica nocturna (HNP) Poliquistosis renal GN posestreptoccica Azotemia prerrenal Amiloidosis primaria Cncer de la prstata Prostatitis aguda Prostatitis crnica Prostatitis abacteriana Pielonefritis aguda Glomerulonefritis (semilunar) rpidamente progresiva Nefropata por reflujo Necrosis papilar renal Acidosis tubular renal distal Acidosis tubular renal proximal Trombosis de la vena renal Eyaculacin retrgrada

Rabdomilisis Insuficiencia cardaca derecha Amiloidosis sistmica secundaria Incontinencia urinaria de esfuerzo Lupus eritematoso sistmico Esclerosis sistmica (esclerodermia) Prpura trombocitopnica trombtica Lesin traumtica de la vejiga y la uretra Ureterocele Estenosis o estrechez uretral Uretritis Granulomatosis de Wegener Tumor de Wilms
El estado de nutricin, el estado de los procesos metablicos y la capacidad del rin para manejar selectivamente las sustancias que recibe son los tres factores principales que determinan la composicin de la orina. En un adulto normal, unos 1.200 ml de sangre pasan por el rin en un minuto. La composicin de la orina es urea, sodio cloro, acido rico, potasio, pequeas cantidades de azcar, metabolitos intermediarios como el acido oxlico, piruvico y ctrico cidos grasos libres e indicios de colesterol, as como cantidades pequeas de colesterol. Existen tambin hormonas y aminas biogenticas que son reflejo metablico y endocrino. En general la composicin de la orina refleja la capacidad de los riones para retener o excretar los diferentes elementos necesarios, productos fina les o txicos para el organismo. El examen de orina puede considerarse desde dos puntos de vista generales: el diagnostico y tratamiento de la enfermedad renal del aparato urinario y la deteccin de enfermedades metablicas o sistmicas que no estn directamente relacionadas con el rin. La orina puede tambin ser investigada para detectar metabolitos de frmacos.
Muestra de orina. El volumen necesario depende del nmero de pruebas que van a efectuarse, deben conservarse refrigeradas sino se van a analizar inmediatamente, deben estar libres de contaminacin fecal y vaginal. El examen de orina comprende tres aspectos: Fsico
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA Qumico Microscpico
Dentro del examen fsico se determina: Color: amarillo claro, amarillo oscuro, caf, rojizo, etc. Olor: caracterstico Aspecto: transparente, turbio, hemorrgico, etc. Sedimento. Escaso, abundante, etc. Densidad: que se determina en el refractmetro por capilaridad, leyendo en la primera escala de la izquierda. Turbidez: que est dada por clulas, cristales, bacterias, blastosporas, leucocitos, eritrocitos, la mucina no da turbidez. El examen qumico que se puede llevar a cabo manualmente, con tiras reactivas o automatizado. Fundamento de las tiras reactivas. 1. pH.la mezcla de los colorantes rojo de metilo y azul de bromotimol, permite obtener pH de 5 a 9, coloraciones que varan de amarillo verde y azul. 2. Protenas. El indicador de tetrabromofenol azul tiene color amarillo, que en presencia de protenas cambia de verde amarillento a azul verde. La solucin amortiguadora de acetato que tiene la zona reactiva permite mantener el pH constante. 3. Glucosa. La glucosa oxidada reacciona con la glucosa presente en la orina, con la eliminacin de 2 tomos de hidrogeno, los que se combinan con el oxigeno atmosfrico y forman perxido de hidrogeno (HO), el que en presencia de peroxidasa oxida la ortotoluidina que pasa de incolora a color azul, proporcional a la cantidad de glucosa presente. 4. Acetona. El acido actico con nitroprusiato de sodio y en presencia de acido amino actico forman un complejo colorido. 5. Hemoglobina. La hemoglobina de la sangre catalticamente desdobla el perxido de hidrogeno con la liberacin de oxigeno, el cual oxida la ortotoluidina, con formacin de color azul. Examen microscpico. Este se lleva a cabo revisando el sedimento, obtenido despus de centrifugar la orina, en un microscopio, se buscan clulas, mucina, bacterias, leucocitos (numero /campo) eritrocitos, cilindros, zoospermos, tricomonas, etc.
Material Tiras reactivas Tubo de ensaye Portaobjetos Cubreobjetos Pipetas Pasteur FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA Centrifuga Microscopio
Material biolgico Orina (preferentemente de la primera miccin de la maana)
Procedimiento. 1. Observar las caractersticas fsicas de la muestra dentro del recipiente de recoleccin. 2. Colocar en un tubo de ensaye orina, hasta 1 cm del borde. 3. Medir la densidad. 4. Introducir la tira reactiva y leer segn especificaciones del fabricante. 5. Centrifugar, decantar el sobrenadante y hacer el examen microscpico del sedimento.
Valores normales: Volumen : 800 1500 ml en 24 horas Densidad : 1.003 1.030 pH : 6 7 Albumina: no contiene Glucosa : no contiene Cuerpos cetonicos. No contiene Hemoglobina: no contiene Bilirrubinas: no contiene Urobilinogeno. 0 4 mg en 24 horas Leucocitos : menos de 10 por campo Eritrocitos : 0 1 por campo Cilindros : no contiene
Cuestionario: 1. Cul es la importancia de un anlisis de orina? 2. a que se asocia la presencia de glucosa en la orina? 3. Si en una muestra de orina encontramos hemoglobina que nos sugiere? FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA 4. La presencia de +++ de bacterias en orina Qu significa? 5. Mencione cuales serian las condiciones de una muestra de orina normal.
Practica 5
Determinacin de Protenas totales

Las protenas son biomolculas formadas por cadenas lineales de aminocidos. El nombre protena proviene de la palabra griega ("proteios"), que significa "primario" o deldios Proteo, por la cantidad de formas que pueden tomar. Por sus propiedades fsico-qumicas, las protenas se pueden clasificar en protenas simples (holoproteidos), que por hidrlisis dan solo aminocidos o sus derivados; protenas conjugadas (heteroproteidos), que por hidrlisis dan aminocidos acompaados de sustancias diversas, y protenas de derivadas, las anteriores. pero sustancias Las formadas son sus por desnaturalizacin y desdoblamiento de toda protenas por
indispensables para la vida, sobre todo por su funcin plstica (constituyen el 80% del protoplasma deshidratado protenas).1 Las protenas desempean un papel fundamental para la vida y son las biomolculas ms verstiles y ms diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo. Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan: Estructural. sta es la funcin ms importante de una protena Inmunolgica (anticuerpos), Enzimtica (sacarasa y pepsina), Contrctil (actina y miosina). Homeosttica: colaboran en el mantenimiento del pH, Transduccin de seales (rodopsina) FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS clula), tambin funciones biorreguladora (forma parte de las enzimas) y de defensa (losanticuerpos son
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA Protectora o defensiva (trombina y fibringeno)
Las protenas estn formadas por aminocidos los cuales a su vez estn formados por enlaces peptdicos para formar esfingocinas. Las protenas de todos los seres vivos estn determinadas mayoritariamente por su gentica (con excepcin de algunos pptidos antimicrobianos de sntesis no ribosomal), es decir, la informacin gentica determina en gran medida qu protenas tiene una clula, un tejido y un organismo. Las protenas se sintetizan dependiendo de cmo se encuentren regulados los genes que las codifican. Por lo tanto, son susceptibles a seales o factores externos. El conjunto de las protenas expresadas en una circunstancia determinada es denominado proteoma.
Caractersticas Los prtidos o protenas son biopolmeros, estn formadas por gran nmero de unidades estructurales simples repetitivas (monmeros). Debido a su gran tamao, cuando estas molculas se dispersan en un disolvente adecuado, que las diferencian forman de las siempredispersiones coloidales, con caractersticas
disoluciones de molculas ms pequeas. Por hidrlisis, las molculas de protena se dividen en numerosos compuestos relativamente simples, de masa molecular pequea, que son las unidades fundamentales constituyentes de la macromolcula. Estas unidades son los aminocidos, de los cuales existen veinte especies diferentes y que se unen entre s mediante enlaces peptdicos. Cientos y miles de estos aminocidos pueden participar en la formacin de la gran molcula polimrica de una protena. Todas las protenas tienen carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno, y casi todas poseen tambin azufre. Si bien hay ligeras variaciones en diferentes protenas, el contenido de nitrgeno representa, por trmino medio, 16% de la masa total de la molcula; es decir, cada 6,25 g de protena contienen 1 g de N. El factor 6,25 se utiliza para estimar la cantidad de protena existente en una muestra a partir de la medicin de N de la misma. La sntesis proteica es un proceso complejo cumplido por las clulas segn las directrices de la informacin suministrada por losgenes. Las protenas son largas cadenas de aminocidos unidas por enlaces peptdicos entre el grupo carboxilo (-COOH) y el grupo amino (-NH2) de residuos de aminocido adyacentes. La secuencia de aminocidos en una protena est codificada en su gen (una porcin de FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA ADN) mediante el cdigo gentico. Aunque este cdigo gentico especifica los 20 aminocidos "estndar" ms la selenocistena y en ciertos Archaea la pirrolisina, los residuos en una protena sufren a veces modificaciones qumicas en la modificacin postraduccional: antes de que la protena sea funcional en la clula, o como parte de mecanismos de control. Las protenas tambin pueden trabajar juntas para cumplir una funcin particular, a menudo asocindose para formar complejos proteicos estables.
Funciones Las protenas ocupan un lugar de mxima importancia entre las molculas constituyentes de los seres vivos (biomolculas). Prcticamente todos los procesos biolgicos dependen de la presencia o la actividad de este tipo de molculas. Bastan algunos ejemplos para dar idea de la variedad y trascendencia de las funciones que desempean. Son protenas: Casi todas las enzimas, catalizadores de reacciones qumicas en organismos vivientes; Muchas hormonas, reguladores de actividades celulares; La hemoglobina y otras molculas con funciones de transporte en la sangre; Los anticuerpos, encargados de acciones de defensa natural contra infecciones o agentes patogenos; Los receptores de las clulas, a los cuales se fijan molculas capaces de desencadenar una respuesta determinada; La actina y la miosina, responsables finales del acortamiento del msculo durante la contraccin; El colgeno, integrante de fibras altamente resistentes en tejidos de sostn.
Funciones de reserva. Como la ovoalbmina en el huevo, o la casena de la leche.
Estructura
Es la manera como se organiza una protena para adquirir cierta forma. Presentan una disposicin caracterstica en condiciones fisiolgicas, pero si se cambian estas condiciones como temperatura, pH, etc. pierde la conformacin y su funcin, proceso denominado desnaturalizacin. La funcin depende de la conformacin y sta viene determinada por la secuencia de aminocidos. Para el estudio de la estructura es frecuente considerar una divisin en cuatro niveles de organizacin, aunque el cuarto no siempre est presente. Conformaciones o niveles estructurales de la disposicin tridimensional: Estructura primaria. Estructura secundaria. Nivel de dominio.
Estructura terciaria. Estructura cuaternaria.
A partir del nivel de dominio slo las hay globulares
Propiedades de las protenas FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA Solubilidad: Se mantiene siempre y cuando los enlaces fuertes y dbiles estn presentes. Si se aumenta la temperatura y el pH, se pierde la solubilidad. Capacidad electroltica: Se determina a travs de la electroforesis, tcnica analtica en la cual si las protenas se trasladan al polo positivo es porque su molcula tiene carga negativa y viceversa. Especificidad: Cada protena tiene una funcin especfica que est determinada por su estructura primaria. Amortiguador de pH (conocido como efecto tampn): Actan como amortiguadores de pH debido a su carcter anftero, es decir, pueden comportarse como cidos (donando electrones) o como bases (aceptando electrones).
Desnaturalizacin : Desnaturalizacin de protenas Si en una disolucin de protenas se producen cambios de pH, alteraciones en la concentracin, agitacin molecular o variaciones bruscas de temperatura, la solubilidad de las protenas puede verse reducida hasta el punto de producirse su precipitacin. Esto se debe a que los enlaces que mantienen la conformacin globular se rompen y la protena adopta la conformacin filamentosa. De este modo, la capa de molculas de agua no recubre completamente a las molculas proteicas, las cuales tienden a unirse entre s dando lugar a grandes partculas que precipitan. Adems, sus propiedades biocatalizadores desaparecen al alterarse el centro activo. Las protenas que se hallan en ese estado no pueden llevar a cabo la actividad para la que fueron diseadas, en resumen, no son funcionales. Esta variacin de la conformacin se denomina desnaturalizacin. La desnaturalizacin no afecta a los enlaces peptdicos: al volver a las condiciones normales, puede darse el caso de que la protena recupere la conformacin primitiva, lo que se denomina renaturalizacin. Ejemplos de desnaturalizacin son la leche cortada como consecuencia de la
desnaturalizacin de la casena, la precipitacin de la clara de huevo al desnaturalizarse la ovoalbmina por efecto del calor o la fijacin de un peinado del cabello por efecto de calor sobre las queratinas del pelo.
Clasificacin FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA Segn su forma Fibrosas: presentan cadenas polipeptdicas largas y una estructura secundaria atpica. Son insolubles en agua y en disoluciones acuosas. Algunos ejemplos de stas son queratina, colgeno y fibrina Globulares: se caracterizan por doblar sus cadenas en una forma esfrica apretada o compacta dejando grupos hidrfobos hacia adentro de la protena y grupos hidrfilos hacia afuera, lo que hace que sean solubles en disolventes polares como el agua. La mayora de las enzimas, anticuerpos, algunas hormonas y protenas de transporte, son ejemplos de protenas globulares. Mixtas: posee una parte fibrilar (comnmente en el centro de la protena) y otra parte globular (en los extremos). segn su composicin qumica Simples: su hidrlisis slo produce su aminocidos. hidrlisis Ejemplos de estas y son otras la insulina y el colgeno (globulares y fibrosas). Conjugadas o heteroprotenas: produce aminocidos sustancias no proteicas con un grupo prosttico Fuentes de protenas Las fuentes dietticas de protenas incluyen carne, huevos, soya, granos, leguminosas y productos lcteos tales como queso o yogurt. Las fuentes animales de protenas poseen los 20 aminocidos. Las fuentes vegetales son deficientes en aminocidos y se dice que sus protenas son incompletas. Por ejemplo, la mayora de las leguminosas tpicamente carecen de cuatro aminocidos incluyendo el aminocido esencial metionina, mientras los granos carecen de dos, tres o cuatro aminocidos incluyendo el aminocido esenciallisina.
Calidad proteica Las diferentes protenas tienen diferentes niveles de familia biolgica para el cuerpo humano. Muchos alimentos han sido introducidos para medir la tasa de utilizacin y retencin de protenas en humanos. stos incluyen valor biolgico, NPU (Net Protein Utilization), NPR (Cociente Proteico Neto) y PDCAAS FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA (Protein Digestibility Corrected Amino Acids Score), la cual fue desarrollado por la FDA mejorando el PER (Protein Efficiency Ratio). Estos mtodos examinan qu protenas son ms eficientemente usadas por el organismo. En general, stos concluyeron que las protenas animales que contienen todos los aminocidos esenciales (leche, huevos, carne) y la protena de soya son las ms valiosas para el organismo. Reacciones de reconocimiento Reaccin de Biuret
El reactivo de Biuret est formado por una disolucin de sulfato de cobre en medio alcalino, este reconoce el enlace peptdico de las protenas mediante la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos delnitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos, lo que produce una coloracin rojo-violeta. Reaccin de los aminocidos Azufrados
Se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reaccin en la separacin mediante un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo. Reaccin de Millon
Reconoce residuos fenlicos, o sea aquellas protenas que contengan tirosina. Las protenas se precipitan por accin de los cidos inorgnicos fuertes del reactivo, dando un precipitado blanco que se vuelve gradualmente rojo al calentar. Reaccin xantoproteica
Reconoce grupos aromticos, o sea aquellas protenas que contengan tirosina o fenilalanina, con las cuales el cido ntrico forma compuestos nitrados amarillos. Deficiencia de protenas Deficiencia de protenas en el tercer mundo La deficiencia de protena es una causa importante de enfermedad y muerte en FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA eltercer mundo. La deficiencia de protena juega una parte en la enfermedad conocida como kwashiorkor. La guerra, la hambruna, lasobrepoblacin y otros factores incrementaron la tasa de malnutricin y deficiencia de protenas. La deficiencia de protena puede conducir a una inteligencia reducida o retardo mental. La malnutricin proteico calrica afecta a 500 millones de personas y ms de 10 millones anualmente. En casos severos el nmero de clulas blancas disminuye, de la misma manera se ve reducida drsticamente la habilidad de los leucocitos de combatir una infeccin. Deficiencia de protenas en pases desarrollados La
deficiencia de protenas es rara en pases desarrollados pero un pequeo nmero de personas tiene dificultad para obtener suficiente protena debido a la pobreza. La deficiencia de protena tambin puede ocurrir en pases desarrollados en personas que estn haciendo dieta para perder peso, o en adultos mayores quienes pueden tener una dieta de pobre. Las personas trauma o convalecientes, recuperndose ciruga,
enfermedades pueden tener dficit proteico si no incrementan su consumo para soportar el incremento en sus necesidades. Una deficiencia tambin puede ocurrir si la protena consumida por una persona est incompleta y falla en proveer todos los aminocidos esenciales.
Exceso de consumo de protenas Como el organismo es incapaz de almacenar las protenas, el exceso de protenas grasos. es digerido y convertido en azcares o cidos El hgado retira el nitrgeno de
los aminocidos, una manera de que stos pueden ser consumidos como combustible, y el nitrgeno es incorporado en la urea, la sustancia que es excretada por los riones. Estos rganos normalmente pueden lidiar con cualquier sobrecarga adicional, pero si existe enfermedad renal, una disminucin en la protena frecuentemente ser prescrita. FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA El exceso en el consumo de protenas tambin puede causar la prdida de calcio corporal, lo cual puede conducir a prdida de masa sea a largo plazo. Sin embargo, varios suplementos proteicos vienen suplementados con diferentes cantidades de calcio por racin, de manera que pueden contrarrestar el efecto de la prdida de calcio. Algunos sospechan que el consumo excesivo de protenas est ligado a varios problemas: Hiperactividad del sistema inmune. Disfuncin heptica debido a incremento de residuos txicos. Prdida de densidad sea; la fragilidad de los huesos se debe a que el calcio y la glutamina se filtran de los huesos y el tejido muscular para balancear el incremento en la ingesta de cidos a partir de la dieta. Este efecto no est presente si el consumo de minerales alcalinos (a partir de frutas y vegetales [los cereales son cidos como las protenas; las grasas son neutrales]) es alto. En tales casos, el consumo de protenas es anablico para el hueso. Muchos investigadores piensan que un consumo excesivo de protenas produce un incremento forzado en la excrecin del calcio. Si hay consumo excesivo de protenas, se piensa que un consumo regular de calcio sera capaz de estabilizar, o inclusive incrementar, la captacin de calcio por el intestino delgado, lo cual sera ms beneficioso en mujeres mayores.[1] Las protenas son frecuentemente causa de alergias y reacciones alrgicas a ciertos alimentos. Esto ocurre porque la estructura de cada forma de protena es ligeramente diferente. Algunas pueden desencadenar una respuesta a partir del sistema inmune, mientras que otras permanecen perfectamente seguras. Muchas personas son alrgicas a la casena (la protena en la leche), al gluten (la protena en el trigo) y otros granos, a la protena particular encontrada en el man o aquellas encontradas en mariscos y otras comidas marinas.
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA Es extremadamente inusual que una misma persona reaccione adversamente a ms de dos tipos diferentes de protenas, debido a la diversidad entre los tipos de protenas o aminocidos. Aparte de eso, las protenas ayudan a la formacin de la masa muscular, para todas aquellas personas que les guste hacer ejercicio, en cuyo caso se recomienda la pechuga de pollo salcochado debido al alto ndice de protena que tiene (no se debe consumir la grasa).[3] Anlisis de protenas en alimentos El clsico ensayo para medir concentracin de protenas en alimentos es el mtodo de Kjeldahl. Este ensayo determina el nitrgeno total en una muestra. El nico componente de la mayora de los alimentos que contiene nitrgeno son las protenas (las grasas, los carbohidratos y la fibra diettica no contienen nitrgeno). Si la cantidad de nitrgeno es multiplicada por un factor dependiente del tipo de protena esperada en el alimento, la cantidad total de protenas puede ser determinada. En las etiquetas de los alimentos, la protena es expresada como el nitrgeno multiplicado por 6,25, porque el contenido de nitrgeno promedio de las protenas es de aproximadamente 16%. El mtodo de Kjeldahl es usado porque es el mtodo que la AOAC International ha adoptado y por lo tanto es usado por varias agencias alimentarias alrededor del mundo
Proteinas totales en suero Es una medicin aproximada de todas las protenas encontradas en la porcin lquida de la sangre. Esta prueba examina especficamente la cantidad total de dos clases de protenas: albmina y globulina. Las protenas son partes importantes de todas las clulas y tejidos. Por ejemplo, la albmina ayuda a mantener un cierto tipo de presin arterial, impidiendo que el lquido se escape fuera de los vasos sanguneos.
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA Razones por las que se realiza el examen Este examen a menudo se hace para diagnosticar problemas nutricionales, enfermedad renal o enfermedad heptica. Si la protena total es anormal, se tienen que realizar exmenes adicionales para identificar el problema especfico.
Valores normales El rango normal es de 6.0 a 8.3 gm/dl (gramos por decilitro). Los valores normales pueden variar levemente entre laboratorios.
Significado de los resultados anormales Los niveles superiores a los niveles normales pueden deberse a: Inflamacin o infeccin crnica, incluyendo VIH y hepatitis B o hepatitis C Mieloma mltiple Enfermedad de Waldenstrom Los niveles inferiores a los normales pueden deberse a: Agamaglobulinemia Sangrado (hemorragia) Quemaduras (extensas)
Determinacin de protenas totales Tcnica de Biuret Fundamento: las protenas dan coloracin violeta en presencia de iones cpricos en solucin alcalina, proporcional a la cantidad de protenas presentes. La reaccin es del enlace peptidico de las protenas.
Material Cloruro de sodio Sulfato de cobre Tartrato de sodio y potasio Hidrxido de sodio Yoduro de potasio Acido clorhdrico FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA Fenoftaleina Sulfato de sodio
Preparacin de reactivos. Cloruro de sodio 0.85% 115 a Cloruro de sodio 85g Agua c.b.p. 1000 ml Disolver y aforar Reactivo de Biuret 115 b Sulfato de cobre 1.5 g Tartrato de sodio y potasio 6g Yoduro de potasio 1g Agua c.b.p. 1000 ml En un matraz volumtrico de 1000 ml poner el sulfato de cobre y el tartrato de sodio y potasio, agregar aproximadamente 500 ml de agua destilada y agitar hasta disolucin; agregar con agitacin constante 300 ml de hidrxido de sodio 2.5N y mezclar. Agregar el yoduro de potasio y agitar hasta disolucin. Aforar a 1 litro y conservar en frasco oscuro. La estabilidad del reactivo es grande, pero debe descartarse si se forma un precipitado negro rojizo. Hidrxido de sodio 1.5 N Hidrxido de sodio 100 g Agua libre de CO c.b.p. 1000ml Disolver y aforar.. Diluir 20 ml de esta solucin a 100 ml y titular con acido clorhdrico 0.5 N; usando fenoftaleina como indicador. Para 20 ml de la dilucin anterior deben gastarse 20 ml de la solucin de acido clorhdrico 0.5N. Sulfato de sodio 26.8 % Sulfato de sodio Agua c.b.p. Disolver y aforar
268 g 1000 ml
Material biolgico 1.0 ml de suero sanguneo
Tcnica: 1. En un tubo de ensaye poner 9.5 ml de cloruro de sodio al 0.85% y 0.5 ml de suero problema, agitar para mezclar 2. En otro tubo de ensaye poner 2 ml de la muestra diluida. 3. En otro tubo que servir de blanco poner 2 ml de cloruro de sodio 0.85%. 4. A cada tubo agregar 8 ml de reactivo de Biuret y mezclar por inversin FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA 5. Dejar 30 minutos a temperatura ambiente y leer a una longitud de onda de 540 m o filtro 540. 6. Ajustar el % de trasmitancia con blanco de reactivos.
Valores normales Protenas totales
6 a 8 g / 100 ml de suero.
Cuestionario 1. para que nos sirve la determinacin de protenas totales? 2. a que puede deberse un nivel por arriba de los valores normales de protenas totales.? 3. cuales son las 2 clases de protenas que generalmente se cuantifican? 4. cual es el fundamento de la tcnica de Biuret.? 5. como se clasifican las protenas?
Practica 7
Determinacin de hierro
INTRODUCCIN
El elemento hierro es esencial para la mayora de los organismos vivientes. El hierro es un componente fundamental de muchas enzimas y pigmentos transportadores de oxigeno. En el organismo fcilmente sufre procesos de oxidacin y reduccin; por ello, el hierro es un constituyente importante de las enzimas que participan en el trasporte de electrones. La distribucin de hierro en el organismo es como sigue: Hemoglobina Mioglobina Citocromo Catalasa Ferritina Siderofilina 900 mg 40 0.8 5 3 7.5 FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA Hierro orgnico total Hierro restante 3.900 300
Solamente del 11 al 14 % de la ingesta de hierro (12 a 18 mg al da) se absorbe en el aparato gastrointestinal. Sin embargo, en los estados que cursan con deficiencia de hierro y durante el crecimiento y embarazo se produce un aumento en la retencin normal de este mineral de cerca de 2 3 veces. El hierro es expulsado a travs de la piel, por el sudor y la exfoliacin de las clulas escamosas, a travs de las heces y la orina, y en la mujer por menstruacin. El embarazo origina una perdida materna de aproximadamente 280 mg que van a parar al feto y 100 mg durante el momento del parto. La lactancia constituye otra perdida materna de hierro. El proceso de la regulacin de la absorcin del hierro a travs del intestino es prcticamente desconocido. El hierro, sin embargo, se absorbe en la porcin superior del intestino delgado directamente a la sangre. Cuando el hierro atraviesa la mucosa intestinal pasa a la sangre donde rpidamente se una a la trasferrina. El hierro tras su absorcin va a parar en gran parte a la medula sea, hgado y en cantidades ms pequeas a otros tejidos. Aproximadamente el 25 % de hierro del organismo se encuentra en los depsitos como ferritinas y hemosiderinas. Estos representan la reserva disponible para cuando surja la necesidad. Fundamento de la determinacin de hierro. Se libera el hierro de las protenas a estas se les precipita, despus se aade al filtrado una solucin de bathophenantrolina, sustancia que forma un compuesto coloreado con el hierro , la intensidad del color es directamente proporcional a la concentracin de hierro. Material. Agua libre de Fe HCl Acido tricloroacetico Acido tioglicolico al 80 % Acetato de sodio Bathophenentrolina Preparacin de los reactivos. 1. Acido clorhdrico: 0.2 N.0.67 ml de acido clorhdrico concentrado y agua libre de Fe c.b.p. 100 ml. 2. Acido tricloroacetico al 30 %: 30 g de acido tricloroacetico agua libre de Fe c.b.p. 100 ml. 3. Acido tioglicolico, solucin de 10 mg / 100 ml: sulfato ferroso amnico..En un matraz aforado poner una pequea cantidad de agua libre de Fe y despus 0.15 ml de acido sulfrico concentrado, disolver y aforar a 100 ml. 4. Solucin de bathophenantrolina al 0.02% : 20 mg de bathophenantrolina y alcohol isopropilico c.b.p. 100 ml 5. Solucin saturada de acetado de sodio. En un tubo, poner 2 ml de agua libre de Fe y se aade hasta la mitad de este volumen acetato de sodio, se agita hasta que ya no se disuelvan algunos cristales que quedan en el sedimento. Material biolgico. FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA Se toman de 7 a 9 ml de sangre venosa y se colocan en 2 tubos de ensaye sin anticoagulante. La toma de la muestra debe ser en ayunas y entre 7 y 9 de la maana. Se centrifuga la sangre dentro de las 2 horas que siguen a la toma de la muestra y se separa el suero el cual debe estar libre de hemolisis. Tcnica. 1. Se ponen 2 ml del suero en un tubo de ensaye. 2. Se agregan 3.0 ml del HCl 0.2 N y una gota del acido tioglicolico al 80 % y se mezcla 3. Se deja reposar 30 minutos 4. Se mezcla con un agitador de cristal hasta que se disuelvan los grumos. 5. Se deja reposar 15 30 minutos a temperatura ambiente, manteniendo el tubo tapado con papel parafilm. 6. Se centrifuga a 2000 r.p.m. durante 15 minutos, se decanta el sobrenadante. 7. Se ponen 4.0 ml en una celda del espectrofotmetro 8. Se agregan 0.5 ml de la solucin saturada de acetato de sodio 9. Se mezcla y agregan 2.0 ml de la solucin de bathophenentrolina al 0.02% 10. Se agita se deja reposar 15 minutos a temperatura ambiente. 11. Se lee la absorvancia a una longitud de3 onda de 535 m , despus de ajustar a cero con un blanco que tiene todos los reactivos y en lugar de suero 2.0 ml de agua destilada.
Calibracin: No. de matraz de 100 ml Sol. Con 10 mg de Fe ml 0.5 1.5 2.0 3.0 agua c.b.p. ml 100 100 100 100 50 100 200 300 Conc. en mg %
1 2 3 4
Se procede con el contenido de cada matraz como si fuera suero. D.O. del problema x 200 = microgramos de Fe/ 100 ml de suero D.O. del estndar La reaccin colorida sigue la ley de Beer hasta la concentracin de 300 mg en 100 ml; si el valor es mayor se usa 1.0 ml de suero y el resultado se multiplica por 2. Valores normales: Hombres 60 185 meg / 100 ml Mujeres 65 180 meg / 100 ml FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
Cuestionario: 1. Cmo encontramos el hierro en el organismo? 2. a qu padecimientos est ligada la ausencia de hierro? 3. Cul es la va de absorcin de hierro? 4. Cul es el fundamento de la tcnica para cuantificacin de hierro? 5. porque usar agua libre de Fe en esta determinacin?
Practica 8 TGO TGP INTRODUCCIN En los procesos de anlisis clnicos que involucren directamente al tejido heptico, resulta de gran utilidad el determinar los niveles sericos de Transaminasas , como lo son la alanina aminotransferasa (ALT TGP) y la aspartato aminotransferasa (AST TGO), ya que comparando los valores de actividad ALT v/s AST, es posible determinar el origen heptico, en su defecto cardiaco , al observar alteraciones en estos patrones enzimticos. Por otro lado , resulta muy til para diferenciar hepatitis alcohlicas de otras hepatitis agudas, esto relacionando AST/ALT: En las hepatitis alcohlicas(con necrosis) este ndice es generalmente mayor a 1 (AST aumentada por sobre ALT), mientras que en las hepatitis virales es generalmente menor a 1 (AST disminuida ante ALT). En fin cualquiera que sea el caso , la determinacin de estas enzimas adquiere importancia diagnstica cuando sus valores son enfrentados con valores de otras enzimas de similar origen tisular, permitiendo as completar un perfil enzimtico de rganos como el hgado. MTODO DE REFERENCIA Y DE RUTINA TGO (AST, ASPARTATO AMINOTRANFERASA) METODO DE IFCC (FEDERACION INTERNACIONAL DE QUIMICA CLINICA) FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA Descripcin. La Aspartato aminotransferasa es una enzima que se encuentra localizada tanto a nivel citoplasmtico como mitocondrial, de all que se diga que es una enzima bilocular , se encuentra ampliamente distribuida en msculo esqueltico, rin , cerebro y principalmente en higado y corazn, donde esta en mayor concentracin.Cualquier alteracin en estos tejidos, se vera reflejado en un aumento en el torrente circulatorio de esta enzima, el cual ser directamente proporcional al dao tisular. En aquellos pacientes con afecciones hepticas se observan las mayores elevaciones de AST, sobre todo en aquellos casos de hepatitis con necrosis. Fundamento. La reaccin es catalizada por la TGO (AST), sta desplaza la reaccin hacia la formacin de Oxaloacetato que reacciona con la MDH (Malato Deshidrogenasa), de modo que la velocidad de oxidacin del NADH medida a 340 nm, es directamente proporcional a la actividad de TGO en la muestra. En el medio de reaccin hay adems LDH (Lactato Deshidrogenasa) suficiente para consumir los cetocidos de origen endgeno, evitando as su interferencia. Reaccin. TGO L-aspartato + 2-oxoglutarato Oxalacetato + L-glutamato Oxalacetato + NADH + H+ L-malato + NAD+ MDH Muestra. Suero, Plasma (Heparinizado, EDTA). Muestras hemolizadas no se aceptan ya que poseen elevados niveles de AST dentro de los eritrocitos.
Linealidad. Si el cambio por minuto de absorbancia excede de 0.160 (340nm y 334 nm) 0.080 (365), diluir la muestra 1+ 4 con suero fisiolgico. Multiplicar el resultado por 5. La absorbancia inicial debe ser superior a 0.8 A. En caso de no serlo se puede estar en presencia de actividades enzimticas muy elevadas y obtener resultados errneos. Diluir la muestra y reprocesarla. Metodologa de Anlisis. *Lectura: Hg 365 nm, 340 nm, 334 nm. *Paso ptico: 1 cm. *Temperatura: 37C. *Medicin: Contra aire. Los reactivos y cubetas deben ser llevados a la temperatura del ensayo, la que debe mantenerse constante durante el desarrollo del test. Valores Normales. 37C (U/L) Hombre Hasta 37 FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA Mujer Ventajas. Simple y Rpido Resulta imposible o poco prctico modificar las mezclas reactivas preestablecidas. Sueros hemolizados dan valores falsamente aumentados. Los sueros con concentraciones de cetocidos endgenos elevados generan valores Pacientes hemodializados o con hipovitaminosis u otras patologias asociadas con dficit de Piridoxal Fosfato (coenzima), generan valores falsamente disminudos. A mayor temperatura se obtiene mayor sensibilidad , pero un menor rango de linealidad . La preincubacin con parte del reactivo es para evitar interferencia con cetoacidos endgenos del suero. El Piridoxal fosfato es una coenzima necesaria en la actividad de la TGO, por ello esta ltima se ve afectada en ausencia de la misma. ejemplo: pacientes hemodializados o con hipovitaminosis. Para evitar contaminacin de reactivos , usar pipetas nuevas y no intercambiar las tapas de los reactivos. MTODO DE RUTINA Y REFERENCIA. TGP (ALT, ALANINA AMINOTRANFERASA) METODO IFCC (FEDERACION INTERNACIONAL DE QUIMICA CLINICA) Descripcin. La alanina aminotranferasa es una enzima que tiene como nica localizacin el citoplasma , de ah que se le denomine unilocular. Su mayor actividad la presenta en el tejido heptico y la menor actividad en msculo esqueltico, corazn, rin, pncreas y eritrocitos (en ese orden). Por lo tanto la destruccin o cambio en la permeabilidad de membrana celular provoca la liberacin de ALT a la circulacin sangunea. Su aumento se debe principalmente a alteracin heptica (como colestiasis, hepatitis txicas o virales). En hepatitis viral el aumento de ALT precede a la aparicin de ictericia, si los valores estn aumentados por sobre 6 semanas, nos debe hacer pensar en una hepatitis activa o el comienzo de una hepatitis crnica. Fundamento. La reaccin catalizada por ALT esta desplazada hacia al formacin de piruvato, que reacciona inmediatamente con la LDH (Lactato Deshidrogenasa), de modo que la velocidad de oxidacin del NADH, medida a 340 nm, es proporcional a la actividad de ALT en la muestra. El exceso de LDH en el medio es para consumir cetocidos de origen endgeno, evitando as su interferencia. Reaccin. FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS Desventajas. hasta 31
falsos elevados.
Consideraciones.
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA TGP L-alanina + 2-oxoglutarato Piruvato + L-glutamato Piruvato + NADH + H L-lactato + NAD+ LDH Muestra. Suero, plasma heparinizado o EDTA. El oxalato , la heparina no inhiben la actividad enzimtica , pero pueden causar cierta turbidez. La ALT es estable en suero durante 3 dias a temperatura ambiente y hasta una semana a 4C.En la orina se encuentra poca o ninguna actividad, por lo cual no se recomienda para el anlisis. Porcentaje de prdida de actividad. Refrigerada Hasta 25C Linealidad. Si el cambio por minuto de absorbancia excede de 0.160 (340 nm y 334 nm) 0.080 (365 nm), diluir la muestra 1 + 4 con suero fisiolgico. Multiplicar el resultado por 5. La absorbancia inicial debe ser superior a 0.80 A. En el caso de no serlo se puede estar en presencia de actividades enzimticas muy elevadas y obtener resultados errneos. Diluir la muestra y reprocesarla. Valores de referencia. 37C (U/L) Hombre Mujer Hasta 40 Hasta 31 10% 17%
Metodologa de anlisis. Lectura: Hg 365 nm, 340 nm, 334 nm. Paso ptico: 1 cm. Temperatura: 37C. Medicin: contra aire.
Los reactivos y cubetas deben ser llevados a la temperatura del ensayo, la que debe mantenerse constante durante el desarrollo del test. Ventajas. Simple y Rpido. El uso de buffer TRIS nos permite que el NADH sea ms estable que en otros mtodos que usan fosfato. El piridoxal 5-Fosfato(PP) es un activador ms efectivo de la ALT en buffer Tris que en el de fosfato. FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA Este mtodo tiene una alta especificidad , carencia de interferencias, alta linealidda, reproductibilidad y rapidez. Sueros hemolizados generan valores falsos elevados, debido a que el eritrocito contiene 3 a 5 veces ms ALT que el suero. Sueros con concentraciones de cetocidos endogenos elevados generan valores falsamente elevados. Muestras de pacientes hemolizadializados o con hipovitaminosis u otras patologas asociadas A mayor temperatura , mayor sensibilidad, pero menor rango de linealidad . Una absorvancia inicial bajo 0,800 D.O., estando reactivos en condiciones, indica una muestra con muy alta actividad de TGP. Por lo tanto es necesario diluir la muestra. Cuando la tcnica se realiza como ensayo de punto final, la reaccin presenta un efecto de retroinhibicin por piruvato, este disminuye la linealidad. No es conveniente modificar la formulacin de un fabricante luego de adquirir los reactivos. MTODOS ALTERNATIVOS. Mtodo de Reitman y Frankel. Esta es una reaccin acoplada con dinitrofenilhidrazina (DNPH). Es una tcnica colorimtrica y cuantitativa. Reaccin. Alanina + cetoglutarato Glutamato + Piruvato Piruvato + DNPH Complejo formado por Pir-DNP-Hidrazona. La lectura se hace a 505 nm. Es una reaccin de punto final. Es necesario un tiempo de retardo de la reaccin con cetoglutarato, lo que permite el consumo de cetoglutarato endgeno y todo otro proceso que consuma NADH. Este retardo no debe ser inferior a 90 segundos. Muestra. Suero. Mtodo de Wrodlewski y LaDue. Este es un mtodo enzimtico cuantitativo. Alanina + cetoglutarato Glutamato + Piruvato LD Piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+ Esta es una medicin del consumo de NADH a 340 nm. Es de uso muy frecuente. La diferencia con el mtodo de referencia es que este mtodo requiere un tiempo de retardo no inferior a 90 segundos antes de la reaccin con cetoglutarato para FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS
Desventajas.
Consideraciones.
con dficit de Piridoxal Fosfato generan valores falsamente disminuidos.
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA permitir el consumo de cetoglutarato endogeno y todo otro proceso que consuma NADH. Adems se recomienda un perodo de preincubacin de 10 minutos con el cofactor piridoxal-5-fosfato. Muestra. Suero MTODO ALTERNATIVO. (mtodo propuesto por la AACC) A propuesto un mtodo para los laboratorios pequeos de Qumica Clnica, el cual se diferencia del de la IFCC en que: 1.- Se emplea un solo reactivo para evitar el procedimiento en dos pasos. 2.- La reaccin se lee despus de 150 segundos , durante los 180 segundos siguientes. 3.- No se agrega Fosfato de Piridoxal. Cuestionario 1. Para que nos sirve la determinacin de TGO y TGP.? 2. Con que otro nombre se conocen TGO y TGP respectivamente? 3. Mencione como se altera la relacin TGO, TGP en casos e hepatitis viral y como en hepatitis cirrtica 4. Porque no se emplea suero hemolisado para la determinacin de estas enzimas? BIBLIOGRAFIA Ttulo: Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico Autor : Instituto de Salud Pblica de Chile Editorial: El Instituto Santiago de Chile 1994 Ttulo: Qumica Clnica Autor: Anderson, Shauna C.
Practica 9 Proyecto fina Determinacin de glucosa posprandial
La determinacin de glucossa posprandial es un estudio que nos sirve para conocer la asimilacin de glucosa en un paciente , y as determinar si esta propenso a diabetes. La prueba consiste en tomar una muestra en ayunas ,en la cual se valorara o determinara el nivel de azcar basal. Posteriormente el paciente tomara un desayuno rico en azcar(malteada, hot-cakes, pastel, jugo,etc.) siempre y cuando no sea diabtico o tenga alguna dieta indicada por su medico, anotan el tiempo en que empieza a desayunar. Al cumplir 2 horas de haber desayunado se le tomara una nueva muestra, se determinara glucosa y se hara el estudio y conclusiones obtenidos de dichos valores.
Procedimiento. El alumno haciendo uso de los conocimientos adquiridos en este curso, toma de muestra, realizacin de la cuantificacin de glucosa, material necesario, etc. Podr entregar resultados. FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICOBIOLOGICAS

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