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DeterminacindeCalcioenaguas naturalesyotrasmatrices ambientalesdigeridas


MtododeEspectrofotometrade AbsorcinAtmicaporLlama
Elaborado Modificado Revisado Aprobado R.Huertas AnalistaQumico V.Muoz AnalistaQumico N.Barboza JefedeSeccinInstrumental S.CastroScarone JefadeLaboratorio

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Calcio Absorcinatmica SECCION3

1 APLICACIN
1.1 Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de calcio (Ca) en aguas naturales y otras matrices ambientales digeridas (aguas residuales, residuos slidos, suelos, sedimentos, soluciones resultantes del test de toxicidad en lixiviados, etc.), en el rango de 0,05 a 7 mg/L para la llama de oxido nitroso / acetileno y de 0,4 a 50 mg/L para la llama aire / acetileno. Es posible ampliar el rango de medida por concentracin, dilucin de la muestra o eventualmente girando el quemador.

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2.1 2.2 2.3 2.4 2.5

REFERENCIAS
Manual de Control de Calidad Analtico. Laboratorio Ambiental DINAMA. Manual de Gestin de Calidad. Laboratorio Ambiental DINAMA Manual de Calidad. Laboratorio Ambiental DINAMA Digestin de suelos y sedimentos para la determinacin de todos aquellos metales capaces de ser extrados bajo las condiciones del ensayo, 3262UY. Digestin de muestras lquidas con turbidez mayor a 1 NTU, efluentes industriales, aguas naturales, soluciones de extraccin del test de toxicidad (TCLP), etc., para la determinacin del contenido total de metales, 3236UY. Extraccin del contenido total de metales en filtros de material particulado, 3260UY. Digestin de efluentes industriales y de aguas naturales con turbidez mayor a 1 NTU para la posterior determinacin de metales, salvo mercurio, 3237UY. Simulacro de la lixiviacin que ocurre cuando un residuo slido es dispuesto en un relleno sanitario, por medio de una extraccin rpida y en condiciones de pH similares al agua de lluvia, Para la determinacin de constituyentes no voltiles (metales y bioensayo de toxicidad por Sistema Microtox), 3261UY. Instructivos de uso de balanza (INE 06, INE 07).

2.6 2.7 2.8

2.9

2.10 Instructivo de uso de equipo de digestin CEM (INE 18), ALTON PAAR (INE 71). 2.11 Instructivo para preparacin de agua destilada (INE 28). 2.12 Instructivo para el uso del destilador (INE 36). 2.13 Instructivo de uso de la centrfuga (INE 49). 2.14 Rutas de anlisis cdigos RIN 08 y RIN 13. 2.15 Instructivos de uso de Espectrofotmetro de Absorcin Atmica (INE 12, INE 62). 2.16 Calculo de concentracin de los distintos metales en muestras donde se constat, mediante el procedimiento correspondiente, la existencia de efecto matriz, 3276UY.

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3.1

RESUMENDELMTODO
Para aguas naturales (ros, arroyos, lluvia, subterrnea, etc), se determina calcio soluble filtrando la muestra previo a su preservacin por filtro membrana de 0,45 m. Otro tipo de muestra es digerida segn el procedimiento de digestin correspondiente (2.4, 2.5, 2.6, 2.7 o 2.8), para reducir la interferencia por materia orgnica y convertir todo el metal a una forma libre. El metal se determina por Espectrofotometra de Absorcin Atmica (EAA) con llama a 422,7 nm. El contenido de calcio se determina mediante una curva de calibracin. Nota: El procedimiento 2.8 no es una digestin, es una extraccin del metal en las condiciones del ensayo

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4.1 4.2 4.3 4.4

PRECAUCIONESDESEGURIDAD
Usar lentes de seguridad, tnica, guantes apropiados. El agregado de cidos realizarlo bajo campana de extraccin de gases. El lavado de material con cido realizarlo con guantes de plstico resistente a cidos. Mantener siempre encendida la campana de extraccin de gases durante la atomizacin de la muestra.

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5.1 5.2 5.3

INTERFERENCIAS
La interferencia por materia orgnica se reduce por digestin de la muestra segn procedimientos 2.4, 2.5, 2.6, 2.7 o 2.8. Alto contenido de sustancias inorgnicas u orgnicas remanentes a la digestin pueden interferir con la medida, ver 10.2. La presencia de fosfato interfiere en la determinacin por formacin de complejos de calcio, no atomizables en la llama de aire / acetileno, esta interferencia se elimina por agregado de lantano quien forma un complejo con fosfato de mayor estabilidad liberando as el calcio. Dicha interferencia tambin puede ser eliminada por el uso de la llama de xido nitroso / acetileno teniendo en cuenta que en este caso se debe agregar una sal de cesio para inhibir la ionizacin del calcio.

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6.1

MUESTREOYPRESERVACIN
Recolectar en frasco de polietileno o de polipropileno de 1L de capacidad de cierre hermtico, o en bolsa de plstico descartable para muestreo de lquidos. A las aguas naturales filtrarlas por filtro membrana de 0,45 m de tamao de poro. Tener en cuenta que as se esta determinando el contenido soluble. En caso de requerir el contenido total, preservar las muestras ajustando a pH menor a 2 con cido ntrico, indicndolo en la etiqueta. Analizar antes de 6 meses.

6.2

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7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7

INSTRUMENTALYMATERIALES
Espectrofotmetro de absorcin atmica con llama, con quemador de 10 cm de longitud. (SHIMADZU AA680, INE12). Quemador de 5 cm para medida con llama de Oxido Nitroso / Acetileno. Lmpara de ctodo hueco de calcio. Balanza analtica de precisin 1 mg, (INE 06 INE 07). Micropipetas automticas de volumen variable (entre 10 y 1000 L). Tubos de plstico, con tapa, descartables, de 10 mL de capacidad. Equipo para filtracin a vaco: bomba de vaco, trampa de agua, kitasato receptor del filtrado y portafiltro. Alternativamente pueden ser usadas jeringas con filtro de cartucho Sartorius Minisart o similar, con tamao de poro de 0,45m Filtros de 0,45m de tamao de poro.

7.8

8
8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6

REACTIVOS
Agua destilada: agua obtenida en el destilador de vidrio Barnstead Stream III (INE36) o equivalente. Agua desionizada: agua obtenida en el equipo Milli-Q (INE28) a partir de agua destilada. cido Ntrico: cido ntrico concentrado al 65 %, d = 1,40 g/mL, Merck 1.00456 o equivalente. Solucin de cido ntrico para lavado 5%: solucin al 5 % v/v de cido ntrico (8.3) en agua destilada (8.1), preparar anualmente. Solucin de cido ntrico para lavado 20%: solucin al 20 % v/v de cido ntrico (8.3) en agua destilada (8.1), preparar anualmente. Solucin estndar de 1000 mg/L de calcio: usar estndar para absorcin atmica o ICP, de concentracin conocida BAKER 6925-04 o equivalente. La fecha de vencimiento figura en la etiqueta. Alternativamente: Disolver 0,2497 g de carbonato de calcio (ppa, secado a 180 C 1 hora antes de pesarlo) en agua y diluir a 100 mL en matraz aforado, con HNO3 1% v/v. Almacenar en frasco de plstico. Es estable por 1 ao. Solucin estndar de 100 mg/L de calcio: dicha solucin se prepara por peso, en frasco de polietileno o polipropileno, tomando 5 mL de la solucin 8.6 y llevando a 50 mL con agua destilada y HNO3 CC. La concentracin final de cido debe ser del 5% v/v. Dicha solucin es estable por 6 meses. Puede prepararse utilizando conjuntamente a la solucin de calcio, soluciones de otros metales, de tal forma que quede multielemental. Estndar de chequeo de exactitud (de origen totalmente independiente del 8.6): estndar de concentracin y densidad conocida, FLUKA 70002 o equivalente. La fecha de vencimiento figura en la etiqueta. Alternativamente preparar como se indica en 8.6 a partir de carbonato de calcio. Acetileno de alta pureza, calidad mnima 99,5 %.

8.7

8.8

8.9

8.10 Oxido Nitroso alta pureza, 99%.

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Calcio Absorcinatmica SECCION3 8.11 Solucin de lantano, disolver 58,65 g de xido de lantano (calidad ppa) en erlenmeyer en 250 mL de cido clorhdrico 37 % calidad para anlisis de trazas metlicas hasta disolucin total, diluir a 1 L con agua desionizada. 8.12 Solucin de cloruro de cesio (CsCl), disolver 25 g de CsCl calidad ppa en 1000 mL de agua desionizada. Nota: En el resto del presente documento se har referencia a estos reactivos por su numeral o nombre.

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9.1

PRECAUCIONESPARALAOPERACIN
Todo el material de plstico y vidrio utilizado, luego de lavado, deber enjuagarse por inmersin en solucin 8.4, mnimo 12 horas, o un enjuague nico con solucin 8.5. Luego enjuagar tres veces con agua 8.2. Este material se mantiene identificado para tal fin. Manejar las muestras previo a la digestin en el laboratorio de tratamiento de muestras para metales. Mantener los recipientes de digestin siempre con tapa dentro de la sala de instrumentos, solo abrirlas durante la medida. Mantener especial cuidado con la contaminacin de muestras, reactivos, o material dentro del laboratorio. Tener presente los tiempos de vigencia de estndares. Soluciones con partculas o con altas concentraciones de slidos disueltos, pueden obstruir el capilar, y/o generar residuos en el quemador modificando el aspecto de la llama. Verificar que esto no ocurra mediante la medida de la absorbancia de un estndar cada 10 muestras, en caso de que la misma vare ms de 20 % destapar el capilar o limpiar el quemador segn corresponda y repetir todas las medidas realizadas desde la anterior medida del estndar. Es importante que las muestras, las soluciones de la curva de calibracin y de la solucin utilizada como control, sean de la misma densidad.

9.2

9.3 9.4 9.5

9.6

10 CALIBRACINDELMTODO
10.1 Preparar como mnimo cuatro soluciones estndar de calcio y un cero, por peso, en tubos de plstico, a partir de la solucin estndar de 1000 mg/L o de 100 mg/L diluyendo con cido ntrico, agua y solucin de lantano o solucin de cesio (segn se use llama de aire o de xido nitroso respectivamente) tal que la concentracin final de cido sea la misma que las muestras y 10% v/v la solucin de lantano o 10% v/v la solucin de cesio. (En caso de muestras no digeridas puede omitirse el agregado de cido ntrico). Medir la densidad de los estndares pesando lo que descarga una pipeta calibrada (Registrar en la ruta de anlisis RIN 08). Calcular la concentracin de Calcio en cada uno de ellos segn 12.1. Vigencia de estos estndares 60 das. 10.2 Para verificar el efecto de la matriz en el anlisis como se indica en 13.4, para cada tipo de matriz ensayada, adicionar a uno de los duplicados de digestin uno de los estndares 8.6, 8.7 u 8.8, de tal forma que la fortificacin de la muestra sea cuantificable y quede dentro de la escala de medida. El estndar usado debe ser suficientemente concentrado para no diluir la matriz. 10.3 Si existe efecto de matriz analizar segn procedimiento 3276UY.

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11 ANLISISDELAMUESTRA
Digestin / Tratamiento de la muestra
11.1 Si se quiere determinar el contenido total, las muestras deben ser digeridas o tratadas segn los procedimientos 2.4, 2.5, 2.6, 2.7 o 2.8, previo a la medida en el Espectrofotmetro. Muestras lquidas lmpidas pueden medirse sin digestin previa slo si se comprueba que su turbidez es menor a 1 NTU. Si se requiere contenido soluble, analizar la concentracin de calcio en el filtrado 11.2 Medir la densidad de la muestra digerida y de las muestras lquidas previo a digerir, pesando lo que descarga una pipeta calibrada. Luego de digerir o filtrar agregar a la muestra solucin de lantano o solucin de cesio (segn se use llama de aire o de xido nitroso respectivamente) tal que la concentracin final sea de 10% v/v para el caso de usar la solucin de lantano o 10% v/v en caso de usar la solucin de cesio. Registrar en la ruta de anlisis correspondiente. Proceder de igual manera para la solucin de control de exactitud.

Medida
11.3 Prender el instrumento siguiendo las instrucciones del uso del Espectrofotmetro de absorcin atmica (INE 12, INE 62). 11.4 Seleccionar las siguientes condiciones de operacin: Lmpara de ctodo hueco de calcio Longitud de onda: 422.7 nm. Intensidad de lmpara: la indicada por el fabricante o la requerida segn instructivo INE12 punto 11. Tipo de medida: sin correccin de fondo (MODE HCL). 11.5 Conectar el Combustible: acetileno Conectar el Oxidante: aire u xido nitroso Tipo de llama: de aire (flujo de acetileno 2,0 L/min, flujo de aire 8 L/min) de xido nitroso (flujo de acetileno 7,0 L/min, flujo de xido nitroso 6,5 L/min) Medida: mnimo dos determinaciones de 3 segundos cada una. 11.6 Registrar en la hoja de datos que imprime el equipo el nmero de ruta de anlisis de toma de muestra correspondientes, el nombre del operador y la fecha. 11.7 Medir los estndares de la curva de calibracin, verificar que se cumpla el punto 13.1. (En caso de que no se cumpla seguir las instrucciones del Instructivo INE12 punto 21. De persistir el problema verificar los flujos de los gases y el estado de la lmpara utilizada. De mantenerse el valor menor al 80 % del terico, revisar los ltimos datos de sensibilidad registrados, para poder evaluar, junto con el soporte tcnico otro tipo de deterioro.) 11.8 Medir las muestras con sus duplicados y blancos. Aproximadamente cada 10 lecturas de muestras, medir un estndar de la curva de calibracin.

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Calcio Absorcinatmica SECCION3 11.9 Si la medida de la muestra excede el mayor valor de curva preparada, preparar estndares de mayor concentracin, como en 10.1 o diluir la muestra en tubo de plstico por peso con agua, cido ntrico, lantano o cesio, segn corresponda. La concentracin final deber ser aproximadamente 10% v/v para cesio o 10 %v/v para lantano y misma proporcin de cido ntrico que las muestras. Medir la densidad. Alternativamente, girar el quemador tal que la absorbancia del mayor estndar sea de aproximadamente 0,900 UA y volver a empezar con las soluciones de la curva de calibracin. Nota: Tener en cuenta que siempre es preferible diluir a girar el quemador, ya que al diluir la matriz, se diluye tambin su interferencia. 11.10 Leer las muestras de control de calidad analtico (control de exactitud y muestras adicionadas). 11.11 Al finalizar todas las lecturas medir nuevamente al menos 3 puntos de la curva de calibracin.

12 ANLISISDEDATOS
12.1 Calcular la concentracin de calcio de cada solucin estndar mediante la siguiente frmula: Concentracin (mg Ca/L) = C S * TS / M T * dEST / d S Dnde: C
S

= Concentracin de calcio, en mg/L, del estndar utilizado (8.6, 8.7 o estndares intermedios preparados a partir de stos).

TS = Toma, en g, del estndar utilizado. MT = Masa total, en g, del estndar utilizado, ms el cido ntrico ms el agua ms lantano o cesio. dEST = Densidad de cada solucin estndar medida en 10.1 calculada como el cociente entre la masa que descarga una pipeta calibrada en g y el volumen nominal de la pipeta en mL (g/mL). dS = Densidad del estndar utilizado ( 8.6, 8.7 intermedios preparados a partir de stos) en g/mL. 12.2 Calcular la absorbancia terica de cada estndar a partir del dato de sensibilidad aportado por el fabricante (ver tabla 4.3 del Manual de Instrucciones 14.1) con la siguiente frmula: Absorbancia Terica: C * 0.00436/ 0.08 en llama de aire Absorbancia Terica: C * 0.00436/ 0.04 en llama de xido nitroso Dnde: C es la concentracin de calcio de cada estndar calculado en 12.1 en mg/L Si la absorbancia de la muestra no diluda, es menor al menor punto de la escala informar como menor que el lmite de cuantificacin.

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Se determina la concentracin de calcio en la digestin de la muestra (CM), o en una dilucin de la misma, interpolando en la curva de calibracin preparada con los estndares usando un procesador de datos comercial (Excel o equivalente). Al graficar las absorbancias de los estndares (y) en funcin de la concentracin de los mismos (x) se obtiene la siguiente curva:

Por lo que Siendo:

CM = (A b)

m m y b los coeficientes de la curva


A, la absorbancia de la muestra a determinar 12.5 Se determina la concentracin de calcio total en la muestra siguiendo las siguientes ecuaciones: 12.5.1 Para muestras lquidas: Calcio total, mg/L = (CM * FD1 * FD2) Dnde: CM = Concentracin de Ca calculada a partir de la curva de calibracin, medida en la digestin de la muestra, diluda o no segn corresponda en mg/L. Para determinar la concentracin de la muestra restar a la absorbancia de la muestra, la absorbancia del blanco previo al clculo a partir de la curva de calibracin. FD1 y FD2 = factores de dilucin de la muestra digerida. 12.5.2 Clculo de FD1: FD1 = Mf/ddig TM/d sin dig Dnde: Mf = Masa final del digesto en g d dig. = Densidad de la muestra luego de ser digerida, calculada como el cociente entre la masa que descarga una pipeta calibrada en g y el volumen nominal de la pipeta en mL (g/mL). d sin dig = Densidad de la muestra previo a digerir, calculada como el cociente entre la masa que descarga una pipeta calibrada en g y el volumen nominal de la pipeta en mL (g/mL), muestras acuosas se asume d = 1 g/mL. T M = Toma de muestra para la digestin, en g.

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Calcio Absorcinatmica SECCION3 15.5.3 Clculo de FD2: FD2 = Pf (PM/d dig) Dnde: Pf = Peso final de la muestra diluida en g( incluyendo solucin de cesio o lantano , segn corresponda y agua)

d dig. = Densidad de la muestra luego de ser digerida, calculada como el cociente entre la masa que descarga una pipeta calibrada en g y el volumen nominal de la pipeta en mL (g/mL). PM = Toma de muestra digerida, en g. Se considera 1g/mL la densidad de la solucin digerida diluida. En caso de no cumplirse, corregir la toma. Nota: Siempre que el valor de absorbancia del blanco sea detectable, y la muestra deba ser diluda, tratar el blanco de la misma forma que la muestra previo a su determinacin. 12.5.4 Para muestras slidas: Calcio total, mg/kg = (CM * FD2) * Mf/(TM * ddig) Dnde: CM = Concentracin de Ca calculada a partir de la curva de calibracin, medida en la digestin de la muestra, diluda o no segn corresponda en mg/L. Para determinar CM restar a la absorbancia de la muestra la absorbancia del blanco, previo al clculo a partir de la curva de calibracin. FD2 = factor de dilucin de la muestra digerida tal como se calcula en el punto 12.5.3. ddig. = Densidad de la muestra luego de ser digerida, calculada como el cociente entre la masa que descarga la pipeta en g y el volumen nominal de la pipeta en mL (g/mL). Mf = Masa final del digesto en g TM = Toma de la muestra para la digestin, en g. 12.6 Se determina la concentracin de calcio en la muestra digerida (sea slida o lquida) adicionada interpolando en la curva de calibracin. Calcular la recuperacin de lo adicionado en la muestra ya digerida segn: % de Recuperacin = 100*((C Ca M AD* V MAD / d Dig - C Ca M * (V MAD / d Dig - TAD))) / (TAD * CEST) Dnde: C Ca M AD = Concentracin de Ca calculada a partir de la curva de calibracin, medida en la digestin de la muestra adicionada, diluda o no segn corresponda en mg/L. C Ca M = Concentracin de Ca, calculada a partir de la curva de calibracin, medida en la digestin de la muestra sin adicionar. TAD = Toma del estndar adicionado, en g.
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Calcio Absorcinatmica SECCION3 C EST = Concentracin de calcio del estndar adicionado, en mg/L. V MAD = Masa total de la muestra mas el estndar adicionado, en g. d
Dig

= densidad de la muestra digerida, calculada como el cociente entre la masa que descarga una pipeta calibrada en g y el volumen nominal de la pipeta en mL (g/mL).

Nota: Se asume densidad del estndar utilizado en la fortificacin de 1 g/mL, en caso contrario corregir la toma del mismo.

13 CONTROLDECALIDADANALTICO
13.1 Control de la sensibilidad del equipo: Si se trabaja en condiciones mximas de sensibilidad: con los quemadores de 5 o 10 cm, segn corresponda, perfectamente alineados, cmara de nebulizacin no obstruda y lmpara de ctodo hueco en ptimo estado, las absorbancias mnimas a obtener son el 80 % de las Absorbancias tericas de cada estndar calculadas en 12.2. 13.2 Control de la exactitud: Evaluarla, de ser posible, con un material de referencia certificado o material de referencia interno cuya matriz sea similar a las muestras y posea el analito de inters, el contenido de calcio obtenido debe estar en el rango 75-125% del contenido real, o de existir, los rangos sern fijados a partir del grfico de control correspondiente. Evaluar la exactitud de la determinacin usando un estndar preparado a partir de 8.8. La concentracin del mismo debe estar dentro del rango 75-125% del contenido real, o de existir, los rangos sern fijados a partir del grfico de control correspondiente. 13.3 Control de la precisin: Medir los duplicados de la muestra y determinar la precisin como la desviacin estndar relativa (RSD) o rango normalizado. Si se cuenta con grficos de control, los lmites de aceptacin de los duplicados deben surgir de estos. En caso contrario se aceptar hasta un 10% de dispersin para matrices liquidas, y 20% para matrices slidas. 13.4 Adicin del estndar: Medir la muestra y la muestra adicionada, calcular la recuperacin de la adicin segn 12.6, debe estar dentro del rango 75-125 %. Si existe grfico de control, los lmites quedaran fijado por ste.

14 BIBLIOGRAFA
14.1 Manual de instrucciones del Espectrofotmetro SHIMADZU AA-680, SHIMADZU CORPORATION, ANALITYCAL INSTRUMENT DIVISION, 1991. 14.2 AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 21h Edition. Washington , APHA, 2005. Mtodo 3020, 3110, 3111 A, B y D pp-3-4 al 3.5, 3.13 al 3.19 y 3.20 al 3-22. 14.3 SHIMAZDU CORPORATION, Spectrophotometry. Analysis Guide for Flame Atomic Absorption

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