UNIVERSIDAD CATOLICA DE TEMUCO

FACULTAD DE ACUICULTURA Y CIENCIAS VETERINARIAS

ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA

DETERMINACIN DE CIDO LINOLEICO CONJUGADO (CLA) EN LECHE DE BOVINOS DEL SECTOR VILCN, NOVENA REGIN.

Tesis de Grado presentada como parte de los requisitos para optar al grado de Licenciado en Medicina Veterinaria.

MARA DANIELA SANHUEZA GARCA.

TEMUCO CHILE
2004
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Profesor Gua

Dr. Juan Pablo Avilez, M.V., M.Sc.

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Informante interno

Dr. Roberto Matamoros, M.V. M.Sc. Ph D.

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Informante externo

Sr. Fernando Garca G. Ingeniero Agrnomo.

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Profesor invitado

Sr. Luis Araneda. Ingeniero Agrnomo.

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Fecha del Examen de Grado:

Temuco,25 de Noviembre 2004.

Agradecimientos.
A Dios creador del universo y dueo de mi vida, muchas gracias!. A mi padre y madre por el apoyo incondicional a lo largo de mi carrera. A mis hermanos; Cone, Lorena y Francisca por su ayuda, apoyo y comprensin todos estos aos. A Claudio Garcs por ensearme que no hay lmites y lo que me proponga lo puedo lograr. A mi ta Cecilia Garca, por su gran apoyo y cario durante todos estos aos. A mis amigos Estrella Plaza, Sebastin Cuevas y Andrea Parra por su amistad incondicional, consejos, apoyo y por ensearme a enfrentar los obstculos con alegra. A los profesores; Fernando Garca y Juan Pablo Avilez por su predisposicin permanente e incondicional en aclarar mis dudas y por sus substanciales sugerencias durante la redaccin de la Tesis. A Gabriele Vonfabeck por su permanente disposicin y desinteresada ayuda.

NDICE DE MATERIAS.

ndice de materias ........................................................................................................4

ndice de tablas ............................................................................................................7

ndice de figuras ..........................................................................................................8

ndice de cuadros .........................................................................................................8

ndice de grficos .......................................................................................................10

Resumen......................................................................................................................12

Summary.....................................................................................................................14

1. Revisin Bibliogrfica ...........................................................................................16 1.1 Introduccin...........................................................................................................16 1.2 Composicin de la grasa de leche y CLA .............................................................18 1.3 Sntesis de cido linoleico conjugado....................................................................19 1.4 Estructura del cido linoleico conjugado..............................................................21 1.5 Ismeros de CLA....................................................................................................23 1.6 Beneficios de CLA en la salud...............................................................................26
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1.7 Cuantificacin de CLA presente en la leche..........................................................28 1.8 Situacin mundial..................................................................................................28 1.9 Factores que afectan la produccin del cido linoleico conjugado en las vacas lecheras........................................................................................................................30 1.9.1.1 Factores alimenticios.......................................................................................32 1.9.1.2 Grasas, aceites y semillas oleaginosas............................................................34 1.9.1.3 Efecto de la energa en la concentracin de CLA...........................................37 1.9.1.4 Praderas..........................................................................................................39 1.9.2 Variacin entre individuos.................................................................................44 1.9.3 Raza....................................................................................................................46 1.9.4 Estacionalidad....................................................................................................47 1.9.5 Edad, paricin, periodo de lactancia y estado de salud.....................................48 1.10 Situacin Nacional...............................................................................................50 1.11 Consideraciones al aumentar el contenido de CLA en la leche..........................51 1.12 Contenido de CLA en leche y derivados..............................................................54

2. Objetivos..................................................................................................................57 2.1 Objetivo general....................................................................................................57 2.2 Objetivos especficos.............................................................................................57 3. Material y mtodos..................................................................................................58 3.1 Duracin del estudio .............................................................................................58 3.2 poca y lugar geogrfico......................................................................................58
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3.3 Nmero de animales a utilizar...............................................................................58 3.4 Caracterizacin predial.........................................................................................59 3.4.1 Sistema de alimentacin.....................................................................................60 3.5 Caracterizacin de rebaos...................................................................................61 3.6 Muestreo de leche durante la lactancia.................................................................62 3.7 Tcnica de evaluacin de CLA en leche................................................................63 3.8 Anlisis de los alimentos.......................................................................................64 3.9 Anlisis estadstico................................................................................................64

4. Resultados y discusin............................................................................................65 4.1 Resultados y anlisis de la leche de los bovinos del predio A...............................65 4.1.1 Resultados y anlisis del alimento entregado a los bovinos del predio A durante la estacin de verano...................................................................................................70 4.2 Resultados y anlisis de la leche de bovinos del predio B....................................73 4.2.1 Resultados y anlisis del alimento entregado a los bovinos del predio B durante la estacin de verano...................................................................................................77 4.3 Resultados y anlisis de la leche de bovinos del predio C (gran productor) durante la estacin de otoo........................................................................................79 4.3.1 Medicin del alimento entregado a los animales del predio C en otoo...........84 4.4 Resultado y anlisis de la leche de bovinos del predio B (pequeo productor) durante la estacin de otoo.......................................................................................88 4.4.1 Medicin del alimento entregado a los animales del predio B en otoo...........92
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4.5 Comparacin entre los predios del estudio en el contenido de cido linoleico conjugado en leche de bovinos, durante la misma estacin. .....................................97 4.5.1 Nivel de cido linoleico conjugado en leche de bovinos durante la estacin de verano..........................................................................................................................97 4.5.2 Nivel de cido linoleico conjugado en leche de bovinos durante la estacin de otoo..........................................................................................................................104 4.6. Diferencias en el nivel de CLA en la grasa de leche bovina en las estaciones de Verano y Otoo..........................................................................................................109 4.7. Anlisis estadstico.............................................................................................113

5. Conclusiones.........................................................................................................119

6. Referencias bibliogrficas....................................................................................121

ndice de tablas. Tabla 1. Diversos ismeros posicionales y geomtricos de CLA, ( % de ismeros totales) y su presencia en muestras de leche. .............................................................24 Tabla 2. Lista de algunos de los efectos benficos de CLA en la salud, informados en estudios biomdicos con modelos animales................................................................27 Tabla 3. Factores que afectan el contenido de cido linoleico conjugado, en la leche y carne de rumiantes..................................................................................................30

Tabla 4. Resumen de los factores dietticos que afectan la concentracin de cido linoleico conjugado (CLA) en la grasa de la leche.....................................................33 Tabla 5. El contenido de CLA, (% de grasa) en la leche de vacas, bajo diferentes condiciones dietarias...................................................................................................43

ndice de figuras. Figura 1. Va metablica propuesta para la biosntesis de C 18:2 cis-9, trans-11. (Bauman y Griinari, 2001)..........................................................................................20 Figura 2. Estructura de los isomeros de CLA trans-10, cis-12; cis-9, trans-11 y cido linoleico cis-9, cis-12. (Bauman et al., 2000)....................................................22

ndice de cuadros. Cuadro 1. Registro de la situacin productiva de las vacas del predio A, en Verano....................................................................................................................65 Cuadro 2. Resultados del anlisis de CLA (%p/p) en muestras de leche de vacas del predio A, en verano......................................................................................................67 Cuadro 3. Concentracin de cido linoleico y linolnico presentes en el alimento de vacas del predio A en verano. .....................................................................................70 Cuadro 4. Registro de la situacin productiva de las vacas del predio B, en Verano.....................................................................................................................73 Cuadro 5. Resultados del anlisis de CLA (%p/p) en muestras de leche de vacas del predio B, en verano......................................................................................................74
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Cuadro 6. Total de cidos grasos presentes en el alimento de vacas del predio B...................................................................................................................................77 Cuadro 7. Registro de la situacin productiva de las vacas del predio C en

otoo............................................................................................................................79 Cuadro 8. Porcentaje de ismeros de CLA en las muestras de leche en vacas del predio C durante otoo................................................................................................81 Cuadro 9. Anlisis de ismeros de CLA (% p/p) y lpidos totales (%) en alimentos de vacas del predio C.......................................................................................................84 Cuadro 10. Registro de la situacin productiva de las vacas del predio B................88 Cuadro 11. Porcentaje de ismeros de CLA en las muestras de leche en vacas del predio B durante otoo................................................................................................90 Cuadro 12. Anlisis de ismeros de CLA (% p/p) y lpidos totales (%) en alimentos de vacas del predio B...................................................................................................92 Cuadro 13. Registro del nivel de cido linoleico conjugado en leche de bovinos, del predio A y el predio B durante la estacin de Verano, expresado en porcentaje....................................................................................................................97 Cuadro 14. Registro del nivel de cido linoleico conjugado en leche de bovinos, en el predio B y el predio C durante la estacin de otoo, expresado en porcentaje..................................................................................................................104

Cuadro 15. Total de ismeros de CLA y total de CLA encontrados en la grasa de la leche bovina, expresados en porcentaje, durante la temporada de verano (predio A y B) y otoo (predio C y B)...........................................................................................109 Cuadro 16. Valores promedios, desviacin estndar (Ds), valores mximos (Mx) y mnimos (Mn) y coeficiente de variacin (CV), para la concentracin de cada ismero, expresado en % respecto al total de grasa lctea presente en muestras de leche bovina en cada predio del estudio, durante la temporada de verano..............113 Cuadro 17. Valores promedios, desviacin estndar (Ds), valores mximos (Mx) y mnimos (Mn) y coeficiente de variacin (C.V.), para la concentracin de cada ismero, expresados en % respecto al total de grasa lctea presente en muestras de leche bovina en cada predio del estudio, durante la temporada de otoo................114 Cuadro 18. Coeficiente de variacin (C.V.) para cada ismero investigado y total de CLA durante verano y otoo, expresado en % respecto al total de materia grasa en leche...........................................................................................................................117 ndice de grficos. Grfico 1. Concentracin de cido linoleico conjugado en la grasa de la leche de bovinos, predio A.........................................................................................................67 Grfico 2. Concentracin de cido linoleico y linolnico (expresado en %), en los alimentos entregados durante la estacin de verano en el predio A...................................................................................................................................70 Grfico 3. Concentracin de cido linoleico conjugado en la grasa de la leche de bovinos, predio B..........................................................................................73
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Grfico 4. Concentracin de cido linoleico y linolnico (%), en los alimentos entregados durante la estacin de verano en el predio B...........................................77 Grfico 5. Ismeros de CLA (% p/p), presentes en la leche de vacas del predio C, durante otoo...............................................................................................................82 Grfico 6. Ilustracin del porcentaje de ismeros de CLA en pradera, silo y concentrado en la estacin de otoo en el predio C...................................................85 Grfico 7. Ismeros de CLA (% p/p), presentes en la leche de vacas del predio B, durante otoo...............................................................................................................91 Grfico 8. Ilustracin del porcentaje de ismeros de CLA en pradera, silo y concentrado en la estacin de otoo en el predio B....................................................92 Grfico 9. Comparacin del nivel de cido linoleico conjugado en leche de bovinos, entre los animales del predio B y predio A durante la estacin de verano........................................................................................................................100 Grfico 10. Comparacin del nivel de cido linoleico conjugado en leche bovinos, entre los animales del predio B y predio C, durante la estacin de Otoo.........................................................................................................................107

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RESUMEN. Con el objetivo de determinar el nivel de cido linoleico conjugado (CLA) en leche bovina de los sistemas productivos del sector Vilcn de la IX regin de Chile, se analizaron muestras de leche de 21 bovinos de raza Frisn Negro provenientes de predios de pequeos y medianos productores, durante las estaciones de verano y otoo del ao 2004. Dentro del anlisis de la leche mediante cromatografa gaseosa, se determin durante la temporada de verano el nivel de los dos principales ismeros de CLA con funciones biolgicamente activas, el cis-9, trans-11 y el cis-10, trans-12. En otoo, se analizaron los ismeros cis-10, trans-12, el ismero cis-10, cis-12 y una mezcla de ismeros compuesta por cis-9, trans-11; cis-11, trans-9. Adems, se efectu un anlisis de los alimentos entregados a los animales durante ambas estaciones, a travs de cromatografa de gas-lquido, con el objetivo de determinar el nivel de cido linoleico presente en stos y de esta forma relacionarlo con la concentracin de cido linoleico conjugado medido en las muestras de leche en los bovinos del estudio. Obteniendo la mayor concentracin de cido linoleico conjugado, en leche procedente de aquellas vacas que reciban la mayor parte de su alimentacin desde las praderas, no as en los animales que se alimentaban con una menor proporcin de pasturas, por lo tanto, se registr la mayor cantidad de cis-9, trans-11 y cis-12, trans-10 en la grasa de la leche de los animales pertenecientes a los predios de pequeos productores. En ambas estaciones del estudio, el porcentaje de ismero cis-9, trans-11 (1.44% en verano y 1.42% en otoo) fue superior al encontrado para el ismero cis-10, trans-12 (1.07% en verano y 1.04% en otoo) en la grasa de leche bovina. Durante verano se obtuvo
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un valor total de 2.50 % en la grasa de la leche para los ismeros c-9, t-11 y c-12, t10 existiendo una tendencia a disminuir ligeramente en otoo (2.46%), debido a estas pequeas diferencias no se observ un efecto estacional en el sector Vilcn de la novena regin de Chile. Estos resultados demostraron que la alimentacin es el principal determinante en el aumento de CLA en leche siendo, principalmente, las dietas basadas en una mayor proporcin de praderas las que ms incrementan la cantidad de CLA en la grasa de la leche bovina.

Palabras clave: cido linoleico conjugado, leche bovina, alimentacin, praderas.

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SUMMARY. With the aim to determine the level of conjugated linoleic acid (CLA) in bovine milk of the productive system of Vilcn are in the IX region in Chile, mik samples were analysed from 21 bovine cattle of Frisn Negro race coming from farm from small and medium producers, during summer and fall of the year 2004. Within the analyses of the milk through gas chromatography, it was determined that during the summer season, the level of the main two isomers of CLA with biologically active functions, cis-9, trans-11 and the cis-10, trans-12. In fall, the isomers cis-10, trans-12; cis-10, cis-12 and a blend of isomers composed by cis-9, trans-11; cis-11, trans-9 were analysed. Besides, it was performed an analyses of the food given to the cattle during both seasons through liquid gas chromatography, in order to determine the level of linoleic acid present in these and, this way to relate it with the concentration of CLA in milk coming from cows with the most of their food from the prairies, this not happening in animals fed with less grass. Then, the most important quantity of cis-9, trans-11and cis-12, trans-10 was registered in milk fat coming from the cattle belonging to farms of small landowners. In both seasons of the study, the percentage of the isomers cis-9, trans-11 (1.44% in summer and 1.42% in fall) was higher to the one found in isomer cis-10, trans-12 (1.07% in summer and 1.04% in fall) in the bovine milk fat. In summer, it was a total value of 2.50% in the milk fat for the isomers cis-9, trans-11 and cis-12, trans-10 existing a trend to diminish slightly in fall (2.46%), due to these differences it was not noted a season effect in the Vilcn are in the IX region of Chile.

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These results showed that food is the main determinant in the increase of CLA in milk, being mainly the diets based on a higher proportion of pasture which increase the most the amount of CLA in the bovine milk fat.

Key words: conjugated linoleic acid, bovine milk, feeding, pasture.

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1. REVISIN BIBLIOGRFICA.

1.1. INTRODUCCIN.

El cido linoleico conjugado (CLA), es un cido graso de cadena larga poliinsaturada (Pinto et al., 2002) con numerosas propiedades benficas en la salud y es un componente natural derivado de los productos alimenticios de rumiantes (Peterson et al., 2002). En la actualidad se le considera un regulador metablico, con efectos hipocolesterolmicos, antiaterognicos, anticarcinognicos,

antioxidantes, e incluso presenta efectos favorables en la prevencin y/o tratamiento de ciertas alergias alimentarias (Sanhueza et al., 2002). Este cido se encuentra presente en aceites vegetales comunes como; el aceite de soya o de maz y de forma natural en la carne de los rumiantes (vacas, ovejas y cabras), as como en la leche de los mismos, (Gagliostro et al., 2002), lugar donde puede alcanzar hasta 0,65% de los lpidos totales, (Fritsche y Steinhart, 1998).

El cido linoleico conjugado, CLA esta formado por un grupo de compuestos que contienen una mezcla de ismeros posicionales y geomtricos, incluso se han identificado ms de 20 diversos ismeros de este cido, (Beaulieu y Drackley, 1999). Siendo el ismero C18:2 (cis-9, trans-11), cido octadecadienico, producto intermedio de la biohidrogenacin del cido linoleico por la bacteria ruminal Butyrivibrio fibrisolvens (Pinto et al., 2002), el ms abundante en este grupo. Este ismero, encontrado en la grasa lctea, ha sido reconocido por la Academia Nacional de Ciencias, de EE UU, como el nico cido graso que ha presentado
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inequvocamente

la

propiedad

de

inhibir

la

carcinognesis

en

animales

experimentales (Kelly et al., 1998). Otro ismero conjugado importante es el C18:2 (cis-10, trans-12), el cual puede presentar hasta cuatro ismeros geomtricos (Dhiman et al., 1999).

Sehat et al., (1998) seala que el ismero cis-9, trans-11 tendra un efecto anticancergeno y el ismero trans-10, cis-12 actuara en el aumento de la masa muscular y en la disminucin del porcentaje de grasa, pero como el CLA encontrado en carne y los productos lcteos es en su gran mayora el ismero cis-9, trans-11, se indica que las funciones biolgicas especficas del CLA pueden ser debido a la presencia de un solo ismero.

Los altos niveles de CLA en los rumiantes, se deben a que son productos intermediarios en la hidrogenacin ruminal del cido linoleico (cis-9, cis-12 C 18:2) a cido esterico (C 18:0). Resultados recientes sugieren que las clulas mamarias de los rumiantes (y tambin las adiposas) seran capaces de sintetizar el cis-9, trans-11 CLA a partir del cido vacnico y otros ismeros, por accin de la enzima delta-9 desaturasa sobre los trans C18:1 (Bauman et al., 2001). Esta enzima se encuentra en el intestino y glndula mamaria, entre otros tejidos, y acta sobre el cido transvacnico, (trans - 18:1) formando el cido linoleico producido en el rumen por la accin bacteriana, y que posteriormente, forma parte de la grasa de la leche, (Gagliostro et al., 2002).

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La concentracin de CLA en los productos lcteos es una funcin directa de su concentracin en la leche cruda, la que puede variar ampliamente ante manipulaciones precisas de la dieta en el animal. La formulacin de un concentrado tal vez sea la medida ms efectiva, rpida y de fcil implementacin a fin de modificar la composicin de la grasa butirosa en forma natural. Los resultados extranjeros demuestran un aumento potencial del orden del 300% en el contenido de CLA en leche a travs de manipulaciones precisas en la alimentacin, (Gagliostro et al., 2002). Actualmente, diversos estudios estn modificando la dieta del animal para que la cantidad de CLA en la leche producida se incremente de forma considerable, con el fin de obtener un producto que resulte aun ms beneficioso para la salud humana.

1.2 Composicin de la Grasa de Leche y CLA. Simopoulos et al., (1999) sealan que los cidos grasos constituyen no slo un aporte energtico que duplica al aporte de los carbohidratos y de las protenas, sino que varios de ellos tienen funciones metablicas especficas. Algunos de los cuales se caracterizan por su importancia en la nutricin humana, como es el caso de los cidos grasos omega-6 y omega-3 (Sanhueza et al., 2002). Eastridge y Qiu, (2001) sealan que algunos cidos grasos encontrados en la grasa lctea, incluyen aquellos que son sintetizados de nuevo en la glndula mamaria a partir del acetato y del -hidroxibutirato, extendindose a los cidos grasos de cadena media, de 4 a 16 tomos de carbn. Parte del cido palmtico (16:0) y todos los cidos grasos con 18 tomos en la cadena de carbn se derivan de los lpidos de la sangre, los que son
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predominantemente de origen diettico, con menor importancia (excepto en el periodo de la lactancia temprana, en el cual los cidos grasos endgenos aumentan, www.nutrihelpanimal.com.ar), son movilizados desde el tejido adiposo. Los cidos grasos de carbn 14 y 16 son responsables del concepto de la grasa de leche como grasa saturada, y tambin contribuyen de manera importante a la estructura fsica de la grasa. Sin embargo, un gran nmero de cidos grasos en grasa de leche, est ganando una cantidad creciente de atencin, ya que la mayora se presenta en el metabolismo microbiano rumiante y son as nicos en estos animales. Entre stos se encuentra el CLA (Eastridge y Qiu, 2001), el que debido a su origen ruminal, tambin se le identifica como "cido rumnico" (Kramer et al., 1998).

1.3 Sntesis de cido linoleico conjugado. Los compuestos denominados CLA representan productos que se forman como intermediarios durante la biohidrogenacin ruminal del cido linoleico (cis-9, cis-12 C 18:2) a cido estarico (C 18:0) (Bauman et al., 2001), por la bacteria Butyrivibrio fibrisolvens (Kepler et al., 1966) y otras bacterias del rumen (Kritchevsky, 2000) o de la conversin endgena del cido transvacnico, (t-11 C, 18:1 TVA) por la enzima delta-9 desaturasa en la glndula mamaria, (Corl et al., 2001).

Como se ilustra en la figura 1, la mayor parte de este cido en la grasa de la leche se sintetiza a travs de la va delta 9-desaturasa (D9- d), a partir del cido transvacnico (TVA), un intermediario en la biohidrogenacin ruminal del cido
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linoleico y linolnico (Griinari et al., 2000). El resto del CLA en la grasa de la leche surge directamente del CLA absorbido por el tracto digestivo, para luego ser producido en el rumen como un intermediario en la biohidrogenacin del cido linoleico.

Las clulas mamarias de los rumiantes (y tambin las adiposas) seran capaces de sintetizar el cis-9, trans-11 CLA a partir del TVA y otros ismeros por accin de la enzima delta-9 desaturasa sobre los trans C18:1 (Bauman et al., 2001). La concentracin de esta enzima en la grasa de la leche, es sumamente variable y depender del tiempo durante el cual la vaca est consumiendo pasturas. Las condiciones ptimas para la sntesis de CLA en la leche se producen a partir del aporte de cidos grasos insaturados provenientes de forrajes frescos que aseguran un ambiente ruminal ptimo para la fermentacin, (www.nutrihelpanimal.com.ar).

C18:2 cis-9, cis-12 (cido linoleico) Isomerasa C18:2 cis-9, trans-11 (CLA) Reductasa C18:1 trans-11 (cido vacnico) Reductasa C18:0 (cido esterico)

C18:2 cis-9, cis-12 (cido linoleico) C18:2 cis-9, trans-11 (CLA) D9-d C18:1 trans-11 (cido vacnico)
D9-d

C18:0 C18:1 cis-9 (cido esterico) (cido oleico) Glndula mamaria o tejido Adiposo.

Rumen.

Figura 1. Va metablica propuesta para la biosntesis de C18:2 cis-9, trans-11. (Bauman y Griinari, 2001).
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1.4 Estructura del cido linoleico conjugado. La isomera geomtrica de los cidos grasos es importante en trminos nutricionales. La gran mayora de los cidos grasos que se encuentran naturalmente poseen isomera cis, sin embargo en la dieta habitual de los humanos se consume una pequea, pero no despreciable, proporcin (1g a 7 g/da) de cidos grasos con isomera trans (Valenzuela y Mogardo, 1999).

La estructuracin de los dobles enlaces de los cidos grasos naturales obedece a un patrn muy caracterstico y conservador. En un cido graso diinsaturado, ambos enlaces siempre estarn separados por un carbono intermedio que no participa de la estructura de instauracin. Esto es en un cido graso donde los dobles enlaces estn entre los carbonos 9-10 y 12-13, el carbono 11 no participar de la estructura de instauracin. Esta sera una estructura no conjugada y al carbono 11 se le designara como un carbono metilnico intermedio. Este es el caso de la estructura de la mayora de los cidos grasos en su forma natural. Sin embargo, como consecuencia de la manipulacin tecnolgica de las grasas y aceites, o en casos muy particulares, por efecto de la metabolizacin a nivel celular de ciertos cidos grasos, es posible que un doble enlace cambie de posicin, siguiendo el ejemplo anterior, desde la posicin 9-10 a la 10-11 o de la posicin 1213 a la 11-12. En ambos casos desaparecera el carbono metilnico intermedio y el cido graso formado se transformara en una estructura conjugada. La conjugacin de los dobles enlaces puede, adems, ocasionar un cambio en la isomera espacial del cido graso. Esto es, en un cido graso diinsaturado cuyos dobles enlaces

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tienen isomera cis (c), uno de estos dobles enlaces, o ambos, pueden adoptar la isomera trans (t).

El CLA (cis-9, cis-12), un cido graso omega-6, es muy abundante en el reino vegetal y en la grasa animal. Bauman, (2002) seala adems, que el CLA, est representado por una mezcla de ismeros posicionales y geomtricos de un cido graso de 18 carbonos con dos enlaces dobles. Los pares de enlaces dobles del cido graso poseen, generalmente, un grupo metileno entre ellos, pero el CLA presenta un arreglo conjugado. La presencia de cidos grasos con enlaces dobles conjugados, fue demostrada en 1935 cuando se estudiaba la leche de animales alimentados a pastoreo. Tericamente, muchos ismeros de CLA pueden diferir en las posiciones del enlace doble (por ejemplo, 7-9, 8-10, 9-11, 10-12, y as sucesivamente). Los dos ismeros de CLA, ms estudiados son cis-9, trans-11 y trans-10, cis-12. En la figura 2, sus estructuras se diferencian del cido linoleico, un cido graso diettico esencial que tambin contiene 18 carbonos y 2 enlaces dobles. Diferencias adicionales, entre los ismeros de CLA, pueden existir en la configuracin del doble enlace, como los cis-trans, trans-cis, cis-cis o trans-trans, siendo todos posibles.

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CLA trans-10, cis-12

CLA cis-9, trans-11

cido linoleico cis-9, cis-12

Figura 2. Estructura de los ismeros de CLA trans-10, cis-12; cis-9, trans-11 y cido linoleico cis-9, cis-12. (Bauman et al., 1999).

1.5 Ismeros de CLA. Los cidos linoleicos conjugados representan una mezcla de ismeros posicionales y geomtricos (tabla 1) (Bauman, 2002).

Este cido (linoleico conjugado) presenta diferentes ismeros; cis-7, trans-9; cis9, trans-11; cis-11, trans-13 principalmente, (Fritsche y Steinhart, 1998), pero, como se indica en la tabla 1, la forma biolgicamente activa y ms importante de los CLA est representada por el ismero cis-9, trans-11 compuesto que representa ms del
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90% de los CLA y constituye el nico cido graso capaz de inhibir la carcinognesis en animales experimentales (Parodi, 1999), en la leche de rumiantes es el ismero ms frecuente, cuyos niveles fluctan en 80%-90% (Chin et al., 1993). No obstante, cis-11, cis-9 recientemente ha sido indicado como un ismero ms efectivo contra clulas cancergenas mamarias (Tanmahasamut et al., 2004), pero su presencia en la leche y carne de rumiantes se ha informado raramente, (Khanal y Olson, 2004).

Aunque biolgicamente activo, el ismero

cis-12, trans-10 se encuentra

presente en cantidades menores al 5% del CLA total y no se ha detectado en muchos casos. Otro ismero de importancia cuantitativa, para el cual su papel biolgico es desconocido es cis-9, trans-7 que comprende el 3 a 16% de CLA total en productos rumiantes (Yurawecz et al., 1998).

Baumgard et al., (2000) demostraron que el ismero de CLA trans-10, cis-12 es un inhibidor potente de la sntesis de la grasa de la leche. Recientemente, las investigaciones que usan los mtodos analticos ms avanzados han revelado que la grasa de leche tiene vestigios de concentraciones de muchos ismeros adicionales de CLA. Por ejemplo, el anlisis de los productos comerciales como el queso demostr contener como ismero predominante (78-84%) al cis-9, trans-11, pero los ismeros adicionales de CLA fueron identificados como siete trans-trans (59%), tres cis/trans (cis-trans o trans-cis) (10-13%) y cinco ismeros cis-cis (<1%) (Sehat et al., 1998).

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Tabla 1. Diversos ismeros posicionales y geomtricos de CLA, ( % de ismeros totales) y su presencia en muestras de leche. Ismeros posicionales y geomtricos de CLA. Ismeros presentes en leche. (%)

Ismeros cis, trans 9, 7 8, 10 9,11 12,10 11,13 11,13 12,14 Total cis, trans (trans, cis) Ismeros trans, trans 8,6 9,7 10,8 11,9 12,10 13,11 14,12 15,13 Total trans, trans Ismeros cis, cis 10,8 11,9 12,10 13,11 Total cis, cis Modificado de Khanal y Olson, (2004). 5.5 1.5 72.6 0.4 7.0 0.7 87.7 2.4 0.4 2.0 0.6 4.2 2.8 12.3 -

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1.6 Beneficios de CLA en la salud. El trmino, alimentos funcionales se utiliza a menudo como una descripcin genrica para referirse a los efectos beneficiosos de los alimentos ingeridos, el que va ms all de su valor nutritivo tradicional (Bauman et al., 2001). Muchos componentes de la grasa de leche que poseen caractersticas anti-cancergenas se han identificado, pero el componente que ha recibido el foco de atencin es el cido linoleico conjugado (CLA). El descubrimiento de CLA como un alimento funcional ocurri hace ms de dos dcadas cuando Pariza et al., (2001) encontraron en la carne un factor anti-mutagnico que consista en una serie de ismeros conjugados del cido linoleico. Luego, varios estudios demostraron que el CLA sintetizado qumicamente poda reducir la incidencia de varios tipos de tumores en modelos animales. Pero, la mayora de los agentes naturalmente anti-cancergenos se encontraban presentes slo en niveles traza y eran de origen vegetal. Sin embargo, el CLA era el nico entre los agentes anti-cancergenos naturales que presentaba potentes efectos en niveles extremadamente bajos y que se encontraba presente en los productos lcteos y la carne de animales rumiantes (Bauman, 2002). Mientras el CLA se estudiaba biomdicamente se evidenci que ste presentaba una gama de efectos positivos en la salud de animales experimentales, algunos de los cuales se sealan en la tabla 2. Estos efectos beneficiosos incluan; la reduccin en el aumento de las grasas corporales, retraso en el inicio de la diabetes tipo II, retardo en el desarrollo de la arterosclerosis, mejoramiento de la mineralizacin de los huesos y modulacin del sistema inmune (Belury, 2002). Lo cual, ha dado lugar

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a un aumento exponencial en la investigacin de CLA en los ltimos aos, (Bauman, 2002). Tabla 2. Lista de algunos de los efectos benficos de CLA en la salud, informados en estudios biomdicos con modelos animales.

Efectos biolgicos. Anticancergeno (estudios en vivo e in vitro) Antiaterognico Alteracin del metabolismo nutricional y lipdico Antidiabetognico ( diabetes tipo II) Realza la Inmunidad Mineralizacin mejorada del hueso Modificado de Bauman, (2002).

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1.7 Cuantificacin de la cantidad de CLA presente en la leche. La cuantificacin de la cantidad o concentracin de CLA presente en la leche y en derivados lcteos puede realizarse mediante: Cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) Cromatografa de Gas (GC) HPLC de fase reversa con luz UV

La extraccin de CLA desde la leche puede realizarse con ter/ dietilter y metilacin con NaOCH3, los steres de cidos grasos en general son separados por GC.

Dentro de los mtodos sealados, Jenkins (2000) indica que el advenimiento de la cromatografa Gas - Lquido ha contribuido definitivamente al conocimiento de la composicin de los cidos grasos de la leche. Y la incorporacin de columnas capilares en el estudio ha mejorado significativamente el conocimiento sobre este tema.

1.8 Situacin Mundial. En Australia, Thomas y Rowney (1996) realizaron un muestreo anual de leche de rebaos en tres regiones del sur-este de este pas. En el muestreo (leche de rebaos) se presentaron los valores ms altos en los cidos de cadena larga (C18 C18:2 conjugados) durante el perodo de verano-otoo y los ms bajos en el perodo de invierno e inicios de primavera.

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Martnez Castro et al., (1979), analizaron durante un ao la leche de rebaos de ocho regiones de Espaa y al considerar un cido tpico de cadena larga como el C18:1, el valor promedio encontrado en el pas Europeo era de 24,90 % con un rango entre 19, 74 y 31,24 %. Ms tarde, Kelly et al., (1998), investigaron el efecto de la dieta (ensilaje y heno, versus praderas) en dos grupos de 8 vacas Holstein, en la concentracin del CLA. El grupo con dieta en base a heno y ensilaje present concentraciones de C18:2 conjugado que fluctuaban entre 0,3 y 0,9 %, en cambio el grupo alimentado con praderas present niveles de 0,6 a 1,8 % de CLA.

Jiang et al., (1996), encontraron una variacin de 0,25 a 1,77 % de CLA en la grasa lctea y sugirieron que el contenido de este cido en la leche podra ser incrementado al modificar la dieta del ganado bovino. Luego, Dhiman et al., (1999), experimentando con diferentes tipos de dietas lograron concentraciones de CLA, en la grasa lctea, que fluctuaron entre 0,89 a 2,21 %, cuando la alimentacin era en base a pradera. Concluyeron, de este modo, que este importante componente puede incrementarse mediante prcticas nutricionales y de manejo, las que se sealan a continuacin.

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1.9 Factores que afectan la produccin del cido linoleico conjugado en las vacas lecheras. Las variaciones en la composicin de los cidos grasos de la materia grasa de la leche de bovinos, son la resultante de los sistemas de alimentacin, del perodo de lactancia, de la variacin estacional y del rea geogrfica, influyendo tambin el grado de mastitis y la raza, entre otros, (Pinto et al., 2002). Asimismo, Khanal y Olson, (2004) sealan que numerosos factores parecen influenciar el contenido de CLA en la leche, en la carne, y en otros productos alimenticios de varias especies animales, los cuales se sealan en la Tabla 3 y que se podran clasificar de manera amplia en; la dieta, el animal y el procesamiento de los productos como un factor relacionado. De todo estos factores, el ms importante es la dieta del animal y se puede manipular en gran parte, para aumentar la concentracin de CLA en productos alimenticios de rumiantes. Mientras la variacin individual animal-animal, es tambin de gran consideracin, el procesamiento como un factor relacionado parece ser de importancia secundaria.

Adems, Khanal y Olson, (2004) indican que la comprensin de los diversos factores que afectan el contenido de CLA en productos alimenticios tiene implicaciones prcticas en lechera y al considerarlos, es posible enriquecer los productos alimenticios que pueden derivar en beneficios potenciales de la salud asociados con CLA.

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Tabla 3. Factores que afectan el contenido de cido linoleico conjugado, en la leche y carne de rumiantes. FACTORES A.DIETA I.Pasturas Fresco / exuberante pasto verde Pasturas + grasa entera de extrudo de soya Pasturas + aceite de soya Pasturas + aceite de pescado Madurez del pasto Diversidad de las especies vegetales Altura del pasto Pasto recientemente cortado II. Alta cantidad de forraje III. Alta cantidad de grano IV. Semillas oleaginosas V. Aceite de semillas asadas / comida VI. Extrudo de semillas oleaginosas VII. Aceites vegetales VIII. Comida de pescado IX. Aceite de pescado X. Sales de Ca de cidos grasos XI. Algas marinas XII. pH ruminal XIII. suplementacin de CLA XIV. Grasas trans XV. Ionoforos XVI. Baja energa de la dieta B. ANIMAL I. Especie II. Raza III. Etapa de lactancia IV. Paricin V. Edad VI. Animal-animal EFECTO EN EL NIVEL DE CLA

Altamente positivo No afecta No afecta Positivo Negativo Positivo regin montaosa> montaa> tierra baja Fresco>conservado Positivo Negativo Mnimo Positivo Positivo, ms que el aceite de semillas asadas Positivo, ms que semillas procesadas Positivo, tan eficiente como las semillas vegetales Positivo, tan eficiente como los aceites vegetales Positivo Positivo >6.0 pH positivo Positivo Positivo Probablemente positivo Probablemente positivo Rumiantes>no-rumiantes Holstein>pardo suizo>Normando>Jersey Mnimo Mnimo

**

Positivo con alta actividad de delta9desaturasa. C. PROCESAMIENTO, GENERAL DE PRODUCTOS LCTEOS. Debatible

** An no se ha determinado el efecto.
Modificado de Khanal y Olson, (2004)
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1.9.1. Factores alimenticios. Bauman, (2002) seala que las variaciones en el contenido de CLA en la grasa de leche entre distintas especies de bovinos se deben, principalmente, a la dieta.

Durante los ltimos 5 aos de investigacin se han identificado muchos factores dietticos que afectan el contenido de CLA en la grasa de la leche. Como se resume en la tabla 4, Bauman et al., (2001) seala que estos efectos dietticos se agrupan en categoras concernientes al mecanismo potencial por el cual pueden actuar.

La primera categora incluye los factores dietticos que proporcionan

sustratos lpidicos para la biohidrogenacin en el rumen. Los aceites vegetales con alto contenido de cidos linoleicos y linolnicos son particularmente eficaces. stos conducen al aumento de la salida desde el rumen de cido vacnico y en menor grado a los ismeros de CLA.

El segundo grupo consiste en los factores dietticos que alteran el ambiente

ruminal de tal modo que afectan las bacterias implicadas en la biohidrogenacin del rumen. El forraje juega un rol importante y puede afectar marcadamente el

ambiente ruminal y la biohidrogenacin en el rumen.

El tercer grupo incluye los factores dietticos que implican una combinacin

de sustratos lpidicos y de la modificacin de la poblacin de bacterias en el rumen. El pasto, es un ejemplo, ya que aquellos animales que se alimentan de una pradera exuberante durante la primavera obtendran una proporcin de CLA en la grasa de
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la leche doble o triplemente mayor que aquellas dietas basadas en maz. Sin embargo, cuando el pasto madura esta diferencia en CLA disminuye.

Pero, tambin la grasa de la leche y el contenido de CLA puede ser aumentado agregando suplementos dietticos de CLA. Las ultimas investigaciones han establecido que los suplementos dietticos de CLA tienen como resultado un aumento de la dosis relacionada en la concentracin de CLA en la grasa de leche. Los suplementos han contenido varios ismeros de CLA, principalmente trans-8,cis10 CLA, cis-9, trans-11 CLA, trans-10, cis-12 CLA y cis-11, trans-13 CLA, y los resultados demostraron que todos los ismeros de CLA eran transferidos a la grasa de la leche, (Bauman, 2002).

Tabla 4. Resumen de los factores dietticos que afectan la concentracin de cido linoleico conjugado (CLA) en la grasa de la leche. Primera Categora Sustratos lipdicos Aceites vegetales Semillas oleaginosas Aceite de maz y ensilaje Grasas animales Segunda Categora Alteracin del ambiente ruminal Forraje/ concentrado Nivel de carbohidratos no estructurales Alimentacin restringida Aceite de pescado y aceites en general Algas marinas Ionoforos Dietas buffers Modificado de Bauman, (2002). Tercera Categora Combinacin de ambas Pasturas Etapa de crecimiento del forraje

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1.9.1.2 Grasas, aceites y semillas oleaginosas. La manipulacin de la dieta animal implica principalmente el suplementar cido linoleico o cidos linolnicos (cis-9, cis-12, cis-15 C18:3, LNA) como sustratos para la biohidrogenacin en el rumen. Dependiendo del tipo de aceite vegetal o de semillas oleaginosas, que posean cido linoleico o cido linolnico (LNA), como las pasturas en las que predomina el LNA y aceite de pescado, el que contiene cidos grasos insaturados de 20 o 22 carbonos, el efecto diettico se relacionaba ms a la composicin de los cidos grasos insaturados de la materia utilizada, que a cualquier otro factor en la alimentacin, (Khanal y Olson, 2004). Santos et al., (2001), estudiaron el efecto de la suplementacin de lpidos en la racin y comprobaron que estos incrementaban los cidos estericos, cido oleico y CLA, contenidos en la leche. La adicin de aceite de soya en la dieta, disminuy el contenido de cido linoleico y cidos grasos saturados, e increment el nivel de CLA y cidos grasos no identificados. En consecuencia, aumentaba el contenido de CLA en la grasa de la leche.

Dhiman et al., (2000), agreg a la racin de vacas semillas oleaginosas asadas y extrudas y demostr que estas presentaban un mayor efecto en el contenido de CLA en la leche que las semillas crudas, lo cual era producto de la baja liberacin de aceite que contienen las semillas crudas en el rumen, comparadas con aquellas semillas que son tratadas con calor. La baja liberacin de aceite, conduca a la biohidrogenacin completa de cido linoleico a cido stearico en el rumen, lo que produca poco o ningn efecto en el contenido de CLA en la grasa de la leche. Adems, los microorganismos responsables de la biohidrogenacin de cidos
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grasos poliinsaturados deben tener acceso al aceite, que probablemente, es muy bajo en semillas crudas, (Khanal y Olson, 2004). Chouinard et al., (1997) administraron soyas procesadas: molidas, micronizadas, asadas, o extrudas y demostraron que al alimentar a las vacas con soyas extrudas el contenido de CLA en leche era ms alto, que aquellas alimentadas con soyas molidas. En otro estudio ms reciente Chouinard et al., (2001) demostraron que las soyas extrudas, micronizadas o asadas producan un incremento doble o triple sobre el contenido de CLA en la leche, lo que no suceda en vacas alimentadas con una dieta control que contena soyas sin procesar. Al respecto Khanal y Olson, (2004) indican que los cidos grasos eran accesibles a los microbios del rumen cuando las semillas oleaginosas eran procesadas y ese tratamiento trmico aumentaba an ms la accesibilidad.

Whitlock et al., (2002) sealaron que el aceite de pescado es tan efectivo en el aumento del contenido de CLA en la leche, como los aceites vegetales o las semillas oleaginosas. Pero, si se administra una gran cantidad de aceite de pescado (200 o 400 ml/d), se reduce generalmente la grasa de la leche, por lo tanto, disminuye el CLA, as como el rendimiento de TVA. Sin embargo, Abu-Ghazaleh et al., (2003) demostraron que era posible aminorar la reduccin de la grasa de la leche combinando el aceite de pescado con otras fuentes de cido linoleico y cidos linolnicos. Por ejemplo, al administrar 1% de aceite de pescado junto a 2% de semillas de girasol que contenan un elevado nivel de cido linolnico, demostraron que se obtena una mayor concentracin y produccin de CLA y TVA, que con 1% de aceite de pescado ms una fuente de grasa del 2% rica en cido esterico.
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Asimismo, en algunos ensayos se lograron tambin altas concentraciones de CLA en grasa de leche de vacas, alimentadas con 1% a 2% de aceite de girasol junto a 3% de aceite de pescado durante la lactancia, estos altos niveles siempre estaban asociados con un elevado contenido de cido vacnico y con una importante sntesis endgena de delta-9 desaturasa en la glndula mamaria, (www.nutrihelpanimal.com.ar).

Abu-Ghazaleh et al., (2002), indicaron que era posible aumentar la concentracin de TVA y CLA desde 91% a 109% cuando se administraba aceite de pescado y extrudo de soya en forma conjunta, pero en forma separada no se observaban efectos significativos. Lo que sugera que el aceite de pescado junto al extrudo de soya aumentaba la produccin de CLA y de TVA ms que otras fuentes dietticas de cido linoleico.

Khanal y Olson, (2004) sin embargo, indican que el mecanismo por el cual la suplementacin con aceite de pescado aumentaba la concentracin de CLA y TVA en la leche an no estn claros. El aceite de pescado es rico en cidos grasos poliinsaturados de cadena larga de 20 y 22 carbonos. Y estos cidos grasos

probablemente, no son capaces de producir CLA y TVA directamente durante la biohidrogenacin en el rumen. Se ha propuesto que las largas cadenas de cidos grasos poliinsaturados de aceite de pescado, inhiben la biohidrogenacin completa de cido linoleico en el rumen, inhibiendo as el crecimiento de bacterias

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responsables de hidrogenar TVA, o inhibiendo las hidrogenasas, lo que conducira a un gran escape de TVA desde el rumen.

Khanal y Olson, (2004) adems, indican que otra forma de suplementar cidos grasos es la grasa o sebo, la cual es rica en cidos grasos de cadena larga saturada, administrndola de dos formas; protegida o no-protegida. Pero, su efecto en el CLA es mnimo (Chouinard et al., 1998), debido a que el carbono 18 de cido graso insaturado es el que produce CLA o TVA a travs de la biohidrogenacin en el rumen, no as el cido graso saturado que se presenta en grandes cantidades en la grasa. Pantoja et al., (1996) indicaron que aquellas vacas suplementadas con 4% o 5% de sebo en su dieta, presentaban una baja concentracin de TVA (1.6 %) en la grasa de la leche. Al respecto, Chilliard et al., (2001) sealaron que la grasa protegida permite un incremento en el rendimiento de la grasa en la leche, el porcentaje de cido esterico de la leche y cidos oleicos, a partir de la cadena de cidos grasos. Sin embargo, es necesario evaluar las distintas estrategias de alimentacin que podran cambiar otros aspectos de la grasa de la leche, la calidad, el sabor, la estabilidad oxidativa o el valor industrial.

1.9.1.3 Efecto de la energa en la concentracin de CLA. Se ha demostrado que las vacas que han sido alimentadas con menos energa que la requerida, han producido una grasa de leche con disminuciones significativas en las concentraciones de cidos grasos de cadena corta y media pero, producen un aumento de cidos grasos C18:1, comparado con la leche de vacas alimentadas de manera adecuada (Timmen y Patton, 1988). Sin embargo, no es claro cuanto, de
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tal aumento en C18:1 influira en el TVA lo que eventualmente contribuira al CLA de la leche. An se desconoce si las vacas que han presentado una disminucin de energa mientras pastorean, contribuyen al incremento de CLA. Si este fuera el caso, sera interesante saber si el contenido de CLA en la leche podra ser aumentado disminuyendo el contenido de energa de la racin total, (Khanal y Olson, 2004).

Overton, (2002) sugiere una estrategia, con el objetivo de disminuir la alta demanda energtica en las vacas en perodo de transicin y as disminuir la liberacin de reservas corporales y la produccin de cidos grasos no esterificados (AGNE). Esta estrategia consiste en suministrar ismeros de cido linoleico conjugado (CLA), por ser estos unos inhibidores muy fuertes de la sntesis de grasa en la leche. Concluyendo que el CLA, a pesar de no disminuir la liberacin de grasa corporal, causaba un ahorro de energa debido a una menor sntesis de grasa en la leche y esa energa se diriga a la sntesis de lactosa, por lo cual el uso de CLA era una herramienta de manejo alimenticio para incrementar el pico de produccin de leche, (Campabadal, 2002).

Por otro lado, los Ionoforos parecen tener algunos efectos positivos el contenido graso de CLA en la leche (Fellner et al., 1999).

Adems, se deben considerar los efectos positivos que se producen, en CLA y en el contenido de TVA en el rumen, al mantener el pH ruminal en 6.0 o sobre 6.0 (Troegeler-Meynadir et al., 2003). El pH Ruminal podra, probablemente, estar
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ligado al incremento de CLA en la grasa de la leche cuando las vacas se alimentan de dietas con altas proporciones de forraje, pero no cuando estas se alimentan con bajo contenido de este alimento (Jiang et al., 1996). Esto es de gran importancia en el aumento del rendimiento de la leche, (en vacas lecheras) y de la carne (en animales de carne) al incluir grandes cantidades de grano para aumentar la concentracin de energa de la dieta y as disminuir el pH del rumen bajo 6,0. El efecto de aumentar la concentracin de energa de la dieta, sin disminuir el pH del rumen puede tener un significado prctico para aumentar la concentracin de CLA y el rendimiento de la grasa de la leche (Khanal y Olson, 2004).

1.9.1.4 Praderas. Dhiman et al., (1999), indicaron que las vacas que han sido alimentadas permanentemente a pastoreo natural han presentado 500% ms de CLA comparadas con aquellas que se alimentaron con una mezcla de racin total que contena forraje conservado y grano. Y que el heno, en cambio, no influy en el contenido de CLA en la leche. En Ohio durante mayo del ao 2000, Eastridge y Qiu, (2001), realizaron un estudio comprobando que exista una concentracin creciente de CLA en la leche, al disminuir la cantidad de grano en la alimentacin, (o al aumentar la cantidad de forraje consumido). As, la concentracin de CLA en leche parece ser ms alta para las vacas que pastan forraje que para las vacas alimentadas con cualquier otra dieta. Al estudiar el efecto de la administracin de forraje fresco sobre la concentracin del cido linoleico conjugado en la grasa de leche en vacas de lactancia, se demostr que cuando las vacas del grupo tratamiento consuman slo
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forraje, las concentraciones del cido linoleico conjugado en la grasa de leche aumentaban al doble. Entonces, la concentracin del cido linoleico conjugado en la grasa de leche puede ser incrementada con la ingestin del forraje fresco.

Sobre el efecto de los distintos tipos de forraje en la composicin grasa de la leche, cabe destacar que la alimentacin de vacas con pasturas, parece producir un alto contenido de cido linoleico y grasas en la leche, ms que aquellos alimentos de forraje conservado o maz. Pero, la magnitud de esta diferencia es limitada. Las comparaciones indirectas indican que la grasa de la leche en dietas con ensilaje de maz, son ms ricas en cidos grasos de cadena corta y cido linoleico, comparadas con dietas de forraje conservado de pradera. El forraje fresco comparado con el forraje conservado, favorece la cantidad de cido mirstico y cido palmtico, a partir de cidos grasos mono y poliinsaturados, incluyendo el CLA. (Chilliard et al., 2001).

Khanal et al., (2002) Khanal et al., (2003 a) y Kay et al., (2002) suplementaron la alimentacin de vacas en pastoreo sin embargo, no encontraron aumentos en el nivel de CLA en la grasa de la leche comparado con aquellas vacas que se alimentaban slo con praderas. Pero, Kay et al., (2003) demostr recientemente que el contenido de CLA en vacas que pastoreaban se podra aumentar con la suplementacin de aceite de pescado o aceite de pescado junto a aceite de girasol, pero no slo con aceite de girasol. Por otra parte, al agregar aceites vegetales a la dieta de vacas en pastoreo aumentaba generalmente el CLA en leche, sin embargo, no es frecuente que lo haga a una concentracin mayor al 2% o 2,5%. (www.nutrihelpanimal.com.ar)
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Estos resultados sugirieron que la fuente de alimentacin que inhiba la hidrogenacin adicional de TVA a cido esterico realzara el contenido de CLA. Pero, no hay investigaciones que indiquen lo que sucede al suplementar vacas que pastorean con otras fuentes de cido linoleico y cidos linolnicos u otros cidos grasos que inhiban la biohidrogenacin adicional de TVA a cido del esterico, disminuyendo por consiguiente el CLA (Khanal y Olson, 2004).

Al parecer cuando las vacas se alimentan de un pasto fresco de la temporada que posee cadenas de C-3 contiene 50% ms de cidos grasos totales y de cidos linoleicos, lo que aumentara el contenido de CLA en la leche (Dhiman et al., 1999) mucho ms que los pastos de estaciones calurosas, que poseen carbonos-4 y que contienen menos de 40% de cidos grasos totales como de cidos linoleicos (White et al., 2001). Un pasto maduro, tiene las proporciones ms altas de C y C y menos cidos linoleicos, adems no es probable que produzca tanto CLA en la leche como lo hace el pasto que es verde y exuberante pastoreado por las vacas lecheras, (Loor et al., 2002).

Aquellas vacas que reciben toda su alimentacin desde las praderas producen una grasa de leche con el contenido ms alto de CLA, no as las que reciben un tercio o dos tercios de su dieta con pasturas (Dhiman et al., 1999).

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La diversidad de especies de forrajeras disponibles en el pasto aumentaba tambin el contenido de CLA en la leche (Collomb et al., 2002a), lo mismo ocurra cuando aumentaba la altitud del pasto (Collomb et al., 2002b).

Sin embargo, al administrar una dieta con bajo contenido de forraje (en razn de 30:70 forraje/ concentrado), se reduca el pH del rumen bajo 6.0 lo que produca un efecto negativo en la concentracin de CLA y TVA, (Troegeler-Meynadir et al., 2003).

Como se observa en la tabla 5, resultado de diferentes dietas, es posible apreciar una variacin en el porcentaje de CLA que contiene la grasa de la leche de diferentes especies de bovinos.

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Tabla 5. El contenido de CLA, (% de grasa) en la leche de vacas, bajo diferentes condiciones dietarias. Raza Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Holstein Jersey Jersey Pardo Suiza Normando Dieta (mezcla de racin total) TMR Slo Pasturas Slo Pasturas Pasturas + extrudo de soya Pasturas + extrudo de semilla de rap TMR + semillas de canola TMR + semillas roleadas Pasturas + mezcla de granos TMR + 1% aceite de pescado Pasturas + 150 g aceite de pescado TMR + 3.6% aceite de soya TMR + 5.3% aceite de linaza TMR + 5.3% aceite de girasol TMR Pasturas + 5.5 kg concentrado TMR Slo pasturas Porcentaje de CLA. 0.44 2.5 1.7 1.7 2.5 1.4 1.2 0.72 0.73 3.3 2.1 1.67 2.44 0.32 0.59 0.41 1.7

TMR : mezcla total de racin. Modificado de Khanal y Olson, (2004).

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1. 9.2. Variacin entre individuos. La variacin entre animales es tambin uno de los factores que produce diferencias en el porcentaje de CLA obtenido en la grasa de la leche (Bauman, 2002). La variacin entre los individuos, en el nivel de CLA en la grasa de la leche, parece estar afectada por dos razones. Primero, las vacas parecen tener diferentes producciones ruminales de cido vacnico y CLA, an cuando todos los animales consumen la misma dieta. Esta variacin est probablemente relacionada con diferencias individuales como; el modelo alimenticio y la frecuencia de masticacin, lo que afectara el ambiente ruminal. La segunda razn es que las vacas se diferencian en la actividad de la delta9-desaturasa y en la sntesis endgena de CLA en la glndula mamaria. Probablemente, esta variacin entre individuos reflejara diferencias en la delta9-desaturasa, lo que implicara la regulacin de la expresin de genes, polimorfismo de los genes que afectan la estructura primaria o terciaria de la enzima, modificaciones post-transicionales, o factores que afectaran la interaccin entre enzima y el sustrato o producto (Peterson et al., 2002). Esto claramente, ofrece el potencial para la seleccin gentica y es un rea de futura investigacin (Bauman, 2002). Por otro lado, Kelsey et al., (2003) sealaron que numerosas investigaciones han demostrado que la alimentacin tiene un efecto sustancial en el contenido de CLA en la grasa de la leche, pero los factores fisiolgicos y las variaciones entre individuos no han sido bien estudiadas. La variacin entre individuos incluye las diferencias relacionadas con la biohidrogenacin en el rumen y con la actividad de
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la delta9-desaturasa en la glndula mamaria (Peterson et al., 2002). Muchos estudios han observado que las diferencias sustanciales causan un aumento (Jiang et al., 1996) o una disminucin (Stanton et al., 1997) en el contenido de CLA en la grasa de la leche. Sin embargo, la variacin individual no se ha considerado, y ningn estudio ha examinado, especficamente, la variacin individual sobre el contenido de CLA en la grasa de la leche. Segn Bauman et al., (2001) las diferencias en el contenido de CLA en la grasa de la leche entre vacas que han sido bien alimentadas son de poca o ninguna importancia para explicar la variacin entre individuos y afirma que el contenido de CLA en la leche, ms bien es dependiente de la produccin en el rumen de trans-11 C18:1 y CLA, as como de la actividad de la delta 9-desaturasa en los tejidos. Ms tarde, Peterson et al., (2002) observaron que la variacin sustancial de la leche en el contenido de grasa de CLA entre animales y a travs de dietas era semejante a estudios previos. Demostraron tambin que animales individualmente eran bastante constantes con el tiempo; la jerarqua individual de los animales se mantena, an cundo se administraban diferentes dietas que podran cambiar el contenido de CLA. Esto sugiri que la produccin en el rumen de trans-11 C18:1 y CLA varan entre individuos con la misma dieta, lo cual representara la base de la variacin individual sobre el contenido de CLA en la grasa de la leche. Delta 9desaturasa es una enzima clave en la sntesis endgena de CLA y de la leche. La proporcin grasa de los pares de cidos grasos, que representa los poderes para esta enzima varia tambin, sustancialmente, an entre animales con una misma

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dieta. As, las diferencias entre individuos en la delta 9-desaturasa contribuyen a la variacin de la leche en el contenido graso de CLA. Eastridge y Qiu, (2001), demostraron que el CLA en la leche podra incrementarse mucho ms mediante la sntesis endgena en la glndula mamaria, que a partir de la biohidrogenacin ruminal. Entonces, mientras la dieta es un determinante mayor de CLA en la grasa de leche, algunos animales poseen un potencial ms grande para responder a un tratamiento diettico que otros, y estas diferencias en la respuesta son consecuentes con el tiempo y a travs de mltiples cambios en la dieta (Peterson et al., 2002).

1. 9.3 Raza. Algunas de las variaciones en el nivel de CLA observado entre vacas se presentan debido a la raza, (Khanal y Olson, 2004).

White et al., (2001) demostraron que dando una misma dieta la raza Holstein presentaba un nivel ms alto de CLA en la grasa de leche que las razas Jersey y Normando.

Kelsey et al., (2003), sin embargo, observaron una variacin secundaria en el contenido graso de CLA en la leche, entre Holstein y Jersey alimentadas con una misma dieta y determinaron que la raza contribua slo a aproximadamente el 1% de la variacin total. Adems, indicaron que la raza Holstein vs. Pardo Suiza, tienen una pequea relacin entre la variacin individual sobre el nivel de CLA y de CLA
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desaturasa, comprobaron que en general, la produccin de leche y la composicin de leche eran caractersticas de cada raza. La raza Holstein tena una gran produccin de leche, mientras la raza Pardo Suiza en promedio, presentaba el contenido ms alto de grasa y protena en la leche. Los rendimientos diarios de la grasa de leche y la protena de la leche eran similares entre las dos razas.

Lawess et al., (1999) compararon cuatro razas, Holstein/ Friesian Irlandesas, Holstein/Friesian Holandesas, Montbeliardes y Normando. Y comprobaron que la raza tiene poco efecto, pero la raza Montbeliardes, promedi cerca de 13% ms contenido de CLA en la grasa de la leche que las otras tres razas.

1.9.4 Estacionalidad. Los Cambios en la composicin de cidos grasos insaturados (FA) y la presencia de dobles enlaces conjugados en la grasa de leche se advirtieron desde 1935 cundo las vacas eran llevadas a pastorear durante el verano. La suma de dobles enlaces conjugados en la grasa de la leche aumentaba desde 0,4 a 0,8%. Durante el invierno cuando las vacas eran confinadas se produca 1,3% y 2,5% durante el verano cuando las vacas se alimentaban con praderas (Kuzdal-Savoie y Kuzdal, 1961).

Riel, (1963) estudi el efecto de la variacin estacional de dobles enlaces conjugados en la leche canadiense y demostr que posean dobles a triples incrementos de estos enlaces en la grasa de la leche durante el verano, cuando las
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vacas pastoreaban. Este autor observ tambin que la concentracin ms baja (0,6%) de dobles enlaces conjugados en la grasa de la leche se presentaba durante marzo, que es ms alto de lo que se observa en la leche actualmente (0,4 a 0,5%) producto de vacas alimentadas con una mezcla de racin total (Khanal y Olson, 2004).

Khanal y Olson, (2004), sealan que posiblemente, esto suceda porque las vacas se alimentaban de una dieta con mayor proporcin de forraje, lo que aumentara el contenido de CLA en la grasa de la leche. La concentracin ms alta de 1,65% en la grasa total de leche se observaba en junio y septiembre. El aumento dramtico en el contenido graso de CLA despus de rotar vacas en pastoreo fueron establecidos, luego de una serie de experimentos por Jahries et al., (1997);

Stanton et al., (1997), Kelly et al., (1998); Lawless et al., (1998); Dhiman et al., (1999) y continan siendo la base de investigacin para aumentar el contenido de CLA en vacas lecheras.

Kuzdal-Savoie y Kuzdal, (1961) indicaron inicialmente, que el abrupto cambio de alimentar en confinamiento ( con ensilaje, heno y remolachas) y luego comenzar a alimentar en pastoreo libre, incrementaba los dobles enlaces conjugados agudamente, hasta que un efecto mximo se podra alcanzar despus de 5 das. Sin embargo, Khanal et al., (2003) indicaron que la grasa de la leche que contiene CLA segua aumentando hasta 23 das despus de que las vacas dejaban de pastorear y se mantendra en 2,54% de grasa de leche, lo cual era 550% ms que el nivel original hasta 29 das, despus de los cuales las vacas se retiraban de la
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pradera. La grasa de la leche y el contenido de TVA siguieron una tendencia semejante. Esto puede ser debido a que es el tiempo requerido para la adaptacin de los microbios del rumen al cambio de dieta, as como tambin a la fisiologa de la grasa de la leche en la sntesis de cidos grasos bsicos, por el tipo y la cantidad de FA suministrados en la dieta. Se demostr tambin, que slo 4 das eran necesarios para retornar al nivel original de CLA y TVA una vez que las vacas se retiraban del pastoreo y se volvan a alimentar con una dieta semejante de TMR (Khanal et al., 2003).

Las vacas que consuman pastos verdes exuberantes parecan producir la grasa de leche con las concentraciones ms altas de CLA. Adems, la suplementacin de vacas que se alimentan a pastoreo con una racin de alto contenido en cido linoleico proporciona una fuente extra de sustratos para CLA y TVA, adems de los cidos linolnicos que proporcionan las praderas. (Khanal y Olson, 2004).

Khanal, (2004) demostr que las vacas lecheras que pastoreaban durante el verano suplementadas con granos, producen 60% o ms de CLA y TVA en alrededor de un ao base, que aquellas vacas que se alimentaron con 10% de DM de pasto fresco cortado durante el verano. La mayora de las vacas (~90 %) en lecheras comerciales de Utah e Idaho, USA, presentaba leche con un contenido graso de CLA entre 0,3 y 0,9%. Este autor observ tambin que la variacin individual entre vacas era ms grande durante el verano que en el invierno, en las lecheras donde las vacas eran alimentadas a pastoreo durante el verano, comparadas con aquellas lecheras que no pastoreaban o que presentaban slo 1/3
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de sus vacas pastoreando. Indic que la concentracin de CLA en la grasa de leche era ms baja durante febrero-marzo y ms alta durante agosto-septiembre en los EEUU (Khanal, 2004) y Canad (Riel, 1963).

1. 9.5 Edad, paricin, periodo de lactancia y estado de salud. Kelsey et al., (2003), demostraron que la paricin, tiene una pequea relacin con la variacin individual sobre el nivel de CLA y de CLA desaturasa. Giesy et al., (1999) suministraron 50 gr/ da de una mezcla de ismeros de CLA en una sal de calcio, a partir del da 14 hasta el da 80 posparto y encontraron que se produca un aumento de la produccin de leche y disminucin de la produccin de grasa, el da 35 posparto en adelante. El efecto consista en que al disminuir la sntesis de grasa en la leche, disminua la alta demanda energtica y se movilizaba menos tejido corporal. Sin embargo, no disminua la cantidad de cidos grasos no esterificados, ni el balance energtico, pero la produccin de leche en este estudio y en otro presentado por Bernal-Santos et al., (2003) se incrementaba hasta en 3.2 kg/da.

Recientemente, Moore et al., (2004) han demostrado que la suplementacin con ismeros de CLA 10 a 21 das previos a la paricin, disminuyen la proporcin total de grasas en la leche de una manera dosis-sensible y la produccin de la grasa exhibe el mismo descenso progresivo que se produce normalmente. La suplementacin con ismeros de CLA disminua la proporcin de grasas en la leche, siendo evidente durante la primera semana post parto y llegando a ser altamente significativa durante la semana 2 y 3, perodo durante el cual el
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rendimiento de la grasa de la leche disminua en 49 y 56%. Estos datos indicaron, claramente, que la suplementacin con CLA, puede inducir una marcada disminucin de la grasa de la leche (40 a 50%) inmediatamente post parto, pero sin afectar negativamente otros parmetros de la produccin.

Cuando se suplementan sales de calcio de CLA en vacas durante el periodo de transicin y la etapa temprana de lactancia, no haban diferencias significativas en el contenido de CLA en la grasa de la leche comparado con un suplemento control de cido graso destilado de palma (Bernal-Santos et al., 2003).

La relacin entre el nmero de lactancias y los niveles de CLA en la grasa de la leche fueron comparados por Stanton et al., (1997) e indicaron que habra un efecto sobre los niveles de CLA en la leche debido al nmero de lactancias. Vacas con ms de 4 lactancias producan ms CLA (p<0,06) en la grasa de la leche, que aquellas vacas que presentaban 2 a 4 lactancias, las vacas ms viejas (>7 lactaciones) obtenan un mayor rendimiento en el nivel de CLA que las vacas ms jvenes. Ms tarde Stanton et al., (2000) investigaron las variaciones en el nivel de CLA producidas al comienzo y trmino de la lactancia, y demostraron que el

contenido de CLA en la leche era ms alto al trmino de la lactacin comparada con la leche que se produca durante el inicio de esta. Pero, aunque los niveles de CLA eran mayores, el factor que ms influa sobre el nivel de CLA era, la disponibilidad y la calidad del pasto.

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Por otro lado, slo un estudio ha demostrado una asociacin positiva entre los niveles de CLA en la grasa de la leche y el incremento en la edad del animal (Lal y Narayanan, 1984).

1.10 Situacin Nacional. Carro, (1999), estudi durante 6 meses la composicin de cidos grasos y triacilglicridos de leche cruda, recepcionada en plantas de la zona sur ( VIII, IX y X regin), identificando un posible efecto estacional y regional en esta zona. Recientemente, se realiz otro estudio por Pinto et al., (2002) durante junio de 1998 a mayo de 1999, en el que fueron analizados los cidos grasos de leche de bovinos como metil steres por Cromatografa de gas lquido, con especial nfasis en los cidos butrico y CLA, por su importancia tecnolgica y de salud pblica. Las muestras de leche cruda eran recolectadas mensualmente durante un ao a nivel de silos en seis plantas, ubicadas en las regiones VIII, IX y X de Chile, enfatizando las variaciones estacionales y regionales.

Pinto et al., (2002) sealan que los cidos grasos de cadena larga (C18:0 a C18:3), no presentaban diferencias significativas entre estaciones; slo a nivel individual, el C18:2 conjugado era significativamente superior en primavera (p<0,05), con un valor de 1,8 %, con respecto a las otras estaciones, presentando el valor promedio ms bajo (1,3 %) en el invierno.

El ismero cis-9, trans-11 se encontraba en concentracin significativamente superior (p<0,05) en la IX regin, con un valor promedio de 1,75 %, con respecto a
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la VIII regin, en donde su valor fue de 1,41 % y en la X regin presentaba un valor intermedio (1, 64 %).

A nivel estacional presentaba el valor ms alto en la poca de primavera-verano (1,75 %), valores inferiores se presentaban en la poca de otoo-invierno (1,59 %). Entonces se deduca que los factores; estacionalidad y rea geogrfica, generaban diferencias significativas en la composicin de los cidos grasos de la grasa lctea bovina.

Cabe destacar, que tanto a nivel regional como de estacionalidad, los valores promedios eran relativamente cercanos, si se comparaban con las grandes variaciones obtenidas en estudios de grupos de vacas individuales sometidas a dietas especficas. Por otro lado, los programas de alimentacin, de manejo y las variaciones climticas, eran relativamente uniformes dentro de cada regin, lo que disminua el factor rebao individual al usar muestras compuestas (muestras de silos de plantas lecheras). (Pinto et al., 2002).

1.11 Consideraciones al aumentar el contenido de CLA en la leche. Khanal y Olson, (2004), indicaron que es necesario considerar dos aspectos en las estrategias de alimentacin que se han diseado para aumentar el CLA en la grasa de la leche.

Primero, la reduccin en el rendimiento de la leche, lo que generalmente es

asociado a las vacas que han sido alimentadas con pasturas. La disminucin del
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rendimiento de la leche puede ser, a veces, un alto precio pagado por los productores lecheros al aumentar el contenido de CLA en la grasa de la leche, a menos que se les d un estmulo extra por ello.

El segundo aspecto, es la reduccin en el contenido graso de la leche, lo que

se asocia generalmente con el aumento de la proporcin de aceites libres tales como, aceite de pescado o aceite vegetal en la dieta que se utilizan normalmente para aumentar el contenido de CLA en la leche.

La meta general de las estrategias de alimentacin debe ser, por lo tanto, aumentar la concentracin grasa de CLA en la leche con un mnimo efecto sobre el rendimiento de la leche o su contenido graso. Esto ser posible suplementando las vacas que se alimentan de pasturas a travs de algunos alimentos, que no slo mantengan una alta concentracin de CLA mientras pastoreen, sino que tambin aminoren la reduccin en el rendimiento de la leche (Khanal et al., 2002), o incluyendo los sustratos para la sntesis de CLA de una forma accesible a los microorganismos del rumen sin afectar su crecimiento y multiplicacin, tal como el extrudo de semillas oleaginosas o aceites libres (AbuGhazaleh et al., 2003).

1. 12 Contenido de CLA en leche y derivados. Muchas investigaciones han examinado el efecto del procesamiento y almacenamiento sobre la concentracin de CLA en los productos lcteos. En general, los resultados han demostrado que el procesamiento y almacenamiento, tienen un mnimo efecto, lo cual indica que el CLA es relativamente estable.
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Entonces, el contenido de CLA en los productos lcteos es, en gran parte, dependiente de la concentracin de CLA en la grasa de la leche cruda (Bauman, 2002).

Los CLA son cidos grasos, por ello su concentracin en los alimentos se expresa, generalmente, con relacin a la grasa total. Los productos lcteos presentan concentraciones tpicas en un rango de 3 a 7 mg/g de grasa, pero la concentracin en la grasa de la leche puede variar marcadamente y puede ser, incluso, incrementada al doble de su valor original. En general, el contenido de CLA en la grasa del alimento, derivado de productos-rumiantes, ser dependiente de la produccin ruminal de cido vacnico y en menor grado del CLA y la actividad de la delta 9-desaturasa en el tejido. Las diferencias entre los animales se relacionan principalmente al tipo de alimento. Sin embargo, bajo una misma dieta y ambiente, sigue existiendo una variacin en la proporcin de CLA en la leche de los animales rumiantes, ( Bauman, 2002).

Respecto al tipo de alimento Khanal y Olson (2004) sealaron que el cido linoleico conjugado se encuentra en; la grasa de la leche, la grasa del tejido de rumiantes y en menor grado en la yema de huevo, as como en los productos derivados de stos. Su contenido es mucho ms bajo en los alimentos que provienen de no-rumiantes que aquellos animales rumiantes, debido a la habilidad que presentan estos ltimos de hidrogenar los cidos grasos insaturados y dietticos con la ayuda de bacterias presentes en el rumen. Como resultado, los productos alimenticios de rumiantes son la fuente diettica principal de CLA y dentro
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de ellos la leche proveniente de vacas es la fuente ms rica de CLA que se ha encontrado.

Por ello, el consumo de carne y leche proveniente de rumiantes representa la principal fuente natural de CLA para el ser humano (Chilliard et al., 2000).

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2. OBJETIVOS.

2. 1 Objetivo General .

Establecer rangos de referencia para el cido linoleico conjugado (CLA) en leche bovina del sector de Vilcn, en la Novena regin de Chile.

2. 2 Objetivos Especficos.

Determinar niveles de CLA en la leche de vacas del sector Vilcn en la Novena regin de Chile.

Determinar los factores que pueden influenciar el nivel de CLA en la leche bovina.

Determinar el factor de mayor influencia en la concentracin de CLA en la grasa de la leche bovina.

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3. MATERIAL Y MTODOS.

3. 1 Duracin del estudio.

Enero 2004 a Junio 2004.

3. 2 poca y lugar geogrfico.

Se tomaron las situaciones productivas locales de tres predios agrcolas cercanos a la IX regin, localidad de Vilcn. Durante la temporada de verano y otoo.

3. 3 Nmero de animales a utilizar.

Verano: Predio A: 5 vacas. Predio B: 6 vacas.

Otoo: Predio C: 5 vacas. Predio B: 5 vacas.

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3. 4 Caracterizacin predial

Se realiz una caracterizacin de las condiciones productivas de los predios, para llevar un registro de las condiciones y su diversidad. Dentro de ello, se estudiaron tres predios clasificando cada uno en pequeos y grandes productores de leche, de acuerdo al nmero de hectreas de terreno, perodo de lactancia de las vacas, promedio de produccin de leche.

Los predios estudiados fueron los siguientes:

Predio A: Gran Productor. Superficie total de 800 hectreas, de las cuales todas son ocupadas para lechera, perodo de lactancia de las vacas desde los 280 a 300 das, produccin de leche promedio por vaca 14 lt/ da.

Predio B: Pequeo productor. La superficie total de este predio es de 70 hectreas y todas son destinadas a lechera, perodo de lactancia de las vacas de 250 a 280 das, promedio de produccin de leche por vaca 12 lt/ da.

Predio C: Productor Mediano. Este predio cuenta con una superficie total de 270 y de stas 180 h. son destinadas a lechera, perodo de lactancia de las vacas que va desde los 280 a 300 das, produccin promedio de leche por vaca de 13 lt/ da.

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3. 4.1 Sistema de alimentacin.

Dentro de cada predio se estableci el sistema de alimentacin durante la temporada de verano y otoo.

Sistema de alimentacin en verano:

Predio A: Sistema basado en pastoreo de pradera compuesta por ballica de rotacin corta, en forma rotativa los animales reciben suplementacin con afrechillo de trigo.

Predio B: Sistema basado en pastoreo con una pradera artificial de avena/ ballica, suplementacin con avena (estrigosa - chancada).

Sistema de alimentacin en otoo:

Predio C: Sistema mixto, pradera artificial de ballica/ trbol, suplementacin a corral con silo (ballica) y concentrado (avena, cebada, tritricale, sales minerales).

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Predio B: Sistema basado en pastoreo, con pradera natural ms suplementacin con ensilaje en base a pradera (ballica) y concentrado (avena y lupino).

3. 5 Caracterizacin de rebaos. Dentro de la caracterizacin de los rebaos, se registraron algunos de los factores que determinan la cantidad de CLA en leche producida por las vacas, como:
q

Raza Frisn Negro.

Nmero de pariciones: se identificaron las madres de acuerdo al nmero de pariciones, dentro del rebao, lo que permiti contar con informacin detallada de la composicin de edades, que normalmente es entendido como el nmero de partos y la distribucin dentro de la regin.

Alimentacin: relacin ensilaje-concentrado / praderas. En este aspecto se analizaron los alimentos entregados a los animales, para determinar el nivel de cido linoleico presente en estos y posteriormente relacionarlos con el nivel de CLA encontrado en la leche de los bovinos en estudio.

Lactancia: se registr el periodo y los das de lactancia de cada animal en estudio.

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Produccin de leche: se determin la produccin diaria de leche en litros producidos por cada vaca.

Para la caracterizacin y clasificacin de las diferentes situaciones productivas en funcin de la obtencin de CLA con relacin a la dieta administrada, se realiz una clasificacin de los animales de condiciones similares, de acuerdo al diagnstico, stos se agruparon y de este modo se establecieron unidades experimentales homogneas y representativas.

3. 6 Muestreo de leche durante la lactancia. Se procedi a realizar un muestreo de la leche de 21 vacas, elegidas en forma aleatoria en cada predio agrcola, durante la lactancia en las estaciones de verano y otoo.

Se realiz la toma de muestras de leche en vacas en distintas etapas de lactancia una vez durante cada estacin a inicios del verano y comienzo de otoo; para caracterizar los predios del estudio de acuerdo al contenido de cido linoleico conjugado en la leche de las vacas. Las muestras se derivaron a la brevedad para su congelamiento y posterior anlisis.

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3. 7 Tcnica de evaluacin de CLA en leche. Las muestras fueron sometidas a un anlisis para determinar el contenido de cido linoleico conjugado (CLA), de acuerdo al origen (predio, rebao, vaca y temporada).

A cada muestra se le efectu una extraccin de lpidos segn el mtodo de Folch et al., (1957). Se realiz metilacin cida y se identificaron los steres metlicos de los cidos grasos mediante cromatografa gaseosa, proceso basado en las diferencias de las velocidades con que los compuestos individuales de una mezcla emigran a travs de un medio estacionario en una columna por influencia de una fase mvil. Citado en http://www.ctv.es/USERS/davidsb/

Los anlisis se desarrollaron en laboratorios de la Universidad Austral de Chile, durante la temporada de verano, poca en la cual se determin el porcentaje de los ismeros cis-9, trans-11 y cis-12, trans-10 en la grasa de la leche.

Durante la temporada de otoo, en cambio, los anlisis se realizaron en la Universidad Catlica de Temuco, Facultad de Acuicultura, determinndose el nivel de la mezcla cis-9, trans-11 y trans-9, cis-11, adems de los ismeros cis-10, cis-12 y cis-12, trans-10.

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3. 8 Anlisis de los alimentos. Se determin el nivel de cido linoleico en los alimentos entregados a los animales durante las temporadas de verano y otoo. De esta forma se relacion con la concentracin de cido linoleico conjugado medido en las muestras de leche de los bovinos del estudio.

En el anlisis de los alimentos se determin la composicin de los cidos grasos por cromatografa de gas lquido, previa obtencin de steres metlicos. Utilizando como carrier en el cromatgrafo Helio y detector de FID. Y a los alimentos se les extrajo la materia grasa por el mtodo de Bligh and Dyer (1959).

Los anlisis se desarrollaron en el centro de Servicios y Diagnstico Agropecuario, Apablaza y Santelices Ltda. Santiago, Chile.

3.9 Anlisis Estadstico. Para el presente estudio, se utiliz la estadstica descriptiva con el fin de analizar la concentracin de cada ismero investigado en leche bovina, durante verano y otoo. Dentro de sta se emplearon, las medidas de tendencia central (media) y medidas de dispersin (desviacin estndar y coeficiente de variacin) a travs del programa estadstico Graphpad Prism 3.0.

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4. RESULTADOS Y DISCUSIN. A continuacin se presentan los resultados de las variables medidas en este estudio, la concentracin de los ismeros de cido linoleico conjugado en la grasa de la leche bovina (cis-9, trans-11; trans-10, cis-12; cis-10, cis-12) y la concentracin de cido linoleico (cis-9, trans-11; cis-10, trans-12; cis-12, cis-10) y cido linolnico en los alimentos entregados a los animales, durante la estacin de verano y otoo mediciones realizadas en diferentes predios del sector Vilcn en la novena regin de Chile, durante el ao 2004.

4.1. Resultados y anlisis de la leche de bovinos del predio A .

Cuadro 1. Registro de la situacin productiva de las vacas del predio A, en Verano. FECHA DE FECHA PROD. LT. TOMA DE DAS DE N DE VACA DE DE LECHE LA LACTANCIA PARTOS PARTO / DA MUESTRA 27-01-04 1A 16-01-04 11 1 19,0 27-01-04 2A 12-01-04 15 4 32,0 27-01-04 3A 16-01-04 11 1 19,8 27-01-04 4A 18-01-04 9 3 22,8 27-01-04 5A 11-01-04 16 2 21,0

%MG 3,22 3,86 4,95 5,16 2,79

Como se registra en el cuadro 1, la situacin productiva de los animales del predio A fue bastante variable al momento de la recoleccin de muestras, la produccin de leche en estos animales se present en un rango de 19 litros hasta 32 litros segn el animal, lo mismo ocurri con el porcentaje de materia grasa (desde 2.79% a 5.16%). Adems, los animales del estudio presentaban una variacin en cuanto al nmero de partos (1 a 4 partos) o edad. Respecto a los das
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de lactancia, todos los animales del estudio en el predio A se encontraron en la primera etapa de lactancia, (primeros 100 das).

En relacin al nmero de partos o edad de los bovinos Stanton et al., (1997) indicaron que habra un efecto sobre los niveles de CLA en la leche debido al nmero de lactancias. Vacas con ms de 4 lactancias produciran ms CLA (p<0,06) en la grasa de la leche, que aquellas vacas que presentaban 2 a 4 lactancias, las vacas ms viejas (>7 lactaciones) obtendran un mayor rendimiento en el nivel de CLA que las vacas ms jvenes. Pero, en el presente estudio no se analizaron muestras de leche en animales con ms de 4 partos. Registrndose slo una mayor proporcin de cis-9, trans-11 y trans-10, cis-12 (cuadro 2) en vacas que presentaban 1 y 4 partos, sin embargo en vacas de 2 y 3 partos se obtuvieron menores concentraciones de CLA. Respecto a la etapa de lactancia, Kelsey et al., (2003), sealaron que este factor tiene una mnima relacin con el nivel de CLA en la grasa de la leche. Sin embargo, Stanton et al., (2000) al investigar las variaciones en el nivel de CLA producidas al comienzo y trmino de la lactancia, demostraron que el contenido de CLA en la leche era ms alto al trmino de la lactacin comparada con la leche que se produca durante el inicio de esta.

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0,4 0,35 0,3 0,25

MeC18:2 cis-9, trans-11

% p/p

0,2 0,15 0,1 0,05 0 1A 2A 3A Animales 4A 5A

MeC18.2 cis12, trans-10

Grfico 1. Concentracin de cido linoleico conjugado en la grasa de la leche de bovinos, predio A.

Cuadro 2. Resultados del anlisis de CLA (%p/p) en muestras de leche de vacas del predio A, en verano. cidos Grasos cis-9, trans-11 Cis-12, trans-10 1A 0,18 0,10 2A 0,25 0,17 3A 0,37 0,22 4A 0,22 0,17 5A 0,15 0,1 Total 1.17 0.76 Promedio 0.24 0.15

Como se ilustra en el grfico 1 y es registrado en el cuadro 2 en el predio A se obtuvo, en general, mayor concentracin de ismero cis-9, trans-11 (0.24% promedio; 1.17% total) y una menor concentracin del ismero cis-12, trans-10 (0.15% promedio; 0.76% total). Lo cual coincide con Khanal y Olson (2004), que
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sealaron a la leche como la fuente ms rica de CLA que se ha encontrado, pudiendo variar la concentracin en sta desde, 0.2% a 3.7%, asimismo indicaron que el principal ismero en la leche es el cis-9, trans-11 en un rango de 80 a 90% del CLA total y aunque biolgicamente activo el ismero trans-10, cis-12 se encontrara en cantidades menores al 5% del CLA total. Slo un animal (vaca 3A) present el mayor nivel de ambos ismeros; cis-9, trans-11 y cis-12, trans-10 con una concentracin de 0.37% y 0.22%, respectivamente. Lo que pudo deberse como indicaron, Khanal y Olson (2004) a la actividad de la enzima delta9-desaturasa, la cual es importante para explicar la variacin individual en el contenido de CLA en la grasa de la leche entre los animales. Pero, la dieta sera el determinante principal en la concentracin de CLA en la leche y slo algunos animales poseen un potencial ms grande para responder al tratamiento diettico que otros. Adems, se present una variacin en la composicin de ambos cidos grasos de la materia grasa de la leche en los bovinos del estudio, lo que pudo deberse, a algunos factores que en general influyen sobre la concentracin de cido linoleico conjugado en la leche. Moreiras, (2004) seal que el contenido de CLA en la leche es afectado tambin por: la raza animal, manejo de los animales y poca estacional. Adems, Pinto et al., (2002), mencionaron algunos como; el rea geogrfica y mastitis.

El nivel ms bajo para ambos ismeros (cis-9, trans-11 y cis-12, trans-10) se obtuvo en la vaca 5A la que result tambin contener el menor porcentaje de
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materia grasa (2.79%) en la leche, razn que se podra explicar, como lo sealaron Peterson et al., (2002) a la variacin entre individuos, este factor reflejara diferencias en la delta9-desaturasa, lo que implicara la regulacin de la expresin de genes, polimorfismo de los genes que afectaran la estructura primaria o terciaria de la enzima, modificaciones post-transicionales o factores que afectaran la interaccin entre enzima y el sustrato o producto. Siendo, entonces la variacin individual animal - animal uno de los factores que produce diferencias en el porcentaje de CLA obtenido en la grasa de la leche (Bauman, 2002).

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4.1.1. Resultados y Anlisis del Alimento entregado a los bovinos del predio A, durante la estacin de verano.

Cuadro 3. Concentracin de cido linoleico y linolnico presentes en el alimento de vacas del predio A en verano. Afrechillo de trigo. 49.6 5.3 54.9 Pradera (ballica) 31.6 13.8 45.4

cidos grasos Poliinsaturados. cido linoleico C 18:2 cido linolnico C 18:3 Total de GP

60 50 40
%
Ac. Linoleico C18:2 Ac. Linolenico C18:3
Afrechillo de trigo pradera (ballica) Alimento

30 20 10 0

Grfico 2. Concentracin de cido linoleico y linolnico (expresado en %), en los alimentos entregados durante la estacin de verano en el predio A.

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Como se observa en el grfico 2 el afrechillo de trigo registr grandes concentraciones de cido linoleico 49.6% (cuadro 3), mucho ms elevado que la concentracin obtenida en la pradera de 31.6%. El afrechillo de trigo se define como, el producto residual de la molienda del grano de trigo, correspondiente al ltimo tamizado de la harina, constituido por partculas finas de las capas menos superficiales del pericarpio con parte del albumen. Representa el 15,3% del peso del grano y es el sub-producto ms abundante de la molinera de trigo en Chile (www.agrarias.uach.cl) Respecto a la alimentacin con granos, Raposo de Medeiros (2002) seala que los animales alimentados con pasturas tienen una mayor proporcin de cido linoleico que aquellos que consumen granos, pero una alimentacin a pastoreo suplementada con granos, puede producir una gran concentracin de CLA.

Por otro lado, respecto a las praderas varios autores como; Dhiman et al., (1999) o Jiang et al., (1996) han sealado que ste es un alimento con el mayor porcentaje de cidos linoleicos y linolnicos produciendo, entonces, una grasa de leche con el mayor nivel de CLA. Pero, esto seguramente, se producira slo cuando las vacas se alimentan de un pasto fresco de la temporada que posee cadenas de carbono-3 conteniendo 50% ms de cidos grasos totales y de cidos linoleicos, lo que

aumentara el contenido de CLA en la leche, mucho ms que los pastos de estaciones calurosas, que poseen carbonos-4 y que contienen menos de 40% de cidos grasos totales como cidos linoleicos (White et al., 2001). Un pasto maduro, tiene las proporciones ms altas de carbonos y menos cidos linoleicos, adems no

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es probable que produzca tanto CLA en la leche, como lo hace el pasto que es verde y exuberante consumido por las vacas lecheras (Loor et al., 2002).

Adems, es posible que intervengan muchos factores como; La diversidad de especies de forrajeras disponibles en el pasto, lo cual aumenta tambin el contenido de CLA en la leche (Collomb et al., 2002a), o la altitud del pasto (Collomb et al., 2002b).

Respecto al sistema de alimentacin Moreiras, (2004) seal que el contenido de CLA en la leche estara afectado por el tipo de explotacin (extensiva o intensiva), racin y suplementos alimenticios suministrados a las vacas. Durante la temporada de verano en el predio A, se utiliz un sistema de alimentacin basado en pastoreo y en forma rotativa los animales recibieron suplemento con afrechillo de trigo. Khanal y Olson (2004) indicaron al respecto que no se produce tanto CLA en la leche bovina en vacas alimentadas con pasturas suplementadas con un alimento rico en cido linoleico, sino que la mxima concentracin de CLA podra obtenerse cuando los animales se alimentan slo de pasturas.

Adems, Pinto et al., (2002) indicaron que la poca estacional produce diferentes concentraciones de CLA en la leche demostrando que la suma de dobles enlaces conjugados en la grasa de la leche aumenta (desde 0.4 a 0.8%) en temporadas de libre pastoreo, en cambio cuando las vacas son confinadas se producira menor proporcin de CLA en la leche (Kuzdal-Savoie y Kuzdal, 1961). Al respecto, Khanal y Olson, (2004) sealaron que posiblemente, esto suceda porque
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las vacas se alimentaban de una dieta con mayor proporcin de forraje, lo que aumentara el contenido de CLA en la grasa de la leche. 4.2. Resultados y anlisis de la leche de bovinos del predio B . Cuadro 4. Registro de la situacin productiva de las vacas del predio B, en Verano. PROD. LT FECHA N DE DE DAS DE DE LACTANCIA PARTOS LECHE/ PARTO DA 28-09-03 110,00 2 13,8 16-10-03 92,00 2 14,0 31-10-03 77,00 3 22,4 26-12-03 21,00 1 17,8 26-12-03 21,00 1 15,0 25-12-03 22,00 1 17,2

FECHA DE TOMA DE LA VACA MUESTRA 16-01-04 16-01-04 16-01-04 16-01-04 16-01-04 16-01-04 1B 2B 3B 4B 5B 6B

%MG 4,29 3,14 3,81 3,00 4,24 4,51

0,6 0,5 0,4 % p/p 0,3 0,2 0,1 0 1B 2B 3B 4B Animales 5B 6B MeC18:2 cis-9, trans-11 MeC18.2 cis12, trans-10

Grfico 3. Concentracin de cido linoleico conjugado en la grasa de la leche de bovinos, predio B.

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Cuadro 5. Resultados del anlisis de CLA (%p/p) en muestras de leche de vacas del predio B, en verano. CIDOS GRASOS Cis-9, trans-11 cis-12, trans-10 1B 0,18 0,21 2B 0,35 0,48 3B 0,23 0,09 4B 0,30 0,23 5B 6B TOTALPROMEDIO 1.69 1.37 0.28 0.23

0,27 0,37 0,16 0,21

En el grfico 3, se aprecia en general, una elevada cantidad de cis-9, trans-11 (0.28% en promedio, 1.7% total) en la grasa de la leche, siendo mayor a la concentracin obtenida para el isomero cis-12, trans-10 (0.23% en promedio; 1.37% total), que coincide como lo seal Sanhueza et al., (2002), con el isomero predominante de CLA encontrado en la leche y carne de rumiantes que es el cis-9, trans-11 presente en concentraciones particularmente altas, pudiendo alcanzar incluso 0.65% de los lpidos totales. En la grasa de la leche, principalmente, sus niveles fluctan entre 0.15% a 0.22%. En contraste Khanal y Olson, (2004) sealaron que el ismero cis-12, trans-10 slo se presenta en bajas

concentraciones respecto al total de CLA en la leche.

Adems, como se observa en el grfico 3 y se registra en el cuadro 5, de todos los animales estudiados en este predio, slo dos de ellos (1B y 2B) presentaron un nivel de cis-12, trans-10, (0.21% y 0.48% respectivamente) mayor a la concentracin del ismero predominante en leche cis-9, trans-11. Lo cual podra explicarse, como lo indic Bauman, (2002) a que la proporcin de grasas en la leche del ismero trans-10, cis-12 puede aumentar marcadamente bajo ciertas situaciones
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dietticas, Chouinard y Gervais (2003) sealaron adems que este ismero estara asociado a una disminucin de la sntesis de materia grasa de la leche y alterara el metabolismo lipdico de las vacas en lactacin, Khanal y Olson (2004) tambin indicaron que a diferencia de cis-9, trans-11 ningn estudio realizado ha detallado la sntesis endgena de otros ismeros de CLA, incluso del trans-10, cis-12, probablemente, porque muchos de ellos contribuyen slo a un 0,05% o menos en la grasa de la leche o de la carne.

Como lo indica el cuadro 4, los animales del predio B en verano se encontraban entre los das 21 a 110 de lactancia y el nmero de partos o edad variaba entre 1 a 3 partos, sin embargo los animales 1B y 2B, presentaban dos partos y una similar produccin de leche (13.8 y 14.0 litros). Pero, la vaca 1B se presentaba al comienzo de la segunda etapa de la lactancia y la vaca 2B al trmino de la primera etapa. Razn que podra producir las diferencias encontradas en la concentracin de CLA en ambos animales (0.18% y 0.35% de cis-9, trans-11, respectivamente). Kelsey et al., (2003) sealaron al respecto que no hay diferencias en el contenido de CLA en la grasa de la leche, entre los animales primparos y multparos y que el nmero de partos contribuye a menos del 0.3% en el contenido de CLA. Pero, al referirse a la etapa de lactacin observaron un pequeo incremento en el contenido de CLA desde la lactacin temprana hacia la ltima etapa de esta. Stanton et al., (2000) tambin demostraron que el contenido de CLA en la leche era ms alto al trmino de la lactacin, comparada con la leche que se produca durante el inicio de la etapa. Razn, que podra explicar el mayor contenido de CLA en la grasa de la leche de la vaca 2B, ya que se encontraba en el da 92 de la lactancia, sin embargo
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no ocurri lo mismo en la vaca 1B que se encontraba en el da 110 de lactacin, porque este animal a pesar de haber presentado una concentracin de ismero cis12, trans-10 superior a la proporcin de cis-9, trans-11 exhiba, en general, un bajo nivel de ambos ismeros al compararlo con el resto de los animales del estudio.

Sin embargo, Stanton et al., (2000) seal que aunque los niveles de CLA producidos pueden aumentar en la ltima etapa de la lactacin lo que ms influye, es la disponibilidad y la calidad del pasto.

En relacin a la produccin de leche, los bovinos del predio B presentaban una produccin que iba desde los 13,8 litros a 22.4 litros. Lock y Garnsworthy, (2003) indicaron que el contenido de CLA y el ndice de CLA desaturasa en la grasa de la leche era independiente del rendimiento de la leche, del rendimiento de la grasa en la leche y del porcentaje de grasa en la leche. Entonces, la variabilidad individual en la produccin de leche de los animales del estudio no estara afectando la concentracin de CLA en las vacas. A excepcin de los dos animales antes mencionados, en general la concentracin total de cis-9, trans-11 (1.69%) se mantuvo sobre el nivel de cis-12, trans-10 (1.37%) lo que se podra explicar segn, Khanal y Olson (2004) a que el cido octadecadienico (cis-9, trans-11) es el componente ms significativo y predominante de CLA en la grasa de la leche de bovinos, comprendiendo 80 a 90% del CLA total.

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4.2.1. Resultados y anlisis del Alimento entregado a los bovinos del predio B, durante la estacin de verano.

Cuadro 6. Total de cidos grasos presentes en el alimento de vacas del predio B. Avena (estrigosa chancada). 33.1 7 40.1

cidos grasos poliinsaturados Ac. linoleico C 18:2 Ac. linolnico C 18:3 Total de GP

Pradera (ballica). 36 0.8 36.8

40 35 30 25 % 20 15 10 5 0 avena estrigosa chancada Alimento pradera (ballica)

Ac. Linoleico C18:2 Ac. Linolenico C18:3

Grfico 4. Concentracin de cido linoleico y linolnico (%), en los alimentos entregados durante la estacin de verano en el predio B.

Como se observa en el grfico 4 y se registra en el cuadro 6, se obtuvo una gran concentracin de cido linoleico, tanto en la pradera (ballica) 36% como en la avena
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(estrigosa y chancada) 33.1%, sin embargo, los cidos linolnicos se presentaron relativamente bajos en ambos alimentos analizados pero, de una manera ms marcada en la pradera, alcanzando slo 0.8%. Al respecto, Khanal y Olson, (2004) indican que la manipulacin de la dieta animal implica, principalmente, el suplementar cido linoleico o cidos linolnicos (cis-9, cis-12, cis-15 C18:3) como sustratos para la biohidrogenacin en el rumen. Dependiendo del tipo de aceite vegetal o de semillas oleaginosas, que posean cido linoleico o cido linolnico.

Respecto al sistema de alimentacin utilizado en el predio se emple una alimentacin basada en pastoreo suplementada con avena. Pero, la avena uno de los alimentos ms consumidos por el ganado, no produce tanto CLA comparado con animales alimentados slo con pasturas (www.discounts-vitamins-herbs.net).

Adems, Khanal y Olson (2004) indicaron que la leche que se produce en animales encontrados en pastoreo libre, comparada con la producida en confinamiento, es generalmente ms suave y con una proporcin ms alta de cido oleico y de cido palmtico. Entonces, es posible aumentar la composicin de cidos grasos en la leche de animales a pastoreo, incluso se puede optimizar la composicin a travs de la suplementacin relativamente simple con semillas, ya que contienen un elevado porcentaje de cidos grasos de carbn-18. Se ha demostrado adems, que el CLA enriquecido en la grasa de leche, obtenida a travs de la suplementacin de vacas a pastoreo con aceite de semillas de rap, era citotxico hacia la lnea celular Mcf-7 que produce cncer mamario en humanos, (Murphy, 2001).
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Bauman et al., (1999) indicaron que varios estudios han demostrado que la alimentacin con semillas crudas no produce efectos sobre la concentracin de CLA en la grasa de leche sugiriendo que los cidos grasos poliinsaturados en las semillas sin procesar son relativamente inaccesibles a las bacterias ruminales. Pero, se producira un gran aumento en la concentracin de CLA en leche, cuando la alimentacin es suplementada con la grasa de semillas enteras, como por ejemplo, semillas de rap, soya, semillas de algodn o aquellas semillas que han sido procesadas, asadas, micronizadas, roleadas y extrudas.

4.3. Resultados y anlisis de la leche de bovinos del predio C, durante la estacin de otoo. Cuadro 7. Registro de la situacin productiva de las vacas del predio C en otoo FECHA PARTO 15.02.04 31.03.04 03.04.04 07.04.04 30.12.03 DAS LACTANCIA 60 15 12 8 107 N PARTOS 3 1 1 3 2 PRODUCCIN LT. DE LECHE /DA. 13,5 11,5 15,5 13,5 12

VACA 1C 2C 3C 4C 5C

% MG 2,70 6,34 5,65 4,1 3,52

Como se aprecia en el cuadro 7, los animales presentaron una produccin de leche relativamente uniforme, desde los 11.5 litros hasta 15.5 litros y los das de lactancia de los bovinos del estudio eran muy variables al momento del muestreo, algunos se encontraban en la primera etapa de lactancia, otros al final de esta etapa y slo un animal (5C) al comienzo de la segunda etapa de lactancia. Kelsey et al., (2003) sealaron al respecto que la etapa de lactancia tendra un pequeo efecto en
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el nivel de cido linoleico conjugado en la leche, pero Stanton et al., (2000) sealaron que el contenido de CLA en la leche era ms alto al trmino de la lactacin comparada con la leche que se produca durante el inicio de esta. Sin embargo, la vaca 5C no present los valores ms altos de CLA en leche como se esperara, sino que la mxima concentracin de CLA en este predio (grfico 5) se produjo en el animal 3C, el cual presentaba un parto y se encontraba en el da 12 de lactancia al momento del muestreo, indicando entonces que podra producirse un mayor nivel de CLA en leche al comienzo de la etapa de lactancia y no al final de sta como lo han sealado varios autores.

Pero, la vaca 3C a pesar de presentar una gran produccin de leche (15.5 lt) y obtener la mayor concentracin de todos los ismeros de CLA investigados, no present grandes porcentajes de materia grasa esto debido, probablemente, como lo sealan Lock y Garnsworthy, (2003) a que el nivel de CLA en la grasa de la leche es independiente de la produccin de leche, el rendimiento de la grasa y el porcentaje de grasa en la leche.

Respecto al nmero de partos o edad, se observ la mayor concentracin de CLA (grfico 5), en los animales 1C, 2C Y 3C que presentaban 1 y 3 partos. Lo cual indica, que podra producirse una relacin con el nmero de partos o edad del animal en vacas de 1 y 3 partos, sin embargo se registr una diferencia en el nivel de CLA en la leche de ambas vacas que presentaban un solo parto. Pero, estas diferencias en el porcentaje de CLA obtenido en la grasa de la leche de ambos animales (2C y 3C) en el estudio, podran deberse como lo seal Bauman, (2002)
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a la variacin individual animal - animal. Respecto al nmero de partos o edad, se ha postulado adems, que las vacas con ms de 4 partos presentan mayores concentraciones de CLA en la grasa de la leche, que aquellos animales que registran dos a cuatro partos (Stanton et al., 1997). Asimismo, Lal y Narayanan (1984) demostraron que se producira un incremento de CLA en leche al aumentar la edad del animal. Lo que permite afirmar el alto porcentaje de CLA registrado en la vaca 1C. Cuadro 8. Porcentaje de ismeros de CLA en las muestras de leche en vacas del predio C durante otoo. MEZCLA CIS-9, TRANS-11 Y TRANS-9, CIS-11 0,53 0,49 0,57 0,45 0,44 2.48 0.46 TRANS-10, CIS-12 0 0,06 0,07 0,05 0 0.18 0.04 CIS-10,CIS12 0,41 0,38 0,44 0,34 0,38 1.95 0.39

VACA 1C 2C 3C 4C 5C Total Promedio

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0,60 0,50 0,40 % p/p 0,30 0,20 0,10 0,00 1C 2C 3C Animales 4C 5C Cis-10,cis-12 Mezcla Cis9, trans-11y trans-9, cis11 Trans-10, cis-12

Grfico 5. Ismeros de CLA (% p/p), presentes en la leche de vacas del predio C, durante otoo.

En el grfico 5, es posible observar, en general, en todos los animales una elevada concentracin de la mezcla cis-9, trans-11 y trans-9, cis-11. Esta mezcla se mantuvo, como lo seala detalladamente el cuadro 8, en los valores mximos de 0.57% y mnimos de 0.44%, en general, de todos los ismeros de CLA estudiados en este predio, obteniendo los mayores niveles en la grasa de leche con un promedio de 0.46%. Pero, es posible que los valores de esta mezcla sean similares a la medicin realizada en verano en el ismero cis-9, trans-11 ya que, al dividir el valor de la mezcla analizada en otoo se obtendra un porcentaje de ismero cis-9, trans-11 (1.24% total y 0.23% promedio) similar al resultado promedio obtenido durante la temporada de verano (0.26%).

Pero, tambin se determin la presencia de ismero cis-10, cis 12 en una gran cantidad, en el cual la concentracin fluctuaba desde 0.34% hasta 0.38% y result
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en un promedio de 0.39%. Al respecto, Sehat et al., (1998) indicaron que al usar los mtodos analticos ms avanzados se han revelado en la grasa de leche vestigios de muchos ismeros adicionales de CLA. Por ejemplo, el anlisis de los productos comerciales como el queso demostraron contener como uno de los ismeros predominantes cis-9, trans-11 (78-84%), y los ismeros adicionales de CLA fueron identificados como trans-trans (5-9%), cis/trans (cis-trans o trans-cis) (10-13%) y ciscis (<1%). Indicando as, que sera posible registrar concentraciones de muchos ismeros de CLA adems de los ismeros fisiolgicamente conocidos (cis-9, trans11 y cis-12, trans-10).

Trans-10, cis-12 arroj las ms bajas concentraciones en la grasa de la leche, en el predio C durante la estacin de otoo. Incluso, en dos de los cinco animales investigados (1C y 5C), no se present este ismero en la leche (cuadro 9) y en los tres animales restantes (2C; 3C; 4C) se obtuvo en muy bajas concentraciones (0.06%, 0.07% y 0.05% respectivamente) con un promedio total en leche de 0.036%. Santos et al., (2002) sealaron al respecto que los principales ismeros de CLA son las formas; cis-9 cis-11; cis-9 trans-11; trans-9 trans-11; cis-10 cis-12; cis10 trans 12; trans-10 cis-12; trans-10. Siendo, slo el isomero cis-9 trans-11 la forma biolgicamente activa de CLA y encontrado en mayor cantidad en la grasa de la leche bovina. Adems Bauman, (2002) indic que la proporcin de trans-10, cis-12 CLA en la leche podra aumentar marcadamente bajo cierto tipo de alimentacin, pero la cantidad de este ismero sigue siendo menor al 2%. Baumgard et al., (2001) mencionaron otro aspecto interesante relacionado al ismero trans10, cis 12 indicando que al infundir este ismero en los rumiantes se producira una
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disminucin en la sntesis grasa de la leche. Sin embargo, al registrarse una baja concentracin de ismero en la leche de las vacas del predio C, no sera posible demostrar esta postulacin, entonces tampoco sera posible demostrar una depresin de la sntesis grasa en las vacas de este predio.

4.3.1. Medicin del alimento entregado a los animales del predio C en otoo.

Un anlisis detallado del nivel de CLA en los alimentos entregados (pradera, silo y concentrado) a los animales del estudio en el predio C durante la estacin de otoo, se indican en el cuadro 9 y se ilustran en el grfico 6.

Cuadro 9. Anlisis de ismeros de CLA (% p/p) en alimentos de vacas del predio C. MEZCLA CIS-9, TRANS-11 TRANS-10, CIS- CIS-10,CISY 12 12 TRANS-9, CIS-11 *C 1 0,61 0,38 0 *C 2 0,49 0,36 0 *C 3 1,32 0,2 0 *C 1= Pradera (Ballica/Trbol) *C 2= Silo (Ballica) *C 3= Concentrado (avena, cebada, tritricale, sales minerales) MUESTRA

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1,4 1,2 1 % 0,8 0,6 0,4 0,2 0 Mezcla Cis-9, Trans-10, cis- Cis-10,cis-12 trans-11y 12 trans-9, cisIsmeros. 11
Grfico 6. Ilustracin del porcentaje de ismeros de CLA en pradera, silo y concentrado en la estacin de otoo en el predio C.
Concentrado Silo Pradera

En ambos registros, grfico 6 y cuadro 9, no se observa la presencia en los alimentos del ismero cis-10, cis-12, al respecto Khanal y Olson (2004), sealaron que la enzima responsable de la conjugacin del cido linoleico (cis-9, cis-12) se identific como cido linoleico isomerasa y el primer paso para la isomerizacin de este cido sera el cambio en la posicin cis-12 para formar cido linolnico (C-9, T11, C-15 C18:3) que entonces, se reduce para producir cido transvacnico. Siendo as el paso final, para la formacin de cido linoleico y linolnico semejantes, ya que durante la biohidrogenacin de estos dos cidos hay un intermediario en comn que es el cido transvacnico. Por ello es posible, que la presencia de ismero cis10, cis-12 slo se encuentre en la leche de los animales y no en los alimentos, ya que la presencia de este ismero en leche parece ser uno de los pasos para la

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biohidrogenacin de cido linoleico en el rumen y su posterior transformacin en cido linoleico conjugado.

Adems, es posible apreciar, como se indica en el cuadro 9, que el mayor porcentaje de lpidos (2.81% total) junto a una gran concentracin de la mezcla cis9, trans-11 y trans-9, cis-11 (1.32%) se obtuvo en el concentrado, el cual estaba compuesto por avena, cebada, triticale y sales minerales, pese a ello este alimento presentaba la menor concentracin entre los alimentos estudiados de isomero trans10, cis-12 (0.2%).

Raposo de Medeiros, (2002) seal que la biohidrogenacin de los cidos grasos depende de la naturaleza de las dietas, con ms de 70% de concentrado disminuye en 50 a 65% el cido linoleico y linolnico respectivamente en la leche, adems este tipo de dieta normalmente se asocia una disminucin del pH ruminal y de la liplisis, paso esencial para que ocurra la biohidrogenacin. Es posible que se observe una reduccin de C18:0 con un gran aumento de los cidos grasos poliinsaturados, debido a una menor biohidrogenacin ruminal cuando se incluye concentrado en la dieta. Adems, la depresin grasa de la leche puede ser causada en forma directa sobre la glndula mamaria, a algn nivel de las rutas bioqumicas para la sntesis de grasa, por una sustancia producida en el rumen al recibir dietas altas en concentrados. Entonces, sera posible encontrar una menor proporcin de CLA en grasa de leche en los animales que son suplementados con concentrado en la dieta.

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Por otro lado, la pradera analizada (ballica/ trbol) result contener 1.49% de lpidos totales con 0.61% de la mezcla cis-9, trans-11 y trans-9, cis-11, sin embargo se obtuvo ms alto nivel de trans-10, cis-12 (0.38%) comparado con los resultados obtenidos en el concentrado (0.2%). Al respecto Dhiman et al., (1999), observaron un aumento en la produccin de CLA comparado con dietas de dos tercios o un tercio de forraje, demostraron as que los animales alimentados slo en base a pastoreo podran obtener valores medios de 21,1 mg/gr de CLA y que este valor sera ms elevado que para aquellos animales que consumen forraje conservado o concentrado.

El silo aportado en la dieta, como se observa en el grfico 6, obtuvo la concentracin ms baja de mezcla cis-9, trans-11 y trans-9, cis-11 ( 0.48%), sin embargo este alimento result, al igual que la pradera, obtener ms cantidad de trans-10, cis-12 (0.36%) que aquel encontrado en el concentrado. Raposo de Medeiros, (2002) seal que los forrajes conservados tienen ms grasas saturadas, y que debido al proceso de secado y fermentacin son metabolizados principalmente los cidos grasos poliinsaturados, lo que podra explicar las variaciones en el nivel de CLA, producindose una menor concentracin de cis-9, trans-11 en la leche de estos animales.

Adems, Bauman, (2002) indic que diversas investigaciones han demostrado que los suplementos dietticos segn la dosis de CLA que contienen los alimentos, dan lugar a un aumento relativo sobre la concentracin del cido en la grasa de la leche. Los resultados de estas investigaciones han establecido que los suplementos
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con diferentes concentraciones de ismeros de CLA, sobre todo trans-8, cis-10 CLA; cis-9, trans-11 CLA; trans-10, cis-12 CLA y cis-11, trans-13 CLA, se han transferido a la grasa de la leche. Entonces, la proporcin de cidos linoleicos medidos en los alimentos sera equivalente a la proporcin de cido linoleico conjugado en la leche de las vacas.

4.4. Resultados y anlisis de la leche de bovinos del predio B durante la estacin de Otoo.

Cuadro 10. Registro de la situacin productiva de las vacas del predio B. PRODUCCIN DAS N LT. DE LECHE/ LACTANCIA PARTOS DA. 35 1 16 22 1 16,4 21 2 13,4 113 5 12,3 28 3 18

VACA 7B 8B 9B 10B 11B

FECHA PARTO 3.03.04 17.03.04 16.03.04 16.12.03 9.03.04

% MG 4,05 3,5 4,08 4,14 4,36

Como se registra en el cuadro 10, exista una gran variabilidad productiva en todos los animales del predio B. Los das de lactancia en el momento del muestreo variaban entre 21 a 113 das de lactacin, el nmero de partos tambin presentaba diferencias, ya que algunos animales presentaban un reducido nmero de partos y otros incluso 5 partos, pese a ello el mayor nivel de CLA se obtuvo en animales de un parto o de menor edad. Al respecto, Stanton et al., (1997) sealaron que la proporcin de cido linoleico conjugado en leche aumentara al incrementar nmero
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de lactancias. Y Lal y Narayanan, (1984) indicaron que se producira ms CLA al aumentar la edad del animal. Pero, en los animales del predio B sucedera lo contrario registrndose el menor porcentaje de CLA en animales de 2, 3 y 5 partos, y la mayor proporcin en animales de un slo parto.

Respecto a los das de lactancia se presentaron altos niveles de CLA tanto en animales con 22 o 113 das de lactacin. Al respecto, Stanton et al., (2000) sealaron que se producen variaciones en el nivel de CLA al comienzo y trmino de la lactancia, demostrando que el contenido de CLA en la leche era ms alto al trmino de la lactacin comparada con la leche que se produca durante el inicio de esta. Sin embargo en los animales del predio B, se registraron proporciones variables de CLA en el inicio y trmino de la primera etapa de lactancia, entonces no fue posible comprobar dicha postulacin, sin embargo Stanton et al., (200) indicaron adems, que aunque los niveles de CLA aumentaban al final de la etapa de lactancia, el factor que ms influa sobre el nivel de CLA era, la disponibilidad y la calidad del pasto.

La produccin de leche, en general, variaba, entre los 12.3 lt a 18 lt en los animales del predio B pero, como lo menciona Lock y Garnsworthy, (2003) el contenido de CLA en la leche y el ndice de CLA-desaturasa son independientes del rendimiento de la leche, el rendimiento de la grasa y el porcentaje de grasa en la leche.

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1,00 0,90 0,80 0,70 % p/p 0,60 0,50 0,40 0,30 0,20 0,10 0,00 7B 8B 9B 10B Animales. 11B
Cis-10,cis-12 Trans-10,cis-12 Mezcla cis-9,trans11 y trans-9,cis 11

Grfico 7. Ismeros de CLA (% p/p), presentes en la leche de vacas del predio B, durante otoo.

Cuadro 11. Porcentaje de ismeros de CLA en las muestras de leche en vacas del predio B durante otoo. MEZCLA CIS-9,TRANS-11 Y TRANS-9,CIS 11 7B 0,64 8B 0,86 9B 0,52 10B 0,61 11B 0,57 Total 3.2 Promedio 0.64 VACA TRANS-10,CIS- CIS-10,CIS12 12 0,09 0,49 0,65 0,47 0,30 0,50 0,40 0,48 0,45 0,48 1.89 2.42 0.38 0.48

90

El nivel de CLA en la grasa de la leche de las vacas del predio B en la poca de otoo observado en el grfico 7, ilustra que todos los animales del estudio en este predio presentaban una gran concentracin de la mezcla (cis-9, trans-11 y trans-9, cis-12) en promedio 0.64%, como se indica en el cuadro 11. Registrando entonces, una mayor proporcin de CLA en la leche de estos animales, comparado con la leche de los animales del predio C durante la misma estacin.

El ismero trans-10, cis-12 se present relativamente bajo en la mayor parte de los animales (0.38% promedio), a excepcin de la vaca 8B la cual, como lo registra el cuadro 11, presentaba una gran concentracin, tanto de la mezcla cis-9, trans-11 y trans-9, cis-11 (0.86%), como de ismero trans-10, cis-12 (0.65%) en la grasa de la leche, sin embargo, resulto contener una proporcin baja de cis-10, cis-12 (0.47%) comparada con otros animales. Al respecto, Khanal y Olson (2004), sealaron que la gran concentracin de otros ismeros de CLA (a excepcin de cis9, trans-11 y cis-10, trans-12) seran el resultado producido durante los pasos de la biohidrogenacin de cido linoleico en el rumen.

Entonces, la gran concentracin de ismero cis-10 cis-12, (2.42% total) que result en el presente estudio se debi, probablemente, a la formacin de productos intermediarios durante la biohidrogenacin ruminal del cido linoleico (cis-9, cis-12 C18:2) (Bauman et al., 2001). Ya que, a travs de diferentes mtodos analticos se ha demostrado que la leche contiene concentraciones traza de muchos ismeros adicionales al cido linoleico conjugado, (Bauman, 2002).

91

Y el bajo porcentaje de materia grasa (3.5%), registrado en la leche de la vaca 8B se podra explicar como lo sealaron Lock y Garnsworthy (2003), a que el porcentaje de grasa en leche es independiente del contenido de CLA en esta.

4.4.1. Medicin del alimento entregado a los animales del predio B en Otoo.

Cuadro 12. Anlisis de ismeros de CLA (% p/p) y lpidos totales (%) en alimentos de vacas del predio B. MEZCLA CIS-9, TRANS11 Y TRANS-9, CIS-11 1 1,55 2 1,72 3 0,72 1= Pradera (ballica) 2= Silo (avena con ballica) 3= Concentrado (lupino- avena) MUESTRA TRANS-10, CIS- CIS-10,CIS12 12 0,97 1,66 0,14 0 0 0

2 1,8 1,6 1,4 1,2 1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 Mezcla Cis-9, trans-11y trans-9, cis-11 Trans-10, cis-12 Ismeros Cis-10,cis-12

Pradera Silo Concentrado

Grfico 8. Ilustracin del porcentaje de ismeros de CLA en pradera, silo y concentrado en la estacin de otoo en el predio B.
92

Al igual que la situacin anterior, como se ilustra en el grfico 8, el alimento entregado a los animales del predio B no presentaba concentraciones de cis-10, cis12, por lo cual es posible afirmar, una vez ms, que este ismero se produce durante la biohidrogenacin de cido linoleico en el rumen para, posteriormente, transformarse en cido linoleico conjugado. Entonces cis-10, cis-12 slo podra ser identificado en la grasa de la leche, pero no en los alimentos consumidos por los animales. Adems Santos et al., (2002), indicaron que cis-10, cis-12 es uno de los principales ismeros de CLA en leche, pero slo el ismero cis-9, trans-11 es la forma biolgicamente activa de los CLA.

Como se registra en el cuadro 12 y se observa en el grfico 8, se obtuvo el mayor porcentaje de lpidos en el concentrado (lupino-avena) sin embargo, con relacin a la pradera y silo analizados durante el estudio, este alimento presentaba bajas concentraciones de la mezcla cis-9, trans-11; trans-9, cis-11 (0.72%), lo mismo ocurri con el ismero trans-10, cis-12 (0.14%).

Bauman et al., (1999) indicaron que al suplementar la dieta de los animales con aceites vegetales, se produce un gran aumento en el nivel de CLA en la grasa de la leche, aceites vegetales como; el aceite de girasol, soya, maz, canola, linaza, y papas. Sin embargo, el grano y el ensilaje con una alta variedad de aceite de maz tienen un mnimo efecto en la concentracin de CLA en la grasa de leche. En general, los aceites vegetales con gran contenido de cido linoleico producen la mayor concentracin de CLA, producindose claramente, un aumento dosis93

dependiente sobre la proporcin de CLA en la grasa de la leche. Por otro lado, varios estudios han demostrado que la alimentacin con semillas crudas, (sin procesar) no tiene efecto sobre la concentracin CLA en la leche, sugiriendo que los cidos grasos poliinsaturados que contienen las semillas sin procesar sean relativamente inaccesibles a las bacterias del rumen. En cambio, un gran aumento sobre la concentracin de CLA en la grasa de la leche, se produce cuando el suplemento diettico contiene las grasas de las semillas que han sido procesadas.

Respecto a los cambios producidos en la poblacin bacteriana ruminal, Bauman et al., (1999) sealaron que, principalmente, se deben a una disminucin del pH como un indicador del aumento de la produccin de propionato, a estos cambios se asocian la alimentacin con una alta cantidad de concentrado, bajo en fibra aumentando la produccin en el rumen y la grasa de la leche que contiene cidos trans-octadecadienoicos. Continuando con esta hiptesis, la adicin de una dieta con un buffer bajo en fibra aument el pH ruminal y disminuy la produccin de cidos trans- octadecadienoicos. Sin embargo, es difcil distinguir entre la cantidad de sustratos lpidicos y los efectos del pH en la biohidrogenacin ruminal. Por ejemplo, si se disminuye la proporcin de forraje: concentrado en la dieta desde 50:50 a 20:80 se ha producido un aumento (Chouinard et al., 1998) y una disminucin (Griinari et al., 1998) de la concentracin de CLA en la grasa de la leche.

La pradera analizada en el predio B result contener 1.55% de mezcla (cis-9, trans-11; trans-9, cis-11) y una concentracin de trans-10, cis-12 de 0.97%. Pero, el
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silo, compuesto por avena y ballica, present un elevado nivel de ambos ismeros, (mezcla cis-9, trans-11; trans-9, cis-11 1.72% y trans-10, cis-12 1.66%). Ruiz, (1996) seal que para un mismo tipo de pradera la respuesta del animal es muy distinta cuando se usa en estado fresco (pastoreo o soiling) que conservada. En cualquier circunstancia, con forraje conservado el animal siempre muestra una produccin inferior que cuando se trata de pastoreo o soiling en la misma pradera, por ejemplo, vacas en lactancia producen 15 a 24 litros en pastoreo y 4 a 8 litros al usar heno y/o ensilaje de pradera. Dhiman et al., (1999), afirmaron que las vacas que alimentadas permanentemente a pastoreo natural han presentado 500% ms de CLA, comparadas con aquellas que son alimentadas con forraje conservado y grano. Y que el heno, en cambio, no influye en el contenido de CLA en la leche.

Sobre el efecto en la composicin grasa de la leche, la alimentacin de vacas con pasturas parece producir un alto contenido de cido linoleico y grasas en la leche, ms que aquellos alimentos con forraje conservado o maz, pero la magnitud de esta diferencia es limitada. Las comparaciones indirectas indicaron que la grasa de la leche en dietas con ensilaje de maz, son ms ricas en cidos grasos de cadena corta y cido linoleico, comparadas con dietas de forraje conservado de pradera. Al comparar forraje fresco con forraje conservado, el primero parece favorecer la cantidad de cido mirstico y cido palmtico, a partir de cidos grasos mono y poliinsaturados, incluyendo el CLA. (Chilliard et al., 2001).

Entonces, al analizar los alimentos utilizados por el productor del predio B durante otoo se encontr una gran proporcin de cidos linoleicos en todos los
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alimentos entregados a los animales (pradera 1,55%; silo; 1,72% y concentrado 0.72%) comparado con el predio C durante la misma temporada, por ello se registraran mayores concentraciones de CLA en la grasa de la leche de los animales del predio B durante otoo. Ya que como lo seal Bauman, (2002) diversas investigaciones han demostrado que los suplementos dietticos segn la dosis de CLA que contienen los alimentos, dan lugar a un aumento relativo sobre la concentracin del cido en la grasa de la leche. Los resultados de estas investigaciones han establecido que los suplementos con diferentes

concentraciones de ismeros de CLA, se han transferido a la grasa de la leche. Entonces, la proporcin de cidos linoleicos medidos en los alimentos sera equivalente a la proporcin de cido linoleico conjugado en la leche de las vacas.

96

4.5. Comparacin entre los predios del estudio en el contenido de cido linoleico conjugado en leche de bovinos, durante la misma estacin.

4.5.1. Nivel de cido linoleico conjugado en leche de bovinos durante la estacin de verano.

Cuadro 13. Registro del nivel de cido linoleico conjugado en leche de bovinos, total, promedio y desviacin estndar (Ds) de CLA, en los animales del predio A y el predio B durante la estacin de Verano, expresado en porcentaje, respecto al total de grasa en leche. PRODUCTORES A vaca 1 A vaca 2 A vaca 3 A vaca 4 A vaca 5 Total Promedio Ds B vaca 1 B vaca 2 B vaca 3 B vaca 4 B vaca 5 B vaca 6 Total Promedio Ds CIS-9, TRANS-11 0,18 0,25 0,37 0,22 0,15 1,17 0,24 0.09 0,18 0,35 0,23 0,30 0,27 0,37 1,7 0,28 0.07 CIS-12, TRANS-10 0,10 0,17 0,22 0,17 0,10 0,76 0,15 0.05 0,21 0,48 0,09 0,23 0,16 0,21 1,37 0,23 0.13 MATERIA GRASA 3,22 3,86 4,95 5,16 2,79 19.98 4.00 1.04 4,29 3,14 3,81 3,00 4,24 4,51 22,99 3,83 0.63

Como se registra en el cuadro 13, al comparar la concentracin de cis-9, trans11 y cis-12, trans-10 en la leche de los animales del predio A y predio B durante la estacin de verano, se observ una concentracin mayor de ambos ismeros de CLA en el predio B (cis-9, trans-11; 0.28% promedio y cis-12, trans-10; 0.23%
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promedio). En cambio, en el predio A se obtuvieron bajas concentraciones de ismeros en la grasa de la leche estudiada, presentando promedios de 0.24% y 0.15% para cis-9, trans-11 y cis-12, trans-10, respectivamente. Sin embargo, a pesar de obtener menores concentraciones de CLA en el predio A, continuo un mayor nivel de cis-9, trans-11 sobre la concentracin de cis-12, trans-10, lo cual sera debido, a que el cis-9, trans-11 es el ismero ms predominante comprometiendo el 80 a 90% del total de CLA en los productos derivados de rumiantes, pero el trans-10, cis-12 se presenta slo en pequeas cantidades de 3 a 5% del total de CLA (Khanal y Dhiman, 2004).

Al analizar las diferentes concentraciones entre ambos ismeros, se observ claramente una elevacin de cis-9, trans-11 sobre el nivel de cis-12, trans-10, lo cual se mantuvo en la leche de las vacas de ambos predios del estudio. Al respecto Raposo de Medeiros, (2002) seal que la diferencia entre los ismeros de CLA, cis-9, trans-11 y cis-12, trans-10, es que este ltimo sera de mayor metabolizacin y, por lo tanto, encontrado en menores concentraciones en la leche y tejidos. Sin embargo, la forma en la cual el CLA se ir acumulando, depende tambin del estado fisiolgico del animal.

Tambin se ha demostrado (con infusiones especficas de trans-10, cis-12 en bovinos) que este ismero causa una disminucin en la grasa lctea (Baumgard et al., 2001). Sin embargo, durante el estudio, el ismero trans-10, cis-12 como efecto de dietas con alto nivel de cido linoleico, no se produjo en grandes cantidades con relacin a otros ismeros, por lo que no debera estar produciendo una depresin
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grasa en la leche de las vacas. Adems, como se registra en el cuadro 13 tan slo dos animales (predio B: vaca 1 y vaca 2) presentaron un aumento de cis-12, trans10 sobre la concentracin registrada para cis-9, trans-11 pero, en ellas no se obtuvo una marcada depresin de la sntesis grasa en la leche de las vacas del estudio.

Con relacin al sistema de alimentacin utilizado por cada predio, durante la temporada de verano, en el predio A se utiliz un sistema basado en pastoreo y en forma rotativa los animales reciban una suplementacin con afrechillo de trigo. En cambio, en el predio B se utilizaba un sistema basado en pastoreo pero, la dieta de los animales era suplementada con avena. En ambos casos, el anlisis de la alimentacin entregada a los animales rebel altas proporciones de cidos linoleicos, sin embargo la pradera suministrada a los animales en el predio A no superaba el porcentaje de cidos linoleicos que contena la pradera del predio B (31,6% pradera del predio A; 36% pradera del predio B) razn que explicara el mayor porcentaje de CLA en la grasa de la leche de los animales pertenecientes al predio B. Ya que, como lo sealaron Dhiman et al., (1999) aquellas vacas que reciben toda su alimentacin desde las praderas producen una grasa de leche con el contenido ms alto de CLA, no as las que reciben un tercio o dos tercios de su dieta con pasturas. Al respecto, Gagliostro et al., (2002) indic tambin, que la alimentacin en base pastoril resulta un factor predisponente para lograr una leche enriquecida en CLA, sobre todo si las pasturas consumidas son de alta calidad.

Incluso, Gagliostro et al., (2002) sealaron que es posible aumentar la concentracin de CLA en la leche a travs de la dieta. Y las diferentes estrategias
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para aumentar el CLA en la grasa de la leche, incluyen el uso de ciertas fuentes de grasa poliinsaturada, como los aceites vegetales o la suplementacin con CLA en la dieta de las vacas (Griinari et al., 1998). Los lmites para esta estrategia no son conocidos, existe una gran variacin entre los animales que consumen diferentes dietas (Dhiman et al., 1999) incluyendo un gran potencial en la sntesis de CLA. Ya que, un 80% de CLA en la grasa de la leche se derivara de la actividad de la Delta9- desaturasa en la glndula mamaria (Lock y Garnsworthy, 2003).

0,6

0,5

c-9, t-11 Predio A c-12, t-10 Predio A c-9, t-11 Predio B c-12, t-10 Predio B

0,4

% p/p

0,3

0,2

0,1

0
1 2

Animales.

Grfico 9. Comparacin del nivel de cido linoleico conjugado en leche de bovinos, entre los animales del predio B y predio A durante la estacin de verano. Como se ilustra en el grfico 9, se aprecia una gran variabilidad en las concentraciones de ambos isomeros (cis-9, trans-11 y cis-12, trans-10) entre la
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leche de los animales de los predios del estudio. Lo cual pudo deberse, como sealaron Kelsey et al., (2003) a que algunos animales exhiben una variacin doble o triple de CLA entre ellos dentro de una misma dieta, produciendo altas o bajas concentraciones de cido linoleico conjugado. Kelly et al., (1998) junto a Lock y Garnsworthy, (2003) afirmaron esta postulacin sosteniendo que el control de la actividad enzimtica de la Delta9-desaturasa debe ser investigado para aumentar la concentracin de CLA.

Pero, existen tambin otros factores que producen una variacin del nivel de CLA en la leche bovina como; el perodo de lactancia (Pinto et al., 2002), el nmero de lactancias (Stanton et al., 1997), paricin (Kelsey et al., 2003) y la edad del animal (Lal y Narayan, 1984), entre otros. Respecto a la etapa de lactancia, los animales del predio A al momento del muestreo se encontraban al inicio de sta (desde los das 9 a 16), en cambio las vacas del predio B se encontraban entre los 21 a 110 das de lactancia. Entonces, esta sera una de las razones que explicara el menor contenido de CLA en la leche de las vacas pertenecientes al predio A, ya que Stanton et al., (2000) sealaron que se producira una variacin en el nivel de CLA al comienzo y trmino de la etapa de lactancia, demostrando que el contenido de CLA en la leche era ms alto al trmino de la lactacin comparada con la leche que se produca durante el inicio de esta etapa.

En cuanto al nmero de lactancias, paricin o edad del animal, las vacas del predio A presentaban 1 a 4 partos y los animales del predio B, 1 a 3 partos lo cual resultaba en una gran variacin en el nivel de CLA en la leche de todos los animales
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durante el verano. Sin embargo, se pudo verificar que al aumentar el nmero de partos disminua el porcentaje de materia grasa y aumentaba la produccin de leche, adems el nivel de CLA aumentaba en las vacas de un parto y de 4 o 5 partos, pero esto no sucedi en vacas con 2 o 3 partos. Al respecto, Stanton et al., (1997) indicaron que habra un efecto sobre los niveles de CLA en la leche debido al nmero de lactancias. Vacas con ms de 4 lactancias producan ms CLA en la grasa de la leche, que aquellas vacas que presentaban 2 a 4 lactancias, las vacas ms viejas (>7 lactaciones) obtenan un mayor rendimiento en el nivel de CLA que las vacas ms jvenes. Adems, se ha demostrado una asociacin positiva entre los niveles de CLA en la grasa de la leche y el incremento en la edad del animal (Lal y Narayanan, 1984).

Adems, como lo ilustra el grfico 9, se observ un marcado incremento en el nivel de cis-12, t-10 en la grasa de la leche de uno de los animales (B vaca 2) del estudio en el predio B. La concentracin del ismero c-12, t-10 en este animal, era superior a todos los valores obtenidos para los otros ismeros analizados durante Verano, en ambos predios. Lo que puede deberse como lo mencion Bauman, (2002) a que el contenido de trans-10, cis-12 puede incrementarse en la grasa de la leche bajo ciertas condiciones dietticas. Pero, el resto de los animales en este predio presentaba menores concentraciones del ismero cis-12, trans-10, lo mismo ocurra en el predio A.

Otra observacin importante es la elevada medicin de cis-9, trans-11 que se obtuvo en la vaca 2 y 6 del predio B y en la vaca 3 del predio A. En el resto de los
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animales este ismero se mantuvo relativamente constante. Khanal

y Dhiman

(2004) mencionaron al ismero cis-9, trans-11 como el componente principal y encontrado en gran cantidad en la grasa de la leche. Indic adems, que existe una importante relacin de este ismero con el cido vacnico, ya que bajo una mejor condicin alimenticia hay una gran concentracin de CLA y cido vacnico en la leche.

103

4.5.2. Nivel de cido linoleico conjugado en leche de bovinos durante la estacin de otoo.

Cuadro 14. Registro del nivel de cido linoleico conjugado en leche de bovinos, total promedio y desviacin estndar (Ds) de CLA, en los animales del predio B y el predio C durante la estacin de otoo, expresado en porcentaje, respecto al total de grasa en leche. PRODUCTORES MEZCLA CIS-9, TRANS-11; CIS-11, TRANS-9 0,64 0,86 0,52 0,61 0,57 3,20 0,64 0.13 0,53 0,49 0,57 0,45 0,44 2,48 0,50 0.05 CIS-12, TRANS-10 MATERIA GRASA

B vaca 1 B vaca 2 B vaca 3 B vaca 4 B vaca 5 Total Promedio Ds C vaca 1 C vaca 2 C vaca 3 C vaca 4 C vaca 5 Total Promedio Ds

0,09 0,65 0,30 0,40 0,45 1,89 0,38 0.21 0 0,06 0,07 0,05 0 0,18 0,04 0.03

4.05 3.50 4.08 4.14 4.36 20.13 4.03 0.32 2.70 6.34 5.65 4.1 3.52 22.31 4.46 1.52

En el cuadro 14 se observa detalladamente el porcentaje de ismeros analizados para cada animal, indicando que el total de la mezcla cis-9, trans-11; cis11, trans-9 era superior en los animales del predio B (0.64% promedio) resultando, entonces, una gran diferencia entre las mezclas analizadas en ambos predios. Asimismo, la concentracin de cis-12, trans-10 fue significativamente ms alta en la grasa de la leche de los animales pertenecientes al predio B resultando un promedio
104

de 0,38% comparado con el predio C, (0.04% promedio). Sin embargo, ambos valores siguen encontrndose dentro de los valores propuestos por la literatura, de 0,15% a 0,22% para cis-9, trans-11(Sanhueza et al., 2002) y el ismero cis-12, trans-10 presente en cantidades menores al 5% de CLA en la leche (Khanal y Olson 2004) .

Una de las razones para las diferentes concentraciones de CLA en la leche de los animales de ambos predios, sera como lo seal Pinto et al., (2002) debido al sistema de alimentacin utilizado por los productores. Ya que, el predio C utilizaba durante otoo un sistema mixto de pradera con suplementacin a corral y pastoreo. En cambio, el predio B empleaba un sistema basado en pastoreo, suplementando con concentrado y ensilaje en base a pradera. Al respecto, Khanal y Olson (2004) indicaron que la leche producida en animales que se encuentran en pastoreo libre, comparada con la producida en confinamiento es, generalmente ms suave y con una proporcin ms alta de cido oleico y de cido palmtico. Adems, estos autores sealaron que posiblemente, cuando las vacas son alimentadas con una dieta que contiene una mayor proporcin de forraje, aumentara el contenido de CLA en la grasa de la leche. Motivo por el cual, existira mayor cantidad de CLA en la grasa de la leche de las vacas del predio B, ya que la medicin de los alimentos entregados a los animales pertenecientes a este predio contendra un gran porcentaje de cidos linoleicos, superiores a los valores encontrados en los alimentos correspondientes al predio C.

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Otra de las posibles causas que afectaron la proporcin de CLA en ambos predios durante el estudio, fue el nmero de partos o edad de los animales al momento del muestreo de la leche, pues hubo una gran variacin en el nmero de partos de los animales empleados durante este estudio (predio C: animales con 1 a 3 partos y predio B: animales con 1 a 5 partos) es posible, entonces, encontrar grandes variaciones en el nivel de cido linoleico conjugado en leche. Kelsey et al., (2003) sealaron que la paricin tiene una pequea relacin en el porcentaje de CLA en la grasa de la leche. Asimismo, Stanton et al., (1997) refirindose al nmero de lactancias, como uno de los factores relacionados, demostraron que un incremento en el nmero de lactaciones tendra un efecto positivo en el contenido de CLA en la leche.

Pero, durante la temporada de otoo se utilizaron animales heterogneos en relacin al nmero de partos o edad del animal, motivo por el cual sera posible encontrar variaciones en la proporcin de CLA en la leche de los animales de ambos predios del estudio durante otoo.

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1,00 0,90 0,80 0,70 % p/p 0,60 0,50 0,40 0,30 0,20 0,10 0,00
1 2 3 4 5

Mezcla c-9, t-11 y t9, c-11 Predio C t-10, c-12 Predio C

Mezcla c-9, t-11 y t9, c-11 Predio B t-10, c-12 Predio B

Animales.
Grfico 10. Comparacin del nivel de cido linoleico conjugado en leche de bovinos, entre los animales del predio B y predio C, durante la estacin de Otoo. En el grfico 10 se observa, al igual que la situacin de los predios analizados en verano, una gran variacin en los niveles de ambos ismeros estudiados (mezcla de cis-9, trans-11; cis-11, trans-9 y cis-12, trans-10) en todos los animales. Situacin que podra deberse, como lo sealaron Peterson et al., (2002) a que algunos animales poseen un mayor potencial para responder a un mismo tratamiento alimenticio que otros, siendo la enzima Delta9-desaturasa la responsable de la sntesis endgena de CLA, pudiendo variar entre los animales que son alimentados con una misma dieta.

Adems, como es posible apreciar en el grfico 10 slo la vaca 2 que pertenece al predio B obtuvo las mayores concentraciones de ambos ismeros (cuadro 14),
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siendo posible, entonces, que la variacin animal animal sea uno de los factores que tambin produce diferencias en el porcentaje de CLA obtenido en la grasa de la leche (Bauman, 2002) encontrndose dentro de estas variaciones factores tales como: las diferencias relacionadas con la biohidrogenacin en el rumen y con la actividad de la delta9-desaturasa en la glndula mamaria (Peterson et al., 2002) produciendo, finalmente, un incremento (Jiang et al., 1996) o una disminucin de cido linoleico conjugado en la leche (Stanton et al., 1997).

En general, ambos ismeros del estudio se encontraron en mayores proporciones en la leche de los animales del predio B. Y en relacin al ismero trans-10, cis-12, en las vacas correspondientes al predio C se registr un bajo nivel de ismero, incluso en algunos animales no se registr la presencia de ste, esto podra ser como lo sealaron Khanal y Olson (2004) a que el ismero trans-10, cis12 a pesar, de ser biolgicamente activo, en algunos casos no se ha verificado su presencia en productos alimenticios derivados de rumiantes. Aumentando la concentracin de ste ismero marcadamente slo bajo ciertas condiciones dietticas sin embargo, jams superara el 2% de CLA en la leche.

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4.6. Diferencias en el nivel de CLA en la grasa de leche bovina en las estaciones de Verano y Otoo. Cuadro 15. Total de ismeros de CLA y total de CLA encontrados en la grasa de la leche bovina, expresados en porcentaje, durante la temporada de verano (predio A y B) y otoo (predio C y B).

VERANO Ismero c-9, t-11 Ismero c-12, t-10 Total de CLA OTOO Mezcla de c-9, t-11 y c-11, t-9 Ismero c-9, t-11 Ismero cis-12, cis-10 Ismero c-12, t-10 Total de CLA (c-9, t-11 + c-12, t-10). 2.84 1.42 0.44 1.04 2.46 1.44 1.07 2.5

Resultados expresados en % respecto al total de materia grasa en leche. Como se registra en el cuadro 15, el ismero predominante en leche sera cis-9, trans-11 durante verano (1.44%) y otoo (1.42%). Lo que coincide con Sehat et al., (1998) quien seal que el CLA encontrado en carne y los productos lcteos es en su gran mayora el ismero cis-9, trans-11. Bauman (2002) tambin afirm esta postulacin, sealando que este ismero se presenta en cantidades del 75% a 90% del CLA en la grasa de la leche. Por otro lado, a pesar de que los resultados encontrados durante verano en la concentracin del ismero cis-9, trans-11 no seran comparables con los registrados en la mezcla cis-9, trans-11 y cis-11, trans-9 podran asemejarse, al analizar en forma separada cada ismero que compone la mezcla investigada durante otoo.
109

Entonces, el nivel de ismero cis-9, trans-11 de 1.42%, aproximadamente, en otoo sera semejante al valor encontrado en cis-9, trans-11 durante verano (1.44%), lo que pudo deberse como lo seal Martnez - Castro et al., (1979) a que los programas de alimentacin, de manejo y las variaciones climticas son relativamente uniformes dentro de cada regin. Y disminuyen las variaciones en la composicin de la materia grasa de la leche debido a factores similares tales como; la variacin estacional y del rea geogrfica.

En general, durante ambas estaciones se aprecian similares concentraciones de CLA, lo cual podra deberse a factores semejantes entre los predios del estudio tales como; el manejo de los animales, raza y el clima dentro de una misma regin (Martnez - Castro et al., 1979).

Igualmente, se registr la concentracin de cis-12, trans-10 con un valor total de; 1.07% durante la estacin de verano, valor que tambin se asemeja al nivel de cis-12, trans-10 encontrado en leche bovina durante la temporada de otoo (1.04%). Lo cual indicara, al igual que valores extranjeros citados en la literatura, que el ismero cis-12, trans-10 se encontrara en menores concentraciones en la leche respecto al ismero cis-9, trans-11 (Khanal y Dhiman, 2004).

En el estudio se present una similitud de CLA entre las dos estaciones, no obstante la concentracin de CLA en verano (2.5%) fue ligeramente superior a la encontrada en otoo (2.46%), con diferencias de 0.04%. Asimismo, Pinto et al., (2002) seal que en Chile la concentracin
110

de

cis-9,

trans-11

sera

significativamente superior en la IX regin (1.73% promedio), con respecto a la VIII regin y X regin, adems mencion que a nivel estacional existe una tendencia al aumento de CLA en la poca de primavera-verano y valores inferiores se presentaran en la temporada de otoo-invierno, sin embargo estas diferencias no seran significativas.

Respecto a los cambios producidos en el crecimiento de las praderas durante diferentes estaciones, Anrique (1995) seal que la composicin nutritiva de las praderas de la zona sur de Chile cambia permanentemente a lo largo del ao y que estos cambios son ms lentos, aunque tambin de consideracin, durante verano y otoo. Adems, Gagliostro et al., (2002) indic que la alimentacin en base pastoril resulta en un factor predisponente para lograr una leche enriquecida en CLA, si las pasturas consumidas son de alta calidad y se encuentran en estado inmaduro (muy tiernas). La concentracin lipdica en las pasturas y el porcentaje de cido linolnico (C 18:3) suele ser alto en crecimientos tempranos cuando el forraje es muy tierno, para decaer marcadamente con la madurez (Bauchart et al., 1984). Incluso, se ha demostrado una importante disminucin en el aporte de cido linoleico y linolnico de las pasturas al avanzar el estado vegetativo de las mismas. La alimentacin con pasturas inmaduras no incrementa el contenido de CLA en leche y slo se produce un ligero aumento de cido linolnico (Gonda et al., 1992). Sin embargo, aquellas vacas que reciben toda su alimentacin desde las praderas producen una grasa de leche con alto contenido de CLA, mucho ms que aquellas que reciben un tercio o dos tercios de su dieta con pasturas (Gagliostro et al., 2002).

111

Es posible observar tambin, en el cuadro 15 la concentracin promedio de cis12, cis-10 de 0.44% encontrado en la grasa de la leche analizada durante otoo. Respecto a los ismeros de CLA, Bauman (2002) seal que muchos ismeros de este cido pueden diferir en las posiciones del doble enlace, por ejemplo, 7-9, 8-10, 9-11, 10-12 y as sucesivamente. Adems, existen diferencias adicionales entre los ismeros con relacin a la configuracin del doble enlace, como los cis-trans, transcis, cis-cis o trans-trans, siendo todos posibles. Sin embargo, las dos formas,

(ismeros) de CLA, que han sido ms estudiados son cis-9, trans-11 y trans-10, cis12. Pero, recientemente cis-11, cis-9 ha sido sealado como un ismero ms efectivo contra clulas cancergenas mamarias (Tanmahasamut et al., 2004), no obstante su presencia en la leche y carne de rumiantes se ha informado raramente, (Khanal y Olson, 2004).

Adems, Khanal y Olson (2004) sealaron que la enzima responsable de la conjugacin del cido linoleico (cis-9, cis-12) identificada como cido linoleico isomerasa, produce como primer paso para la isomerizacin de este cido el cambio en la posicin cis-12 para formar cido linolnico (C-9, T-11, C-15 C18:3), que entonces se reduce para producir cido transvacnico. Siendo el paso final, para la formacin de cido linoleico y linolnico semejante, ya que durante la biohidrogenacin de estos dos cidos hay un intermediario en comn que es el cido transvacnico. Por ello es posible, que la presencia de ismero cis-10, cis-12 slo se encuentre en la leche de los animales y no en los alimentos, ya que parece ser uno de los pasos producidos durante la biohidrogenacin de cido linoleico en el rumen, para su posterior transformacin en cido linoleico conjugado. Lo que
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explicara adems, la baja concentracin de este ismero (0.44%) en la grasa de la leche respecto a los otros ismeros analizados.

4.7. Anlisis estadstico.

Cuadro 16. Valores promedios, desviacin estndar (Ds), valores mximos (Mx) y mnimos (Mn) y coeficiente de variacin (CV), para la concentracin de cada ismero, expresado en % respecto al total de grasa lctea presente en muestras de leche bovina en cada predio del estudio, durante la temporada de verano. PREDIO A Promedio Ds Mn. Mx. C.V. PREDIO B Promedio c-9, t-11 0.24 0.09 0.15 0.37 36.34 c-9, t-11 0.28 c-12, t-10 0.15 0.05 0.10 0.22 33.99 c-12, t-10 0.23 Materia grasa 4.00 1.04 2.79 5.16 26.07 Materia Grasa 3.83

Ds Mn. Mx. C.V.

0.07 0.18 0.37 25.42

0.13 0.09 0.48 57.61

0.63 3.00 4.51 16.54

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Cuadro 17. Valores promedios, desviacin estndar (Ds), valores mximos (Mx) y mnimos (Mn) y coeficiente de variacin (C.V.), para la concentracin de cada ismero, expresados en % respecto al total de grasa lctea presente en muestras de leche bovina en cada predio del estudio, durante la temporada de otoo. PREDIO B Promedio Ds Mn. Mx. C.V. PREDIO C Promedio Ds Mn. Mx. C.V. Mezcla c-9, t-11; c-11, t-9 0.64 0.13 0.52 0.86 20.46 Mezcla c-9, t-11; c-11, t-9 0.50 0.06 0.44 0.57 11.01 c-12, t-10 0.38 0.21 0.09 0.65 54.33 c-12, t-10 0.04 0.03 0 0.07 93.38 c-12, c-10 0.48 0.01 0.47 0.50 2.36 c-12, c-10 0.39 0.04 0.34 0.44 9.59 Materia grasa 4.03 0.32 3.5 4.36 7.90 Materia grasa 4.46 1.51 2.70 6.34 33.73

Como se puede apreciar, en los cuadros 16 y 17, al analizar el CV de los ismeros de CLA en cada predio del sector Vilcn, existieron grandes diferencias en cada uno de ellos. Los componentes ms variables en trminos de CV, respecto al total de la materia grasa en la leche, se registraron en el ismero cis-12, trans-10 en los animales del predio C durante otoo (C.V= 93.38%), continuando con el mismo ismero en el predio B durante otoo (C.V.= 54.33%) y verano (C.V.= 57.61%). Se observa tambin una baja variabilidad en el ismero cis-10, cis-12 correspondiente a los predios B (C.V.= 2.36%) y C (C.V.=9.59%), durante otoo. Estas variaciones se deberan probablemente, como lo sealaron Pinto., et al (1998) a que las muestras
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a nivel de rebaos presentan una mayor dispersin, comparadas con las muestras tomadas a nivel de silos de plantas lecheras.

Respecto a los promedios registrados durante la estacin de verano (cuadro 16), el valor ms alto fue para el ismero c-9, t-11, principalmente, en el predio B de 0.28%. Al respecto, Jian et al., (1996) encontraron una variacin de 0,25% a 1,77% de CLA en la grasa lctea y sugirieron que el contenido de este cido en la leche puede ser incrementado al modificar la dieta del ganado bovino. Ms tarde, Dhiman et al., (1999) experimentando con diferentes tipos de dietas lograron

concentraciones de CLA, en la grasa lctea, que fluctuaron entre 0,89 a 2,21 %, cuando la alimentacin fue en base a pradera. Concluyeron, entonces, que este importante componente puede incrementarse mediante prcticas nutricionales y de manejo.

El valor promedio ms bajo como se aprecia en el cuadro 16, se encontr en el predio A en el ismero c-12, t-10 (0.15%) sin embargo, la materia grasa en este predio (4.00%) se present ms alta, comparada con el predio B (3.83%).

Durante otoo, (cuadro 17) el promedio ms bajo fue tambin para c-12, t10 en el predio C (0.04%) y predio B (0.38%). El promedio ms alto se obtuvo en la mezcla cis-9, t-11; t-9, c-11 perteneciente al predio B (0.64%). Respecto a la materia grasa, en ambos predios se encontraron promedios que superaban el 4% de grasa lctea, obteniendo el mayor valor en el predio C (4.46%).

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Con relacin a los valores mximos y mnimos de los ismeros de CLA en el estudio, se obtuvo una gran variacin en todos. Cabe destacar, que los valores ms bajos fueron encontrados durante otoo para el ismero c-12, t-10 desde 0% a 0.07% del total de materia grasa en leche de los animales del predio C. Lo cual, probablemente, fue debido a la baja concentracin de este ismero en leche, ya que como lo seala la literatura c-12, t-10 se presenta en cantidades menores al 5% del CLA total en leche y no ha sido detectado en muchos casos (Khanal y Olson, 2004). Los valores ms altos en verano se obtuvieron en la mezcla de c-9, t-11; c-11, t-9 (0.86% - 0.44%, en general), el ismero c-12, c-10 por su parte, registr valores similares en ambos predios (0.50% 0.47% predio B y 0.44% 0.34% predio C), siendo ligeramente menores en el predio C.

Los valores ms altos durante verano se presentaron en el ismero c-9, t-11 en los animales pertenecientes a los predios B (0.37% - 0.18%) y A (0.37% 0.15%), siendo los valores mximos y mnimos similares en cada predio y slo ligeramente ms bajos en el predio A. Los valores mnimos se registraron en c-12, t10 con excepcin del valor mximo registrado en el predio B para ste ismero, ya que un animal present un 0.48% del total de materia grasa compuesta por c-12, t10, valor que superaba al encontrado para c-9, t-11. Lo cual podra explicarse, como lo indic Bauman, (2002) a que la proporcin de grasas en la leche del ismero trans-10, cis-12 puede aumentar marcadamente bajo ciertas situaciones dietticas

116

Cuadro 18. Coeficiente de variacin (C.V.) para cada ismero investigado y total de CLA durante verano y otoo, expresado en % respecto al total de materia grasa en leche. VERANO Ismero c-9, t-11 Ismero c-12, t-10 Total de CLA en verano OTOO Mezcla de c-9, t-11 y c-11, t-9 Ismero c-12, t-10 Ismero cis-12, cis-10 Total de CLA en otoo (c-9, t-11 + c-12, t-10). 15.74 73.86 5.98 2.46 30.88 45.8 2.5

Como se observa en el cuadro 18, la mayor variabilidad en trminos de C.V. se present en el ismero c-12, t-10 durante ambas estaciones, principalmente durante otoo con un C.V. de 73.86% respecto al total de materia grasa. El ismero c-9, t-11 registr un C.V. de 30.88% durante verano, siendo menor la dispersin encontrada en la mezcla (c-9, t-11; c-11, t-9) con un 15.74%. Por otro lado, el isomero cis-10, cis-12 registr la menor variabilidad (5.98%).

Con relacin al total de CLA, es posible observar similares concentraciones en leche bovina durante ambas estaciones en estudio, sin embargo se encontr ligeramente menor cantidad durante otoo con un 0.04% menos al total de cido linoleico conjugado en leche encontrado durante verano (2.5%). Valores similares sealaron Pinto et al., (2002) al investigar el efecto estacional de CLA en la leche de silos en seis plantas ubicadas en las regiones VIII, IX y X de Chile durante un ao
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(desde junio 1998 a mayo 1999) encontrando un valor ms alto en la poca de primavera-verano (1,75 %) y valores inferiores se presentaron en la poca de otooinvierno (1,59 %).

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5. CONCLUSIONES.

Se estableci el valor promedio de los ismeros de cido linoleico conjugado

en la grasa de la leche de los bovinos del sector Vilcn, en la novena regin de Chile. Establecindose durante la temporada de verano, un valor promedio de 0.26% para el ismero cis-9, trans-11 y 0.19% para cis-12, trans-10. Durante otoo, se determin una concentracin promedio de 0.57% para la mezcla de cis-9, trans11 ; trans-9, cis-11, 0.21% para cis-12, trans-10 y 0.44% para el ismero cis-10, cis12. Resultando dentro de los valores extremos observados en investigaciones extranjeras (0.2% a 3.7%)

El ismero cis-12, trans-10 present la mayor variacin durante la estacin

de otoo, con un coeficiente de variacin (C.V.) de 73.86% respecto al total de materia grasa. Durante verano, se apreci tambin una gran variabilidad, aunque menor a la encontrada en otoo de 45.8% del total de materia grasa. Cis-9, trans-11 durante verano, present una menor variabilidad con 30.88%. La mezcla (c-9, t-11; c-11, t-9) registr una baja variabilidad, con un C.V. de 15.74%. El ismero cis-10, cis-12 present las menores variaciones en la grasa de la leche en relacin a los ismeros investigados, con un coeficiente de variacin de 5.96% respecto al total de materia grasa de leche bovina analizada en cada predio durante otoo.

El ismero predominante en la grasa de la leche bovina fue cis-9, trans-11 y

no el ismero cis-12, trans-10 presente en concentraciones menores al 5% del CLA total encontrado en la leche, coincidiendo con la literatura.
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En la temporada de otoo cis-10, cis-12 alcanz un nivel de 0.44% en la

grasa de la leche y no se registr la presencia de este ismero en el anlisis de los alimentos. Se concluy, entonces, que cis-10, cis-12 es un ismero que se genera como uno de los intermediarios del proceso previo a la formacin de cido linoleico conjugado en el rumen, siendo posible encontrar este ismero en grandes cantidades en el animal, pero ste no se presenta en los alimentos.

Adems, se registr durante verano un valor total de; 2.50 % para los

ismeros c-9, t-11 y c-12, t-10 existiendo una tendencia a disminuir ligeramente en otoo (2.46%) con una disminucin de aproximadamente el 0.04%, debido a estas pequeas diferencias no se observ un efecto estacional en el sector Vilcn de la novena regin de Chile.

Durante ambas estaciones del estudio, se registr el mayor porcentaje de los

ismeros de cido linoleico conjugado en la grasa de la leche de los animales pertenecientes al predio del pequeo productor (predio B). Debido a la fuente de alimentacin consumida por los animales en este predio, ya que durante verano y otoo la dieta se basaba de praderas naturales mejoradas y poca estabulacin.

Las muestras de leche correspondientes a los predios A y C del sector Vilcn

presentaron una menor concentracin de cido linoleico conjugado que la registrada en el predio B. Estas diferencias se deben al sistema de alimentacin utilizado por cada productor. Sin embargo, dichos valores se encuentran dentro de los rangos de
120

referencia citados en la literatura.

En general, se concluy que la alimentacin es el principal determinante en

el aumento de CLA en leche siendo, principalmente, las dietas basadas en una mayor proporcin de praderas las que ms incrementan la cantidad de CLA en la grasa de la leche bovina.

121

6. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.

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