Microbiologa 27/05/2009

Nidia :B

Estructura y Clasificacin Viral (1parte de la clase)

El origen de la palabra virus Tiene relacin con la palabra veneno, que se usaba en el SXVIII para describir algunas sustancias de origen desconocido y que eran patgenos, en realidad en ese momento no saban de qu se trataba; existen algunos txicos que son qumicos, otros que son orgnicos, para entonces, este trmino los abarcaba a todos. No fue hasta el desarrollo de la microscopa electrnica que se pudo realmente ver cmo eran los virus. Aqu se pudieron duplicar algunas partculas que producan enfermedades, como las que podemos ver hoy en da, donde el hombre ha podido protegerse de algunas de ellas por medio de las vacunas y otras que continan actuando, como por ejemplo la influenza. La evidencia de la existencia de los virus data desde el origen del hombre, siempre ha sido atacado por virus; no solamente humanos, sino que existen algunos que son capaces de atacar plantas y animales. Cmo se pudo demostrar que era un virus y no una bacteria la que causaba la infeccin? Simplemente por tamao se puede separar una bacteria de un microorganismo ms pequeo. En 1892 Iwanovski hizo una filtracin en membranas, el experimento se trataba de que se molan las hojas de tabaco que presentaban lesiones producidas por el virus del mosaico del tabaco, si se tomaba una gota de este lquido y se pona en una hoja sana, produca el mismo efecto; cuando se filtraba el lquido (se supone que al utilizar un filtro de 0,2 m la bacteria quedara retenida en esta membrana) solo quedara el liquido con el virus, resulta que al ponerlo sobre hojas sanas, volva a provocar las mismas lesiones en estas. De esta manera se pudo saber que los virus eran partculas ms pequeas que el tamao de este filtro (0,2m). Qu son los virus? Si se analiza bioqumicamente estn constituidos principalmente por cidos nuclicos y protenas. Adems algunos contienen lpidos e hidratos de carbono. El tamao vara entre 10 y 400nm, esto se descubri a travs del microscopio electrnico. Se clasifican como parsitos intracelulares estrictos, esto quiere decir que slo son capaces de replicarse dentro de una clula, porque depende de la energa que contiene esta, y los componentes bsicos como son los aminocidos y nucletidos. Infectan diversos tipos de clulas (animales, vegetales, bacterias). Para determinar la estructura de los virus existen dos mtodos la criomicroscopa electrnica y la difraccin de rayos x. La criomicroscopa electrnica es una derivacin de la microscopa electrnica normal, la difraccin de rayos x es una tcnica que se usa para determinar las estructuras de protenas o sustancias que son cristalizadas. Sabemos que las dimensiones de los virus van desde los 10nm a los 400nm, esto no se puede ver a travs del microscopio ptico, por lo tanto en 1930 se desarroll el primer microscopio electrnico. De esta manera se empezaron a ver muestras de distintos virus. Una de las tcnicas que utiliza es la tincin negativa una muestra es sombreada con metales pesados, de tal manera que lo que se deja ah es una huella de lo que haba (lo que se ve ms blanco es el virus)

Estructura y Replicacin de los Virus 1

De esta manera se pudieron ver distintos tipos de partculas virales en donde son notorias las diferencias de las formas de los virus. La criomicroscopa electrnica es una desviacin de la tcnica, slo que en vez de hacer el sombreado se congela la muestra y hacen cortes donde est el virus, estos cortes se miran en el microscopio electrnico, como se pueden hacer muchos en distintos planos, se pueden tomar todos y mediante procesos matemticos computarizados se puede hacer una reconstruccin de cmo es este virus. De acuerdo a la forma encontramos que virus tienen distintos tipos de simetra donde podemos ver una icosadrica, una helicoidal y una compleja. Simetra Helicoidal: el virus tiene un genoma que es un cido nuclico y este ac. nuclico es envuelto por protenas (analoga con un choclo Dx!!..los granos seran las protenas y la coronta sera el cido nuclico). Se ven como una barra alargada. Dependiendo del tamao de este virus, el tamao de las protenas que lo estn cubriendo. La funcin principal de las protenas es tratar de empaquetar el cido nuclico y protegerlo, porque el cido nuclico puede ser cortado por nucleasas. Otra funcin es que en la infeccin estas protenas son importantes para poder entrar en la clula, tiene que producirse una interaccin entre estas protenas y los receptores que tengan las clulas. Los virus no pueden entrar a todas las clulas. Simetra Icosadrica: Se basa en una figura que tiene 20 caras triangulares, esta forma se genera espontneamente debido a la interaccin de las protenas. En el interior ir el genoma y al igual que en la figura anterior, ir protegido por las protenas. Matemticamente tiene, de pende de donde se ubica el eje, distintas simetras. Lo que importa que tengamos claro xDes que se forma una estructura de 20 caras triangulares aproximadamente, que al visualizarlo no se nota tan claramente en todos; esto se debe a que las protenas con las que estn formados los distintos virus empiezan a alterar la forma de las caras, por eso se pueden encontrar incluso algunos que parecen esferas. No dijieron nada sobre el de simetra compleja, pero ah estla el dibujito :B! se supone que no tienen simeta regular. Lo que muestra esto es solamente la parte que tiene protenas y el cido nuclico que est adentro. Existen los llamados virus desnudos y con manto, estos ltimos se cubren por una membrana por fuera. Por ejemplo, el VIH tiene una (la cosa roja) estructura icosaedra (aunque no lo crean :O ... lo dicen las matemticas) con el cido nuclico en su interior, y adems posee esta membrana (lo azul) que est constituida por lpidos y protenas. Entre el manto y la capside existe la matriz (en amarillo) que son protenas. Los virus estn compuestos por subunidades mnimas que son protenas de cadenas polipeptdicas. Las subunidades estructurales son los protmeros, que son asociaciones de protenas que forman una molcula, esta unidad estructural va a estar repetida muchas veces y eso va a formar la estructura del virus. Estructura y Replicacin de los Virus 2

La unidad morfolgica es el capsmero, (el profe dice q no le l no le da mucha importancia porque es lo que se ve del virus), es lo que se observa de la microscopa electrnica pero no necesariamente corresponde a la unidad estructural. La cpside es la cubierta, la capa proteica que rodea al genoma. Nucleocpside se habla de la mezcla que hay de unas protenas que estn unidas al genoma. Con este trmino hay confusin porque hay libros que tienen claramente especificado qu es la nucleocpside y hay otros que hablan de la cpside y nucleocpside. Por ejemplo, virus que no tienen manto, se ve el cido nuclico con la protena, a eso le llaman nucleocpside. En el caso de otros virus, como por ejemplo en el VIH, existe lo que se llama cpside que es la protena que est por fuera (como las cpsulas de los remedios, tienen una cubierta y adentro va el medicamento; la cubierta vendra a ser la cpside) y dentro de la cpside va el acido nuclico ms otras protenas; eso vendra siendo la nuecleocpside [en el caso del VIH est claramente establecida la diferencia]. Entonces existirn virus que slo tengan cpside y otros que tengan adems nucleocpside. La envoltura o manto es una membrana que tiene una bicapa lipdca con glicoprotenas. Virn es la partcula viral completa y es la que es infectiva. La estructura de los virus est formada por organizaciones en que se van acoplando las protenas, y cada cara va a estar formada por la asociacin de protenas. Por ejemplo en la imagen aparecen una protena roja una azul y una verde, si hablamos de unidad estructural podramos decir que esas 3 protenas estn formando esa cara, y esas pueden interaccionar de distinta forma, entonces todo un virus va a tener distintas asociaciones de protenas y estas van a determinar su forma y tamao. A su vez, las protenas, adems de interactuar entre si en las caras, lo hacen en los vrtices. * Eso que marqu () vendra siendo un protmero, ah se nota que el protmero se repite varias veces el protmero vendra siendo la subunidad estructural del virus. Existen virus que tienen poquitas o otros que tienen muchas protenas, cuando tienen muchas se van a ver ms redondos. Estabilidad de los Virus Retomando lo de la existencia de virus desnudos y con manto, entre ellos tienen diferente estabilidad, los virus con manto al tomar contacto con el ambiente es muy fcil que su manto sea oxidado (porque contienen lpidos) y ser atacados por agentes fsicos (rayos uv, desecacin), son muy lbiles al ambiente. Los virus desnudos, en general son muy estables (por ejemplo los enterovirus, hepatitis A). Por lo general los virus con mantos se van a contagiar ms de persona a persona (virus influenza), en cambio los desnudos las personas pueden infectarse porque tomaron aguas contaminadas. Virus estables, como los de contaminacin fecal-oral (enterovirus) pueden pasar por el estmago (pH bajo) y no ser destruidos ah, llegando al tracto digestivo en las condiciones optimas para infectar. Por lo tanto de acuerdo a la va de infeccin que utilizan necesitan ser ms o menos estables, por ejemplo un rinovirus si tuviese q pasar por el estmago sera destruido. Estructura y Replicacin de los Virus 3

Genoma Viral En general los virus poseen un solo tipo de acido nuclico (DNA o RNA),que contiene la informacin gentica necesaria para la sntesis de protenas virales y pueden ser de simple o doble hebra, lineal o circular, fragmentado, etc. Es bastante heterognea la forma en la que tienen los cidos nuclicos los virus. La parte ms importante de los virus son las protenas ya que est constituido en un 30 a un 90% por ellas. Segn el tamao y complejidad del virin puede contener de 4 a 100 polipptidos diferentes (4 tendra el virus ms simple y 100 el ms complejo). Las protenas del virn pueden ser estructurales (formando la partcula, para proteger el genoma) o no estructurales (enzimas que necesita para catalizar algunas reacciones). Funciones de las protenas Estructura (proteccin del genoma) Ensamblaje de una cubierta estable empaquetamiento y reconocimiento especfico del genoma Replicacin del genoma viral: Polimerasas Transporte del genoma: * Interaccin con componentes celulares internos para transportar el genoma al sitio apropiado (hay genomas que se replican en el nucleo y otros en el citoplasma) Interaccin con receptores celulares clulas infecta (tropismo viral) va a determinar si el virus es infectivo o no, y qu tipo de

* Transmisin de seales especficas para inducir fusin a membranas. Interacciones con el husped el virus tiene que interaccionar de distintas formas con protenas del husped, con procesos que pasan en la clula que se infect. * Interaccin con sistema inmune * Interaccin con componentes celulares para dirigirse al rgano * Sitio adecuado (vas de transmisin). Inmungenos Virulencia (hay protenas que determinan que el virus puede ser ms o menos patognico) Lpidos e Hidratos de Carbono Estructura y Replicacin de los Virus 4 Los virus con manto poseen hidratos de carbono y lpidos de origen celular, esta membrana la adquieren cuando salen de la clula (yemacin), pueden llevar membrana celular o nuclear dependiendo del lugar donde se produjo la replicacin. Clasificacin Existen distintos criterios de clasificacin, de acuerdo a cido nuclico, simetra, si poseen o no manto, husped. Hoy en da en general se clasifican por el cido nuclico y despus se hacen todas las dems subdivisiones. Los virus RNA, de acuerdo a simetra los podemos clasificar en icosadricos y helicoidales, despus se pueden subdividir en desnudos y con manto (los helicoidales generalmente tienen manto), otra subdivisin que se puede seguir haciendo son si los RNA son de simple o doble hebra, positivos o negativos, despus de eso, vienen todos los nombres de familia, etc. Cuando se habla de RNA positivo significa que la secuencia de ese RNA es igual a la secuencia del mensajero que produce. El negativo tiene la secuencia complementaria al mensajero.

En la clasificacin, esto es lo ms aceptado y est por convencin: Grupo RNA(-) Por ejemplo un RNA negativo Orden (-virales) no todos tienen un orden, familia si Orden: Mononegavirales Familia (-viridae) Subfamilia (-virinae) Genero (-virus) Especie ( ) Familia: Filoviridae Gnero: Filovirus Especie: Virus Ebola Zaire

Por lo general solo se nombra familia genero y especie, de todos modos hay virus que se nombran por lo que producen, por ejemplo el virus de la varicela, virus rubola, virus dengue etc.

Replicacion Viral (2parte de la clase)

La replicacin viral se puede dividir en varias etapas Adsorcin Es la unin del virus a la clula, se hace por la interaccin de protenas que tiene el virus con receptores de la clula, no todas las clulas tienen estos receptores, es por eso que un virus puede absorberse en la mucosa nasal y otro en la mucosa gstrica. Una vez que se produce la interaccin entre la clula y el virus, la clula empieza a rodear esta partcula, se puede formar un endosoma y asi ingresar a la clula. Es una unin altamente especfica, va a definir el tropismo viral (qu clulas se van a infectar las que tengan el receptor) y estos receptores celulares son protenas o glicoprotenas que tienen importantes funciones biolgicas diferentes. Este proceso puede cambiar (reversible), es independiente de la temperatura, puede cambiar segn condiciones (cambio de pH) y puede inhibirse por la accin de algunos anticuerpos Penetracin Estructura y Replicacin de los Virus 5 Se producen cambios conformacionales en la protena que llevan a que finalmente el virus ingrese al interior de la clula, existen dos mecanismos de entrada: la fusin de la membrana del virus con la membrana celular, y la endocitocis (la membrana celular engloba al virus y lo hace ingresar). Despus de que el virus entra es irreversible, es dependiente de la temperatura y puede alterarse con inhibidores de fagocitosis o endocitosis. Los virus ingresan como vesculas y luego son liberados dentro de la clula; en virus como la influenza, que tiene membrana, al ingresar se forma una vescula de doble membrana. Denudamiento Se produce la liberacin del material gentico viral por la accin de enzimas celulares (enzimas lisosomales presentes en vacuola fagoctica) y/o virales. El genoma viral siempre queda asociado a algunas protenas virales (componentes de la nucleocpside) Biosntesis de macromolculas virales En general lo que debe sintetizarse son las protenas y los cidos nuclicos basado en la informacin gentica que tiene el virus.

Ya sea si el virus tenga RNA de una hebra, doble hebra, positivo o negativo, al final todos tienen que producir un mensajero, y ese mRNA va a ser el que va a producir las protenas y enzimas que necesita para formar la estructura viral. Una vez que se sintetizan los componentes virales se tiene que producir la replicacin del genoma y la sntesis protenas virales tempranas (son las que van a sintetizar los cidos nuclicos) y tardas (las protenas estructurales). La replicacin virus DNA generalmente se hacen en el ncleo y la de los virus RNA generalmente en el citoplasma, existen excepciones en que algunos virus RNA, como el de la influenza, se replican parcialmente en el ncleo. Los virus se pueden clasificar segn el tipo de cido nuclico que tienen, DNA o RNA. Si es RNA(+) se puede tener sntesis de las protenas porque en algunos, el genoma puede ser utilizado directamente como mensajero. Los RNA(-) tienen necesariamente que formar el mRNA. Si se tiene un RNA de doble hebra, una positiva y una negativa, la negativa tiene que hacer su mensajero complementario y luego se pueden sintetizar las protenas. Todos los virus necesitan producir un mensajero. En la replicacin de los virus existen etapas que son virales (donde intervienen protenas virales) y tambin hay procesos celulares, estos tienen que estar acoplados. La sntesis de protenas se realiza en los ribosomas, entonces es un proceso celular, pero si utiliza una enzima propia del virus, esa va a ser una etapa viral. (en el dibujo lo que est en verde es un proceso viral y lo rojo es un proceso celular). En el caso del virus polio, se utiliza un mensajero que produce una poliprotena (una protena larga) y despus es cortada por proteasas para producir todas las protenas que forman el virus, luego se ensambla el virus y este es capaz de lisar la clula y salir. Estructura y Replicacin de los Virus 6 RNA (+) de simple hebra (polio) acta como RNAm, es infectivo y sirve de molde para la replicacin del genoma viral. Por lo tanto virus no requiere contener transcriptasa en el virin (son infectivos de por s, porque son capaces al momento de entrar a la clula, de replicar directamente). Los virus RNA (-) y RNA de doble hebra (+/-) requieren llevar RNA polimerasa en el virin ya que el cido nuclico no es infectivo.

El profe dej hasta ah noms la clase dejo esto que sale en la diapo Ensamblaje * Formacin de nucleocpside proteica y su asociacin al genoma viral * Virus DNA: se produce en el ncleo * Virus RNA: se produce en el citoplasma * En virus desnudos ensamblaje permite formar la nucleocpside completa (virus maduro) * En virus con manto la formacin de la nucleocpside completa se produce al salir de la clula (adquisicin del manto) El proceso de maduracin es asincrnico y los virus ya maduros permanecen asociados a la clula husped hasta que se lisa Liberacin o Salida * Lisis (virus desnudos) * Yemacin (virus con manto)

Estructura y Replicacin de los Virus 7