RIESGOS A LA SALUD CAUSADOS POR CIANOBACTERIAS Y ALGAS DE AGUA DULCE EN AGUAS RECREACIONALES

Dra. Ingrid Chorus Cientfica Instituto para la Higiene del Agua, Aire y Suelo Agencia Federal Ambiental Corrensplatz, 1 D14195, Berlin Alemania Telf. +49 30 890 31346 Fax +49 3089031830 E-mail: ingrid.chorus@uba.de Prof. Ian R. Falconer Departmento de Farmacologa Clnica y Experimental Universidad de Adelaida, Escuela de Medicina Australia 5005 Centro Cooperante de Investigacin para Calidad del Agua y Tratamiento Telf. 61 8 8303 4257 y 61 6251 1345 E-mail: ifalconer@medicine.adelaide.edu.au Ing. Henry J. Salas Asesor Centro Panamericano de Ingeniera Sanitaria y Ciencias del Ambiente (CEPIS) Casilla Postal 4337, Lima 100, Per Los Pinos 259, Urbanizacin Camacho Lima 12, Per Telfono (51-1) 437-1077, Fax (51-1) 437-8289 E-mail: hsalas@cepis.org.pe Dr. Jamie Bartram Cientfico Divisin de Apoyo Operacional en Salud Ambiental Unidad de Agua, Saneamiento y Salud (OMS) Organizacin Mundial de la Salud 20 Avenue Appia CH-1211 Ginebra 27, Suiza Telfono +41 (22) 791.3537 & 3531, Fax +41 (22) 791.4159 E-mail: bartramj@who.ch

PALABRAS CLAVES

CIANOBACTERIA, EUTROFICACIN, RECREACIN, TOXINAS, ALGAS

RIESGOS A LA SALUD CAUSADOS POR CIANOBACTERIAS Y ALGAS DE AGUA DULCE EN AGUAS RECREACIONALES
Introduccin: Qu son las cianobacterias y algas, y por qu sus efectos para la salud recin han suscitado inters? En aguas dulces, el trmino "algas" se usa para organismos microscpicos muy pequeos, en principio organismos unicelulares, algunos de los cuales forman colonias y as, alcanzan tamaos visibles a simple vista como partculas verdes diminutas. Estos microorganismos generalmente se dispersan finamente en todo el agua y pueden causar una considerable turbiedad si alcanzan densidades altas. Las "cianobacterias" son organismos con ciertos rasgos de bacterias y algunos de algas. Son similares a las algas en tamao pero a diferencia de otras bacterias, contienen pigmentos verde-azulados o verdes y por lo tanto, realizan la fotosntesis. Por ello, tambin se denominan "algas verde-azuladas". En contraposicin a la mayora de algas, muchas especies de cianobacterias pueden acumularse para formar natas en la superficie, a menudo denominadas "afloramientos", con una densidad celular sumamente alta. Los casos conspicuos de intoxicacin pecuaria han conducido al estudio de la toxicidad cianobacteriana, y durante las ltimas 2 a 3 dcadas, se ha identificado la estructura qumica de varias toxinas cianobacterianas (cianotoxinas) y se han establecido sus mecanismos de toxicidad. Por contraste, apenas se han investigado los metabolitos txicos de las algas de agua dulce, pero se ha mostrado la toxicidad para especies de agua dulce de Dynophyceae y Prymnesiophyceae (vase el punto 2.2). Debido a que las especies marinas de estos gneros a menudo contienen toxinas, en verdad es razonable esperar especies txicas entre estos grupos incluso en las aguas dulces. Al comparar la causa relativa de la inquietud que surge en caso de cianobacterias txicas con aquella que surge de algas de agua dulce potencialmente txicas, los mecanismos de concentraciones de clulas son un factor clave. Si bien muchas especies de algas de agua dulce tambin pueden proliferar intensivamente en aguas eutrficas (o sea, excesivamente fertilizadas), no forman natas superficiales densas como las cianobacterias, y en consecuencia, las toxinas que pudieran contener no se acumulan a concentraciones tales que puedan convertirse en peligrosas para salud humana o del ganado. En contraposicin a las cianobacterias, las algas de agua dulce no han sido implicadas en casos de envenenamiento de ganado o intoxicacin de la fauna silvestre. Por estas razones, esta contribucin se centrar en gran parte en los riesgos para salud debidos a cianobacterias en aguas dulces destinadas a la recreacin. Se incluir informacin sobre los efectos para la salud de las algas de agua dulce. Algunas especies de cianobacterias tambin proliferan en aguas costeras salobres, en particular en condiciones tranquilas. Nodularia spumigena es el ms generalizado de estos organismos, contiene toxinas y puede formar natas superficiales. Las aguas salobres tambin alojan algas txicas tales como Prymnesium. La inquietud de los problemas de salud debidos a Francis (1878) describi "una nata como pintura cianobacterias txicas en las aguas recreacionales verde al leo, de dos a seis pulgadas de espesor ... se basa en varias fuentes de informacin. Son no apta para el ganado bovino y otros animales, que numerosos los casos de intoxicacin letal de produce una rpida y a veces terrible muerte" del animales terrestres que consumen agua con ganado bovino, cerdos y perros que haban crecimientos de masa de cianobacterias. El primer consumido la nata de un afloramiento de Nodularia caso documentado de una intoxicacin letal del spumigena. ganado causado por agua potable de un lago altamente infestado con cianobacterias se public en el ltimo siglo (recuadro) y los casos registrados hasta ah incluyen ganado ovino, bovino, caprino, porcino, perros, peces, roedores, anfibios, aves acuticas, murcilagos, zebras y el rinoceronte (Codd et al. 1989). Los perros han muerto despus de lamer acumulaciones de cianobacterias de su pelaje, o despus de ingerir natas de cianobacterias bnticas (Gunn et al. 1992). Los casos de defunciones humanas debidas a toxinas cianobacterianas se han limitadas a la exposicin a travs de dilisis renal (Jochimesen et al. 1998). Sin embargo, las deficiencias de salud se conocen a partir de numerosos informes anecdticos de irritaciones de la piel y/o mucosas, y tambin de casos documentados de enfermedades despus de la exposicin a travs de agua potable as como la ingestin o aspiracin accidental de material de la nata (vase el cuadro 2). Otras fuentes de informacin 2

son datos toxicolgicos de experimentos con animales y datos sobre concentraciones de toxinas cianobacterianas en aguas usadas para la abstraccin de agua potable y recreacin (vanse los puntos 2.1 y 2.4). Las toxinas de algas y cianobacterias son sustancias naturales, pero la actividad humana ha conducido a la fertilizacin excesiva ("eutroficacin") de muchos cuerpos de agua, especialmente durante las tres ltimas dcadas. Esto a su vez causa la proliferacin anormal de algas y cianobacterias (en agua dulce) y por lo tanto tiene un impacto considerable sobre la calidad del agua recreacional. En climas templados el predominio de cianobacterias es sumamente pronunciado durante los meses de verano, cuando la demanda de aguas recreacionales es ms alta. En algunas regiones, las cianobacterias han sido abundantes por ms de una generacin. Mientras que anteriormente, con frecuencia la idea comn era no nadar "donde el agua afloraba"; los usuarios (debido a la falta de opciones) ahora han aceptado esta calidad de agua como normal para su regin. Se han reportado mltiples ancdotas de nios jugando con las natas. Por lo tanto, la eutroficacin junto con una falta de conciencia por parte de la poblacin puede conducir a riesgos para la salud causados por cianotoxinas. Las toxinas cianobacterianas en el agua dulce fueron consideradas un tema de inters slo recientemente, ya que nuestro conocimiento sobre su presencia y distribucin ha estado fuertemente limitado por la falta de mtodos adecuados para la deteccin y vigilancia. Desde los aos sesenta hasta finales de los aos ochenta, la deteccin se realiz principalmente con un bioensayo con ratones para evaluar la seguridad de los abastecimientos de agua potable. Debido al costo elevado (as como limitaciones ticas de aplicabilidad), este mtodo no es apropiado para grandes programas de monitoreo rutinario o tipo sondeo. Sin embargo, ahora existen mtodos efectivos de anlisis qumico para las toxinas conocidas, y los ensayos immunolgicos sensibles as como los ensayos con enzimas se han vuelto comercialmente disponibles para los ms importantes (por ejemplo, microcistinas y saxitoxina, vase a continuacin). Estas brindan nuevas posibilidades para programas de sondeo orientados hacia la evaluacin del riesgo potencial as como hacia la vigilancia regular. Los programas de sondeo recientes y en curso en varios pases muestran que las concentraciones de toxina cianobacteriana en las aguas recreacionales y potables se aproximan ms a los niveles de inquietud que algunos de los productos qumicos industriales y antropognicos que actualmente son el centro de la atencin pblica y son tratados por la legislacin. "Uno slo puede especular sobre el motivo por el cual los Estados Unidos ha permanecido reactivo en lugar de preventivo sobre el tema de toxinas cianobacterianas. ... es improbable que las toxinas naturales alguna vez reciban la misma atencin, ya sea por el pblico o medios de comunicacin, como los contaminantes hechos por el hombre. Como se describe en la bibliografa sobre comunicacin de riesgos, existen diversos factores de rechazo" que contribuyen a las percepciones del pblico sobre un riesgo especfico. Estos incluyen si el riesgo es voluntario o involuntario, natural o industrial, o familiar frente a extico....... Generalmente, las toxinas cianobacterianas son de menor inters periodstico que los productos qumicos industriales ya que son naturales y no tan relevantes moralmente ni temidos (Yoo, Carmichael, Hoehn y Hrudey 1995, p. 8-9).

Actualmente, diversos pases estn desarrollando guas para cianobacterias txicas en aguas recreacionales y/o para toxinas de cianobacterias en el agua potable. La Organizacin Mundial de la Salud ha publicado un valor gua provisional para la microcistina-LR en el agua potable (WHO 1998) dentro del proceso de revisin de las Guidelines on Drinking-Water Quality de la OMS. An ms, en una monografa compilada por la OMS sobre Toxic Cyanobacteria in Water: a Guide to Health Significance, Monitoring and Management (Chorus y Bartram, eds. 1998), se presenta una seccin dedicada a prcticas seguras para aguas recreacionales (p. 163), y un captulo de las Guidelines for Safe Recreational Water Environments, Vol. 1: Coastal and Freshwaters de la OMS (que ser publicado como un borrador de consulta por la OMS a finales de 1998) estar dedicado a las cianobacterias y algas en las aguas recreacionales. As, las guas para la evaluacin y manejo de los peligros de las cianobacterias en aguas recreacionales actualmente se estn volviendo disponibles en el mbito internacional.

2.

Evaluacin de riesgos: qu sabemos Pasos en el desarrollo del conocimiento sobre acerca de los riesgos causados por cianotoxinas cianobacterias y algas en aguas dulces? 1878: primera publicacin sobre los efectos txicos de las cianobacterias Las toxinas cianobacterianas en el agua dulce hasta mediados de los aos 40: informes de intoxicaciones han sido el centro de la investigacin en un de ganado y fauna silvestre despus de ingerir nmero pequeo de grupos de trabajo cianobacterias perfilados en diversos pases, especialmente 1950-1970: numerosas pruebas de toxicidad (ensayos con Australia, Escandinavia, Japn, Reino Unido, ratones, i.p.) con material de afloramientos y cultivos Sudfrica y EUA. Se han identificado toxinas de cianobacterias, listas de cianobacterias claves causantes de defunciones de animales potencialmente txicas, descripcin de los efectos, y lesiones humanas. Sin embargo, existe diferenciados por hepato- y neuro-toxinas evidencia considerable que una variedad de 1972: primera cianotoxina identificada (Anatoxina-a) metabolitos cianobacterianos puede ser 1990: mtodos analticos adecuados disponibles para el pertinente para la salud humana y deben monitoreo rutinario de toxinas evaluarse como riesgos potenciales. Se 1995: ensayos inmunolgicos y enzimticos sumamente requiere mayor investigacin sobre toxinas y sensibles alergenos producidos por cianobacterias y diversas taxa de algas para la evaluacin integral de riesgos.

2.1 Cianobacterias y toxinas cianobacterianas ("cianotoxinas") Qu son cianobacterias? Las cianobacterias son organismos unicelulares muy generalizados que crecen planctnicamente (es decir, dispersos en el agua), en superficies de cuerpos de agua, as como en superficies terrestres hmedas. Si bien las clulas nicas son muy pequeas (pocos m de dimetro), muchas especies forman filamentos o colonias, a veces hasta de uno o dos mm de dimetro. Las especies bnticas habitan en la superficie del sedimento, y algunas veces forman natas densas. Debido a su contenido de pigmentos y capacidad de fotosntesis, estos organismos se clasificaron por primera vez como cianofita o "algas verde-azuladas", pero la apreciacin posterior en la ultraestructura de sus clulas indic que se asemejan ms a las bacterias que a otras algas. Por ello, ahora tambin se denominan cianobacterias, o se clasifican como un grupo separado (cianoprocariotes). Sin embargo, la funcin ecolgica de las cianobacterias planctnicas es similar a la de las algas. Por consiguiente, pueden estar incluidas dentro del trmino "fitoplancton" y con frecuencia y en trminos generales, se denominan "algas". Segn su contenido de pigmentos, las cianobacterias pueden parecer verdes, verde azuladas y en casos de algunas especies, tambin rojo borgoa. Las poblaciones decadentes pueden ocasionalmente tornarse azul brillantes, turquesa o incluso prpura. En contraposicin a las algas verdaderas, muchas especies de cianobacterias planctnicas poseen vesculas especializadas de gas intracelular. Las pilas de estos cilindros huecos diminutos (< 300 nm) hechos de protenas mantienen un espacio lleno con gas en la clula que permite al microorganismo controlar su flotabilidad y as, buscar activamente las profundidades del agua con condiciones ptimas de crecimiento. Sin embargo, la regulacin de la flotabilidad para cambiar la cantidad de gas en las vesculas es lenta. Las clulas adaptadas a la mezcla turbulenta por vesculas de gas agrandadas tomarn algunos das en reducir su flotabilidad para adaptarse a condiciones ms tranquilas. Por lo tanto, especialmente cuando el clima cambia de tormentoso a bueno (es decir, condiciones de mezcla en el agua de turbulenta a altamente estratificada), muchas clulas o colonias excesivamente flotables pueden acumularse en la superficie. Los vientos livianos los conducen a las costas y bahas de sotavento, donde forman natas (Figura 1). En casos extremos, estas aglomeraciones pueden tornarse muy densas e incluso, adquirir una consistencia gelatinosa. Con mayor frecuencia, se ven como rayas o natas viscosas que incluso pueden asemejarse a la pintura o jalea verde-azulada. Estas situaciones pueden cambiar rpidamente, incluso en horas. Para las agrupaciones de masa de cianobacterias se ha adoptado el trmino colectivo de "afloramientos en el agua", que pueden diferenciarse por los crecimientos de masa de las clulas dispersadas por igual en toda el agua, y por natas flotantes en la superficie. Los afloramientos" distribuidos por igual en toda la capa superior de agua pueden ser lo suficientemente densos para causar una decoloracin visible. Sin embargo, se ha informado que con frecuencia, las natas acumulan clulas por un factor de 1000 o ms; cuando la

Perfil del lago 4m Nivel moderado de riesgo: 50 g/L de clorofila-a o 100 000 clulas/L posiblemente 20 g/l de microcistina en los 4 m superiores de agua Acumulacin de 100 veces a un nivel alto de nata: 5000 g/L clorofila-a o 10 000 000 clulas/L posiblemente 2000 g/l de microcistina en los 4 m superiores de agua Acumulacin de 1000 veces si el viento limpia las natas de100m a 10 m 50 000 g/L de clorofila-a o 100 000 000 clulas/L posiblemente 20 000 g/l de microsistina concentrada en una baha del cuerpo de agua

4 cm Flotabilidad conlleva a una acumulacin de 100 veces de clulas

alcance del viento 100 m

Nata muy espesa

Visto desde arriba

direccin del viento direccin del viento

Figura 1.

Esquema del potencial de formacin de nata que cambia el riesgo cianotxico de moderado a alto

acumulacin ha alcanzado un milln, adquiere una consistencia de lenteja acutica, y las natas de especies con cantidades sustanciales de mucilago pueden alcanzar una consistencia gelatinosa. Las natas pueden deshacerse rpidamente por la accin de las olas y redispersarse mediante la mezcla provocada por vientos renovados. Sin embargo, especialmente en bahas de poca profundidad, el material de las natas puede tomar un tiempo bastante largo en dispersarse, ya sea como resultado de las olas o, en ltimo trmino, desintegracin de las clulas. Las clulas murindose y en el proceso de lisacin liberan su contenido en el agua, donde los pigmentos pueden adoptar un color azul cobrizo. La descomposicin bacteriana conduce a la putrefaccin rpida del material. Los depsitos en la costa son desagradables, a menudo repulsivos y - como ya se aprecian plenamente - potencialmente txicos. Algunas cianobacterias producen olores caractersticos que pueden describirse como "mohosos", "geranios o "similares a los vegetales". Sin embargo, el desarrollo de sustancias olorosas no se correlaciona con la toxicidad. Estos olfatos pueden tomarse como una seal de advertencia de la presencia potencial de cianobacterias, pero la falta de estos olores no garantiza la ausencia de cianobacterias o sus toxinas. Si bien las aglomeraciones de cianobacterias son generalmente causadas por especies planctnicas en las aguas eutrficas, las natas bnticas en las aguas oligotrficas ocasionalmente causan problemas: estas natas que cubren el lecho pueden crecer slo en agua transparente, donde la luz solar penetra hasta el fondo. Durante das soleados, su fotosntesis puede provocar altas tasas de produccin de oxgeno, y hacer que las burbujas aflojen partes de las natas y las conduzcan a la superficie. Las natas de cianobacterias bnticas que son llevadas a la orilla y recogidas por los perros han sido letales (Edwards et al, 1992) y la muerte de ganado en praderas alpinas suizas tambin pudo haber sido causada por cianobacterias bnticas (Mez et al. 1995). Si bien son pertinentes para los animales domsticos y el ganado, el efecto para la salud humana de estas cianobacterias en las playas ser considerablemente inferior que el de las natas en el agua. Sin embargo, la concientizacin de la toxicidad potencial de estas natas es importante ya que se acumulan a lo largo del litoral de aguas transparentes y generalmente no se reconocen como productoras potencialmente nocivas de cianobacterias o algas. Las cianobacterias txicas se encuentran en todas las aguas interiores y costeras del mundo. Actualmente, al menos 46 especies en todo el mundo, han mostrado causar efectos txicos en los vertebrados (Sivonen y Jones 1998). Las cianobacterias txicas ms comunes son: Microcystis spp. Planktothrix (syn. Oscillatoria) rubescens Planktothrix (syn. Oscillatoria) agardhii Anabaenaspp. Aphanizomenon spp. algunas Oscillatoria spp. Cylindrospermopsis raciborskii Synechococcus spp. Gloeotrichia spp. Lyngbia spp. Nostoc spp. Schizothrix spp. Synechocystis spp.

y en los ambientes salobres o marinos, Nodularia spumigena. La toxicidad no puede excluirse para especies y gneros adicionales, y a medida que la investigacin se expande y cubre regiones adicionales en el globo, existe mayor probabilidad de encontrar ms especies txicas. Por consiguiente, es prudente esperar un potencial txico en cualquier poblacin cianobacteriana. Algunas especies contienen neurotoxinas y microcistinas (vase a continuacin) simultneamente. El gnero ms comn que causa afloramiento, Microcystis, casi siempre es txico (Carmichael 1995), pero ocurren cepas no txicas. En general, la toxicidad no es un rasgo especfico de ciertas especies, ms bien, la mayora de especies comprenden cepas txicas y no txicas. Si bien las condiciones que conducen a la proliferacin cianobacteriana estn bien establecidas, no se conoce bien la funcin fisiolgica o bioqumica de las toxinas para las cianobacterias, y los factores que conducen al predominio de cepas txicas sobre las no txicas no se comprenden en su totalidad. Se est acumulando evidencia para las diferencias genticas entre las cepas que contienen microcistina y las cepas que no la contienen, dentro de categoras taxonmicas de otro modo identificadas como una y la misma especie (Dittmann et al, 1997, Rouhiainen 1997). La experiencia con cultivos cianobacterianos tambin indica que la toxicidad es un rasgo bastante constante de una cepa dada (o genotipo), ligeramente modificada por las condiciones ambientales.

En todo el mundo, cerca de 75% de las muestras cianobacterianas investigadas contenan toxinas. Sin embargo, la toxicidad de un nico afloramiento puede fluctuar rpidamente en tiempo y espacio. Las demostraciones de toxicidad de la poblacin cianobacteriana en un lago dado no necesariamente implican un peligro ambiental o humano siempre que las clulas permanezcan ligeramente dispersas los crecimientos de masa y especialmente natas superficiales representan los riesgos. Qu toxinas contiene cianobacterias? El progreso en la qumica analtica durante las dos ltimas dcadas ha permitido el aislamiento e identificacin estructural de tres neurotoxinas con modalidades algo diferentes de bloqueo de la transmisin de seales neuronales (anatoxina-a, anatoxina-a(s) y saxitoxinas), una citotoxina general que inhibe la sntesis proteica (cilindrospermopsina) y un grupo de toxinas denominadas microcistinas que inhiben las fosfatasas proteicas. La inhibicin de fosfatasa podra en principio tambin ser generalmente citotxica, pero las microcistinas son principalmente hepatotxicas ya que usan un tipo de portador similar al portador de cido blico de las clulas del hgado para pasar a travs de las membranas celulares. Estas toxinas recibieron el nombre del organismo de donde se aislaron por primera vez, pero la mayora de ellas ha sido encontrada en una amplia variedad de gneros, y algunas especies contienen ms de una toxina o tanto microcistinas como neurotoxinas. El cuadro 1 presenta un resumen de las cianotoxinas ms importantes actualmente conocidas y su modalidad de accin aguda (la mayor parte de la informacin se toma de Turner et al, 1990; Sivonen y Jones, 1998; Kuiper-Goodman et al, 1998; vanse estas fuentes para mayores detalles). Cuadro 1: Toxinas cianobacterianas y su toxicidad aguda Cianotoxinas LD 50 (i.p. con Gnero que produce la ratones) de toxina toxina(s) pura Mecanismo de toxicidad

Bloqueadores de protenafosfatasa (pptidos cclicos con ADDA) Microcistinas en general (ca. 60 congneros conocidos) Microcistina-LR Microcistina-YR Microcistina-RR Nodularina Neurotoxinas Anatoxina-a (alcaloide)

Bloquean la protena 45->1000 g/kg 60 (25-125)g/kg 70 g/kg 300-600 g/kg 30-50 g/kg 250 g/kg Microcystis, Planktothrix/ Oscillatoria, Nostoc, Anabaena, Anabaenopsis, Hapalosiphon Nodularia spumigena Anabaena, Oscillatoria, Aphanizomenon, Cylindrospermum Conocidas slo en dos especies de Anabaena Aphanizomenon, Anabaena, Lyngbya, Cylindro-spermopsis raciborskii Cylindrospermopsis raciborskii Bloquea la despolarizacin post-sinptica Bloquea la acetilcolinesterasa Bloquea los canales de sodio Fosfatasas Por enlace covalente y causan hemorragia del hgado; puede ocurrir dao acumulativo

Anatoxina-a(s) (organofosforado nico) Saxitoxinas (alcaloides de carbamato)

40 g/kg 10 30 g/kg

Citotoxina Cilindrospermopsina (alcaloide)

2100 g/kg/d 200g/kg/5-6 d

Bloquea la sntesis proteica; toxicidad acumulativa sustancial

Para propsitos de manejo, es importante entender que estas toxinas se encuentran principalmente dentro de las clulas cianobacterianas. La liberacin en el agua circundante es posible, en particular cuando las clulas mueren y se disuelven por lisis, y pueden haber diferencias entre las toxinas y las especies en lo referente a la fuga de clulas intactas. Sin embargo, la toxina disuelta en el agua se diluye rpidamente y probablemente tambin se degrada, mientras que las concentraciones de toxina peligrosamente altas generalmente son el resultado de la acumulacin de material celuloso como natas. Por lo tanto, las medidas para la seguridad recreacional deben considerar principalmente las clulas cianobacterianas que contienen toxinas.

Si bien se asume que las toxinas enumeradas en el cuadro 1 son las sustancias ms significativas para la salud humana, es improbable que se hayan descubierto todas los cianotoxinas importantes. Yoo et al. (1995) sealan que continuamente se descubre una mayor variedad de toxinas individuales. Numerosos grupos de trabajo farmacolgicos estn realizando la investigacin para sustancias farmacolgicamente activas de cianobacterias (por ejemplo Falch et al. 1995, Mundt y Teuscher, 1988). En la conferencia internacional sobre cianobacterias txicas en 1995 (Moestrup ed. 1996), doce exposiciones indicaron la presencia adicional de compuestos bioqumicamente activos (generalmente no identificados) en extractos crudos de cianobacterias. Los resultados de Fastner et al. (1995) muestran que las hepatocitas primarias de ratas reaccionan a las microcistinas en extractos crudos de algunas cepas de cianobacterias en correlacin cercana a su contenido de microcistinas, pero que esta reaccin es favorecida an ms por un factor desconocido. Oberemm et al. (1997) demostraron la toxicidad sustancial de los extractos cianobacterianos crudos para los huevos de peces, los efectos no se deban al contenido de cualquiera de los cianotoxinas conocidas. Por lo tanto, bien pueden encontrarse metabolitos cianobacterianos adicionales con impacto sobre la salud humana. Es intrigante que las cianobacterias tambin puedan estar enlazadas a persistencias interepidmicas de clera, ya que existe evidencia de que la supervivencia e incluso multiplicacin del Vibrio cholerae en los ambientes de agua natural pueden estar conectadas con su capacidad para penetrar las envolturas de mucilago de Anabaena sp., y ese intercambio de oxgeno (de fotosntesis para respiracin aerobia) y dixido de carbono pueden permitir una relacin simbitica (Islam et al. 1991, 1994).

Cun peligrosas son las cianotoxinas para la salud humana? Existen varios estudios de casos de daos a la salud humana a travs de cianotoxinas que estn bastante bien documentados. Si bien la mayora involucr la exposicin a travs del agua potable, demuestran que los seres humanos se enferman - en algunos casos gravemente - a travs de la ingestin o aspiracin de substancias cianobacterinas txicas (cuadro 2); los sntomas fueron claramente atribuibles a microcistinas en el trgico caso de la administracin accidental de estas toxinas con dilisis renal (Jochimsen et al. 1998). Probablemente, la mayor parte de enfermedades humanas causadas por cianobacterias no ha sido documentada. Como se dijo en Yoo et al. (1995): "Adems, los informes anecdticos son numerosos, aunque pocos aparecen en la bibliografa" (p. 95). Posiblemente, son muchos los casos no reconocidos ya que debido a la falta de conocimiento acerca de la toxicidad de las cianobacterias, ni los pacientes o mdicos asocian los sntomas con esta causa. Los sntomas reportados incluyen "dolor abdominal, nuseas, vmitos, diarrea, dolor de garganta, tos seca, cefalea, ampollas en la boca, neumona atpica y enzimas hepticas elevadas en el suero (especialmente la transferasa de gamma-glutamil)" (Carmichael, 1995, p. 9) as como sntomas de fiebre de heno, mareo, fatiga, irritaciones de la piel y ojos; estos sntomas tienen probabilidad de estar relacionados con varias clases de toxinas y gneros de cianobacterias (ibid, p. 7). An ms, se ha reportado irritacin por contacto a partir de varios gneros cianobacterianos de agua dulce despus de la exposicin por actividades recreativas ( Anabaena, Aphanizomenon, Nodularia, Oscillatoria, Gloeotricha), aunque esto no fue tan grave como la de cianobacterias marinas. Los riesgos para la salud humana surgen de tres vas de exposicin: 1. contacto directo de partes expuestas del cuerpo, incluidas reas sensibles como odos, ojos, boca y garganta, y reas cubiertas por un traje de bao que pueden recoger el material celular, y 2. ingestin accidental por tragar agua que contiene clulas 3. ingestin del agua que contiene clulas mediante la aspiracin (inhalacin). Es probable que diferentes metabolitos cianobacterianos estn involucrados al evocar los sntomas asociados con estas rutas de exposicin.

Cuadro 2: Estudios de casos e informes sobre lesiones agudas de seres humanos despus de la exposicin a cianobacterias

Casos atribuidos a cianotoxinas en el agua potable 1931: EUA: un afloramiento masivo de Microcystis en los ros Ohio y Potomac caus enfermedades a 5000 - 8000 personas abastecidas de agua potable proveniente de estos ros. El tratamiento de agua potable por precipitacin, filtracin y cloracin no fue suficiente para eliminar las toxinas (Tisdale 1931). numerosas casos de enfermedades del aparato digestivo despus de la exposicin a crecimientos de masa de cianobacterias fueron compilados por Schwimmer & Schwimmer 1968. choque endotxico de 23 pacientes de dilisis en Washington D.C. se atribuye a un afloramiento de cianobacterias en un reservorio de agua potable (Hindman et al. 1975) Australia: Se combati el afloramiento de Cylindrospermopsis raciborskii en un reservorio de agua potable en Palm Island con sulfato de cobre, lo cual conllev a la liberacin de toxinas de las clulas en el agua y por lo tanto, caus enfermedades graves (con hospitalizacin) a 141 personas abastecidas de este reservorio (Falconer 1993 y 1994). Australia: En la ciudad de Armidale, se elevaron las actividades de enzimas en el hgado en la sangre de la poblacin abastecida con agua superficial contaminada por Microcystis spp. (Falconer et al. 1983) EUA: Carmichael (1985) compil estudios de casos sobre nuseas, vmitos, diarrea, fiebre, infecciones al ojo, odo y garganta, despus de la exposicin a crecimientos de masa de cianobacterias China: la incidencia de cncer heptico se relaciona claramente con las fuentes de agua y es significativamente mayor para poblaciones que usaban aguas superficiales infectadas con cianobacterias comparado con aquellas que beban aguas subterrneas (Yu, 1995). Australia: Falconer (1993) calcula que debido a afloramientos de cianobacterias txicas, ms de 600.000 dashombre se pierden anualmente por la abstraccin de agua potable. Suecia cerca de Malm: el uso ilegal de agua de ro no tratada en una fbrica de azcar condujo a una conexin cruzada accidental con el abastecimiento de agua potable para un nmero incierto de horas. El agua del ro estaba densamente poblada con Planktothrix agardhii, y las muestras tomadas pocos das antes y pocos das despus del incidente mostraron que estas cianobacterias contenan microcistinas. Un total de 121 de 304 habitantes del pueblo (as como algunos perros y gatos) se enfermaron con vmitos, diarrea, retortijones musculares, nuseas (Cronberg et al. 1997)

1968: 1975: 1979:

1981: 1985: 1993:

1993: 1994:

Casos atribuidos a cianotoxinas en el agua recreacional 1959: Saskatchewan: a pesar de la muerte del ganado y advertencias contra el uso recreacional, la gente continuaba nadando en el lago infestado con cianobacterias. Trece personas se enfermaron (cefaleas, nuseas, dolores musculares, diarrea dolorosa). En las excretas de un paciente - un mdico que haba ingerido accidentalmente 300 ml de agua se pudieron identificar claramente numerosas clulas de Microcystis spp. y algunos tricomas de Anabaena circinalis (Dillenberg y Dehnel, 1959). Inglaterra: de 10 a 20 soldados se enfermaron despus de nadar y remar en canoa en el agua con un afloramiento significativo de Microcystis spp; dos de ellos contrajeron neumona grave atribuida a la inhalacin de una toxina de Microcystis y requirieron hospitalizacin y terapia intensiva (Turner et al. 1990). Las habilidades de natacin y la cantidad de agua ingerida parecer haber tenido relacin con el grado de enfermedad. Australia: Evidencia epidemiolgica de los efectos adversos sobre la salud despus de contacto con el agua recreacional de un estudio prospectivo que inclua 852 participantes, mostr la elevada incidencia de diarrea, vmitos, sntomas de gripe, erupciones cutneas, lceras en la boca, fiebres, irritaciones de ojos u odos, dentro de 2 - 7 das despus de exposicin (Pilotto et al. 1997). Los sntomas aumentaron significativamente con la duracin del contacto con el agua y la densidad de las clulas cianobacterianas, pero no estuvieron relacionados con su contenido de cianotoxinas conocidas como se enumera en el cuadro 1.

1989:

1995:

Casos debidos a otras rutas de exposicin 1996: Caruaru en Brasil: Un total de 131 pacientes de dilisis estaban expuestos a microcistinas con el agua usada para la dilisis; 56 de ellos murieron. Al menos 44 de estas vctimas mostraron los tpicos sntomas asociados con microcistina, ahora denominado "Sndrome de Caruaru", y el contenido de microcistina en el hgado correspondi al de los animales de laboratorio que haban recibido una dosis letal de microcistina (Carmichael, 1996; Jochimsen et al. 1998).

Contacto directo Se conocen reacciones drmicas alrgicas o irritativas de diversa gravedad de cianobacterias as como de algas de agua dulce, pero no han sido ampliamente documentadas. Los trajes de bao, y especialmente los trajes de buceo, tienden a agravar estos efectos al acumular material de algas e incrementar la destruccin de clulas y liberacin de contenido celular. Reportes de Estados Unidos de Amrica han registrado reacciones alrgicas de la exposicin por actividades recreativas, y se ha mostrado que la ficocianina de pigmentos de las cianobacterias ha sido responsable de un caso (Cohen y Reif, 1953). La sensibilizacin cutnea a cianobacterias (vase punto 2.3) ha sido documentada. Se ha reportado dermatitis grave semejante a quemaduras de piel debidas a agua marina con cianobacterias desalojadas de las rocas despus de tormentas en mares tropicales (vase el resumen en Kuiper-Goodman et al. 1998). Las irritaciones de la piel eran un sntoma frecuente en el estudio epidemiolgico de Pilotto et al. (1997) sobre los efectos para la salud despus de la exposicin por actividades recreativas a cianobacterias; esto mostr correlacin con la densidad de clulas cianobacterianas y la duracin de la exposicin, pero no con las concentraciones de microcistinas. Es muy probable que estos sntomas no se deban a las cianotoxinas identificadas enumeradas en el cuadro 1, sino a otras sustancias que actualmente no se han identificado totalmente. El estudio de Pilotto encontr asociaciones claras de la frecuencia de los efectos sobre la salud con la densidad cianobacteriana y el tiempo de exposicin, pero ninguna asociacin con la concentracin de microcistinas. Ingesta La ingestin o inhalacin fue la ruta de exposicin en la mayora de casos documentados de enfermedades humanas asociadas con cianobacterias (cuadro 2). En contraposicin al contacto directo, la ingestin de cianobacterias incluye un riesgo de intoxicacin por cianotoxinas enumeradas en el cuadro 1. Este riesgo puede calcularse a partir de la densidad de las clulas, el contenido de toxina celular y los mecanismos de toxicidad conocidos. Los mecanismos agudos de toxicidad son bien conocidos para neurotoxinas y microcistinas, y existe cierta informacin disponible para calcular riesgos debidos a la exposicin repetida o crnica. A pesar de las diferentes modalidades de accin, las tres neurotoxinas de cianobacterias pueden ser letales ya que pueden causar sofocacin, anatoxina-a y a(s) a travs de calambres, saxitoxinas a travs de la parlisis. El apoyo artificial de la respiracin (con mquinas) puede permitir la supervivencia. Anatoxinaa(s) es el nico inhibidor de colinesterasa organofosfato conocido que ocurre naturalmente y causa una fuerte salivacin (s significa salivacin), retortijones, tembladeras, diarrea, vmitos y una muerte sumamente rpida en minutos. Las saxitoxinas y anatoxina-a(s) se encuentran entre las sustancias ms neurotxicas conocidas. Sin embargo, se tiene evidencia que en los lagos y ros no son tan frecuentes como las microcistinas. Esto se aplica especialmente a anatoxina-a(s): hasta la fecha, slo se ha encontrado en un pequeo nmero de afloramientos de Anabaena en Amrica del Norte. An ms, las concentraciones de estas sustancias sumamente txicas en las natas apenas alcanzarn niveles neurotxicos graves para un ser humano que ingiere un bocado. (Por contraste, el ganado beber muchos litros, y los animales domsticos - especialmente perros - recogern el material de las natas de su piel y lo ingerirn a travs de su lengua.) Despus de la ingestin de una dosis subletal de estas neurotoxinas, la recuperacin parece ser completa y hasta la fecha, no se han observado efectos crnicos. Por estas razones, las neurotoxinas son un peligro que debe tomarse en cuenta al usar aguas recreacionales infestadas con cianobacterias, pero basados en el conocimiento actual, es razonable considerarlas menos peligrosas que las microcistinas o cilindrospermopsina, que puedan causar un dao continuo. Las microcistinas son las cianotoxinas ms frecuentes y generalizadas. Son heptapeptidos cclicos que contienen una cadena lateral especfica de aminocidos (ADDA) que hasta la fecha slo se ha encontrado en microcistinas y nodularina (una toxina pentapeptida cclica de las cianobacterias de aguas salobres). Hasta ahora, se conocen cerca de 60 anlogos estructurales de microcistina (Rinehart et al. 1994; Sivonen y Jones, 1998). Varan en lo que se refiere a grupos metlicos y dos aminocidos dentro del anillo. Esto tiene consecuencias para la estructura terciaria de la molcula y conlleva a diferencias pronunciadas en la toxicidad as como en las propiedades hidrofbicas/hidroflicas. Las microcistinas bloquean las fosfatasas proticas 1 y 2a, que son "interruptores moleculares" importantes en todas las clulas eucariticas, con un enlace covalente irreversible (MacKintosh et al. 1990).

10

La nodularina, producida por la especie salobre Nodularia spumigena, es muy similar a la microcistis en estructura y efecto. La va principal para las microcistinas en las clulas es un mecanismo de transporte similar al portador de cido blico, que se encuentra en las clulas hepticas, pero en menor grado tambin en la epitelia intestinal (Falconer 1993). Por lo tanto, para los vertebrados, una dosis letal de microcistina causa la muerte por necrosis heptica en horas hasta pocos das. La permeabilidad de otras membranas celulares para microcistinas an es controversial. Posiblemente, los anlogos estructurales hidrofbicos pueden penetrar en algunos tipos de clulas incluso sin el portador de cido de bilis (Codd, 1995). An ms, Fitzgeorge et al. (1994) publicaron evidencia para la destruccin de epitelio nasal incluso por la microcistina-LR comn hidroflica anloga. Si bien la toxicidad por ingestin oral generalmente est en un orden de magnitud menor que la toxicidad por inyeccin intraperitoneal (i.p.), la aplicacin intranasal en estos experimentos fue igualmente txica como inyeccin i.p., y la lesin a la membrana por microcistina aument la toxicidad de la anatoxina-a. Esta ruta de ingestin puede ser pertinente para actividades acuticas que implican la inhalacin de roco y gotitas, como el esqu acutico. Las microcistinas se encuentran en la mayora de poblaciones de Microcystis spp., que con frecuencia forman natas superficiales, y en cepas de algunas especies de Anabaena spp, que tambin pueden formar natas. El contenido elevado de microcistinas se ha observado an ms en Planktothrix (syn. Oscillatoria) agardhii y P. rubescens (Fastner et al. 1999). Sin embargo, P. agardhii nunca forma natas, y P. rubescens generalmente no las forma durante la temporada de recreacin acutica. Esto reduce el peligro para los baistas comparado con el peligro causado por especies que forman natas. La toxicidad acumulativa de las microcistinas: Fitzgeorge et al. (1994) demostr que la toxicidad de la microcistina es acumulativa: una dosis oral nica no cas ningn aumento del peso del hgado (que es una medida de la lesin heptica), mientras que la misma dosis aplicada diariamente durante 7 das caus un aumento de 84% del peso del hgado y por lo tanto, tuvo el mismo efecto que una dosis oral nica 16 veces mayor. Esto puede deberse al enlace covalente irreversible de la microcistina a las fosfatasas proticas y a el dao sustancial a la estructura celular (Falconer, 1993): la curacin del hgado probablemente requiere el crecimiento de nuevas clulas hepticas. La lesin heptica subaguda tiene probabilidad de pasar desapercibida por dos razones: La lesin heptica slo muestra externamente los sntomas notorios una vez que se vuelven graves. An ms, las curvas agudas de dosis-respuesta para microcistinas son empinadas Por lo tanto, puede ocurrir un ligero dao heptico hasta niveles cercanos a la toxicidad aguda severa. Debido a la falta de sntomas evidentes a una exposicin moderada, es probable que esto contine con personas no informadas del riesgo (por ejemplo, durante das consecutivos de un da feriado o olas de calor), que aumentar el riesgo de dao heptico acumulativo. La toxicidad crnica de las microcistinas: Existen dos aspectos del dao crnico de la microcistina al hgado, uno es lesin heptica activa progresiva (vase anteriormente, y Falconer et al. 1988), el otro es el potencial para fomentar el crecimiento de tumores. El crecimiento de tumores causado por las microcistinas est bien documentado, aunque las microcistinas por s solas an no han demostrado ser carcinognicas. El fomento de tumores de la piel de ratones ha sido mostrado despus de la iniciacin por la exposicin tpica a un carcingeno (dimetilbenzantraceno) seguida de la ingestin de un extracto de Microcystis aeruginosa (Falconer y Buckley 1989, Falconer and Humpage 1996, Fujiki et al. 1996). En estudios con hgados de ratas, se promovi la aparicin de focos y ndulos de hgados preneoplsticos por microcistina LR pura en un protocolo que inclua una dosis i.p. de dietilnitrosamina y dosis i.p. de microcistina-LR durante varias semanas (Nishiwaki-Matushima et al. 1992). Los estudios sobre el mecanismo de toxicidad celular revelan que la microcistina interfiere con la estructura celular y la mitosis, lo cual puede ayudar a explicar la actividad que fomenta el crecimiento de tumores (Falconer y Yeung 1992, Kaya 1996). Cilindrospermopsina es un alcaloide recientemente identificado aislado de Cylindrospermopsis raciborskii (Ohlani et al. 1992). Es una citotoxina general que bloquea la sntesis proteica, y los primeros sntomas clnicos de envenenamiento son insuficiencia renal y heptica. El dosaje oral con clulas enteras del organismo causa un dao generalizado a los rganos, incluido daos a los pulmones, suprarrenales e intestino, y ms de una toxina podra estar involucrada. Es especialmente peligroso porque los sntomas clnicos slo se manifiestan varios das despus de la exposicin. Por lo tanto, la causa y efecto con frecuencia sern difcil de relacionar. En Australia, pacientes intoxicados con cilindrospermopsina a travs del agua potable se salvaron de morir slo porque recibieron atencin hospitalaria capacitada e intensiva (Falconer 1996; Hawkins et al. 1997). Se considera que Cylindrospermopsis raciborskii es una especie

11

tropical y subtropical, pero recientemente se ha informado que aflora muy al norte (Viena) (Roschitz, 1996). Se reportaron poblaciones sustanciales desde el nordeste de Alemania (Wiedner, com. pers.), y en general, parece estar invadiendo regiones templadas (Padisk, 1997). Por lo tanto, esta toxina tambin puede tornarse pertinente en zonas templadas. 2. 2 Dinoflagelados, crisofitos, clorofitos y otras algas

Como se menciona en la seccin 1, apenas se ha investigado la produccin de toxina en otros grupos de algas de agua dulce. Oshima et al. (1989) aisl e identific tres ictiotoxinas (polonicumtoxinas A, B y C) de un dinoflagelado, Peridinium polonicum, que parecan ser responsables de la muerte de peces. La toxicidad en ensayos biolgicos con ratones fue de 1,5 - 2 mg/kg y por lo tanto, varias rdenes de magnitud inferiores a la toxicidad de la microcistina-LR. La prueba de Ames no mostr ninguna mutagnesis, pero los autores recalcan la necesidad de realizar estudios sobre la toxicidad crnica para evaluar el riesgo potencial sobre la salud de estas toxinas. Hansen et al. (1994) describen un estudio de caso de muertes de peces en un pequeo lago dans durante un gran crecimiento masivo de Chrysochromulina parva (614.000 clulas/ml) con poco otro fitoplancton presente. Los autores consideran la falta total de otras condiciones perjudiciales como una indicacin fuerte de la toxicidad de esta especie, especialmente debido a que las especies marinas del gnero Chrysochromulina contienen toxinas potentes. Se requiere una investigacin sistemtica de la toxicidad de las algas de agua dulce, en particular para especies relacionadas con gneros marinos txicos (dinoflagelados, diatomeas, haptofitos). Sin embargo, las algas de agua dulce no representan un alto riesgo para la salud recreacional en comparacin con las cianobacterias que forman natas, ya que las algas carecen de mecanismos de acumulacin de clulas igualmente efectivos. 2.3 Reacciones alrgicas y otros resultados para el salud despus de la exposicin a algas y cianobacterias

Con frecuencia, se reportan reacciones alrgicas a algas y cianobacterias en el marco de "evidencia anecdtica" de las aguas recreacionales eutrficas. Yoo et al. (1995) sealaron que las "reacciones alrgicas a las cianobacterias son relativamente comunes" (p. 77). Sin embargo, rara vez se investigan en estudios cientficos o se publican. Entre el nmero pequeo de publicaciones disponibles, Heise (1949 y 1951) describi irritaciones oculares y nasales en nadadores expuestos a Oscillatoriaceae. McElhenny et al. (1962) aplicaron extractos de cuatro especies de algas diferentes (cianobacterias y cloroficeas) como pruebas intracutneas de piel a 20 nios no alrgicos, de los cuales ninguno tuvo respuesta, y a 120 nios con alergias respiratorias, 98 de los cuales mostraron reacciones positivas claras a al menos una de las cepas de la prueba. Mittal et al. (1979) realiz pruebas a 4.000 pacientes en la India con alergias respiratorias, 25% de los cuales mostraron reacciones positivas a la cloroficea o cianobacterias, o a ambas. An ms, se observaron reacciones pronunciadas de la piel en respuesta a un afloramiento de Uroglena spp. en un nmero reducido de baistas, especialmente bajo los trajes de baos donde las clulas se acumularon y se destruyen parcialmente al nadar (Chorus 1993). A menudo, los buzos se quejan de reacciones drmicas al material de las algas que se acumula bajo sus trajes de buzo, que tienden a actuar como un colador, dejando salir el agua, pero recogiendo las algas entre la piel y el traje. La presin y friccin entre la tela y la piel conlleva a la destruccin de las clulas, liberacin del contenido y por lo tanto, a la exposicin drmica intensificada no solo al material de la pared celular de las algas, sino tambin a sustancias en gran parte confinadas dentro de las clulas. Es importante sealar que las reacciones alrgicas no estn limitadas a las cianobacterias. Las sustancias que provocan estas reacciones tienen probabilidad de ser diferentes a las toxinas cianobacterianas descritas anteriormente. Sin embargo, las reacciones alrgicas requieren altas densidades de clulas en el agua destinada a la recreacin, y en las aguas dulces, los desarrollos de masa son ms frecuentes debido a las cianobacterias. An ms, otros grupos de algas no se acumulan como natas superficiales y por consiguiente, sus metabolitos no se presentarn en concentraciones comparativamente altas. Las algas han causado toses irritativas en el personal y pacientes de una unidad fisioteraputica que usaba agua superficial tratados con filtros gruesos para realizar masajes bajo el agua. En octubre de 1986, lel cuerpo de agua contena 4.600 a 58.000 clulas/ml de la desmidia Staurastrum gracile. Esta especie no fue

12

eliminada efectivamente por el filtro y tiene paredes celulares fuertes revestidas con estructuras similares a espinas y ganchos que bien pueden causar irritaciones de las mucosas (Naglitsch 1988). Si bien este incidente puede ser ms una curiosidad que una grave amenaza para la salud, s destaca el beneficio del anlisis microscpico de las aguas teraputicas y recreacionales para reconocer a las algas como una causa potencial de las reacciones de la salud. 2.4 Con qu frecuencia y en qu tipos de aguas recreacionales, las cianobacterias y algas de agua dulce pueden causar riesgos para salud?

Slo existe evidencia documentada de los problemas para la salud de las cianobacterias y no de algas de agua dulce. Los datos de las encuestas en varios pases indican que se espera toxicidad en de todas las muestras que contienen cianobacterias (cuadro 3; vase tambin a Sivonen y Jones, 1998). En general, las microcistinas txicas al hgado parecen ser ms comunes que las neurotoxinas, aunque estas ltimas han causado intoxicaciones severas de animales en Amrica del Norte, Europa y Australia. Se han reportado afloramientos que contienen cilindrospermopsina en Australia, Hungra, Japn e Israel. Cuadro 3: Encuestas de frecuencia cianobacteriana Pas Nmero % de sitios txico muestre ados Inglaterra 78 70% Escandinavia 51 59% Finlandia 188 44% Mar Bltico 25 72% Wisconsin, EUA 102 27% Pases Bajos 10 90% Pases Bajos 29 79% Hungra 35 82% Alemania (RDA) 6 Alemania 1995-96 80 Dinamarca 96 67% 90% 72% de toxicidad Referencia Si bien esta surgiendo una imagen general de la frecuencia de cianotoxinas asociada con cierto gnero de cianobacterias (vase Sivonen y Jones, 1998), no se sabe muy bien qu niveles de cianotoxina pueden esperarse en aguas recreacionales con cianobacterias. En general, deben abordarse dos niveles: 1. Cunta toxina contienen las clulas de las cianobacterias dominantes? 2. A qu concentraciones de toxina por litro de agua conduce esto?

La mayor parte de estudios se han centrado en la primera pregunta. Sin embargo, si se conoce la densidad de las clulas adems del contenido de toxinas por clula, pueden calcularse las concentraciones de toxinas por litro de agua. Pocos estudios han tratado directamente las concentraciones por litro, y los mtodos de deteccin ahora permiten determinar directamente las concentraciones de toxina por litro en lugar de requerir el enriquecimiento del material celular. En general, el contenido de cianotoxinas de las clulas puede alcanzar niveles de varios mg por g de peso seco. Esto se ha establecido para microcistinas, nodularina, cilindrospermopsina, anatoxina-a y saxitoxinas, y se encontr el mximo de 18 mg/g peso seco de nodularina (Sivonen y Jones 1998). Si se conoce la biomasa de cianobacterias por litro para una masa de agua dada, las mximas concentraciones esperadas de toxina pueden calcularse a partir de estos datos. Actualmente, escasos estudios incluyen la variabilidad del contenido de toxina en el desarrollo de poblaciones cianobacterianas (Benndorf y Henning 1989; Jungmann 1995, Kotak et al. 1995, Fastner et al. 1999), aunque esto sera importante para la evaluacin de riesgos: ya que la toxicidad acumulativa de los peligros de las microcistinas (vase el punto 2.1) es ms alta para personas expuestas en varios das consecutivos. Para el manejo de aguas recreacionales, unos pocos aos de investigacin regular del contenido de toxinas de los afloramientos prevalentes de cianobacterias pueden proporcionar informacin sobre la variabilidad del contenido de toxinas tanto en tiempo como en espacio. Si el contenido de toxinas demuestra poca variacin durante varias semanas o incluso meses de afloramiento de ciertas especies, se puede establecer una base regional para predicciones futuras. Las concentraciones de toxinas por litro de agua que resultan del contenido celular dependen enteramente de la densidad de las clulas. La formacin de nata es importante para determinar la densidad de las clulas. En un estudio, las concentraciones de microcistina variaron de 0,01 - 0,35 mg/L mientras que las cianobacterias se dispersaron por igual (Fastner et al. 1999), pero el muestreo de natas en el litoral de los

Informe de NRA, 1990 Codd et al. 1989 Sivonen et al. 1990 Sivonen et al. 1989 Repavich et al. 1990 Leeuwangh et al. 1983 RIZA, 1994 Trkn-Kozma y Gbor, 1988 Henning & Kohl, 1981 Fastner et al. 1999 Henriksen, 1997

13

mismos cuerpos de agua han mostrado concentraciones de microcistinas de ms de 1 mg/L en 7 de 34 muestras, y la mxima concentracin alcanz 24 mg/L (Chorus 1998). Algunas especies que comnmente se presentan, como Planktothrix agardhii, nunca forman natas. Las concentraciones mximas de microcistina por litro de agua reportadas son de 0,35 mg/L (Fastner et al. 1999), pero las concentraciones de hasta 0,5 mg/L pueden calcularse para cuerpos de agua poco profundos donde las densidades de poblacin de esta especie pueden ser sumamente altas. Para efectos prcticos, el conocimiento actual implica que las autoridades sanitarias consideren a cualquier crecimiento de masa de cianobacterias como un peligro potencial para la salud. Este es un acercamiento actualmente seguido por aquellos encargados del rea de recursos hdricos y las autoridades de salud en algunos pases. En conclusin Existe amplia evidencia que muestra que la ingestin de cianobacterias txicas puede causar sntomas tales como dolor abdominal, nuseas, vmitos, diarrea, mareo o fatiga, y representar peligros ms graves para la salud en las aguas recreacionales con natas de cianobacterias. El peligro del dao heptico puede calcularse a partir de concentraciones de toxinas. Los riesgos de la ingestin son mayores para nios que juegan en agua de poca profundidad cerca de la orilla donde las concentraciones de nata tienden a ser las ms altas. Para personas que ingieren reiteradamente pocos mililitros de agua rica en cianobacterias que contiene microcistinas (es decir, durante un da feriado donde se practican deportes acuticos en varios das consecutivos), el dao heptico acumulativo puede presentar un mayor riesgo que un nico evento de ingestin accidental. Nadar en cuerpos de agua con altas densidades de clulas cianobacterianas dispersadas en forma pareja, representar una menor exposicin, pero an habr posibilidad de un riesgo para la salud. Contacto directo con clulas cianobacterianas puede conducir a reacciones drmicas, dolor de garganta, tos seca, cefalea, ampollas en la boca, irritaciones de piel y ojos. Las reacciones drmicas alrgicas o irritativas de menor gravedad se deben a cianobacterias as como a algas de agua dulce, pero no han sido suficientemente documentadas. Los trajes de bao y en particular, los trajes de buceo tienden a agravar estos efectos al acumular el material de algas e incrementar la destruccin de las clulas y liberacin del contenido celular. Evidencia de un experimento con animales y el brote de una enfermedad humana indican que la inhalacin y resorcin a travs de las mucosas nasales y faringeas pueden presentar un alto riesgo en deportes acuticos que incluyen la sumersin constante de la cabeza (buceo, competencias de natacin) o inhalacin de aerosoles (esqu acutico).

Por lo tanto, es necesario establecer guas para proteger la salud humana de la exposicin a cianobacterias durante actividades recreacionales. 3. Manejo de riesgos: vigilancia, medidas inmediatas y minimizacin de riesgos

El manejo de riesgos debe considerar las incertidumbres actuales de la evaluacin de riesgos. Actualmente, la poca informacin disponible con respecto a los efectos sobre la salud de diversos grupos de algas sugiere que el manejo de riesgos se centre en riesgos para salud debidos a cianobacterias txicas, mientras que se debe intensificar la recoleccin de estudios de casos e informacin acerca de los efectos sobre la salud de las algas. An ms, la mayora de enfoques actuales con respecto a la seguridad de las aguas recreacionales abordan la aparicin de cianobacterias como tales, porque an no es muy claro si se han identificado todas las cianotoxinas importantes, y los resultados para la salud observados despus de la exposicin por actividades recreativas - en particular irritacin de la piel y membranas mucosas - probablemente estn relacionados con sustancias cianobacterianas diferentes de las toxinas conocidas y enumeradas en el cuadro 1. Frente a la dificultad del muestreo cuantitativo y representativo debido a la distribucin heterognea de cianobacterias en el tiempo y el espacio, en particular en lo que se refiere a la formacin y ubicacin de las natas, los acercamientos deben incluir la capacidad de un cuerpo de agua para mantener mayores poblaciones cianobacterianas. 14

Varios pases han establecido guas para cianobacterias y/o sus toxinas en agua potable y/o recreacional. Una cuestin discutible es cules medidas deberan tomarse a altas concentraciones de toxinas. Las medidas a corto plazo abarcan la advertencia al pblico, clausura de balnearios y cancelacin de actividades deportivas acuticas tales como competencias. Las medidas de mediano a largo plazo son identificacin de las fuentes de nutrientes (generalmente fosfato) y reduccin significativa del aporte de nutrientes para reducir efectivamente no slo la proliferacin de cianobacterias sino tambin de algas potencialmente nocivas. 3.1 Guas y su derivacin

La discusin internacional sobre guas para cianotoxinas se est centrando en microcistinas ya que las neurotoxinas no se consideran peligrosas (debido a su falta de toxicidad crnica) ni generalizadas. Cylindrospermopsis, cuya toxina es muy peligrosa, no forma natas superficiales y por lo tanto es ms un riesgo para salud en el agua potable que en el agua recreacional. En general, las cianobacterias que contienen microcistinas a niveles mayores que 1 mg/g de clulas deben considerarse sumamente txicas. Comparadas con otras toxinas, las cianotoxinas son sumamente potentes, considerando los valores de LD 50 (i.p.) de 10 a 50 g/kg/d (cuadro 1). Sin embargo, su presencia en el agua dulce es generalmente en forma diluida. An ms, la ingesta oral es menos txica que la aplicacin intraperitoneal por aproximadamente dos ordenes de magnitud. Basado en la evidencia de que la LD oral50 de la microcistinaLR en ratones es 5.000 a 11.600 g/kg de peso seco (ps) (Fawell y James 1994), puede esperarse que la ingestin de 20 mg de microcistina o menos para un nio de 10 kg cause una lesin heptica aguda grave, incluso con posibilidades de muerte. En la bibliografa, se han reportado concentraciones de hasta 24 mg/L de microcistinas en el material de la nata (vase anteriormente), donde la ingesta oral de 1 litro podra ser potencialmente fatal. Ocasionalmente, se observa el enriquecimiento sustancialmente mayor de natas hasta una consistencia gelatinosa donde la ingestin accidental de volmenes ms pequeos podran causar un dao grave. El material de la nata puede fcilmente contener enriquecimientos de cianobacterias por un factor de mil o ms, comparado con la densidad en las aguas abiertas. Si bien generalmente se asume que los seres humanos dejaran de ingerir natas superficiales, la ingestin accidental de cantidades peligrosas puede ocurrir durante los deportes acuticos (nadar con sumersin de la cabeza, saltar de trampolines, navegar en tablas con vela, esquiar), y el peligro es sumamente grave para los nios ya que ellos tienden a ingerir mayores volmenes de agua, especialmente cuando juegan alrededor de aguas de poca profundidad en medio de natas acumuladas. Falconer (1994) hizo un primer intento para establecer una gua para microcistinas sobre la base de un estudio de exposicin de seis semanas con cerdos y otros datos toxicolgicos. Falconer sugiri 1 g/L para microcistinas en el agua potable, una concentracin que puede ser alcanzada por 5.000 clulas de Microcystis por ml de agua. El equipo de trabajo del Australian New South Wales Blue-Gree Algae recomend un nivel de 15.000 clulas/ml como "exposicin de contacto aceptable para cianobacterias". Ressom et al (1994) cuestionan la factibilidad de determinar niveles "seguros" de cianobacterias en aguas recreacionales, pero sugieren 20.000 clulas por ml como un umbral. Esta es una densidad que se manifestar como una descoloracin leve del agua y por lo tanto, el pblico informado la puede reconocer. Los resultados epidemiolgicos de Pilotto et al. (1997) citados en el cuadro 2 indican que la frecuencia de efectos adversos para la salud podra comenzar a incrementarse a densidades de clulas tan bajas como 5.000 a 20.000 clulas /ml. La directiva para aguas recreacionales de la Unin Europea (EC 1976) no reglamenta la densidad de las algas o cianobacterias, pero requiere un mnimo de 1m de transparencia (lectura de discos Secchi) y recomienda al menos 2 m. De todos los parmetros de la directiva, este es el que menos se ha implementado. Por ejemplo, en Alemania y Pases Bajos, casi la mitad de los balnearios de agua dulce reportaron menos de 1 m de transparencia, en la mayora de casos debido a la turbiedad de las algas. La intencin original de este parmetro era fsica: es ms fcil ver en el agua transparente cuando una persona se est ahogando para luego poder rescatarla. Sin embargo, este parmetro es actualmente el nico en la directiva que refleja la densidad del fitoplancton y por lo tanto, puede usarse indirectamente para controlar las algas y cianobacterias. Este criterio de transparencia se mide en el contexto del monitoreo rutinario de balnearios de acuerdo a la directiva de la EC a intervalos de 14 das, y se us en Alemania como base para un enfoque jerrquico para monitorear los crecimientos de masa y natas en los balnearios (Bundesgesundheitsblatt 1992). El acercamiento que se basa en la observacin que si cumple el criterio de

15

transparencia de 2 m, los crecimientos prolongados de masa de cianobacterias y natas superficiales intensivos ocurrirn rara vez en esta regin. Ocasionalmente, se deben vigilar los balnearios con mayor turbiedad para su contenido de nutrientes para comprobar si esto proporciona una capacidad para el crecimiento de masa de cianobacterias, y en ese caso, se recomienda el monitoreo frecuente de los crecimientos de masa en el balneario. En el proceso de compilar la gua mencionada sobre Cianobacterias txicas en el agua (Chorus y Bartram (eds.), 1998), para la Organizacin Mundial de la Salud, una reunin de expertos de la OMS ha recomendado una gua de procedimientos para aguas recreacionales basada en una evaluacin crtica de la evidencia y acercamientos actuales. Esto considera una gua provisional para el agua potable de 1 /L para microcistina-LR establecida por la OMS para sus Guas para la calidad del agua potable (WHO 1998), por lo tanto, se considera el peligro particular del dao heptico por microcistinas. Sin embargo, los resultados para la salud observados despus de la exposicin a actividades recreativas - en particular irritacin de la piel y membranas mucosas son ms generales y probablemente estn relacionados con sustancias cianobacterianas (en la actualidad mayormente desconocidas) a diferencia de las toxinas muy conocidas enumeradas en el cuadro. 1. Por lo tanto, las guas para la exposicin a actividades recreacionales deberan considerar las clulas cianobacterianas en su totalidad en lugar de centrarse en cianotoxinas individuales. Adems, los datos epidemiolgicos seran una base ms adecuada para su derivacin en lugar de los datos experimentales. Se ha publicado un estudio epidemiolgico sobre los efectos para la salud por la exposicin durante actividades recreativas de contacto primario (Pilotto et al. 1997; vase el cuadro 2 y el siguiente recuadro a continuacin), y esto se us como base para derivar guas para densidades celulares. Frente a la dificultad del muestreo cuantitativo representativo debido a la distribucin heterognea de cianobacterias en el tiempo y el espacio, en particular en lo que se refiere a la formacin y ubicacin de nata, deben incluirse ms enfoques que aborden la capacidad de un cuerpo de agua para mantener las principales poblaciones cianobacterianas. Evidencia epidemiolgica para peligros de bajo nivel de cianobacterias Los datos epidemiolgicos de Pilotto et al. (1997) pueden usarse como base para derivar guas para efectos agudos y no acumulativos sobre la salud, que tienen mayor probabilidad de causar molestias en lugar de efectos graves sobre la salud. Estos datos abarcan los efectos sobre la salud humana de las clulas y colonias cianobacterianas intactas, y por lo tanto, incluyen efectos de sustancias y bacterias actualmente desconocidas asociadas con colonias cianobacterianas. Los efectos medidos fueron irritacin de ojos y odos, sarpullido en la piel y tambin, vmitos, diarrea, sntomas de resfro/gripe, lceras en la boca y fiebre. La gente que estuvo en contacto con el agua con ms de 5.000 clulas cianobacterianas/ml durante ms de una hora mostr una proporcin elevada de posibilidades (Odds Ratio) para los sntomas (3,44). Se presentaron proporciones de probabilidades (Odds Ratio) similares para sntomas de personas que se baaban en agua con 5.000 a 20.000 clulas/ml (2,71) y por encima de 80.000 clulas/ml (2,90)

La OMS recomienda el siguiente enfoque (Falconer et al. 1998, p. 163-171): "Los problemas para la salud de las cianobacterias en aguas recreacionales deben diferenciarse entre los sntomas principalmente irritativos causados por sustancias cianobacterianas desconocidas y el peligro ms potencialmente grave de la exposicin a altas concentraciones de cianotoxinas conocidas, en particular, microcistinas. Por ello, un nico valor gua no es apropiado. Ms bien, en tres niveles se define una serie de valores gua asociados con la creciente gravedad y probabilidad de efectos graves (cuadro 4). Probabilidades relativamente leves y/o bajas de efectos adversos sobre la salud: Para protegerse de los efectos sobre la salud no causados por la toxicidad de microcistinas, sino por los efectos irritativos o alrgicos de otros compuestos cianobacterianos, un nivel gua de 20.000 clulas cianobacterianas por ml (correspondiente a 10 g/L de clorofila a en condiciones de predominio de cianobacterias) puede derivarse del estudio epidemiolgico de Pilotto et al. (1997; vase el recuadro anterior). Si bien las implicancias para la salud reportadas en este estudio estaban relacionadas con la densidad cianobacteriana y la duracin de la exposicin, afectaron a menos de 30 por ciento de los individuos expuestos. A esta densidad cianobacteriana, se puede esperar 2 g/L de microcistina si predominan las cianobacterias que producen microcistinas, y hasta 10 g/L, con afloramientos sumamente txicos (las diferencias regionales de contenido de microcistinas en las clulas pueden ser sustanciales). Este nivel es cercano al valor gua provisional para el agua potable de 1 g/L para microcistina-LR (WHO 16

1998) que es seguro para el consumo durante un ciclo de vida. Por lo tanto, los efectos sobre la salud debidos a microcistinas son improbables, y es suficiente con brindar esta informacin a baistas con este bajo nivel de riesgo. Adems, se recomienda que las autoridades se informen para iniciar una vigilancia adicional del sitio. Cuadro 4: Guas para la prctica segura en el manejo de aguas recreacionales Nivel gua o situacin Formacin de nata con cianobacterias en balnearios Cmo se deriv el nivel gua Inferencia de intoxicaciones letales de animales por va oral Historias de casos reales de enfermedades humanas Riesgos para salud Potencial para la intoxicacin aguda letal Potencial para enfermedades a largo plazo con algunas especies cianobacterianas Resultados adversos para la salud a corto plazo; por ejemplo, irritaciones de la piel, enfermedades gastrointestinales Potencial para la enfermedad a largo plazo con algunas especies cianobacterianas Resultados adversos para la salud a corto plazo; por ejemplo, irritaciones de la piel, enfermedades gastrointestinales Accin recomendada Accin inmediata para prevenir contacto con natas; posible prohibicin de nadar y otras actividades de contacto con el agua Investigacin de seguimiento de la salud pblica Informe a las autoridades pertinentes

100.000 clulas de cianobacteria/mL o 50 g clorofila-a/L con predominio de cianobacterias

De la gua para el agua potable para microcistina LR, y datos relacionados con otras cianotoxinas

Vigilancia de las natas Restriccin de reaeracin de contacto primario e investigacin adicional de peligros Colocacin de letreros de advertencia de riesgo en el lugar Informe a las autoridades de salud pertinentes Colocacin de letreros de advertencia de riesgos en el lugar Informe a las autoridades pertinentes

20.000 clulas de cianobacterias/mL o 10 g clorofila-a/L con predominio de cianobacterias

De estudios epidemiolgicos sobre actividades recreativas de contacto primario de los seres humanos

Resultados adversos para la salud a corto plazo; por ejemplo, irritaciones de la piel, enfermedades gastrointestinales, probablemente a menor frecuencia

Probabilidad moderada de efectos adversos sobre la salud: Con concentraciones superiores de clulas cianobacterianas, se eleva la probabilidad de sntomas irritativos. Adems, las cianotoxinas (generalmente atadas a las clulas) pueden alcanzar concentraciones con efectos potenciales para la salud. Para evaluar el riesgo en estas circunstancias, se pueden aplicar los datos usados para el valor gua provisional del agua potable para microcistinas. Mientras se baan, los nadadores ingieren involuntariamente agua por la boca y el dao ocasionado por esta ingestin ser equivalente al del abastecimiento de agua potable con el mismo contenido de toxinas. Se puede esperar que un nadador ingiera 100-200 ml de agua en una sesin, los tablistas de vela y esquiadores probablemente ms. Un nivel de 100.000 clulas cianobacterianas por ml (que es equivalente a aproximadamente 50 g/l de clorofila-a si predominan las cianobacterias), representa un valor gua para una alerta moderada de salud en aguas recreacionales. A este nivel, es probable 20 g/L de microcistinas, si el afloramiento consta de Microcystis o Planktothrix agardhii y tiene un contenido promedio de toxinas por clula de 0,2 pg, 0,4 g de microcistinas por g de clorofila-a, (es posible hasta 50 g/L de microcistinas). Este nivel es equivalente a veinte veces la concentracin establecida por los valores gua 17

provisionales de la OMS para microcistinas-LR en el agua potable, pero dara lugar a la ingesta de una cantidad en el rango de la dosis diaria tolerable (DDT) de 0,04 g/kg/d (WHO 1998) para un adulto de 60 kg que ingiere 100 ml de agua mientras nada (en lugar de 2 L de agua potable). Sin embargo, un nio de 15 kg que ingiere 250 ml de agua mientras juega intensivamente, podra estar expuesto a diez veces la DDT. An ms, el riesgo para la salud aumentar si la persona expuesta es particularmente susceptible, por ejemplo, debido a la hepatitis B crnica. Por ello, los niveles cianobacterianos que puedan causar concentraciones de microcistinas de 20 ug/L deben motivar una accin adicional. Se han observado que las especies que no forman nata de cianobacterias tales como Planktothrix agardhii alcanzan densidades celulares correspondientes a 250 g/l de clorofila-a o an ms, en cuerpos de agua de poca profundidad. La transparencia en tales situaciones ser menor a 0,5 metros medidos con un disco Secchi. Se ha mostrado que Planktothrix agardhii contiene cuotas muy altas de clulas de microcistinas (1-2 g por g de clorofila-a, Sivonen y Jones 1998), de manera que pueden presentarse concentraciones de toxinas de 250 a 500 g/L sin formacin de nata. Una razn adicional para una mayor alerta a 100.000 clulas/ml es el potencial de que las especies cianobacterianas (en particular Microcystis spp. y Anabaena spp.) formen natas (vase la figura 1), que pueden aumentar la densidad local de las clulas y por lo tanto, la concentracin de toxinas por un factor de mil o ms en unas pocas horas. As, el riesgo rpidamente cambiara de moderado a alto (vase la siguiente subseccin) para baistas y otras personas que realizan deportes acuticos de contacto primario. La formacin de natas de cianobacterias presenta un problema nico para el monitoreo rutinario en los intervalos usuales de tiempo de una o dos semanas, ya que estos intervalos de monitoreo tienen poca probabilidad de detectar niveles mximos de riesgo. Debido al potencial para la formacin rpida de nata a una densidad cianobacteriana de 100.000 clulas/ml 50 g/L de clorofila-a (del gnero cianobacteriano que forma nata), se deberan intensificar las medidas de vigilancia y proteccin a estos niveles. Las opciones son inspeccin diaria para la formacin de nata (si el gnero de formacin de nata estn presente), y medidas para prevenir exposiciones en reas propensas a la formacin de nata. Se recomienda la intervencin para promover campaas efectivas de informacin pblica para educar a las personas y advertirles con respecto al contacto con las natas. Adems, en algunos casos (por ejemplo, formacin frecuente de nata), restringir las actividades recreativas puede ser apropiado. Se debe implementar un programa intensificado de monitoreo, en particular cuando se trata de acumulaciones de nata. Las autoridades sanitarias deben ser notificadas de inmediato. Alto riesgo de efectos adversos sobre la salud Existe evidencia abundante sobre efectos potencialmente severos para la salud relacionados con natas causado por cianobacterias txicas. Si bien ninguna muerte humana se ha asociado inequvocamente con la ingestin de cianotoxinas por la boca, numerosos animales han muerto por consumir agua con material de natas de cianobacterias (seccin 2). Esta discrepancia puede deberse al hecho de que los animales beben mayores volmenes de agua que contiene nata con relacin a su peso corporal, mientras que la ingestin accidental de nata por los seres humanos durante las actividades recreativas dar lugar a una dosis inferior. Las natas de las cianobacterias pueden representar concentraciones de mil a un milln de veces de poblaciones de clulas cianobacterianas. Los clculos indican que un nio que juega en natas de microcistis durante un perodo prolongado y que ingiere un volumen significativo podra recibir una exposicin letal, aunque ningn informe indica que esto haya ocurrido en la prctica. Basado en la evidencia que una ingesta oral letal de microcistina-LR es 2.000 g/kg de peso corporal para un ratn (Kuiper-Goodman et al. 1998), se podra esperar que la ingestin de 20 mg de microcistina o menos por un nio de 10 kg, cause una lesin heptica aguda grave, incluso con posibilidades de muerte. Se han reportado concentraciones de hasta 24 mg/L de microcistinas en el material de la nata (seccin 2), donde la ingesta oral de 1 litro podra ser potencialmente fatal. Ocasionalmente, se observa el enriquecimiento sustancialmente mayor de natas hasta una consistencia gelatinosa y la ingestin accidental de volmenes ms pequeos podra causar un dao grave. La evidencia anecdtica indica que los nios, a diferencia de los adultos, pueden sentirse atrados a jugar en natas.

18

La presencia de natas causada por cianobacterias es un indicador de efectos adversos potencialmente severos para la salud para aquellos baistas que establecen contacto con la nata. Para estas situaciones, se recomienda accin inmediata para controlar el contacto con la nata. Se recomienda realizar un seguimiento de la salud pblica especialmente si el cumplimiento es deficiente. "Este enfoque no abarca todas las situaciones concebibles. Por ejemplo, las cianobacterias bnticas pueden estar en contacto con nadadores despus de que una tormenta rompe pedazos de filamentos, o cuando las natas de cianobacterias se separan naturalmente del sedimento y se acumulan en el litoral (Edwards et al. 1992). Algunas playas marinas reportan problemas generalizados debidos a una cianobacteria bntica marina, la Lyngbya majuscula, que crece en rocas de mares tropicales y causa ampollas graves cuando se pegan a los trajes de buceo de los nadadores despus de una tormenta (Grauer 1961). Esta respuesta puede deberse a la toxicidad aguda, como en el caso de la Lyngbya, que puede producir toxinas irritantes. Como se presenta en el cuadro 4, las mediciones de densidad de clulas cianobacterianas no detectarn estos peligros. En cambio, este peligro de la cianotoxina requiere una observacin crtica y bien informada sobre los balnearios, en combinacin con una respuesta flexible. Es difcil definir las concentraciones seguras de cianobacterias en el agua recreacional para efectos alrgicos o reacciones de la piel, ya que las sensibilidades de los individuos varan en gran medida. El empeoramiento de las reacciones drmicas debidas a la acumulacin de material cianobacteriano y a una mayor destruccin de las clulas en los trajes de bao y trajes de buceo puede ser un problema incluso a densidades por debajo de las guas descritas anteriormente. 4. Monitoreo y vigilancia

El cuadro 5 muestra un enfoque para el monitoreo destinado a limitar los esfuerzos regulares de vigilancia a aquellos sitios que tienen probabilidad de presentar un riesgo. El cuadro 6 proporciona un esquema para la evaluacin y accin temporal e inmediata. Los acercamientos efectivos para el manejo y vigilancia de riesgos deben tener en cuenta que tanto los crecimientos de masa de cianobacterias as como su distribucin potencialmente heterognea en un cuerpo de agua estn regidos por mecanismos ecolgicos complejos. Principalmente, las concentraciones de nutrientes (generalmente, fosfato) determinan la mxima biomasa posible y a concentraciones moderadas a bajas, influyen firmemente cuando predominan las cianobacterias u otras algas. Sin embargo, la formacin de nata depende de parmetros morfolgicos tales como profundidad a partir de la cual las cianobacterias pueden subir a la superficie, y longitud del alcance del viento sobre el cual las agregaciones superficiales se pueden arrastrar unas a otras para formar natas en el litoral. Por estas razones, los valores presentados en el cuadro 5 pueden servir de orientacin y gua para luego desarrollarse an ms como informacin sobre la acumulacin en un cuerpo de agua dado. Para la inspeccin visual del balneario, siga el esquema presentado en el cuadro 6. Transitoriamente, para una evaluacin y accin inmediata (es decir, si el equipo y los laboratorios no estn disponibles), este esquema puede aplicarse sin necesidad de evaluar los datos cuantitativos requeridos en el cuadro 5. Sin embargo, la investigacin no debe limitarse a estos parmetros visuales, a menos que puedan evaluarse diariamente. Si se omite el acercamiento cuantitativo presentado en el cuadro 5, las autoridades no tienen ninguna medicin acerca de la formacin potencial de nata y por ello, deben esperar constantemente este riesgo.

19

Cuadro 5: Acercamiento de la investigacin estructurada y cuantitativa para el monitoreo y vigilancia de cianobacterias txicas

1.

Monitorear el fosfato total al menos dos veces al ao, en climas subtropicales y templados a comienzos de la primavera (overturn) y en verano, durante la temporada principal. Si las concentraciones fsforo total estn por debajo de 0,01 - 0,02 mg/L de P, los crecimientos de masa de cianobacterias son improbables y las turbiedades altas pueden deberse a otras causas. Asegrese de determinar el fsforo total, no slo las fracciones disueltas, ya que slo el fsforo total refleja la capacidad del ecosistema para formar cianobacterias. An ms, asegrese de aplicar un mtodo efectivo de digestin de muestras como el ISO/FDIS 6878, borrador final (basado en Koroleff 1976). A concentraciones ms altas de fsforo total, se debe verificar la presencia de crecimientos de masa de cianobacterias en el fitoplancton (vanse los pasos 2 y 3).

2.

Monitorear los crecimientos de masa de fitoplancton (algas + cianobacterias) a intervalos quincenales. Realice la inspeccin visual siguiendo el esquema presentado en el cuadro 6. Para la evaluacin cuantitativa, use la concentracin de clorofila-a como una medida sencilla para la densidad de algas (incluida la cianobacteriana). Si las concentraciones de clorofila-a permanecen por debajo de 0,01 mg/L, las densidades de cianobacterias peligrosas son improbables. A concentraciones ms altas, se requieren investigaciones microscpicas para el predominio de cianobacterias (vase el paso 3). Inspeccione en lo mximo posible el rea de captacin para signos de desages de aguas residuales, fertilizacin excesiva cerca del litoral, erosin u otras posibles fuentes de fsforo.

3.

Monitorear el predominio de cianobacterias potencialmente txicas: Si las investigaciones microscpicas muestran el predominio de concentraciones de clorofila-a de cianobacterias por encima de 0,01 mg/L, se deben tomar medidas inmediatas, tales como colocacin de letreros de advertencia o verificacin regular de playas para la formacin de natas, y se deben planificar medidas a largo plazo para restaurar la calidad de las aguas recreacionales. El monitoreo de las concentraciones de toxinas es opcional, pero no necesario, a menos que se reporten efectos sobre la salud.

Se recomienda incluir mediciones de la transparencia (lecturas del disco Secchi) en los pasos 2 y 3, ya que los datos de transparencia mejoran en gran medida la comprensin del sistema. Con frecuencia, los valores de < 2 m indican crecimientos de masa de cianobacterias o algas. Los mtodos para los pasos 1 - 3 se presentan a continuacin.

Este acercamiento procura maximizar la seguridad mientras reduce los esfuerzos de investigacin a situaciones que puedan presentar un peligro. Se autofortalece an ms, ya que aborda la capacidad del sistema para formar organismos peligrosos y con ello, se obtiene una mejor comprensin de los ecosistemas respectivos. Carmichael (1995) recalca el aspecto de que los factores que rigen la distribucin espacial y temporal de las cianobacterias son bastante predecibles en muchos cuerpos de agua y pueden conocerse a travs de la observacin regular. La necesidad de tratar con el peligro de cianobacterias txicas puede conducir a un mejor entendimiento de las tendencias de crecimientos de masa y por lo tanto, a una base para un acercamiento adecuadamente diferenciado para manejar los riesgos potenciales de acuerdo a la situacin especfica de cada cuerpo de agua. En resumen, debido a que la base cientfica para derivar valores gua para cianobacterias y especialmente para algas en aguas recreacionales actualmente est debilitada por la falta de datos cuantitativos epidemiolgicos y toxicolgicos sobre la exposicin crnica, se recomienda un acercamiento general de precaucin: se debe evitar la exposicin a altas densidades especialmente de cianobacterias, y se debe informar al pblico acerca de este peligro. 20

Cuadro 6: Inspeccin visual de los balnearios y accin inmediata para prevenir peligros para la salud

1.

Evaluar las reas con mayor probabilidad de ser afectadas primero es decir, litorales de sotavento. Note cualquier cambio en la direccin o fuerza del viento 24 horas antes de llegar a una conclusin ya que las condiciones pueden variar en horas. Determine si: Se puede ver el fondo del lago a 30 cm de profundidad a lo largo de la orilla Las cianobacterias son visibles en la orilla del agua o si se ven rayas de color verde o verdeazuladas en la superficie del agua. Se observa nata verde o verde-azulada en la superficie del agua en cualquier rea.

2.

3.

4.

Si las cianobacterias estn presentes, decida si: Separar el rea afectada con boyas si fueran lo suficientemente pequeas y, prohibir el acceso a los baistas prohibir el acceso a la orilla del agua afectada por la nata o por la visibilidad reducida, excepto por el lanzamiento de embarcaciones prohibir el acceso a todos los usuarios a actividades recreativas donde los afloramientos de cianobacterias cubran generalmente las aguas.

5.

Si las cianobacterias estn presentes, inspeccione lo mximo posible el rea de captacin para signos de desages de aguas residuales, fertilizacin excesiva cerca del litoral, erosin, u otras fuentes potenciales de fosfato. Si las cianobacterias estn presentes, inicie el monitoreo regular de acuerdo al cuadro 5.

6.

5.

Mtodos para monitorear la presencia de cianobacterias y anlisis de cianotoxinas

Yoo et al. (1995) sealan que la mayor variedad y nmero de cianotoxinas individuales descubiertas hacen que "la meta de los mtodos analticos muy especficos y sensibles que detectaran todas las toxinas pertinentes sea cada vez ms compleja y en ltimo trmino, inalcanzable" (p. 93). Por lo tanto, el monitoreo y desarrollo de afloramientos en lugar de toxinas es un acercamiento ms racional. An ms, la buena familiaridad con la limnologa del cuerpo de agua destinado a la recreacin facilitar una concientizacin y accin bien proyectada. Para el enfoque estructurado esbozado en el cuadro 5, se recomiendan los siguientes mtodos ampliamente conocidos, y se sealan los aspectos importantes. Transparencia: Sumergir un disco blanco de 20 cm de dimetro (disco Secchi) atado a un cordn de longitud suficiente (> 4 m). La lectura correcta es la profundidad a la cual este disco apenas se puede ver desde la superficie, cuando se sombrea la superficie con el cuerpo mismo o barco (vase Bartram y Balance 1996 para una descripcin detallada). Fosfato total: Algunos mtodos de digestin ampliamente aceptados para disolver partculas a fin de liberar todo el fosfato realizan este trabajo en forma incompleta. El mtodo de ISO (ISO/FDIS 6878, borrador final; vase tambin Koroleff 1976) ha resultado ser sencillo y eficiente. Un total de 10 ml de muestras estn firmemente selladas en los tubos con tapas resistentes al calor y cocinadas a presin. Si no hay equipo de laboratorio disponible, pueden usarse ollas a presin sencillas empleadas en viviendas. El uso de una cubeta de 5 cm de largo para medir la absorcin incrementar cinco veces la sensibilidad comparado con las cubetas de 1 cm de largo comnmente empleadas. 21

Clorofila-a: Se recomiendan extracciones con etanol hirviente de acuerdo a ISO 10260 (1992). Cianobacterias: El muestreo debe tener en cuenta que su distribucin horizontal y vertical puede ser sumamente heterognea y variable en perodos cortos. Para evaluar los riesgos para salud, se deben buscar y muestrear los afloramientos densos y natas superficiales. La densidad cianobacteriana misma puede evaluarse al contar las clulas o filamentos en un microscopio invertido (Lawton et al. 1998; Padisak y Adrian, en prensa; Cronberg 1982; Utermhl 1958). Sin embargo, si la biomasa del fitoplancton se cuantifica mediante el anlisis de clorofila, el anlisis microscpico puede limitarse a una investigacin breve de las especies dominantes, en lugar de realizar recuentos laboriosos de clulas. La experiencia general muestra que a concentraciones de clorofila-a de ms de 40 g/L y con predominio de cianobacterias, se pueden formar rpidamente natas superficiales. Las concentraciones severas de natas se observan en concentraciones por encima de 100 - 150 g/L de clorofila-a (medido en aguas abiertas, fuera de las natas del litoral). Los enriquecimientos en natas por un factor de 1.000 o ms comparados con aguas abiertas son comunes mientras ms grande sea la superficie del cuerpo de agua, mayor ser la concentracin potencial de natas de cianoabacterias a travs de la accin del viento. En los pases que siguen la directiva de la Unin Europea para aguas destinadas a la recreacin (EC 1976), generalmente el muestreo se realiza quincenalmente. Por lo general, esto ser suficiente cuando no se detecten poblaciones cianobacterianas. Sin embargo, tan pronto empiece el crecimiento de la poblacin cianobacteriana (en climas templados, a menudo, a mediados de verano), se debe aumentar la frecuencia de muestreo a un muestreo por semana. Toxinas cianobacterianas: El muestreo de toxinas debe considerar que las cianotoxinas (especialmente microcistinas) generalmente estn contenidas dentro de las clulas y liberadas en el agua circundante slo cuando ocurre la lisis. Esto no puede aplicarse a la anatoxina-a (Bumke-Vogt et al. 1996). La mayora de mtodos analticos abordan el contenido intracelular. Por ello, la filtracin rpida de las muestras antes del inicio de la lisis es necesaria para prevenir la subestimacin del contenido de toxinas. El enriquecimiento en el lugar con redes de plancton ha resultado ser muy efectivo para "cosechar" mayores cantidades para el anlisis de toxinas. En situaciones donde las concentraciones de partculas constan en gran parte de cianobacterias, el peso seco de muestras concentradas de afloramientos puede estar fcilmente relacionado con el volumen de agua muestreado al determinar la concentracin de partculas en el agua del lago. Para las cianotoxinas cuya estructura ya ha sido descrita, se han establecido mtodos analticos apropiados para el anlisis rutinario, algunos de ellos muy recientemente (Codd et al. 1994). En Lawton et al. (1998) y Harada (1994) se presentan buenas revisiones de los mtodos, su sensibilidad y los campos de aplicacin. Las autoridades de salud se centrarn principalmente en microcistinas; los anlisis de neurotoxinas puede indicarse en situaciones especficas (por ejemplo, muertes de animales). Las microcistinas pueden analizarse efectivamente y con bastante exactitud en 1 - 2 das segn el mtodo HPLC de Lawton et al. (1994). Se puede realizar una rpida evaluacin preliminar con ensayos immunolgicos (comercialmente disponibles); la confiabilidad aumenta an ms mediante el uso paralelo de un ensayo enzimtico (An & Carmichael 1994; Ueno et al. 1996). Ms all de estos mtodos que tratan sustancias conocidas, el bioensayo con ratones mostrar una respuesta integrada a las toxinas conocidas as como desconocidas en las cianobacterias. Es rpido y fcil para laboratorios que habitualmente realizan ensayos con ratones, pero ticamente controversial en muchos pases y generalmente ms costoso que los mtodos analticos. Se ha desarrollado una bioprueba con suborganismos usando hepatocitos primarios de ratas en comparacin con una lnea de clulas para realizar pruebas para la hepatotoxicidad y citotoxicidad generales (Heinze 1997). 6. Medidas a corto plazo

La percepcin de riesgos debidos a cianobacterias txicas ha generado diferentes reacciones: En Gran Bretaa, se han cancelado las competencias deportivas debido a afloramientos de cianobacterias (National Rivers Authority 1990), pero tambin se est recogiendo experiencia con opciones, tales como observacin cercana de la formacin de nata y proteccin de baistas al cercar las natas con barreras flotantes, o lanzamiento de embarcaciones y natacin slo en muelles en vez del litoral (Codd, comunicacin personal). En Australia, la responsabilidad de reaccionar a las advertencias generalmente depende del pblico: los balnearios rara vez estn cerrados, pero se colocan seales de advertencia de una manera clara y comprensible (con pictogramas para superar las barreras del idioma en esta sociedad multicultural). En Australia, esta poltica se puede basar en un grado especialmente alto de conciencia pblica hacia las

22

cianotoxinas, debido a la presencia relativamente frecuente de afloramientos de cianobacterias, y una larga historia de intoxicaciones de animales domsticos. En Alemania, se est proponiendo una reaccin en dos etapas con un nivel de alerta debido a altas densidades de cianobacterias, lo cual promueve la publicacin y colocacin de avisos de advertencia y, un nivel de intervencin en la formacin de natas que provoca el cierre temporal del sitio. La medida a corto plazo ms importante es la informacin adecuada brindada al pblico sobre los riesgos de las cianobacterias. La conciencia de un riesgo potencial no slo es un pre-requisito para evitarlo, sino tambin para comprender los sntomas potencialmente causados por la exposicin e identificar su causa. Al igual que las personas son conscientes de la toxicidad de los hongos venenosos o laburnos, las personas deben saber que en ningn caso deben ingerir natas cianobacterianas y, que debe evitarse el contacto directo. Por ello, una responsabilidad principal de las autoridades pblicas es brindar informacin adecuada al pblico. Advertencia a todos los visitantes de esta playa Actualmente, se est desarrollando un afloramiento masivo de algas verde-azuladas en el Lago _______. Usted puede reconocerlo mediante la descoloracin verde-azulada del agua y a veces tambin por la presencia de natas en la superficie. Estas algas pueden ser txicas. Los efectos txicos aumentarn si el agua se ingiere por la boca en varios das consecutivos. Por consiguiente: Evite ingerir agua cuando nada! Los nios estn especialmente en peligro! Si aparecen sntomas despus del contacto con el agua (por ejemplo, nuseas, vmitos, diarrea, irritaciones de la piel u ojos, dificultades de respiracin) consulte a su mdico y srvase notificarlo a su autoridad de salud!

La comunicacin de las advertencias al pblico puede ocurrir a travs de medios de informacin locales y al colocar avisos de advertencia. En el siguiente recuadro, se presenta un ejemplo de un aviso de advertencia breve y sencillo. Los avisos pueden ser en forma de dibujos, que muestren a una persona nadando con una barra roja Los animales domsticos, especialmente los perros, cruzada. La comunicacin de los avisos de tambin estn en peligro! advertencia de cianobacterias puede complementarse con informacin adicional sobre otros parmetros de calidad del agua recreacional regularmente monitoreados por las autoridades y/o alguna informacin adicional sobre cianobacterias.

La diferenciacin entre el grado de contacto con el agua en diferentes tipos de deportes acuticos debe incluirse en los avisos de advertencia. La informacin sobre la naturaleza, con frecuencia transitoria, y distribucin local muy variable de natas es importante para transmitir el mensaje de que las actividades recreativas estn restringidas slo temporalmente y muy localmente, y que se puede encontrar cerca agua de calidad aceptable, es decir en otro sitio del mismo lago. 7. Medidas a largo plazo y riesgos que deben evitarse: cmo podemos mantener o lograr bajas densidades de poblacin de algas nocivas?

El objetivo de las medidas en cuanto a minimizar los riesgos de algas txicas no es clausurar los balnearios, sino restaurar la calidad del agua destinada a la recreacin con transparencias de > 2 m (lectura del disco Secchi) y ausencia de afloramientos de cianobacterias. Esto puede lograrse al mantener concentraciones de fsforo total por debajo de 0,01 mg/L-P; y las densidades de cianobacterias que causan niveles de riesgo moderado a alto como se describen en el cuadro 4 son improbables a concentraciones totales de fsforo por debajo de 0,02 - 0,03 mg/L-P. Este umbral puede ser difcil de alcanzar en cuerpos de agua con mltiples fuentes de contaminacin de nutrientes. Sin embargo, las fuentes de nutrientes son muy variables localmente. Por consiguiente, se recomienda firmemente la identificacin de las fuentes principales (vase la figura 2) y el desarrollo de estrategias de restauracin que en muchos casos, resultan ms factibles que lo que originalmente se pens (vase Chorus y Mur 1998). Particularmente, los aportes de nutrientes de la escorrenta agrcola puede en muchos casos reducirse fcilmente (sin costo e incluso con una ganancia econmica) al reducir la aplicacin de fertilizantes a la demanda real del cultivo, o a travs de medidas sencillas tales como proteccin contra la erosin al plantar arbustos a lo largo de una tira de cerca de 20 m en la orilla del lago, en lugar de labrar y fertilizar en la misma orilla del agua. Las autoridades de salud pueden iniciar una mejora sustancial en estas situaciones.

23

Causas Aguas residuales con tratamiento insuficiente Escorrenta de reas agrcolas fertilizadas Estircol, efluente de industrias ganaderas intensivas Escorrenta de las calles en reas urbanas

Efectos Fertilizacin del agua, principalmente con fsforo

Impacto en la calidad de las aguas recreacionales Consecuencias Crecimiento de masa de cianobacterias potencialmente txicas toxicidad efectos alrgicos mayor turbiedad olores nocivos

Factores que favorecen : aguas poco profundas, largos periodos de retencin (> 1-2 meses)

Fig. 2:

Crecimientos de masa de cianobacterias potencialmente txicas factores causantes y que favorecen, e impacto sobre la calidad del agua recreacional

24

Referencias An, J. & Carmichael, W. 1994: Use of a colorimetric protein phosphatase inhibition assay and enzyme linked immunosorbent assay for the study of microcystins and nodularins. Toxicon 32,, 1495-1507. Bartram, J., Ballance, R. 1996: Water Quality Monitoring. A practical guide to the design and implementation of freshwater quality studies and monitoring programmes. Published on the behalf of UNEP and WHO by Spon/Chapmann & Hall, London. 383 pp. Benndorf, J. & Henning, M. 1989: Daphnia and toxic blooms of Microcystis aeruginosa in Bauzen Reservoir (GDR). Int. Revue ges. Hydrobiol. 74, 233-248. Bumke-Vogt, C., Mailahn, W., Rotard, W., Chorus, I. 1996: A highly sensitive analytical method for the neurotoxin Anatoxin-a and first application to laboratory cultures. Phycologia 35, 51-56. Bundesgesundheitsamt 1992: Schutz von Badenden vor Algentoxinen und Allergenen in Badegewssern durch Einhaltung der Anforderungen nach EG-Richtlinie. Bundesgesundheitsbl. 6/92, S. 320. Carmichael, W., Hones, C., Mahmood, N. Theiss, W. 1985: Algal toxins and water-based disease. Critical Rev. Environm. Contr. 15, 275-313. Carmichael, W. 1994: The toxins of cyanobacteria. Scientific American, 64-72. Carmichael, W. 1995: Toxic Microcystis and the environment. p. 1-12 in: Watanabe, M., Harada, K., Carmichael, W., Fujiki, H.: Toxic Microcystis. CRC Press, Boca Raton, New York, London, Tokyo. 262 pp. Carmichael, W.W. 1996: Proceedings of the IV Symposium of the Brasilian Society of Toxinology. Oct 6-11, 1996. Chorus, I. 1993: Algal metabolites and water quality: toxins, allergens, and taste-and odor-substances. Proceedings of the ILEC-symposium "Strategies for Lakes beyond 2000", Mem. Ist. Ital. Idrobio. 52, 257280. Chorus, I. 1998: Die Blaualgen - eine Berliner Besonderheit. In: Dokumentation zum Symposium zur Nachhaltigkeit imWasserwesen in der Mitte Europas vom 17. - 19. Juni 1998, Senatsverwaltung Berlin. Chorus, I. and Bartram, J. (eds), 1998: Toxic Cyanobacteria in Water: a Guide to Public Health Significance, Monitoring and Management. Published on the behalf of WHO by Spon/Champan & Hall, London, in press. Chorus, I., Mur, L. 1998: Preventive Measures. In: Chorus, I. and Bartram, J. (eds): Toxic Cyanobacteria in Water: a Guide to Public Health Significance, Monitoring and Management. Published on the behalf of WHO by Spon/Champan & Hall, London in press. Codd, G.A., Bell, S.G., and Brooks, W.P. 1989: Cyanobacterial toxins in water. Wat. Sci. Technol. 21, 1-13. Codd, G. 1995: Geographic, spatial and temporal occurrence of Cyanobacterial toxins. Lecture at the 1st. International congress on toxic cyanobacteria, 20-24. Aug. 1995, Ronne, Denmark, to be published in Phycologia. Codd, G.A., Jefferies, T.M., Keevil, C.W. and Potter, E. (eds.) 1994: Detection Methods for Cyanobacterial Toxins. The Royal Society of Chemistry. ISBN 0-85186-961-0, 191 pp. Cohen, S.G. and Reif, C.B. 1953. Cutaneous sensitization to blue-green algae. J. Allergy 24, 452-457. Cronberg, G. 1982: Phytoplankton changes in Lake Trummen induced by restoration. Folia Limnologica Scandinavica 18, 119 pp.

25

Cronberg, G., Annadotter, H., Lawton, L.A., Hansson, H.-B., Gthe, U., Skulberg, O.M. 1997: A large outbreak of gastroenteritis associated with the toxic cyanobacterium Planktothrix (Oscillatoria) agardhii. Proceedings of the 1st international symposium on toxic Cyanobacteria. Phycologia. Dillenberg, H.O. & M.K. Dehnel 1959. Toxic water bloom in Saskatchewan. Canad. Med. Assoc. J. 83, 1151-1154. Dittmann, E., Meissner, K., Brner, T. 1997: DNA sequences encoding peptide synthesis in Microcystis aeruginosa. Lecture at the 1st. International congress on toxic cyanobacteria, 20-24. Aug. 1995, Ronne, Denmark. Phycologia. EC Directive 76/160/EWG 1976: Directive on the quality of bathing water, Nr. L 31/1-7. Edwards, C., Beattie, K., Scrimgeour, C., Codd, G. 1992: Identification of anatoxin-a in benthic cyanobacteria (blue-green algae) and in associated dog poisonings at Loch Insh, Scotland. Toxicon 30, 1165-1167. Falch, B., Knig, G., Wright, A., Sticher, O., Angerhofer, C., Pezzuto, J., Bachmann, H. 1995: Biological activities in Cyanobacteria: evaluation of extracts and pure compounds. Planta Med. 61, 321-328. Falconer, I. 1993 (ed.): Algal Toxins in Seafood and Drinking Water. Academic Press, London, San Diego, New York, Boston, Sydney, Tokyo, Toronto. ISBN 0-12-247990-4. 224 pp. Falconer, I.R. 1994: Health problems from exposure to Cyanobacteria and proposed safety guidelines for drinking and recreational water, 3-10. In: Codd, G.A., Jefferies, T.M., Keevil, C.W. and Potter, E. (eds.): Detection Methods for Cyanobacterial Toxins. The Royal Society of Chemistry. ISBN 0-85186-961-0, 191 pp. Falconer, I.R. 1996: Cylindrospermopsis - A health risk or just a nuisance? In: Cylindrospermopsis - A new toxic algal bloom challenge for Australia, Brisbane City Hall, 24 Oct. 1996, Symposium Abstracts. Falconer, I., Bartram, J., Chorus, I., Kuiper-Goodman, T., Utkilen, H., Codd, G., 1998: Safe levels and practices. In: Chorus, I. and Bartram, J. (eds), 1998: Toxic Cyanobacteria in Water: a Guide to Public Health Significance, Monitoring and Management. Published on the behalf of WHO by Spon/Champan & Hall, London, in press. Falconer, I.R., Beresford, A.M., Runnegar, M.T.C. 1983: Evidence of liver damage by toxin from a bloom of the blue-green alga Microcystis aeruginosa. Med. J. Aust. 1, 511-514. Falconer, I., Buckley, T.H. 1989: Tumor promotion by Microcystis sp., a blue-green algae occurring in water supplies. Med. J. Aus. 150 351-352. Falconer, I.R. & Humpage, A.R. 1996. Tumour promotion by cyanobacterial toxins. Phycologia, 35(6 supplement), 74-79. Falconer, I. R., Smith, J.V., Jackson, A.R.B., Jones A., Runnegar, M.T.C. 1988: Oral toxicity of a bloom of the cyanobacterium Microcystis aeruginosa administered to mice over periods up to 1 year. J. Toxicol. Environ. Health 24, 291-305. Falconer, I.R., Yeung, D.S.K. 1992: Cytoskeletal changes in hepatocytes induced by Microcystis toxins and their relation to hyperphosphorylation of cell proteins. Chem.-Biol. Interactions 81, 181-196. Fastner, J., Heinze, R.,Chorus, I. 1995: Microcystin-content, hepatotoxicity and cytotoxicity of Cyanobacteria in some German water bodies. Wat. Sci. Techn. Fastner, J., Neumann, U., Wirsing, B., Weckesser, J., Wiedner, C., and Chorus, I. 1999: Microcystins (hepatotoxic heptapeptides) in German fresh waters. Env. Toxic. Water Qual., in press.

26

Fawell, J.K. and James, H.A. 1994 (Report No. FR 0434/DoE 3728). United Kingdom: Allen House, The Listons, Liston Road, Marlow, Bucks, SL7 1FD. Fitzgeorge, R., Clark, S. & Keevil, C. 1994: Routes of intoxication, 69-74. In: Codd, G.A., Fastner, J., Neumann, U., Wirsing, B., Weckesser, J., Wiedner, C., und Chorus, I. 1999: Microcystins (hepatotoxic heptapeptides) in German fresh waters. Env. Toxic. Water Qual., in press. Francis, G. 1878: Poisonous Australian Lakes. Nature 18, 11-12. Fujiki, H., Saeoka, e., Saganuma M. 1996: Carcinogenesis of microcystins. 203-232 in: Watanabe, M.F., Harada, K.-I., Carmichael, W.W., Fujiki, H. (eds.): Toxic Mycrocystis. CRC Press. ISBN 0-8493-7693-9, 262 pp. Grauer, F. 1961 Seaweed dermatitis. Arch. Dermatol., 84, 720-732. Gunn, G. J., Rafferty, A. G., Rafferty, G. C., Cockburn, N., Edwards, C., Beattie, K. A., Codd, G. A. 1992. Fatal canin neurotocicosis attributed to blue-green algae (cyanobacteria). The Veterinary Record, 4. Hansen, L., Kristiansen, J., Rasmussen, J. 1994: Potential toxicity of the freshwater Chrysochromulina species C. parva (Prymnesiophyceae). Hydrobiologiea 287, 157-159. Harada, K.-I. 1994: Strategy for trace analysis of microcystins in complicated matrix. Proc. Symp. Toxic Cyanobacteria - A Global Perspective. Adelaide, South Australia, Australian Centre for Water Quality Research. 49-51. Hawkins, P.R., Chandrasena, N.R. Jones, G.J., Humpage, A.R., Falconer, I. 1997: Isolation and toxicity of Cylindrospermopsis raciborskii from an ornamental lake. Toxicon 35, 341-346. Heise, H.A. 1949: Symptoms of hay fever caused by algae. J. Allergy 120, 383. Heise, H.A. 1951: Symptoms of hay fever caused by algae. J. Allergy 9, 100. Heinze, R. 1997: A biotest using primary rat hepatocytes. International congress on toxic cyanobacteria, 2024. Aug. 1995, Ronne, Denmark. Phycologia. Henning, M. and Kohl, G. 1981: Toxic blue-green algae water blooms found in some lakes in the German Democratic Republic. Int. Revue ges. Hydrobiol. 66, 553 561. Henriksen, P. 1997: Microcystins in Danish Cyanobacteria: Toxin profiles and toxin contents of Danish natural populations of Cyanobacteria as determined by HPLC. Lecture at the 1st. International congress on toxic cyanobacteria, 20-24. Aug. 1995, Ronne, Denmark, to be published in Phycologia. Hindman, S.H., Favero, M.S., Carson, L.A., Petersen, N.J., Schonberger, L.B., Solano, J.T. 1975: Pyrogenic reactions during haemodialysis caused by extramural endotoxin. Lancet 2, 732-734. Islam MS (1991). Toxigenicity and Toxin genes of Vibrio cholerae 01 Isolated from an Artificial Aquatic Environment. World Journal of Microbiology and Biotechnology 7 269-71. Islam MS, Miah MA, Hasan MK, Sack RB and Albert MJ (1994). Detection of non-culturable Vibrio cholerae 01 in a Blue-green Alga from Aquatic Environment in Bangladesh. Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene 88 298-9. Jochimsen et al. 1998: ISO 10260 1992(E): Water quality- Measurement of biochemical parameters Spectrometric determination of the chlorophyll-a concentration. Jochimsen, E.M., Carmichael, W.W., An, J., Cardo, D.M., Cookson, S.T.,holmes, C.E.M., Antunes, M. B.de C., Filho, D.A. de Melo, Lyra, T.M., Spinelli, V.T., Azevedo, S.M.F.O. and Jarvis, W.R. 1998 Liver failure and death following exposure to microcystin toxins at a dialysis center in Brazil. New Eng. J. Med. (in press).

27

Jungmann, D. 1995: What is the ecological benefit of a microcystin-producing Microcystis-population? Lecture at the 1st. International congress on toxic cyanobacteria, 20-24. Aug. 1995, Ronne, Denmark. Phycologia. Kaya, K. 1996: Toxicology of Microcystins. 175 202 in: Watanabe, M., Harada, K., Carmichael, W., Fujiki, H.: Toxic Microcystis. CRC Press, Boca Raton, New York, London, Tokyo. 262 pp. Koroleff, F. 1976: Determination of phosphorus. Verlag Chemie, 117-126. In: Grashoff, K. (ed.), Methods for Seawater Analysis.

Kotak, B., Lam, A., Prepas, E., Kenefick, S.L., Hrudey, S.E. 1995: Variability of the hepatotoxin MicrocystinLR in hypereutrophic drinking water lakes. J. Phycol. 31, 248-263. Kuiper-Goodman, T., Falconer, I., Fitzgerald, J. 1998: Human Health Aspects. In: Chorus, I. and Bartram, J. (eds): Toxic Cyanobacteria in Water: a Guide to Public Health Significance, Monitoring and Management. Published on the behalf of WHO by Spon/Champan & Hall, London, in press. Lawton, L., Edwards, C., Codd, G.A. 1994: Extraction and high-performance liquid chromatographic method for the determination of microcystins in raw and treated waters. Analyst 119, 1525-1530. Lawton, L., Harada,K.-I., Kondo, F. 1998: Laboratory analysis of cyanotoxins. In: Chorus, I. and Bartram, J. (eds): Toxic Cyanobacteria in Water: a Guide to Public Health Significance, Monitoring and Management. Published on the behalf of WHO by Spon/Champan & Hall, London, in press. Lawton, L., Marsalek, B., Padisk, J. 1998: Cyanobacterial Quantification and Identification. In: Chorus, I. and Bartram, J. (eds): Toxic Cyanobacteria in Water: a Guide to Public Health Significance, Monitoring and Management. Published on behalf of WHO by Spon/Champan & Hall, London, in press. Leeuwangh, P, Kappers, F.E., Dekker, M., Koerselmann, W. 1983: Toxicity of cyanobacteria in Dutch lakes and reservoirs. Aquatic Toxicology 4, 63-72. MacKintosh, C., Beattie, K.A., Klumpp, S., Cohen, P. & Codd, G.A. 1990: Cyanobacterial microcystin-LR is a potent and specific inhibitor of protein phosphatases 1 and 2a from goth mammals and higher plants. FEBS Letters 264, 187-192. McElhenny , T.R., Bold, H.C., Malcolm Brown, P., McGovern J.P. 1962: Algae: a cause of inhalant allergy in children. Annals of Allergy 20, 739-743. Mez, K., Hanselmann, J., Niederberger, Jl, Preisig, H.-R. 1995: Are cyanobacteria responsible for animal casualties on Swiss alpine pastures? Lecture at the 1st. International congress on toxic cyanobacteria, 20-24. Aug. 1995, Ronne, Denmark, to be published in Phycologia. Mittal, A., Agarwal, H.K.., Shivpuri, D.N. 1979: Respiratory allergy to algae: clinical aspects. Annals of Allergy 42, 253-256. Moestrup (ed) 1996; Proceedings of the 1 International Congress on Toxic Cyanobacteria, 20-24 Aug. 1995, Ronne, Denmark, Phycologia 35. Mundt, S. & Teuscher, E. 1988: Blaualgen als Quelle pharmakologisch aktiver Verbindungen. Die Pharmazie 43, 809-815. Naglitsch, F. 1988: Algen als Ursache von Reizhusten. (Algae caused irritation-cough). Zentralbl. Mikrobiol. 143, 331-334. National Rivers Authority 1990: Toxic blue-green algae. Water Quality Series No. 2, 125 pp. Nishiwaki-Matsushima, R., Ohta, T., Nishiwaki, S., Suganuma, M., Kohyama, K., Ishikawa, T., Carmichael, W. W. and Fujiki, H. 1992 Liver tumor promotion by the cyanobacterial cyclic peptide toxin microcystin LR. J. Cancer Res. Clin. Oncol., 118(6), 420-424.
st

28

Oberemm, A., Fastner, J., Steinberg, C.E.W. (1997): Effects of microcystin-LR and cyanobacterial crude extracts on embryo-larval development of zebrafish (Danio rerio). Wat.Res. 31(11), 2918-2921. Ohlani, I., Moore, R.E., Runnegar, M.T.C. 1992: Cylindrospermopsin: a potent hepatotoxin from the bluegreen alga Cylindrospermopsis raciborskii. J. Am. Chem. Soc. 114, 7942-7944. Oshima, Y., Minami, H., Takano, Y, Yasumoto, T. 1989: Ichthyotoxins in a freshwater dinoflagellate Peridinium polonicum. 375-377 in: Oksidhi, Anderson, Nemoto, (eds): Red tides: Ecology, Environmental Science, and Toxicology. Elsevier Science Publ. Co. Padisk, J. 1997: Cylindrospermopsis raciborskii (Woloszynska) Seenayya et Subba Raju, an expanding, highly adaptive blue-green algal species: worldwide distribution and review of its ecology. Archiv Hydrobiol. Padisk, J. & Adrian, R., in press: Phytoplankton. In: Tmpling, W. (ed.): Ausgewhlte Methoden der Gewsseruntersuchung. Fischer Vlg. Jena. Pilotto, L.S., Douglas, R.M., Burch, M.D., Cameron, S., Beers, M., Rouch, G.R., Robinson, P., Kirk, M., Cowie, C.T., Hardiman, S., Moore, C. and Attwell, R.G. 1997: Health effects of exposure to cyanobacteria (blue-green algae) due to recreational water-related activities. Aust. N. Zealand J. Public Health, 21, 562566. Repavich, W.M., Sonzogni, W.C., Standridge, J.H., Wedepohl, R.E., Meisner, L.F., 1990: Cyanobacteria (blue-green algae) in Wisconsin waters: acute and chronic toxicity. Wat.Res. 24, 225-231. Ressom, R. et al. 1994: Health effects of Toxic Cyanobacteria. National Health and Medical Research Council. Commonwealth of Australia, Canberra. ISBN 0 644 32908 4. Rinehart, K.L., Namikoshi, M. & Choi, B.W. 1994: Structure and biosynthesis of toxins from blue-green algae (cyanobacteria). J. Appl. Phycol. 6, 159-176. Riza, 1994: Rijksinstitutt vor Integrall zoetwaterbeheer en afvalwaterbahandeling: Cyanobacterien-de situatie in Nederland. ISBN 903 690 1138, 41 pp. Toxinen in

Roschitz, E. 1996: Sukzession und Produktion des Phytoplanktons in der Alten Donau vor und nach der Sanierung. Diplomarbeit an der Universitt Wien. Rouhiainen, L. 1997: Cloning and characterization of peptide synthetase genes from a hepatotoxic Anabaena strain. Lecture at the 1st. International congress on toxic cyanobacteria, 20-24. Aug. 1995, Ronne, Denmark. Phycologia. Schwimmer, M., Schwimmer, D. 1968: Medical aspects of phycology. In: Jackson, D.F. (ed.): Algae, Man and the Environment. Syracuse University Press, Syracuse, New York, 279-358. Sivonen, K., Jones, J. 1998: Cyanobacterial toxins. In: Chorus, I. and Bartram, J. (eds): Toxic Cyanobacteria in Water: a Guide to Public Health Significance, Monitoring and Management. Published on the behalf of WHO by Spon/Champan & Hall, London, in press. Sivonen, K., Kononen, K., Carmichael, W.W., Dahlem, A.M., Rinehard, K.L., Kiviranta, J., Niemel, S.I. 1989: Occurrence of the hepatotoxic Cyanobacterium Nodularia spumigena in the Baltic Sea and structure of the toxin. Appl. and Environm. Microbiol. 55, 1990-1995. Sivonen, K., Niemel, S.I., Niemi, R.M., Lepist, L., Luoma, T.H., Rsnen, L.A. 1990: Toxic cyanobacteria (blue-green algae) in Finnish fresh and coastal waters. Hydrobiologia 190, 267-275.

29

Tisdale, E.S. 1931: Epidemic of intestinal disorders in Charleston, W. Va., occurring simultaneously with unprecedented water supply conditions. Am. J. Public Health 21, 198-200. zitiert nach: Sykora,J.L. & G. Keleti: Cyanobacteria and endotoxins in drinking water supplies, in Carmichael, W. (ed.) 1981: The Water Environment - Algal Toxins and Health. Plenum Press, New York and London. 491 pp. Trkn Kozma, A., Gbor, M. 1988: Toxikus cianobaktriumok hazai felszini vizeinkben. Hidrologiai Kzlny 68, 49-53. Turner, P.C., Gammie, A.J., Hollinrake, K., Codd, G.A. 1990: Pneumonia associated with cyanobacteria. British Medical Journal 300, 1440-1441. Ueno, Y., Nagata, S., Tsutsumi, T., Hasegawa, A., Watanabe, M.F., Park, H.-D., Chen, G.-C., Chen, G. and Yu, S.-Z. 1996: Detection of microcystins, a blue-green algal hepatotoxin, in drinking water sampled in Haimen and Fusui, endemic areas of primary liver cancer in China, by highly sensitive immunoassay. Carcinogenesis, 17, 1317-1321. Utermhl, H. 1958: Zur Vervollkommnung der quantitativen Phytoplankton-Methodik. Verh. Internat. Verein. Limnol. 19, 800-807. WHO 1998 Guidelines for Drinking water Quality, Second Edition, Addendum to Vol 2, Health Criteria and other supporting information. WHO, Geneva,Switzerland. Yoo, S; Carmichael, W.; Hoehn, R.; Hrudey, S. 1995: Cyanobacterial (blue-green Algal) Toxins: A Resource Guide. AWWA Research Foundation, ISBN 0-89867-824-2,229 pp. Yu, S.-Z. 1995: Primary prevention of hepatocellular carcinoma. J. Gastroenterol. Hepatol. 10, 674-682.

30