UT3 (U.D.

12 LIBRO)
CITOGENÉTICA
HUMANA Y
ANÁLISIS
CROMOSÓMICO
La citogenética es el campo de la genética que
comprende el estudio de la estructura, función y
comportamiento de los cromosomas. Incluye
análisis de bandeado G en cromosomas, otras
técnicas de bandeado citogenético, y también la
citogenética molecular de hibridación por
fluorescencia in situ (FISH) e hibridación por
genómica comparativa (CGH).
 CONTENIDOS
- CONCEPTO DE CARIOTIPO
- TÉCNICAS DE OBTENCIÓN DE EXTENSIONES
CROMOSÓMICAS
- ANÁLISIS CROMOSÓMICO
- NOMENCLATURA CITOGENÉTICA Y FÓRMULA
CROMOSÓMICA
- DIAGNÓSTICO PRENATAL
- CITOGENÉTICA Y CÁNCER
 INTRODUCCIÓN
CARIOTIPO: Conjunto de cromosomas de una especie, un
individuo o una célula ordenados de acuerdo a su tamaño y
morfología.

-Para poder ver los cromosomas deben ser visibles al microscopio

óptico (CROMOSOMAS METAFÁSICOS)
-Para obtener los cromosomas metafásicos, hay que:
- Realizar un cultivo celular.
- Preparar las extensiones de cromosomas.
- Realizar las técnicas de tinción y bandeo.
TIPOS DE CARIOTIPOS QUE SE PUEDEN
OBTENER

CARIOTIPO DE ESPECIE: Patrón para comparar por si existen

mutaciones y anomalías.
CARIOTIPO CONSTITUCIONAL: Conjunto de cromosomas
característicos de un individuo.
CARIOTIPO DE CÉLULA: Cromosomas que contiene una célula, que
puede diferir del cariotipo del individuo, ejemplo células tumorales.
INDICACIONES PARA REALIZAR UN CARIOTIPO
(ampliación documento 12.1)

1) Periodo Prenatal:
- Edad mayor de 35 años.
- Ansiedad materna.
- Triple screening alterado.
- Oligoamnios-polihidramnios.
- Retraso de crecimiento intrauterino (CIR)
- Arteria umbilical única.
- Sospecha ecográfica de cromosomopatía
- Antecedentes de cromosomopatía balanceada
en un progenitor
2) Periodo neonatal:
- Malformaciones mayores aisladas.
- Presencia de 3 o más defectos congénitos
menores.
- Recién nacido con rasgos dismórficos.
- Recién nacido con genitales ambiguos.
- Parto con producto muerto de causa inexpli-
cable.
- Muerte neonatal de causa inexplicada.
3) Periodo de lactancia:
- Niños con dificultades para el aprendizaje.
- Niños con rasgos dismórficos.
- Niños con retraso psicomotor.
4) Periodos Preescolar-Escolar:
- Trastornos del crecimiento. - Retraso psicomotor.
- Rasgos dismórficos.
5) Periodo de adolescencia:
- Ginecomastia.
- Falta de desarrollo puberal.
- Amenorrea primaria o secundaria - Retraso mental.
-Rasgos dismórficos.
6) Periodo del adulto:
- Padres de niños con anomalías cromosómicas estructurales.
- Abortos de repetición.
- Infertilidad inexplicable.
- Diagnostico prenatal (liquido amniótico y
biopsia de corion).
- Rasgos dismórficos.
7) En todas las edades:
- Procesos malignos (cariotipo constitucional y tumoral).
- Control de transplantes de medula ósea.
CARIOTIPO ESTANDAR
DE SANGRE PERIFÉRICA
CARIOTIPO ESTÁNDAR DE
SANGRE PERIFÉRICA

El cariotipo constitucional estándar de un individuo

se obtiene a partir de una muestra de sangre
periférica.

Se desarrolla en cuatro fases:

•Cultivo de linfocitos
•Obtención de extensiones cromosómicas en
metafase.
•Tinción de cromosomas con técnicas de bandeo.
•Análisis de los cromosomas teñidos.
 Cultivo de linfocitos
• Se utilizan los siguientes componentes:
o MUESTRA: Sangre periférica
anticoagulada con heparina. (Nunca con
edta)
o Medio de cultivo: Los más utilizados son
RPMI 1640, DMEM Y Ham F10;
suplementados con suero bovino fetal (10-
20%), L-glutamina y antibióticos. penicilina y estreptomicina
o Frasco Roux o tubo para cultivo.
Esta técnica es para sangre
periférica.
La muestra debe ser 5ml de
sangre venosa recogida en tubo
con anticoagulantes de
heparina de litio.
Se coge la capa de leucocitos.
 PROCEDIMIENTO DE
CULTIVO:
• 1.- SIEMBRA: medio de cultivo en proporción 1/5-
1/10
• 2.- ADICCIÓN DE FITOHEMAGLUTININA: para
desdiferenciar a los linfocitos T hacia linfoblastos.
Linfocitos inmaduros
• 3.- INCUBACIÓN: 37ºC a 5% de CO2 durante 72h,
inclinados 45º. En gradilla inclinada
• 4.- DETENCIÓN DE LA MITOSIS EN METAFASE: aprox 2
horas antes finalizar el cultivo añadir colchicina
para detener la las mitosis en metafase.

LINFOBLASTOS
 OBTENCIÓN DE EXTENSIONES
DE METAFASES:
• 1.- SACRIFICIO DEL CULTIVO: Trasvasar el contenido del
frasco de cultivo a un tubo falcon cónico, centrifugar y
eliminar el sobrenadante dejando 0,5 mL para
resuspender. Cloruro Potasico
• 2.- CHOQUE HIPOTÓNICO E INCUBACIÓN: CLK 0,075M, 5-20
minutos a 37ºC. Las células se cargan de agua y se
hinchan. Los cromosomas se reparten por todo el volumen
de la célula.
• 3.- FIJACIÓN Y LAVADO: con fijador de carnoy (2-3
lavados).
• 4.- OBTENCIÓN DE EXTENSIONES POR GOTEO: resuspender
las células en el fijador de carnoy. Cargar suspensión
celular en una pipeta pasteur y dejar caer 1-2 gotas sobre
un porta, rompiéndose la célula y dispersándose los
cromosomas sobre el porta. Secar y teñir.
 Tinción y bandeo
cromosómico
• TINCIÓN CONVENCIONAL: Se realiza por inmersión
de los portas en una solución de giemsa al 3% en
tampón fosfato a pH 6,7 durante 3-4 min y
posteriormente se lavan con agua.
• Los cromosomas se tiñen uniformemente,
permitiendo ver la cantidad de metafases antes de
proceder a las técnicas de bandeo.
 Bandeo G
• Se deben utilizar preparaciones envejecidas, sin
restos de fijador y sin humedad residual. Para ello se
mantienen las preparaciones:

o Estufa a 60-65ºC durante 1-2 días

o Estufa a 37ºC durante 3-4 días
o Temperatura ambiente 7-10 días.

Los procedimientos de tinción varían mucho entre los

distintos laboratorios de citogenética en cuanto a
concentración de reactivos, tiempos y temperaturas de
incubación. Aunque todos poseen un patrón común en los
procedimientos
 Bandeo G
• Digestión con tripsina
o Se realiza por inmersión de las preparaciones en una solución con
tripsina.
o El tiempo de inmersión dependerá de la concentración de la enzima, la
temperatura de incubación y el grado de envejecimiento de la muestra.
o Esta finaliza mediante lavados con solución salina o PBS.

• Tinción con Giemsa, se realiza por inmersión en una

solución tamponada.

• Lavado con agua y secado para su observación

microscopica.
EJEMPLO TÉCNICA DE BANDEO G

Procedimiento:

1. Sumergir las preparaciones envejecidas en una solución de tripsina al 0.1 %

en PBS durante 5-10 segundos.
2. Lavar dos veces en PBS
3. Sumergir las preparaciones en una solución de giemsa al 3% en tampón
fosfato a pH 6,7 durante 5 min.
4. Lavar con agua y dejar secar.

Reactivo PBS Tampón fosfato pH 6,7

NaCl 10 g KCl 0,25 g Solución A Solución B

NaHPO4 1,44 g KH2PO4 0,25 g NaHPO4 946 mg KH2PO4 907 mg
Agua destilada: csp 1000 ml csp 100 ml csp 100 ml

Solución de trabajo: 43 ml A +57 ml

B
 Tratamiento con tripsina + Giemsa
Bandas G: Regiones ricas en AT (bandas oscuras)
(Seabright, 1971)
 ANALISIS
CROMOSÓMICO
 Análisis cromosómico
• Nos permite obtener el cariotipo,
pudiéndose detectar las posibles
alteraciones cromosómicas tanto numéricas
como estructurales.

• La metodología que se sigue es:

o Recuento y análisis cromosómico de metafases completas
o Ordenamiento y emparejamiento
RECUENTO Y ANÁLISIS CROMOSÓMICO DE METAFASES

COMPLETAS

• Para realizar un cariotipo se analizan un mínimo de 20 metafases

completas.

• Estas metafases se observan y se cuentan los cromosomas y al

menos cinco de ellas las de mejor calidad se fotografían.

• Las metafases fotografiadas se someten a un análisis completo,

comparando cada cromosoma con su homólogo banda a banda
para detectar cualquier cambio en su estructura.

• En los casos de organismos que presentan dos o mas poblaciones

celulares con diferente cariotipo (mosaicismo), se analizan como
mínimo 30 metafases.
 Ordenamiento y
emparejamiento
• Los cromosomas de una de las metafases
fotografiadas se ordenan por parejas de homólogos
formando un cariotipo.
• Este ordenamiento y emparejamiento de los
cromosomas se realiza según las carácterísticas
morfológicas y el patrón de bandas G de los
cromosomas metafásicos.
Cariotipo: conjunto de cromosomas que caracteriza a una especie.

Cariotipo humano
46 cromosomas
23 pares de homólogos

22 pares de autosomas
1 par de gonosomas
24 tipos cromosómicos
Idiograma con bandas G

Fórmula cromosómica: 46, XY

Carácterísticas morfológicas de los
cromosomas humanos

Los cromosomas se ordenan siguiendo tres criterios:

•TAMAÑO
•POSICIÓN DEL CENTRÓMERO
•PRESENCIA DE CONSTRICCIONES SECUNDARIAS
 TAMAÑO

-Característico de cada especie.

-Se ordenan de mayor a menor.
POSICIÓN DEL CENTRÓMERO

Cuando hay varios cromosomas de tamaño similar, se colocan

primero los metacéntricos, después los submetacéntricos y por
último los acrocéntricos

CONSTRICCIONES SECUNDARIAS

El cariotipo humano se ordena en ocho grupos de cromosomas,

siete grupos de autosomas denominados con las siete primeras
letras del abecedario en mayúsculas (A-G) y un grupo de
cromosomas sexuales que se situan al final del cariotipo.
 BRAZO CORTO METACENTRICO
CENTROMERO CENTROMERO
CENTRAL
BRAZO LARGO

SUBMETACENTRICO
BRAZOS DESIGUALES
CENTROMERO

ACROCENTRICO
CENTROMERO EN
CENTROMERO POSICION SUBTERMINAL
(UN BRAZO MUY CORTO)
sub
PATRON DE BANDAS G
Es el bandeo más usado en citogenética. Permite la identificación
inequívoca de todos los cromosomas, lo cuál es especialmente
importante en el grupo C, por la gran similitud morfológica de
varios cromosomas. Además facilita la detección y el análisis de
las alteraciones estructurales de los cromosomas.

El patrón estandar es de 350-400 bandas, correspondientes a

cromosomas metafásicos, totalmente condensados.
 Cariotipo quimérico: se compara el ideograma de cada
cromosoma con la imagen de un cromosoma real bandeado.
 Automatización del
análisis cromosómico
• Actualmente el análisis cromosómico se realiza de
forma automatizada mediante CARIOTIPADORES.
Estas plataformas están dotadas de microscopios
motorizados, cámaras digitales y programas
informáticos que automatizan el procedimiento de
análisis cromosómico:
o Capturan y analizan imágenes en metafases
o Clasifican automaticamente los cromosomas según su morfología y
patrón de bandas.
o Realizan el cariotipo.
o Generan un informe con los cromosomas ordenados y las alteraciones
detectadas.
 NOMENCLATURA
CITOGENÉTICA Y FÓRMULA
CROMOSÓMICA
FÓRMULA CROMOSÓMICA
 FORMULA CROMOSÓMICA
La fórmula cromosómica proporciona la
descripción detallada del cariotipo de un
individuo.

Las abreviaturas, símbolos y pautas para

redactarla, se rigen por el consenso internacional
del ISCN.

Se distinguen las siguientes pautas a seguir:

- Sin anomalías
- Anomalías numéricas
- Anomalías estructurales
- Mosaicismos
Fórmula cromosómica sin
anomalías
• La fórmula se inicia con el número total de
cromosomas que posee el individuo seguido de
una coma.
• A continuación se especifican los cromosomas
sexuales sin anomalías estructurales. Así obtenemos:

o 46,XX
o 46,XY
 Fórmula cromosómica
con anomalías numéricas
• Se refleja directamente en la fórmula, algunos
ejemplos:
o 45,X MONOSOMÍA DEL CROMOSOMA X
o 47,XYY ES UNA DISOMÍA DEL CROMOSOMA Y

• Si la anomalía numérica afecta a los autosomas, se

informa a continuación de los cromosomas
sexuales, separada de ellos por una coma:
o Las monosomías se señalan con signo (-) seguido del número de
cromosoma que falta.
• 45,XX,-21 MUJER CON MONOSOMÍA DEL CROMOSOMA 21
o Las trisomías se señalan con el signo (+) seguido del número de
cromosomas extras.
• 47,XY,+21 VARÓN CON TRISOMÍA DEL CROMOSOMA 21
 Fórmula cromosómica
anomalías estructurales
• Se informan a continuación de las numéricas, si existen, o a
continuación de los cromosomas sexuales, separados por una
coma.
• Las anomalías estructurales que afectan a un único
cromosoma ( deleción, duplicación, inversión, cromosoma en
anillo)se informa con la abreviatura de la alteración seguida
del número del cromosoma afectado entre paréntesis y de la
banda o bandas afectadas por la mutación ( puntos de
rotura y reunión) también entre paréntesis.

o 46,XX,DEL(9)(q22) mujer con delección terminal del brazo largo

del cromosoma 9 con punto de rotura en la banda q22.
o 46,XY,del(2)(q21q32) varón con delección intersticial del brazo
largo del cromosoma 2 con puntos de rotura y unión en q21 y
q32.
• Las anomalías estructurales que afectan a dos
cromosomas (translocaciones) se informan con la
abreviatura de las alteraciones, seguida de los
números de los cromosomas afectados entre
parentesis y separados por un punto y coma,
seguido de los puntos de rotura y reunión en cada
cromosoma, también entre paréntesis y separadas
por punto y coma los de cada cromosoma.

• Las traslocaciones no recíprocas, para la fórmula,

se consideran como inserciones entre cromosomas
no homólogos. La abreviatura utilizada es (ins) y de
los dos cromosomas implicados se coloca primero
el aceptor y después el donante( separados por
punto y coma).
o 46,XY,ins(10; 3)(q22;p13p23); varón con inserción en el
cromosoma 10 a nivel de la banda q22 del segmento
comprendido entre p13 y p23 del cromosoma 3.
• En las traslocaciones recíprocas, el orden de los
cromosomas es primero los sexuales si están
afectados y los autosomas de menor a mayor.

o 46,Y,t(X;17)(q23;q21); varón con una translocación recíproca entre los

cromosomas X y 17 con puntos de intercambio en Xq23 y 17q21. En este
caso, detrás del 46 solo se pone el cromosoma Y, porque el X tiene
anomalías estructurales.
 Fórmula cromosómica
Mosaicismos
• La fórmula se inicia con la abreviatura (mos) y a
continuación se escriben todas las líneas celulares,
empezando por las anormales y terminando por la
normal. Las líneas celulares se separan entre sí por
el signo /. Para conocer la proporción en la que se
encuentra cada línea celular, después de su
descripción se pone entre corchetes el número de
metafases analizadas que presentan ese cariotipo.
• Cuando hay varias líneas celulares anormales, se
ordenan de mayor a menor según el número de
metafases en las que se ha detectado.
o Mos47,XYY[15]/46XY[30]; Individuo con mosaicismo en el que se han
analizado 45 metafases, en 15 se ha detectado una disomía del
cromosoma Y, mientras las 30 restantes son normales.
 FÓRMULAS CROMOSÓMICAS DE ALTERACIONES

CROMOSÓMICAS HUMANAS
• Anomalías estructurales:
o Delecciones:
• Síndrome del maullido de gato: 46,XX,del(5)(p14)
o Translocaciones
• Leucemía mieloide crónica( cromosoma Philadelfia):
46,XX,t(9;22)(q34;q11.2)
o Duplicaciones
• Enfermedad de Charcot-Marie-Tooth: 46,XX,dup(17)(p12)
• Anomalías numéricas:
o Autosomas
• Síndrome de Down: Trisomía 21; 47,XX,+21
• Síndrome de Edward: Trisomía 18; 47,XX,+18
• Síndrome de Patau: Trisomía 13; 47, XX,+13
o Cromosomas sexuales
• Síndrome de Turner: 45,X
• Sídrome del duplo Y: 47,XYY
• Síndrome de Klinefelter: 47,XXY
 CARIOTIPO DE ALTA
RESOLUCIÓN
• Es aquel que se obtiene a partir de cromosomas en
profase tardía o prometafase.
• Los cromosomas presentan menor grado de
condensación, por lo que al aplicarles una técnica
de bandeo G se obtiene un mayor número de
bandas (550-850 dependiendo del grado de
condensación)
• Permite detectar alteraciones cromosómicas
estructurales de menor tamaño respecto del
cariotipo convencional
• Para ello hay que sincronizar el cultivo de linfocitos.
• Se realiza añadiendo metotrexato, inhibidor de una
enzima necesaria para la síntesis de timidina. Las células
no replican el ADN y se bloquean en la fase S.
• Después de un tiempo, se añade al cultivo timidina o
algún análogo sintético, reiniciandose la síntesis de ADN,
reiniciandose la mitosis de manera sincronizada.
• Después se añade colcemid, para evitar la formación
del huso acromático, se incuba pero durante un corto
periodo de tiempo garantizandose la presencia de
cromosomas en profase o prometafase.
Limitaciones de la Citogenética Convencional :

• Requiere metafases
• No siempre la calidad de las metafases es optima
• Resolución limitada (en el mejor de los casos 2-5 Mb )

Alternativa : Citogenética Molecular

1. FISH (Hibridación in situ con fluorescencia)

• Requiere saber lo que se busca
• Tener la sonda adecuada
2. Otras técnicas:
• Requieren equipos muy sofisticados y apoyo
informático
SKY (Cariotipo espectral multicolor, multifish)
CGH (Hibridación Genómica Comparada)
CITOGENÉTICA Y
DIAGNÓSTICO
PRENATAL
• La obtención del cariotipo fetal es una técnica
incluida en el diagnóstico prenatal. Se realiza en las
siguientes situaciones:
o Resultado alterado del triple cribado o screening
(bioquímico y ecográfico) en el primer trimestre de
gestación.
o Retraso en el crecimiento intrauterino
o Observaciones de anomalías ecográficas en el feto
o Antecedentes de cromosomopatía balanceada en un
progenitor.
Dependiendo de las semanas de
gestación el cariotipo fetal se
puede realizar:

-CARIOTIPO DE VELLOSIDAD
CORIONICA
- CARIOTIPO DE LÍQUIDO
AMNIOTICO
 CARIOTIPO DE VELLOSIDAD
CORIONICA
• Es una envoltura del embrión humano implicada en
la formación de la placenta y cuyas células tienen
la misma carga genética que el embrión.
• Los pasos que se realizan son:

o Toma de biopsia
o Lavado y selección de la muestra
o Cultivo y obtención de metafases
 Toma de biopsia
• Se realiza entre las 10-14 semanas de gestación.
• La muestra se obtiene pasando una aguja o una
delgada pinza hacia la placenta a través del cuello
uterino o a través del abdomen materno. Se toma un
pequeño fragmento de la placenta que tiene la misma
composición genética que el feto para el estudio
cromosómico o para estudio del DNA o para cultivo
celular para otro tipo de estudios. La toma de la
muestra se realiza siempre viendo a través del
ultrasonido, dónde se encuentra la pinza y dónde se
localiza la placenta.
• Inconveniente: obtención de mosaicismo por
contaminación materna.
• Escasa obtención de metafases
- [Link]
Fu1fr2alIN8
[Link]
LgjOqEZgpk
 Lavado y selección de la
muestra
• Las biopsias se recogen en tubos con RPMI 1640
con antibióticos y heparina.
• Un primer paso es el lavado de la muestra en placa
de Petri con solución salina estéril o medio de
cultivo, eliminando cualquier resto de coágulos o
grumos densos ( origen materno)
• Este proceso debe hacerse en condiciones de
esterilidad
 Cultivo y obtención de
metafases
• CULTIVO CORTO
o Se basa en que en el tejido corial hay células que entran en
mitosis espontaneamente. Para mejorar la calidad y cantidad de
estas divisiones se cultiva la biopsia durante 24-48 h. Primero se
realiza el cultivo y después se disgrega. Pasos:
• Cultivo en placa de Petri 24-48h/37ºC/5% CO2
• Adicción Colcemid (detener metafase)
• Trasvase a tubo cónico, eliminación del medio de cultivo y
choque hipotónico.
• Fijación: lavado con ac. Acético y alcohol
• Disgregación del tejido
• Goteo de la suspensión celular sobre portaobjetos.
• Estas preparaciones se pueden teñir con bandeo G
por métodos convencionales y realizar el análisis
cromosómico.
• CULTIVO LARGO
o Se trata de realizar un cultivo primario de fibroblastos presentes
en la vellosidad coriónica, por lo que en este caso se disgrega
primero y se cultiva después.
o Los pasos genéricos a seguir son:
• Disgregación enzimática de la vellosidad, pronasa +
colagenasa.
• Siembra de la suspensión celular en placas de Petri o Roux
con medio de cultivo completo.
• Incubación 4-5 dias/37ºC/5% CO2
• Control del crecimiento y control de mitosis, si es necesario
cambiar el medio de cultivo.(microscopio invertido)
• Añadir Colcemid (detener en metafase)
• Tripsinización para despegar las células y trasvasar a un tubo
falcon cónico
• Choque hipotónico
• Fijación y lavado
• Goteo sobre portaobjetos

Las preparaciones obtenidas se pueden teñir con bandeo G y

se dejan listas para análisis cromosómicos.
 Cariotipo de líquido
amniótico
• Se basa en la presencia de células de
descamación de las membranas que rodean al
feto y del propio feto (amniocitos y fibroblastos)
• Para su análisis citogenético se procede de
manera análoga a la descrita en las vellosidades
coriónicas:
o Se realiza entre las semanas 16-18 de gestación
o La obtención del líquido amniotico se realiza por punción transabdominal
bajo control ecográfico.
o El líquido amniótico es una suspensión celular, para iniciar el cultivo:
• Se centrifuga la muestra
• Se elimina el sobrenadante
• Se resuspende el botón celular con medio de cultivo completo
• Se realiza la siembra en placas de Petri o frascos Roux.
• Se continúa como en el procedimiento anterior
 CITOGENÉTICA Y
CÁNCER
• Son dos conceptos intimamente ligados, ya que
muchas neoplasias tienen su origen en alteraciones
cromosómicas, tanto numéricas como
estructurales.
• Estas anomalías constituyen en muchos casos
biomarcadores, aportando información sobre el
diagnóstico, pronostico, evolución y tratamiento de
enfermedades tumorales.
• Las alteraciones se detectan exclusivamente en las
células tumorales (mosaicismo).
• Las alteraciones desencadenantes son muy
variadas:
o Estructurales: translocaciones e inversiones pueden producir
reordenamiento de genes que determinen activación o sobreexpresión
de oncogenes.
o Producción de proteínas quiméricas que inciden en el funcionamiento de
genes implicados en el crecimiento y diferenciación celular.
o Producción de genes de fusión, que producen expresiones aberrantes de
un gen. Ej: Cromosoma Philadelphia que origina un gen fusión, que
produce una sobreexpresión del oncogen ABL bajo el control del gen
BCR.
o Las delecciones y aneuploidias pueden originar por perdida de
cromosomas, perdida de genes supresores de tumores.
o La ganancia de material genético pueden producir una sobreexposición
de oncogenes.

Es frecuente cuando se realiza un cariotipo

tumoral encontrarse un cariotipo compuesto, es
decir, multiples cariotipo diferentes. Esto es así
porque durante la evolución del tumor
aparecen subclones celulares que van
acumulando alteraciones genéticas.