UNIVERSIDAD DE CORDOBA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGIA

ASIGNATURA: BACTERIOLOGIA I DOCENTE: NUBIS MENCO MORALES PRACTICA # 2 ANTIBIOGRAMA INTRODUCCION El antibiograma es el mtodo usual para determinar la sensibilidad in vitro de un microorganismo frente a los antimicrobianos. El estudio de la sensibilidad antimicrobiana de las bacterias es necesario porque el espectro de actividad de los antimicrobianos es limitado y las bacterias tienen capacidad para desarrollar resistencia. Para ello es necesario conocer los conceptos concentracin mnima inhibitoria (CMI), que es la menor concentracin de antimicrobiano capaz de impedir el crecimiento de un microorganismo en unas condiciones normalizadas, y concentracin mnima bactericida (CMB) que es la menor concentracin de antimicrobiano capaz de destruir el 99,9% de una muestra inoculada en unas condiciones normalizadas. El estudio de la CMI es el que se realiza de forma habitual en los laboratorios de microbiologa. Para llevarlo a cabo se utilizan procedimientos de referencia y cepas control que proporcionan a estos mtodos unos resultados reproducibles, comparables y que permiten clasificar los microorganismos en diferentes categoras: a) sensible: Cuando la CMI de un antibitico para una bacteria se puede conseguir in vivo con dosis teraputicas y la experiencia ha demostrado su eficacia b) resistente: Cuando el microorganismo no es inhibido por las concentraciones que normalmente se pueden obtener. c) intermedio: Cuando las bacterias se inhiben a concentraciones que no se alcanzan con dosis teraputicas, pero que pueden alcanzarse con dosis ms altas sin que sean txicas cuando el antibitico se encuentra a altas concentraciones en el lugar de la infeccin, generalmente en las vas de eliminacin. El medio de cultivo en el que se realizan la mayora de los antibiogramas (excepto para bacterias exigentes) es el medio Muller-Hinton (extracto de carne, aminocidos y almidn . Este medio se puede usar en estado lquido o slido.

OBJETIVO El objetivo de esta prctica es estudiar qu son los antibiticos y cmo se realiza la valoracin de la actividad antimicrobiana de un compuesto qumico (antibitico) Mediante la tcnica de Kirby-Bauer. MATERIALES Y REACTIVOS Agar Mueller Hinton. Hisopos estriles. Agua estril. Asas redondas Coloracin de Gram Microscopio Mechero Laminas Sensidiscos Cepa de bacterias Gram negativas Cepa de bacterias Gram positivas Pinzas

PROCEDIMIENTO 1. Organizar el rea de trabajo, trabajar sobre papel Kraft para no contaminar la superficie del mesn. 2. Tomar una colonia con un escobilln estril u diluirlo en agua destilada hasta obtener el grado de turbidez de 1 Mac Farland. 3. Sembrar el microorganismo a estudiar esparcindolo por toda la caja de Petri. 4. Se toman las pinzas de diseccin se pasan por la llama del mechero y se toma un disco de papel filtro estril y 5. sobre la superficie del medio se coloca el disco (observar figura) 6. Se repite el paso 4 por cada disco 7. Incubar a 37C por 24 hrs. 8. Medir los halos de susceptibilidad y elaborar un informe escrito con los resultados.

Nota: Lectura e interpretacin del antibiograma: Con una regla milimetrada se miden los dimetros de los halos de inhibicin que aparezcan alrededor de los discos de antimicrobianos.

C C l R f

S t T E

Paso 4. Se muestra la forma como se colocan los discos en la superficie del medio de cultivo. Por ejemplo. Cl, cloranfenicol; P, penicilina; T, tetraciclina; E, eritromicina; St, estreptomicina; Rf, rifampicina; C, control.

PRELABORATORIO 1. Que otras tcnicas se emplean para evaluar la susceptibilidad antimicrobiana y en qu consisten? 2. Cules son las bases para la utilizacin clnica de los antibiticos. 3. Cuales son las estrategias para disminuir la aparicin de las resistencias a los antibiticos?