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CICLO DE KREBS UBICACIN DE LA VA. En clulas eucariotas, se realiza en la mitocondria.

En las procariotas, el ciclo de Krebs se realiza en el citoplasma, especficamente en el citosol.

Las enzimas del ciclo de Krebs estn localizadas dentro de las mitocondrias, en la matriz mitocondrial.

REGULACIN DEL CICLO DE KREBS La velocidad del ciclo de Krebs viene continuamente modulada para cumplir con las necesidades energticas exactas de la clula. Los sitios primarios de control son las enzimas alostricas: la isocitrato deshidrogenasa y la -cetoglutarato deshidrogenasa. La isocitrato deshidrogenasa es estimulada alostricamente por la presencia de ADP, que aumenta la afinidad de la enzima por el sustrato. Las uniones de isocitrato, de NAD+, de Mg2+, y de ADP, a la enzima son mutuamente cooperativas en sentido activador. Por contra, el NADH inhibe la enzima por el desplazamiento directo de NAD+. El mismo ATP tiene efecto inhibitorio. El segundo sitio del control del ciclo de Krebs est cerca de la -cetoglutarato deshidrogenasa. Algunos aspectos del control de esta enzima son parecidos a los del complejo enzimtico de la piruvato deshidrogenasa, como puede esperarse dada la extrema homologa entre las dos enzimas. La -cetoglutarato deshidrogenasa es inhibida por el succinil-CoA y el NADH, es decir, los productos de la reaccin que cataliza. La -cetoglutarato deshidrogenasa puede ser tambin inhibida genricamente por un alto nivel energtico presente en la clula. Esto significa que, en presencia de altos niveles de ATP, la clula es capaz de reducir la eficiencia del proceso de produccin de energa. En muchas bacterias, tambin se controla la entrada en el ciclo de las molculas con dos tomos de carbono. En ellos, la sntesis de citrato, oxalacetato y acetil-CoA es la sede de una importante regulacin. EL ATP, en efecto, es un inhibidor alostrico de la citrato sintasa. El efecto concreto del ATP es aumentar la KM de la enzima por el acetil CoA. De este modo, cuanto ms ATP est presente en la clula menos Acetil-CoA se introduce en el ciclo.

REGULACIN DEL CICLO DEL CIDO CTRICO Reaccin sumaria del ciclo: Acetyl-CoA + 3 NAD+ + FAD + GDP + Pi --> 3 NADH + FADH2 + CoA-SH + GTP + 3 CO2 La oxidacin de un acetilo (2CO2) por cada vuelta del ciclo, genera: 3 NADH, 1 FADH2, 1 GTP (o ATP) Si todos esos nucletidos de re oxidan totalmente en la cadena de transportadores mitocondrial, por cada vuelta del ciclo se originarn en total: 12 ATPs Si partimos de glucosa, el RENDIMIENTO MXIMO de su degradacin aerobia ser Gluclisis: 2ATP + 2NADH = 8 ATP Descarboxilacin oxidativa del piruvato: 2 NADH = 6 ATP Ciclo de Krebs: 2ATP + 6NADH + 2FADH2 . = 24 ATP Total: 8 + 6 + 24 = 38 ATP.

La elevada produccin de ATP que tiene el ciclo del cido ctrico hace que deba ser finamente regulado, segn las necesidades energticas de la clula.

1.- REGULACIN DEL COMPLEJO PIRUVATO DESHIDROGENASA. Esta es una reaccin crucial en el metabolismo energtico puesto que es esencialmente irreversible y supone la nica entrada al metabolismo aerobio. La regulacin se lleva a cabo de dos formas diferentes: 1.- Mediante inhibicin por producto (NADH y Acetil-CoA). 2.- Mediante modificacin covalente de la piruvato deshidrogenasa (E1).

a.- INHIBICIN POR PRODUCTO - NADH compite por en centro activo de la enzima E3 (DHLDH) y acetil-CoA compite por el cetro activo de E1 (PDH). - El efecto que eso produce es: a) un descencenso en las respectivas actividades enzimticas. b) que las reacciones de las enzimas (E2) y (E3) transcurran en sentido inverso. c) que la enzima E1 mantenga su PP en su forma acetilada (inactiva). Mecanismo del complejo Piruvato deshidrogenasa b.- MODIFICACIN COVALENTE Ciclo de interconversin: Piruvato deshidrogenasa fosforilada: INACTIVA. Piruvato deshidrogenasa NO fosforilada: ACTIVA. ACTIVADORES Ca
2+

ACTIVADORES ATP, NADH, Ac-CoA INHIBIDORES Piruvato, ADP, Ca2+

Insulina

El AMP no afecta para nada a ninguna de las tres enzimas.

2.- REGULACIN DE LAS ENZIMAS DEL CICLO Examinemos la energtica de las ocho reaciones del ciclo, aunque en este caso es muy difcil el clculo de la DG pues los metabolitos se distribuyen entre el citosol y la mitocondria y no se conoce cunto hay en cada compartimento. DG0' DG (kcal/mol) (kcal/mol) - 7.7 + 1.5 - 5.0 - 7.9 - 0.7 + 1.4 + 0.8 + 7.1 Negativo ~0 Negativo Negativo ~0 ~0 ~0 ~0

Reaccin Enzima 1 2 3 4 5 6 7 8 Citrato sintasa Aconitasa Isocitrato deshidrogenasa Complejo a-cetoglutarato deshidrogenasa Succinil-CoA sintetasa Succinato deshidrogenasa Fumarasa Malato deshidrogenasa

Tres son las enzimas que trabajan fuera del equilibrio: citrato sintasa, isocitrato DH y a-cetoglutarato deshidrogenasa. Son pues las etapas limitantes de la velocidad del ciclo. En el ciclo del cido ctrico la regulacin de las etapas limitantes NO tiene lugar mediante elaborados procesos alostricos sino por tres sistemas mucho ms simples: 1.- Disponibilidad de los sustratos. 2.- Inhibicin por producto de la reaccin. 3.- Inhibicin competitiva por ciertos intermediarios del ciclo. El flujo metablico del ciclo del cido ctrico es proporcional al consumo de oxgeno. Puesto que el consumo de oxgeno, la reoxidacin del NADH y la sntesis de ATP estn absolutamente relacionadas, la regulacin del ciclo depender de los mecanismos que controlen la produccin de NADH. Los reguladores ms importantes son Acetil-CoA, oxalacetato y NADH. Acetil-CoA y oxalacetato estn a concentraciones no saturantes de la citrato sintasa, por lo que la entrada del acetato en el ciclo depender de la disponibilidad de sus sustratos.

La [oxalacetato] flucta con la relacin [NADH]/[NAD+], de acuerdo con la ecuacin:

1) Regulacin de la citrato sintasa Si se precisa una mayor produccin de energa, se incrementa el consumo de O2 y la [NADH] mitocondrial descender y se incrementar la [oxalacetato], la cual estimular la reacin catalizada por la citrato sintasa. Altas [citrato] y [NADH] inhiben esta enzima. Succinil-CoA compite por al enzima y la inhibe. 2) Regulacin de la isocitrato deshidrogenasa El uso del citrato se controla por la isocitrato deshidrogenasa, que es inhibida por NADH, ya que la aconitasa opera en el equilibrio. ATP y NADH son inhibidores de la enzima. El Ca2+ es un lgico activador. Estudios in vitro han encontrado dos efectores alostricos de esta enzima: ADP como activador y ATP como inhibidor. 3) Regulacin de la a-cetoglutarato deshidrogenasa Es inhibida por NADH, ATP y sucinil-CoA. Tambin en este caso Ca2+ es un activador. REGULACIN CONCERTADA DEL METABOLISMO OXIDATIVO AEROBIO La sntesis de ATP depende, principalmente, del nmero de molculas de nucletidos reducidos que sean reoxidados en la cadena de transportadores mitocondrial. Las fuentes ms importantes de esos electrones son la gluclisis, el cclo del cido ctrico y la oxidacin de cidos grasos. El control de la gluclisis y del ciclo del cido ctrico se encuentra pues coordinado con la demanda de fosforilacin oxidativa. Es lgico pues que el control de la gluclisis y el ciclo del cido ctrico sea dependiente de la carga de adenilato, del NADH o de ambos.

Esta coordinacin puede verse en el efecto del citrato sobre la PFK: cuando baja la demanda energtica, [ATP] se incrementa y [ADP] desciende. Como la isocitrato deshidrogenasa es activada por ADP y la a-cetoglutarato deshidrogenasa es inhibida por ATP, el flujo a travs del ciclo se reduce. El citrato de sobra ser transportado hacia el citosol, en donde inhibir la PFK.

Procesos Catablicos, Anablicos y Carcter Anfiblico. Normalmente uno piensa de una ruta metablica que o bien es anablica o catablica. El ciclo de los cidos tricarboxlicos es una ruta catablica, pero sin embargo, varios de sus intermediarios son molculas iniciales de una serie de rutas biosintticas (anablicas). Estas rutas precisan de energa y por lo tanto el ciclo de los cidos tricarboxlicos debe de funcionar para proporcionar esa energa. Las diferentes rutas que utilizan intermediarios del ciclo de los cidos tricarboxlicos son: 1. La biosntesis de la glucosa o gluconeognesis. Tiene lugar en el citosol y precisa de OAA. Este pasa la membrana en forma de malato (el OAA no pasa la membrana, necesita una interconversin). 2. La biosntesis de lpidos, incluyendo la sntesis de cidos grasos y la sntesis del colesterol. Ocurre en el citosol y necesita de acetil-CoA. El acetil-CoA que se forma en la mitocondria no pasa la membrana y el acetil-CoA del citosol se origina a partir del citrato, que pasa la membrana mediante un co-transporte con malato. 3. La biosntesis de algunos aminocidos. El a-CG y el OAA se utilizan para la sntesis de glutamato y aspartato. 4. La biosntesis de porfirinas, que utiliza succinil-CoA. Las reacciones que dan lugar a intermediarios del ciclo de los cidos tricarboxlicos son denominadas reacciones anaplerticas (reacciones de rellenado), siendo la principal la reaccin catalizada por la piruvato carboxilasa (hgado, riones; mitocondrias de clulas animales pero no en plantas), que produce OAA (enzima tetrmerica con biotina y Mg2+ en cada subunidad) Piruvato + CO2 + ATP + H2O oxalacetato + ADP + Pi Esta enzima siente la necesidad de intermediarios del ciclo de los cidos tricarboxlicos (se activa por el acetil-CoA). La PEP carboxilasa produce OAA a partir del PEP y HCO3 (levaduras, bacterias y plantas, pero no en animales) y la PEP carboxiquinasa produce OAA y GTP a partir de PEP, CO2 y GDP (corazn, msculo esqueltico) y el enzima mlico, que produce malato y NAD(P)+ a partir de Pyr, HCO3- y NAD(P)H .

Otras rutas degradativas que generan intermediarios del ciclo de los cidos tricarboxlicos son la oxidacin de cidos grasos impares (succinil-CoA), la rotura de los aminocidos Ile, Met y Val (succinil-CoA) y la transaminacin y desaminacin de los aminocidos (OAA y aCG).

Reacciones anaplerticas (si hay sntesis neta de intremediarios del TCA) Piruvato carboxilasa piruvato + ATP + HCO3- OAA + ADP + Pi + H+ Glutamato deshidrogenasa glutamato + NAD(P)+ aCG + NAD(P)H + H+ +NH4+ Reacciones no anaplerticas (no hay sntesis neta de intremediarios del TCA) Glutamato-oxaloacetato transaminasa aCG + Asp Glu + OAA