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FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLAN DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AGRICOLAS MANUAL DE LABORATORIO DE FITOPATOLOGIA BIOL. MARCOS ESPADAS RESENDIZ M.C. GLORIA DE LOS ANGELES ZITA PADILLA PROLOGO Siendo la Fitopatología la ciencia que estudia las enfermedades de las plantas, los agentes causales, su interacción con los hospederos, la sintomatología, así como los medios de control de éstas, es notorio el papel que desempeña dentro de esta ciencia el trabajo de gabinete, esto es, el análisis de laboratorio, ya que es en éste lugar donde se establece el conocimiento de cada uno de los enunciados anteriores. El objetivo del laboratorio de Fitopatología es adiestrar al alumno en las principales técnicas de colecta, cultivo, identificación y control de los organismos causales de las enfermedades de las plantas. El presente manual tiene la intención de brindar la mínima información necesaria en el trabajo práctico de la Fitopatología, tratando siempre de establecer la relación hospedero-patógeno, al aportarles el conocimiento básico para que en un futuro sepan y puedan diagnosticar cuando un cultivo está enfermo o dañado y tengan noción de los métodos y técnicas de control que podrían emplear para lograr una mejor producción. No pretende ser éste un trabajo terminado, sino que se espera enriquecerse con la ayuda y crítica de profesores y alumnos. LOS PROFESORES DE FITOPATOLOGIA

OBJETIVOS GENERALES. Al terminar el curso el alumno: Adquirirá la destreza en el manejo de las principales técnicas el diagnóstico fitosanitario y podrá discriminar entre ellas cuando se aplican a determinado grupo fitopatógeno para su reconocimiento y diagnóstico (hongos, bacterias, nemátodos, virus)

DESARROLLO. El trabajo del laboratorio comprende a las prácticas generales y al seminario.

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PRACTICAS. Están contenidas en este manual. Se deberá entregar un reporte de cada una de estas prácticas, una semana después de haberlas concluido. Los reportes deben contener lo indicado en el manual, además de lo que los profesores les indiquen. NO SE ACEPTAN REPORTES DE PRACTICAS EXTEMPORANEOS. SEMINARIO DE INVESTIGACION. Es un trabajo particular que deberá desarrollar cada equipo a través del semestre. Este trabajo pretende que el alumno se familiarice con algún patógeno en particular, siguiendo los postulados de Koch, para lograr la correcta identificación del agente causal, de tal forma que pueda extrapolar sus conocimientos para un diagnóstico adecuado de cualquier enfermedad vegetal en su ejercicio profesional. En la primera sesión de laboratorio se les proponen algunos temas a escoger, aunque puede ser el mismo equipo el que lo proponga. En la segunda sesión todos los equipos deben tener su tema definido. En la tercera sesión deben entregar su proyecto de trabajo, el cual debe contener los siguientes puntos: 1. INTRODUCCION. (Justificación del trabajo, es decir, el QUE, el POR QUE y el PARA QUE). 2. OBJETIVOS. (Ante el planteamiento de un problema, se deben proponer objetivos a cumplir para poder solucionarlo). 3. HIPOTESIS. (Es la probabilidad que se supone como la solución al problema planteado, y por lo tanto, debe corresponder a los objetivos). 4. METODOLOGIA. (Es la descripción de los pasos a seguir para cumplir los objetivos). 5. BIBLIOGRAFIA. Cada equipo tiene que programar la fecha de siembra de las plantas que necesite, indicándolo en la metodología. Una vez que se terminen las prácticas, todas las sesiones subsecuentes se dedican exclusivamente al desarrollo del seminario. Al finalizar el semestre, hay una sesión para la EXPOSICION DE LOS SEMINARIOS. Cada equipo tiene 15 minutos para exponer y 5 minutos para preguntas. El mismo día de la exposición, se entrega un reporte final que contenga los siguientes puntos: 1. 2. 3. 4. INTRODUCCION. OBJETIVOS. HIPOTESIS. REVISION BIBLIOGRAFICA. Esta debe incluir: 4.1 Historia y distribución geográfica del patógeno. 4.2 Importancia económica

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4.3 Etiología 4.3.1 Clasificación 4.3.2 Morfología. 4.3.3 Patogénesis 4.4 Sintomatología 4.5 Epifitiología 4.6 Control METODOLOGIA RESULTADOS. (Se describe lo obtenido en el experimento). DISCUSION. (Es la parte más importante del trabajo, pues es donde se hace el análisis de los resultados, interrelacionándolos con los objetivos e hipótesis planteados, fundamentándose en la información obtenida en la revisión bibliográfica). CONCLUSIONES. (Conocimiento obtenido a través de todo el trabajo experimental). BIBLIOGRAFIA.

El reporte debe ser en Word y con buena presentación. A la entrega de este reporte, debe de anexarse: - la copia de por lo menos 3 artículos recientes referentes al tema del seminario. - Material didáctico de apoyo, en referencia al seminario (diapositivas, láminas, preparaciones, material de herbario). NOTA: No se reciben ningún trabajo o reporte fuera de la fecha indicada. La asistencia al laboratorio es OBLIGATORIA. EVALUACION. Reportes de prácticas...................….....….........................15% Seminario de Investigación...........…...…..........................25% Proyecto.....................................................5% Desarrollo...................................................10% Exposición..................................................5% Reporte final...............................................5% Exámenes parciales.....................…..........…......................10% TOTAL.........50% MATERIAL NECESARIO PARA LAS PRACTICAS QUE DEBEN TRAER POR EQUIPO*. 1 m. de franela 1 m. de manta de cielo 1/2 lt. de blanqueador de ropa 1 marcador indeleble Cerillos 1 caja de porta objetos 1 caja de cubre objetos 1 rollo de masking tape 1 charola de plástico tipo panera

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1 paquete de algodón 1 bolsa de detergente de 200 gr. Etiquetas engomadas de 2 x 2 cm. 1 rollo de papel aluminio 10 goteros en frascos color ámbar 1 rotulador Cepillo para lavar cristalería de laboratorio *Este material es necesario desde la primera práctica

PRACTICA 1 METODOS DE COLECTA
INTRODUCCION. El diagnóstico de las enfermedades de las plantas tiene tanto de arte como de ciencia. Ciertas enfermedades pueden ser reconocidas fácilmente, mientras que otras toman años. No pueden darse normas fijas aplicables a todos los casos, cada uno requiere un enfoque diferente e individual. El diagnóstico es una de las bases indispensables para lograr el control eficaz de una enfermedad. Solo cuando se conoce el agente causal puede consultarse literatura especializada que revela la experiencia de otros fitopatologos y puede servir para planear las medidas de combate. El diagnóstico es más preciso, por lo general, si el que lo realiza ha examinado personalmente la enfermedad en el campo. Un observador cuidadoso puede obtener datos valiosos que facilitan todo el proceso por ejemplo, la distribución local de una enfermedad varía de acuerdo a las circunstancias, es decir, pueden estar afectadas todas las plantas por igual, algunas más que otras, plantas sanas alternadas con plantas enfermas, áreas bien definidas de plantas enfermas, en hileras en los bordes de la plantación, en las partes más bajas o distribuidas al azar. Es importante notar la presencia de focos de infección inicial, a partir de los cuales se extienda la enfermedad, ya que esta información da idea del patrón de diseminación y de la fuente de inóculo primario. En el desarrollo de la Fitopatología práctica, es de suma importancia la colecta del material enfermo, puesto que de esto dependerá el que se puedan realizar las técnicas conducentes a una identificación acertada del patógeno en cuestión. OBJETIVOS: Conocer y manejar las técnicas más comunes de colecta y preservación de material de estudio fitopatológico.

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DESARROLLO: Los problemas fitopatológicos se pueden presentar en hojas. frutos. como raíz. estas bolsas no deben exponerse al sol. flores.) e) Decoloraciones. Si el cultivo ya esta muy desarrollado. Es indispensable que todos los ejemplares que se colecten. y cerrarla con una liga. hojas. hielera portátil. soluciones fijadores. Se pueden identificar cuando: a) Crecen anormalmente b) Se secan o se mueren c) Cuando disminuye la cosecha año con año y no se recupera aún con fertilizantes o combatiendo malezas. como frutos o bulbos. prensa. ligas. etiquetas. rayados. etc. En el caso de que las plantas sean pequeñas.foxitsoftware. papel secante. Es conveniente disponer del mayor número de elementos vegetales colectados que permitan lograr la identificación del agente causal. sobre pigmentaciones. serrucho. Pala recta. libreta de campo. cámara fotográfica.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Se colectan partes representativas. pero que no están en su totalidad muertas o en estado de descomposición. gigantismos. frutas. se debe sacar la planta entera. 5 . Se deberá colectar varias plantas completas que presenten síntomas iniciales y en diferentes etapas de desarrollo de la enfermedad. de suelo. d) Alteraciones en el crecimiento (achaparramiento. Para partes vegetales carnosas. tallos. Es conveniente colectar también una planta sana para que sirva de comparación. dependen del tipo de cultivos que se trate: a) Cultivo anual. Para evitar que los nemátodos mueran. frascos de boca ancha. periódico y cartón corrugado. manchas. engrapadora manual. navaja de campo. se deben colectar en frascos con soluciones fijadoras. machete. pues así no son útiles para el estudio en el laboratorio. vayan acompañados con los siguientes datos. lupa de campo. tallo. (aproximadamente). bolsas de polietileno. así mismo. MATERIAL Y EQUIPO UTILIZADO EN LA COLECTA DE PLANTAS ENFERMAS. es muy probable que se trate de infestaciones de nemátodos. etc. raíces. tijeras de podar. etc. y sin sacudir el suelo de las raíces. Las partes vegetales que deben colectarse. a) Datos generales. En el caso de que la planta presente nodulación en la raíz. por lo que se deben tomar muestras del suelo que haya estado en contacto con la raíz. se debe meter en una bolsa de plástico junto con 250 gr. b) Cultivo perenne. colecte solo proporciones de los órganos afectados. igualmente con síntomas iniciales y en diferentes etapas de desarrollo de la enfermedad. se deberán colectar partes que estén completamente muertas o en estado de descomposición.com For evaluation only.

Frecuencia de riego Incorporación de materia orgánica Podas ________________ ________________ ________________ Fertilizaciones Aclareos Otros ________________ ________________ ________________ a) Químicos aplicados al cultivo (concentraciones y dosis). Drenaje ________________ Textura ________________ 6 . Localidad Fecha Cultivo (hospedero) ________________ ________________ ________________ ________________ Variedad Edad del cultivo Cultivos anteriores Predio ________________ ________________ ________________ ________________ b) Apariencia general del cultivo Marchitez Amarillamiento Areas muertas Manchas foliares __________________ Tizones ________________ Desarrollo anormal ________________ Otros ________________ ________________ ________________ ________________ c) Partes atacadas de las plantas. Raíz Hojas Frutos ________________ ________________ ________________ Brotes o Tallos Flores ________________ ________________ d) Distribución de la enfermedad Plantas aisladas Areas grandes Bandas o franjas Manchones o grupos de plantas ________________ ________________ Areas pequeñas ________________ ________________ Bordes de cultivo ________________ ________________ e) Condiciones prevalecientes durante la aparición de los primeros síntomas y el desarrollo de la enfermedad. Fertilizantes Herbicidas Defoliantes ________________ Fungicidas ________________ Insecticidas ________________ Otros ________________ ________________ ________________ a) Características del suelo.com For evaluation only.foxitsoftware.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Muestra No. Precipitación Vientos Granizo ________________ ________________ ________________ Humedad relativa Heladas Otros ________________ ________________ ________________ a) Labores culturales.

México.. F. Gaviño... E. o solución de Hesler. Zn K P __________ Mn __________ Mg __________ Otros _ __________ N __________ Bo __________ __________ __________ Datos del laboratorio que nos ayudarán al diagnóstico de la enfermedad y a la identificación del agente causal........ En este caso se puede prensar o preservarse en refrigeración.…. 2...1000 ml.. Cloruro de Zinc .......A...A..... Glicerina . b) Presencia de esporas......... Limusa. 1975.. Herrero Hnos.A. F. *Preparación de soluciones preservadoras.... e) Evidencia de daños mecánicos El material colectado puede emplearse para: a) Realizar aislamientos del agente causal...com For evaluation only.......... Manual de Laboratorio de Fitopatología General. 1975.....Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.......25 ml.... 1...... 10 ml....50 ml Formalina .. NOTA: Los alumnos traerán la colecta fitopatológica BIBLIOGRAFIA. SOLUCION DE HESLER Agua destilada .....) d) Presencia de insectos o ácaros... a) Características de las lesiones........... En el primer caso los ejemplares deben ser montados en cartulinas blancas de 25 x 45 cm.100 ml....... Echandi... México...... consistencia etc. o bien la preservación en fijadores* como alcohol al 70%... micelio................A Formol al 40% .. b) Como material de herbario..... Alcohol al 50% .... siguiendo las técnicas de herbario acostumbradas. c) Exudaciones (color..25 ml...G....foxitsoftware............ y H. Técnicas Biológicas Selectas de Laboratorio y Campo...... 7 ....... Figueroa.... empleándose el prensado....... pH ________________ Otros ________________ a) Posibles diferencias y/o excesos nutricionales..... G... cuerpos fructíferos o cualquier estructura (hacer esquemas). 10 ml... Acido acético glacial ... Todo el material preservado debe llevar su etiqueta correspondiente...

1964. 6. Méx. Tuite. D. Windham. Fungi and Bacteria.G. Burges Pobl.com For evaluation only.A. I. Plant Pathological Methods. Técnicas de uso común en el manejo de Hongos fitopatógenos. R.. 1977. ya que deben seguirse siempre que se está frente a una enfermedad de la que desconozca o se dude del agente causal. Marcel Dekker Inc.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.El agente causal debe estar constantemente asociado con la enfermedad. and Windham. Co. Acribia. 8.C. lo que permite la posibilidad de aplicar los métodos de control más adecuados. Zaragoza.C. Washinton. INTRODUCCION En el diagnóstico de las enfermedades vegetales. ya que ahí donde se efectúa la identificación del agente causal. Trigiano.foxitsoftware. OBJETIVOS Adiestrar a los alumnos en la preparación de medios de cultivo y en las técnicas de aislamiento de agentes fitopatógenos más utilizadas. 3.I. 5. 3.C. N. 1978.. Fundamentos de Patología Vegetal.A. y C. L.El organismo debe ser aislado y cultivado en el cultivo puro. REVISION BIBLIOGRAFICA El diagnóstico de las enfermedades se fundamenta en los Postulados de Koch. El proceso de identificación de un patógeno requiere el aislamiento del mismo. González. Que revisten gran importancia dentro de la Fitopatología. S. 2. London. Introducción a la Fitopatología. San Jose de Costa Rica. 8 . López A. el trabajo de laboratorio de suma importancia. debe desarrollarse la enfermedad original.. 518 pp. Boca Raton. M.Al inocular una planta susceptible sana. Plant pathogen detection and diseases diagnosis. 7. PRACTICA 2 PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO Y METODOS DE AISLAMIENTO. Los postulados de Koch son los siguientes. J. Tesis. 413 pp. para lo que es necesaria la elaboración de medios de cultivo que permitan el desarrollo de dicho patógeno. G.. Minneapolis. A. 1.. Roberts. T..N. 1972. Plant pathology. New York. Boothroyd. P. E. Concepts and Laboratory. Narayanasamy. CRC Press. 2001. 4. 2004.

determinación. En el caso de que el patógeno se encuentre en las partes vegetales se puede proceder a realizar aislamientos directos. 9 . del que se deben tomar nuevas muestras para realizar otros cultivos seleccionados de las diferentes colonias. nitrógenos. reproducción y diagnóstico de aquellos organismos productores de enfermedades en las plantas. éstos es. microelementos (Fe. Nutrientes: en el medio de cultivo. pH: También en este caso.com For evaluation only. pero en general los hongos fitopatógenos se desarrollan y reproducen mejor en pH ligeramente ácido. los valores óptimos son muy variables. A partir de la primera muestra que se coloca en un medio de cultivo. Temperatura: Los valores óptimos de éstas son muy variables para cada especie. utilizar cámaras húmedas. Para realizar aislamientos a partir del suelo. Mo ). tanto de vida libre como parásitos. que se comportan como parásitos facultativos. existen diversas técnicas como el de Placa Directa y el de Dilución en Serie. pero en general no influye. Para poder estudiarlos y conocerlos se deben cultivar en modos adecuados y aislándolos del suelo o de partes vegetales enfermas. Luz: Este factor afecta en algunos casos la reproducción de los fitopatógenos. etc.El organismo patógeno debe ser aislado de la planta infectada bajo condiciones experimentales. Cu. los medios de cultivos deben reunir características especiales. hongos y otros organismos de muy diversos tipos. colocar partes vegetales en el medio de cultivo. Ca). generalmente requieren de 50% o más. Zn Mn. a través de trampas. Para lograr el desarrollo y producción de las diferentes especies fitopatógenas.foxitsoftware. vitaminas. mientras que las bacteria en uno alcalino.. pero la mayoría de ellos pueden crecer en un rango de 10 a 25º C. deberán estar presentes elementos nutricionales tales como fuentes de carbono. hasta lograr que en el medio solo se desarrollen un tipo de organismo. tomando en cuenta los factores que se mencionan a continuación. etc. Humedad: Deberá proporcionarse una humedad relativa favorable a los fitopatógenos que se desee cultivar. 4. macroelementos (P. Este es un factor determinante para el desarrollo y reproducción. Los medios de cultivos son mezclas de sustancias nutritivas que se utilizan para el aislamiento. K. de manera que encontramos bacterias. se obtiene un cultivo mixto. Mg. Medios de cultivo.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Aislamiento. un CULTIVO PURO. En la naturaleza abundan los microorganismos que se desarrollan estrechamente relacionados entre sí. desarrollo.

Medios sintéticos: Son aquellos medios de cultivo en los que se conoce exactamente la composición de cada uno de sus componentes.. tubérculos.AVA ( avena .AN (agar nutritivo ) 3.JTA (jugo de tomate-agar) 13. Consistencia 2. 2. 1. por ejemplo: harina de maíz-agar.agar) 7.3. por ejemplo: tejidos vegetales.MM ( medio de Martin) 8.3 Medios líquidos: Son preparados sin agar.MSA ( malta-sal-agar) 10 .TSA (jugo de tomate.PDA ( papa-dextrosa-agar) 2.AA ( agua-agar) 10.foxitsoftware.. o bien se componen de sustancias naturales y sustancias sintéticas.. por lo que permanecen líquidos aún al enfriarse.VFA (vaina de frijol-agar ) 9... Se emplean para mantener cultivos por largo tiempo. Contienen esencialmente agar.. 2. Asepsia: Los medios de cultivo deben esterilizarse y mantenerse a salvo de cualquier contaminación.. materiales que al enfriarse quedan completamente sólidos. gelatina u otras sustancias solidificantes.com For evaluation only.sal. Medios complejos o semisintéticos: En estos la composición de uno de los componentes no se conoce de manera exacta. Entre los medios de cultivos de uso frecuente en Fitopatología están los siguientes: 1..HMA ( harina de maíz-agar) 11. 2. Los medios de cultivo pueden ordenarse de acuerdo a su consistencia.. Contienen bajas proporciones de agar y gelatina.Composición 1. raíces. Clasificación de los medios de cultivo. Medios de cultivos naturales: Se forman a partir de material vegetal natural..1. Muy empleados para el aislamiento y la reproducción de hongos y bacterias.2..agar ) 6. 1. al enfriarse permanecen en estado coloidal. mezclados o separados.JFA ( jugo de frijol agar) 12. quedando de la siguiente manera: composición o a su 1.1 Medios sólidos. frutos.. ( 2-3 % ) gelatina ( 10-15 %) albumina etc. por ejemplo: Agar Czapek. se emplean cuando se necesita incrementar el inóculo de hongos o bacterias..HFA ( harina de frijol-agar) 4. vainas.2 Medios semisólidos.V8A ( jugo V8-agar) 5..Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.. etc.

. Se disuelve el agar en 500 ml......... Procedimiento: Partir 200 gr.......15gr...... Se añade la solución de agar daxtrosa al caldo de papa mezclando bien y se afora con agua destilada a 1000 ml.com For evaluation only........ Se deja hervir durante 15 min...... calentando ligeramente...... 15gr........ se afora a 1000 ml y se esteriliza......BA 15...20gr. de papa sin cáscara y cubrirlo con agua destilada...........aforar a 1000 ml Dextrosa. de agua destilada..... Concluido éste tiempo se cuela la infusión o caldo de papa a través de manta de cielo. se le agrega la dextrosa y se disuelve...... AN ( agar nutritivo o extracto de carne-agar) Este medio de cultivo nos sirve para cultivar bacterias como Erwinia.PDA (papa-dextrosa-agar) Este medio de cultivo se utiliza para el aislamiento.. y se esteriliza. 3. Procedimientos: Se disuelve el agar en el agua destilada..... calentando ligeramente............................ 2............... Ingredientes : Papa..AA (agua-agar) Este medio de cultivo se utiliza para el aislamiento de hongos del suelo como Phytium y algunos Actinomicetos... Pseudomonas y Corynebacterium........................Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www....foxitsoftware...200gr Agar... 14 . Agua destilada...... Agua destilada.. crecimiento y reproducción de varios hongos y de bacterias como Xanthomonas y Agrobacterium......aforar a 1000 ml 11 ..................BK (Bonner.....Addicot) (medio B de King) Preparación de los medios de cultivo 1.. Ingredientes: Agar..

...............HMA (harina de maíz-agar) Este medio de cultivo sirve para aislar hongos de los géneros Pythium y Phytophthora. luego agregar la peptona y el extracto de carne y disolver.. Añadir el líquido centrifugado a la solución de agardextrosa-peptona y aforar con agua destilada a 1000 ml.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www......20gr... agua destilada.....………......... dextrosa.................. Procedimiento: Disolver el agar en 500 ml...20gr. Disolver el agar...... Decantar y juntar el líquido sin sólidos producto de la centrifugación........30gr....................foxitsoftware....15gr.20gr... agar......aforar a1000ml............. Esterilizar....... Agua destilada. Ingredientes: Harina de frijol .3gr.. a 60º C se filtra la infusión a través de manta de cielo.......... agar ..... Se decanta y se junta el líquido sin sólidos... 12 ... Se filtra la infusión a través de manta de cielo... de agua destilada a 70º C se agrega la harina de maíz y se calienta por 1 hr..... La solución filtrada se clarifica centrifugando durante 20 min a 300 RPM...... a 3000 RPM...aforar a 1000 ml.5 gr....... de agua destilada se agregan los 30 gr..... La solución filtrada se clarifica centrifugando por 20 min........20gr. Ingredientes: Extracto de carne de res..... por último aforar con agua destilada a 1000 ml................. 4............. de agua destilada calentando ligeramente. Procedimiento: En 500 ml. 5............20gr.............. Peptona....................... Agua destilada......HFA (harina de frijol.com For evaluation only................................................. Peptona........... la dextrosa y la peptona en 300 ml de agua destilada calentando ligeramente........ Ingredientes: Harina de maíz ......... de harina de frijol.........aforar a 1000ml....... producto de la centrifugación... agar........... Procedimiento: En 500 ml.……….......................... se calienta la solución a 60-70 ºC.........agar) Este medio de cultivo se utiliza para cultivar algunas especies del género Phytophthora............

foxitsoftware... 7........ 13 .............………………………………..10 gr......……………………………….JFA ( jugo de frijol ..aforar a 1000ml... Esterilizar........com For evaluation only. hasta completar la cantidad requerida........... CaCo3. 6.....aforar a 1000ml........ Centrifugar para clarificar durante 20 min a 3000 RPM........................ Agar... resultante de la centrifugación.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.aforar a 1000 ml B) Para aislar a Phytophthora parasitica y Ph......................2gr.15gr.......... palmivora..5gr...... Dejar reposar la solución durante 10 min........ Ingredientes: Jugo de frijol proveniente de vainas prensadas o molidas.... CaCo3 ... Ingredientes: Jugo V8 centrifugado*.... Ingredientes: Jugo V8 centrifugado*... Agar ..........20ml........ Añadir el líquido centrifugado a la solución de agar mezclándolo bien............ Disolver el agar en 285 ml..... Se decanta y se junta el líquido sin sólidos.. *En ambas fórmulas se puede sustituir el jugo V8 por jugo de tomate simple...... Agitar hasta disolverlo....... Añadir la solución de agar al jugo de frijol y esterilizar...............100 ml......... Agar. Para aislar a Phytophthora infestans y Phythium...............4................ de agua destilada....................agar) Este medio de cultivo se emplea para cultivar Colletotrichum lindemuthianum.......15gr.... Agua destilada.. Procedimiento: Obtener el jugo de frijol prensado o moliendo las vainas verdes. calentando ligeramente..215 ml. Agua destilada ........agar ) Este medio se prepara de dos formas........... Agua destilada.............. Disolver el agar en 300 ml de agua destilada calentando ligeramente. Procedimiento: Agregar el CaCo3 al jugo V8 o de tomate.........V8A (jugo V8.... según la especie de hongo que desee cultivar....... Finalmente aforar con agua destilada a 1000 ml.

Ingredientes: NaCl………………….. Se esteriliza.... Agar . ) y se añade la solución centrifugada.. a 300 RPM. Ingredientes: Avena…………… …. Decantar y juntar el líquido sin sólidos producto de la centrifugación. Disolver el agar en 400 ml de agua destilada calentado ligeramente... 8...... mezclar bien y aforar con agua destilada a 1000 ml Esterilizar....6gr.JTA ( jugo de tomate-agar) Este medio de cultivo se utiliza para aislar a Phytophthora capsici...........60 ml........ 9. Procedimiento: Se muelen los tomates y se cuelan a través de una manta de cielo.......com For evaluation only. Agar ………………………….foxitsoftware.......7.... Añadir a esta solución la infusión de avena centrifugada.. Ingredientes: Jugo de tomate natural. Para la fórmula A) disolver el agar en agua destilada. Este medio de cultivo se utiliza para aislar principalmente a los hongos que atacan granos almacenados. se centrífuga durante 20 min a 3000 RPM.AvA (avena-agar) Este medio de cultivo se utiliza para aislar especies de los géneros Phytophthora y Pythium.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www....aforar a 1000 ml. se agita bien y se deja reposar durante 10 min.. Filtrar la infusion a traves de una manta de cielo. Después hervir durante 30 min... Añadir a la solución de agar el jugo V8 o de tomate centrifugado y aforar con agua destilada a 1000 ml...... Se decanta y se junta todo el líquido centrifugado hasta completar la cantidad requerida...... mezclando esta solución con el jugo V8 o de tomate centrifugado... centrifugar durante 20 min. Disolver el extracto de levadura en la solución de agar... calentando ligeramente. de agua destilada para disolver el agar....5 gr Agar…………………………12 g Agua destilada………aforar a 1000 ml Ca Co3. Se disuelve el agar en otro poco de agua destilada (800ml........0. 2 gr. Para clarificar la solución colada.14gr.…….... Para la fórmula B) utilizar 900 ml.. mezclando bien..7.. Procedimieto: En 600 ml de agua remojar 60 gr de avena durante 24 hr.5 gr 14 .. Agua destilada.. El jugo se mezcla con el CaCo3. MSA (malta -sal-agar). Para clarificar.....60 gr Extracto de levadura….

Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.20 gr Agua destilada ………………. Esterilizar por NO MAS de 15 min.808 gr MgSO4 o7H2C (sulfato de magnesio) . Disolver el extracto de malta en la solución de agar. Ingredientes: KNO3 (nitrato de potasio)…0.0108 gr FeCl3 (tartato férrico)……0. 12. Procedimiento. a 3000 RPM. 15 . En 400 ml de agua se disuelve la sal calentando ligeramente... Añadir la solución de extracto de malta-agar.000gr KCl (cloruro de potasio)………….00 gr Agua destilada………………aforar a 1000 ml. calentando ligeramente. mezclando bien. Aforar con agua destilada a 1000 ml..aforar a 1000 ml Procedimiento: En 400 ml de agua disolver el agar calentando ligeramente...0010 Agar ……………………25. En 500 ml de agua destilada disolver la sal calentando ligeramente.foxitsoftware. Si se mezcla con el agar y 200 ml de agua.aforar a1000 ml. y se mezcla bien calentado ligeramente.0. BA (Bonner. Extracto de Malta …….15 gr (si se usa medio deshidratado) 30 gr (para jugo de tomate) Procedimiento: En 500 ml de agua destilada se disuelve el jugo de tomate-agar (medio deshidratado) y el agar.0369 gr para aislar y desarrollar a Phymatotrichum Ca(NO3)H2O (nitrato de calcio)…0. se centrifuga durante 20 min.0. la solución de sal. Ingredientes: Jugo de tomate-agar (medio deshidratado) NaCl……………………………100 gr o 90 ml de jugo de tomate de lata Agua destilada ……. 11.6486 gr gr Glucosa ………………………… 20.. Este medio de cultivo sirve omnivorum. Agar………………………………. Este medio de cultivo se utiliza para aislar hongos de granos almacenados. Se añade a esta solución la de jugo de tomateagar mezclando bien y se afora a 1000 ml.com For evaluation only.236 gr KH2PO4 Fosfato diácido de potasio ….Addicott). Esterilizar. TSA (JUGO DE TOMATE-SAL-AGAR).0.

Peptona……………. Agar………………. Este medio de cultivo se utiliza para aislar a los hongos del suelo. y en los restantes 500 ml se disuelven uno a uno los demás componentes.05 ml de estreptomicina en solución a cada caja de Petri (esto es para inhibir el crecimiento de las bacterias) 14.1. BK (B de King). En otros 300 ml de agua se disuelven los demás componentes agregándole a esta solución la de agar.. Agua destilada…………………………aforar a 1000 ml. Se disuelve 1 gr de estreptomicina en 150 ml de agua destilada estéril. mezclando bien.0-7.5gr. K2HPO4……………………….. Agar……………………………. momentos antes de vaciar el medio en las cajas de Petri. Rosa de Bengala…………………………………3. Añadir a la solución de glucosa-agar la solución del resto de los componentes.. MM (medio de Martin). Este medio de cultivo sirve para aislar diferentes géneros de bacterias. Ingredientes: Dextrosa……………10 gr.20 gr. Después se mezclan bien las dos soluciones. Agua destilada…………………aforar a 1000 ml Estreptomicina…………………………………. En 500 ml de agua destilada disolver el agar y la glucosa calentando ligeramente. calentando ligeramente. Procedimiento: Para preparar la solución de Rosa de Bengala se disuelve 1 gr de colorante en 100 ml de agua.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.10 ml MgSO4…………………1.5 ml. 13. En 500 ml de agua destilada se disuelve el agar. Este medio de cultivo sirve para aislar a Colletotrichum lindemuthianum. de esta solución se toman los 3.1 gr.0. Ingredientes: Peptona……………….1 gr. Ajustar el pH a 7.7H2O(sulfato de magnesio hidratado)…. 5 gr. En 500 ml de agua destilada disolver todos los demás componentes uno por uno.20gr. 15..5 ml para agregarlos a 1000 ml de medio de cultivo. La estreptomicina se prepara separadamente.5 gr. MgSO4. Procedimiento: Se disuelve el agar en 500 ml de agua calentando ligeramente y después se le añade la glicerina. 16 . VFA (vainas de frijol-agar).. Glicerina……………….foxitsoftware. Se mezcla bien y se esteriliza.. midiendo con papel pH y agregando HCl si se necesita acidificar o NaCl si se trata de alcalinizar.com For evaluation only.5 gr.glicerina.5. KH2PO4……………. Se agrega 0...15 gr.

Tomar el recipiente con el medio de cultivo y destaparlo con la mano izquierda. Vaciado del Medio de Cultivo a Cajas de Petri. Colocar la tapa de la caja de Petri suavemente en su sitio y tapar el recipiente con el medio de cultivo. C. de agua estéril 1 Pizeta con cloro al 50% 2 Vasos de precipitado p/calibrar * 2 Papel filtro estéril tamaño de 8 x 12 cm. pasar la boca del recipiente sobre la llama del mechero. MATERIALES 2 Matraces de 250 ml limpios y ertériles. mezclando bien y se afora a 1000 ml. realice lo siguiente: A. realizar pruebas de esterilidad por incubación a 35 ºC durante 48 hrs. Agua destilada………………. Una vez solidificado el medio. 1 Soporte universal con tela de asbesto 1 Probeta de 100ml.15 gr. Se calienta a 60º C durante 30 min. Ingredientes: Vainas de frijol………………. Agar………………………….aforar a 1000 ml. 2 Pinzas de disección 1 Matraz con 500ml. Deje solidificar. Conservar el tapón en la misma mano con que sostiene el recipiente del medio. del medio. Limpiar la mesa con una solución de cloro 2:1 en agua o benzal B. se le añade la infusión filtrada. Distribuir uniformemente el medio con movimientos de rotación de la caja sobre una superficie horizontal.com For evaluation only. H. Para llenar las cajas de Petri con el medio de cultivo de una manera aséptica. Se filtran a través de una manta de cielo y papel filtro.250 gr. E. Tomar con la mano derecha una caja y levantar la tapa lo suficiente para vertir el medio. G. de agua destilada estéril 4 Recipientes de plástico p/desif. 17 . 1 Mechero 1 Gradilla 1 Agitador 6 Tubos de ensaye c/9 ml. Procedimiento: En 500 ml de agua destilada se añaden las vainas cortadas en trozos muy pequeños. Se disuelve el agar en 300 ml de agua destilada calentando ligeramente.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware. Poner las cajas y recipientes con el medio sobre la mesa. F. D. Esterilizar. 1 Balanza granataria* 12 Cajas de Petri limpias y estériles 1 Frasco de agar 2 Cjas de Petri para cámara humeda 1 Frasco de dextrosa* 2 Agujas de disección 1 Frasco de malta 1 Centrifuga 1 Frasco de carbonato de calcio NOTA: Los reactivos para la elaboración de los medios de cultivo puedes variar de acuerdo a la cantidad y diversidad de medios de cultivo que elabore el grupo. Colocar y encender el mechero o lampara de alcohol. vaciar en cada caja de 10 a 12 ml.

Incube las cajas a 24ºC y observe después de 5 días. A qué tipo de medios de cultivo (natural. Se incuba a 24ºC durante 2 o 3 días y se observan resultados. En cajas de petri con medio de cultivo solidificado. los tejidos se lavan y se sumergen en un tubo con agua destilada estéril. se humedece con agua destilada estéril. Aislamiento a partir del suelo. 2. tome una muestra de este material con una aguja de disección estéril y colóquelo directamente sobre el medio de cultivo solidificado.2. Después de 4 a 5 días se podrá apreciar el crecimiento del patógeno. micelio. Incube a 24 ºC. 1. Agregue a las cajas. Se deja reposar de 1 a 2 min. Posteriormente de cada tubo se toma 1 ml y se coloca en una caja de Petri. Placas directas. previamente. Cuando se desea aislar bacterias. si encuentra fructificaciones.foxitsoftware. Se transfiere 1 ml del sobrenadante a otro tubo con 9 ml de agua destilada estéril y se repite así tres veces mas. 1.2. etc. Las colonias de microorganismos se observan de 2 a 3 días después . Qué es la esterilización y cuales son los métodos mas frecuentes para esterilizar materiales fitopatológicos? 3.1. transfiera pequeñas placas por separado a nuevas cajas o tubos con medio estéril. se enjuaga con agua destilada estéril y se coloca en cajas con PDA solidificado. 2. a temperatura soportable por el dorso de la mano. agregue pequeñas porciones de suelo son una espátula.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Plante semillas o porciones vegetales en suelo infectado. se hacen diluciones que se agregan a cajas con PDA. 2. Proceda a aislarlo con la técnica anterior CUESTIONARIO. 2. Se toma una porción de tejido enfermo y se desinfecta en una solución 2:1de cloro (NaOCl). 18 . TÉCNICAS DE AISLAMIENTO 1. usando una para cada dilución.. Incube a 24 ºC Cuando hayan crecido colonias de hongos o bacterias. Aislamientos a partir de vegetales enfermos. 2. Se recomienda usar agua-agar. Sobre el papel se colocan pequeños trozos del vegetal enfermo y se cierra la caja.com For evaluation only. Describa los tipos de colonias que surgieron en los aislamientos a partir del suelo y partes vegetales enfermas. Se incuba a 24ºC y se observa después de 4 a 5 días.1. La porción que interesa se desinfecta en cloro (NaOCl). Aislamiento directo. Trampas. semisintético o sintético) pertenecen los utilizados en esta práctica? Explique su respuesta. Cámara húmeda.3.4. En una caja de Petri estéril. se recurre al uso de la cámara húmeda. Se mezcla 1gr de suelo en 10 ml de agua destilada estéril. proporcione humedad e incube a temperatura ambiente. Incube a 24ºC y observe a los 7 días. agua-agar o medio de Martin. Cuando la planta presenta micelio y no hay fructificaciones o cuando no se aprecia el crecimiento del patógeno. 1. con ayuda de una aguja de disección. Partes vegetales en medio de cultivo. que contenga papel filtro esterilizado. 2. Observe al microscopio de disección el ejemplar enfermo. Dilución en serie.

M. 4. es decir. 1985. 5. Op. 5. Echandi. que 19 . * 2. E. S.com For evaluation only. Las enfermedades vegetales pueden ser causadas por agentes abióticos y bióticos. Plant pathogen detection and disease diagnosis. cit. F. 413 pp.. Figueroa. Sydney. Basic Plant Pathology Methods. viroides. Cómo realizaría un cultivo de Puccinia graminis tritici y del virus del mosaico amarillo del frijol. 9. 4. Agrios. Concepts and Laboratory.Plant pathology. 1978.. 2004. Windham.02 organismos por ml. Narayanasamy.C. A. Juárez y H. 1975. Trigiano. Singapore. a partir de vegetales enfermos? BIBLIOGRAFIA 1. D. T. Costa Rica. P. 6. New York. cit. A. G. and Oliver.. R. Op. French. micoplasmas.foxitsoftware. cit. C. Op. Boston. CRC Press. M. 2001. de organismos en 1ml Ejemplo: 2 colonias x 1 1000 x 10 ml = 0. 2005. IICA. Amsterdam. la identificación del agente causal ocupa un lugar preponderante. Dewey. C. Plant pathology. espiroplasmas. Elsevier academic Press. Calcule el numero de organismos que surgieron en los aislamientos a partir del suelo por el método de dilución. algunos son tan pequeños o requieren de técnicas microscópicas tan elaboradas para su observación. Marcel Dekker Inc. 267 pp. López A. New York.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. 518 pp. and Sinclair J. B. Oxford. 1980. and Windham. 7. Métodos de Investigación Fitopatológica. 5th ed. de la siguiente manera No. D. O. san Francisco. G.. PRACTICA 3 GENERALIDADES DE MICROORGANISMOS INTRODUCCION. London. riquettsias.. 992 pp. Modern assay for plant pothogenic fungi. Washinton. Boca Raton.G. En el proceso de diagnóstico de las enfermedades de las plantas. de colonias x dilución empleada x volumen inicial = No. Tokyo. bacterias. 8. y Her... C A B International. 1994.. N. Paris.R. en los microorganismos fitopatógenos. N. Dhingra. De estos. Gaviño. 1975. Schots.. Las técnicas de identificación particularizan en los agentes bióticos. Heidelberg. R. entre los que encontramos virus. hongos y nemátodos. CRC Press. 355 pp 3. London. San Diego.

Lavarlo con una solución de cloro al 10% por 4 minutos en agitador magnético 5. es imposible determinar su morfología en un laboratorio escolar. Macerar 11. Secar en papel filtro. Someterlo a un lavado con Tween 20 sobre agitador magnético por 3 minutos 4. Concretamente. Lavarlo bajo el chorro de agua corriente 3. Enjuagar con agua destilada estéril (150 ml en vaso de precipitado) sobre agitador magnético por un minuto.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.5. Decantar en un tubo tipo Ependorf. OBJETIVOS. en preparaciones temporales y permanentes.com For evaluation only. Colocar en bolsa para macerar 9.0% (PEG). Solución 3: Fosfato de potasio 0. 7.foxitsoftware. Reconocer las características morfológicas que distinguen a las bacterias.5% sulfito de sodio. Pesar un gramo del tejido cosechado 2. pH=7. los hongos y los nemátodos. en tanto que otros se prestan a su trabajo en éstos. 8. Solución 2: Glicol-polietileno al 6% (PEG). Macerar 13. El macerado se homogeniza durante un minuto. los que resultan mas fáciles de identificar son las bacterias.5 Solución 4: glicol-polietileno al 20.25 M. Dar un enjuage final con con agua destilada estéril (150 ml en vaso de precipitado) sobre agitador magnético por un minuto. 6. con 0. en caso necesario agregar 1 ml de solución 1 para facilitar la decantación.5M (1:2 p/v). METODOLOGÍA 1. pH=7. Agregar 1 ml de la solución al macerado 12. a los hongos y a los nemátodos. Agregar 2 ml de la solución 1 10. 20 . 14. PRIMERA PARTE: VIRUS (esta parte se hará con equipos que trabajen virus fitopatógenos en su seminario) Purificación de partículas virales REACTIVOS Fosfato potásico Sulfito de sodio Cloroformo Tetracloruro de carbono Glicol-polietileno (PEG) SOLUCIONES Solución 1: Fosfato potásico 0.

todas son saprófitas facultativas. bacilar o espiralada. carecen de núcleo verdadero. 20. Se centrífuga a 8 500 rpm durante diez minutos. Después se centrífuga a 10. 15. Se usa el sobrenadante para el diagnóstico. Dependiendo de la cantidad de estos. 25. La mayoría son saprófitas obligadas. 21.000 rpm durante diez minutos. Se conocen aproximadamente 1600 especies de bacterias. El precipitado obtenido se resuspende en la solución 3 y se incuba durante seis horas. 24.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Homogeneizar dos minutos más. Se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza. 16.5:1 v/p de cada uno). ácido murámico y azúcar. Elaboración de preparaciones temporales y permanentes de bacterias. Se incuba durante una hora en frío (4º C). las bacterias pueden teñirse de rojo o de violeta al seguir la técnica de tinción de Gram. 27. La pared celular determina la forma de las bacterias y es selectiva. 2. 21 . Algunas forman esporas.5 ml de solución por cada 100 g de tejido). pudiendo contener aminoácidos aromáticos. Después de doce horas. Enseguida se agregan al homogenizado Cloroformo y Tetracloruro de carbono (0. membrana y citoplasma este último conteniendo gránulos de grasa. por lo que pueden ser cultivadas en medios artificiales. 23. 22. 19. pared celular. se centrífuga a 10. Tinción de flagelos. Tinción de bacterias por el método de Gram. 17. Ciertas bacterias son flageladas y pueden desplazarse en medios líquidos. aunque no es el caso de las fitopatógenas.000 rpm durante diez minutos. con pocas excepciones. El manual de Bergey cita 180 especies de bacterias reconocidas como fitopatógenas. vacuolas. Al sobrenadante se añade la solución 4 (2 ml PEG/5 ml sobrenadante).000 rpm durante diez minutos. Su forma puede ser esférica. ACTIVIDADES. de las cuales. RESULTADOS: SEGUNDA PARTE: BACTERIAS Las bacterias son microorganismos pertenecientes al reino Monera. Después se resuspende en la solución 3 (0. 18. es decir. Centrifugar a 5000 rpm durante cinco minutos.foxitsoftware.com For evaluation only. Tinción de cápsula y productos de excreción. Todas las bacterias fitopatógenas conocidas hasta el presente son aerobias. 26. El sobrenadante que resulta se trata con la solución 2 y se agita en frío (4º C) durante dos horas. pigmentos y material genético disperso. aún cuando existen anaerobias facultativas. y como tales benefician al hombre porque ayudan descomponiendo grandes cantidades de materia orgánica y deshechos animales y vegetales. facultad que no ejercen dentro del tejido vegetal. 1. Se encuentran constituidos por una cápsula de secreción. El precipitado se centrífuga a 12.

80ml Mezclar las soluciones A y B Solución lugol 22 .foxitsoftware. Agua destilada…………………………….8g. Observación de preparaciones temporales permanentes de bacterias. 3. agregue cristal violeta durante 2 min. Siempre se empieza por 10X. coloque el cubreobjetos y observe..com For evaluation only. Alcohol etílico……………………………20ml Solución B Oxalato de amonio………………………. COLORACION DE GRAM. Reactivos: Solución de Cristal violeta con oxalato de amonio: Solución A: Cristal violeta……………………………2. indicando los nombres de las estructuras. Lave con sulfato de cobre al 2 % Séquelo con papel absorbente.0. Puede teñir la preparación siguiendo las técnicas adecuadas. Observe la preparación al microscopio usando diferentes objetivos. Haga un frotis. evitando que se formen burbujas colocando inclinado. colóquela en un portaobjetos limpio con una gota de agua destilada. séquelo al aire. Porta y cubreobjetos Caja de petri Agujas de disección Cultivos de bacterias Preparaciones de bacterias Mordiente para tinción de flajelos Tejidos vegetales enfermos Cristal violeta para tinción de Gram Safranina para tinción de gram Tinta china bacteriológica Sulfato de cobre Lugol Cristal violeta para flagelos Alcohol etílico ANTES DE EMPEZAR A TRABAJAR. 2. 4. deje caer el cubreobjetos suavemente. Con el asa tome una pequeña muestra de microorganismos del cultivo. DESINFECTE LA MESA CON CLORO TECNICA PARA REALIZAR PREPARACIONES TEMPORALES Trabaje cerca de la flama. MATERIALES Y METODOS. Coloque el cubreobjetos. Esquematización de lo observado. y cuando el líquido se haya extendido por el borde. 1. Recuerde que a 100X es necesario usar aceite de inmersión. Flamee el asa o aguja de disección para evitar contaminaciones. agregue una pequeña muestra de bacterias. TINCION DE PRODUCTOS DE EXCRESION Y CAPSULA DE BACTERIAS.0g. Coloque en un portaobjetos una gota de tinta china bacteriológica.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Las cápsulas aparecen en color azul y violeta y los cuerpos bacterianos en azul obscuro.

Yodo…………………………………………1. debido al gran número de enfermedades que ocasionan...... Fije la preparación al aire o con calor (a la flama). TERCERA PARTE: HONGOS Los hongos comprenden al grupo más numeroso de microorganismos fitopatógenos. lave con agua corriente. Observe al microscopio.20ml..foxitsoftware. 3.. Absorba el agua con papel sin frotar.0.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www..5%.5% en alcohol etílico al 95%.5g Fenol………………………………………2. Agua destilada…………………………………………100ml. Glicerina……………………………………80ml. 4. En una gota de agua coloque una pequeña masa de bacterias esparciéndolas a lo largo....0g Agua destilada……………………………….. Cubra la preparación con lugol 1 min y lave con agua corriente. Cubra la coloración con safranina 1 min..…20 gr Agua caliente…………….100ml.. 1.... Cubra la preparación con cristal violeta 1 min.0g. 7. Agua destilada………………………………100ml. Colorante de contraste ( solución de afranina) Safranina al 2. y decante..... finalmente dejamos reposar durante cuatro días a temperatura de 180.2.. Se repite el lavado de la misma forma.. agitando para una decoloración homogénea.............. Se cubre con cristal violeta se deja actuar 2 min. filtramos y usamos Cristal violeta Cristal violeta……………………………. 2..10ml.. KI…………………………………………….. Decolore con alcohol etílico por 30 seg. 6.com For evaluation only...... Se lava con agua cuidadosamente... Se observa al microscopio con el objetivo de inmersión.. *Mordiente: Acido tánico………….. y lave con agua corriente...... 23 . siendo además los causantes de las mayores pérdidas económicas agrícolas....5g Etanol a 97%.. Se añade el mordiente filtrado y se deja de 1 a 5 min. Debe de ser un cultivo de 24 horas....... TINCION DE FLAGELOS DE BACTERIAS. Se prepara un frotis y se seca al aire.80ml Posteriormente adicionamos 15 ml Trióxido de Cromo al 2. 5... Se seca la preparación al aire...

Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. 24 . los oídos. Se considera que todas las plantas son susceptibles al ataque de por lo menos un hongo. 1. encontrándolos en rangos de temperatura que van desde los 0ºC hasta los 50º . Pueden desarrollarse en condiciones climáticas muy variadas. Extienda el micelio y agregue una gota de azul de metileno. carentes de clorofila. Porta y cubreobjetos Mechero o lampara de alcohol Caja de Petri Agujas de disección Tejidos vegetales enfermos Azul de lactofenol azul de metileno rojo congo lugol preparaciones de hongos cultivos de hongos Azul de algodón PREPARACIONES TEMPORALES DE HONGOS 1. en donde se encuentran dispersos sus núcleos verdaderos. estos últimos solitario o agrupados en sinemas. esporangios y conidios. 3. son microscópicos y macroscópicos. MATERIALES Y METODOS. Con una asa estéril (o una aguja de disección ). ya que se encuentran en el suelo. uni y pluricelulares. Están constituidos por células redondas u ovales solitarias o en plasmodios. En algunos hongos el micelio llega a formar pseudotejidos. Los hongos pertenecen al reino Fungi. indicando los nombres de las estructuras.y basidios. y muchas son afectadas por un gran número de estos organismos. Si las hifas están separadas en celdas. Entre las estructuras de reproducción asexual están . así como las mitocondrias. Prosénquima y pseudoparénquima . ribosomas. Elaboración de preparaciones temporales y permanentes de hongos. Observación de preparaciones permanentes de hongos.com For evaluation only. 2. Algunas estructuras de reproducción sexual son las oosporas. tome una pequeña muestra de hongos y colóquela en un portaobjetos con una gota de agua destilada. peritecios y cleistotecios. clamidosporas. se dice que el micelio es septado.foxitsoftware. y si el protoplasma es continuo en las hifas el micelio es cenocítico. ACTIVIDADES. retículo endoplásmico y gránulos de sustancias de reserva. esporodoquios. que nacen directamente de una espora de resistencia o en basidiocarpos. 2. Cada hifa está constituida por una pared celular que protege a la membrana celular y al contenido protoplasmático. ascas -libres o en apotecios. utilizando diferentes técnicas de tinción. El hábitat de los hongos es muy amplio. en el agua y dentro o sobre plantas y animales. cuyo conjunto se denomina micelio. acérvulos o picnidios. o más frecuentemente por estructuras alargadas y ramificadas llamadas hifa. Esquematización de lo observado.

Windham.com For evaluation only. sustituyendo colorantes. Coloque el cubreobjetos y por un extremo agregue una gota de rojo congo*. se seca se vuelve a esterilizar y se entrega al laboratorista en las mismas condiciones en que lo recibió para llevar a cabo la práctica MICROCULTIVO Introducción. usando lactofenol en lugar de agua para colocar el micelio. IMPORTANTE. • Conocer la técnica de microcultivo para la caracterización de estructuras somáticas y reproductivas para identificar morfológicamente a los hongos fitopatógenos. es la identificación del agente causal y una herramienta más para cumplir con este objetivo. Por ejemplo esta técnica resulta sumamente útil para aquellos hongos en los que es difícil observar la formación de los conídios sobre los conidióforos y la forma y estructura de éstos. su crecimiento y esporulación en todos sus detalles y así tener elementos morfológicos de estructuras somáticas y reproductivas completas para así poder hacer la identificación con mayor confiabilidad y conocer a los hongos como agentes causales de enfermedades en los cultivos de importancia agrícola Dhingra. Al final de cada práctica todo el material biológico y medios de cultivo: Antes de lavarlo se esteriliza. diferenciación de las estructuras reproductivas asexuales y sexuales. permita que se difunda y observe al microscopio. micelio. and Windham. 2. Realice una preparación temporal de hongos. se desprenden y/o se rompen. el siguiente paso para cumplir a cabalidad con el segundo postulado de Koch.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. and Sinclair(1985) Trigiano. con esta técnica se obtienen las distintas fases del ciclo de vida de los hongos. Mediante este método se puede observar bajo el microscopio. que va de germinación de la espora. • Esta técnica se puede seguir. Se debe dar un manejo de tiempos en el desarrollo de los hongos para poder observar las estructuras desde el inicio de su formación. TINCION CON ROJO CONGO. formación del tubo germinativo. al efectuar el preparado correspondiente. hifas. los desechos sólidos se colocan en el lugar indicado para estos.. 25 . (2004) Objetivo. 3. porque. Una vez que se tiene el resultado de las diferentes técnicas de aislamiento como lo es la obtención de la cepa pura. se lava. en caso que este agente causal sea un hongos como en la mayoría de las enfermedades que limitan la producción agrícola: es la técnica de microcultivo.. Coloque el cubreobjetos y observe al microscopio. 1.foxitsoftware.

Aguja de disección.foxitsoftware. Agua estéril.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Materiales y Métodos. cubreobjeto y triangulo de vidrio (estéril). Caja de Petri estériles con PDA. Pipeta. Recipiente con alcohol al 96%. Papel parafí 26 . Bisturí. Caja de Petri con portaobjeto. Pinzas de disección. Puntas. Caja con cepa pura.com For evaluation only.

1985. New York. G. M. Toriello.3 M84 Ø Narayanasamy. 2004. C. C. and Foster. and Windham. C. and Sinclair J. R. Bills.B. 27 . este paso se realiza en el interior de una campana de flujo laminar preparada para trabajar bajo condiciones asépticas 2. QK600. S.este portaobjetos debe de estar sobre el triangulo de vidrio 3.. 2004. C. SB 731 N37.. Washinton. C. 777pp.. 72 y 96 hrs. M. B. SB731 N37 Ø Schots. SB733 M63 Ø Trigiano.B. C A B International. A. A. El crecimiento del hongo se detiene cada 24.. en el fondo de la cámara de microcultivo para mantener la humedad. 355 pp SB 732. S. Se agregan 2ml de agua estéril. respectivamente BIBLIOGRAFÍA Ø Dhingra. M. London. sin mojar el área de crecimiento del hongo. Dewey.B. 7.. Basic Plant Pathology Methods. P. CRC Press.. 2002. Ø Muller. SB732. y detener su desarrollo a la 48. uno de los cuadros de PDA se transfiere al portaobjetos que esta en la cámara de microcultivo .Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. G. D. Concepts and Laboratory. Plant pathogen detection and disease diagnosis. Plant pathology. Modern assay for plant pothogenic fungi. procurando que quede bien centrado. Plant pathogen detection and diseases diagnosis.com For evaluation only. N. Biodiversity of fungi inventory and monitoring methods. and Oliver. 5. M. D. Los pasos 1-5 se llevan a cabo en el interior de una campana de flujo laminar o en mesas de trabajo en condiciones asépticas 6. T. Boca Raton. 2001. Marcel Dekker Inc.56 P53 Ø Narayanasamy. 267 pp. QK 603 M55. M. UAM IB UNAM. y Ulloa. 1994..B. P. Con la aguja de disección estéril o con una asa bacteriológica estéril se lleva el inóculo a las orillas superiores e inferiores del cuadro de PDA 4. 518 pp. con la ayuda de un bisturí estéril. R. 2001. 413 pp. T. Marcel Dekker Inc.. O. Windham. 8. Elsevier Academic Press. 518 pp.foxitsoftware. Dentro de la cámara de flujo laminar. 1. Se coloca el cubre objetos sobre el cuadro de PDA inoculado. CRC Press. F.5 D45 Ø Mier. se repiten los pasos del 1 al 7 para mas microcultivos. Se sella el dispositivo de microcultivo con papel parafilm y se rotula..C. 90pp. Hongos microscópicos saprobios y parásitos: Métodos de laboratorio. Con un bisturí estéril se cuadricula el medio de cultivo de la caja de Petri con PDA en cuadros de aproximadamente 1 cm2. F...

Hay que evitar que quede invertida la escala (Ver Fig 1).. las claves que usa para la identificación de los diferentes grupos de hongos fitopatógenos están en función del tamaño de las estructuras somáticas y de reproducción de este grupo de fitopatógenos.Sobre la platina del microscopio se pone el micrómetro del objeto similar portaobjeto como si fuese una preparación. clestotecios entre otras.. apotecios. o de las colonias que hayan formado sobre las placas en medios de cultivo. óptico para su identificación morfológica Material. Metodología. Preparaciones permanentes y/o temporales de estructuras fitopatógenos. 28 . Calibración de los lentes objetivos. Fig 1. Por ejemplo si se habla de hongos fitopatógenos las estructuras que se miden para identificarlos son: picnidios. Un micrómetro ocular. sinemas. peritecios.A.com For evaluation only.Se coloca en el ocular del microscopio óptico el micrómetro ocular –aunque a menudo se trabaja con el ocular micrométrico permanente puesto en el microscopio. Un microscopio óptico. y B. 1.Escala de la reglilla ocular micrométrica 2.foxitsoftware.Colocación de la reglilla ocular. estructuras somáticas y reproductivas de importancia taxonómica de agentes fitopatógenos con el microscopio. acérvulos. La The American Phytopathological Society en todas sus obras de enfermedades de los cultivos agrícolas. La identificación del agente causal es básica para precisar el diagnóstico y así poder establecer el mejor método de control para estas limitantes biológicas en la producción agrícola.. MEDIDA DE ESTRUCTURAS DE AGENTES FITOPATÓGENOS CON MICROSCOPIO ÓPTICO Introducción. • Que el alumno aprenda a calibrar y medir células. Objetivo.. esporodoquios.. Para identificar a un agente fitopatógeno y cumplir cabalmente con el segundo postulado de Koch de además de los datos correspondientes al aspecto de los síntomas que hayan causado en su hospedante. Un portaobjetos micrométrico. de los datos morfológicos que hayan resultado de la técnica de microcultivo es necesario saber las medidas de las estructuras somáticas y reproductivas que se observan en el microscopio óptico para tener una identificación confiable del agente causal.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.

con ese ocular y objetivos respectivamente. en el otro extremo de las reglillas se observa cual de las 100 líneas de la reglilla ocular coinciden con otra de la reglilla del portaobjetos. el • 29 . Esta operación se deberá repetir cuando se cambie de microscopio o de objetivos para evitar errores. Fig 2..Moviendo la platina se observa a través de microscopio con ambas reglillas colocadas se les puede ver superpuestas en el campo visual. Puesto que las rayas del portaobjetos aparecen tanto más gruesas cuanto mayor son los aumentos. y se puede saber cuantas líneas del micrómetro ocular concuerdan con cuantas lineas del micrómetro del objeto se hace coincidir el margen de una raya del micrómetro ocular con una del micrómetro del objeto. es obvio que esta calibración es para este microscopio.009 mm = 9 µm y este valor es el que utilizamos para definir el tamaño de cada estructura que se mide.. la reglilla ocular se encuentra graduada del 0 al 10 a un lado la reglilla del objeto con 100 divisiones.Moviendo la platina se hace coincidir el margen de una raya del ocular micrométrico con una del portaobjetos micrométrico. la superposición de las líneas ha de ser siempre al comienzo del margen exterior de éstas.Escala de la reglilla portaobjeto 3. En el campo visual. se les puede ver superpuestas en el campo visual. Y se hacen los cálculos correspondientes. • Ejemplos 1: Se hace coincidir los ceros de ambas reglillas (ver imagen 1) y se observa que en el otro extremo de las reglillas el 100 de la reglilla ocular coincide con el 97 de los trazos de la reglilla del objeto. se hacen coincidir ambas reglillas en el cero.. Puesto que cada división de éste equivale a 10 µm.97 mm. como cada línea del micrómetro del objeto corresponde a 10 micras.com For evaluation only.Cuando se observa a través del microscopio con ambas reglillas micrométricas colocadas. una línea del micrómetro ocular es equivalente a 0. 3. por lo tanto.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.Vista simultánea del ocular y de la reglilla micrométrica 4.foxitsoftware. es decir 0. Ejemplo 2: Se hace coincidir los ceros de ambas reglillas (ver imagen 2) y se observa que siete divisiones del ocular micrométrico coinciden con dos divisiones del portaobjetos micrométrico.. Ver figura 3 Fig 3. y se puede saber cuántas líneas del micrómetro ocular concuerdan con cuántas líneas del micrómetro del objeto..

1984.. puesto que el cambio altera la distancia mecánica y el valor del micrómetro depende de ella. • Ejemplo 3: Si la estructura del hongo se extiende a lo largo de 16 líneas y cada una de ellas vale 9 micras.foxitsoftware. F. Edición. M. 2ª. según se explicó antes. Barcelona.com For evaluation only.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. E. 30 . México. FES Zaragoza UNAM. Estado de México. Omega editores. H y R. BIBLIOGRAFIA Barrera. 2. El Microscopio Óptico. 1999. Edición. de manera que se puede colocar una célula o estructura celular cualquiera.. 148 pp. Edición. Barcelona. D. y A. en este caso. por tanto el tamaño total de esta célula es de 16 x 9. 1972. Técnicas para el Laboratorio de Biología. México.Vista simultánea del ocular y de la reglilla micrométrica. D. Barthelemy. R. E. Mateu. y se cuenta el número de divisiones de la escala comprendidas en la longitud y en el ancho de dicha estructura.Iztacala-UNAM P y V editores. 4ª. Jover Ediciones. R.Medición de ejemplares y estructuras de micromicetes. 96 pp. España. Guía de los hongos microscópicos. es decir 144 micras. Muntañola. una división del ocular = 20/7 = 2. J. ____________.. Lee.Una vez que se ha cuantificado el valor de cada línea en la reglilla del ocular ( 9 y 2. 1. México. E. Fig 4. CECSA editor. valor de cada división del ocular se obtiene mediante una simple regla de tres: 7 divisiones del ocular = 20 µm... 167 pp. donde coinciden la primera línea de las dos reglillas y la línea 2 de la reglilla portaobjetos con la siete de la ocular b).8 µm en los ejemplos). Atlas de Microscopia. se hace coincidir una raya de la escala con los márgenes de la estructura fúngica elegida. F.Si se llega a cambiar el objetivo por otro menor aumento se debe repetir la operación para encontrar nuevos valores en la reglilla. B. 1ª. Cárdenas 1997 El microscopio óptico FES. 1996. esta medición se puede realizar en un microscopio mono o binocular. pero en este último caso se tiene que mantener inalterada la distancia interpupilar. España. 86pp.8 µm (Ver Fig 4). Dawson. México. se puede retirar el portaobjetos micrómetro y en su lugar se puede colocar un portaobjetos normal con el espécimen a medir y se deja colocado el micrómetro ocular.

Añadir 400 ul de Buffer AP1 y 4 ul de RNAsa solución stock (100 mg/ml) para unmáximo de 100 mg (peso fresco) o 20 mg (peso seco) de tejido vegetal y agitar vigorosamente en vortex. 9. AISLAMIENTO DE DNA FUNGICO DE CULTIVOS PUROS CON DNeasy Plant Mini Kit (esta práctica solo se realizara sí los alumnos seleccionan a hongos fitopatógenos en su seminario) OBJETIVO: Obtener DNA de cultivos puros de hongos fitopatógenos.Incubar la mezcla por 10 minutos a 65o C.Añadir 1..Añadir 130 ul de buffer AP2 a el lisado.com For evaluation only.... Mezclar dos o tres veces durante la incibación invirtiendo el tubo.Tranferir el flujo del paso 5 a un nuevo tubo (no abatecido) sin provocar disturbios o perturbar el peller de desechos celulares.5 volúmenes de buffer AP3/E a el lisado clarificado y mezcle por pipeteo.Pesar directamente en un mortero 100 mg de tejido fungico y macerarlo con nitrógeno líquido hasta un polvo fino usando el pistilo. transferir el tejido en polvo a un tubo eppendorf permitiendo que el nitrógeno se evapore impidiendo que las muestras se descongelen.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Centrifugar por 1 minuto a = a 6000 xg corresponde a = 8000 rpm para la mayoría de las centrífugas y desechar el fluido. INTRODUCCIÓN: MATERIALES Y METODOS 100 g.. Opcional centrifugar el lisado por 5 minutos a alta velocidad 5. Desechar el fluido y reusar el tubo colector en el paso 11. 8. incluyendo el precipitado que pudo haberse formado a el DNeasy mini spin colum sentado en un tubo colector de 20 ml (abastecido). 2. tejido vegetal Mortero con pistilo estéril Tubos eppendorf Hielo Nitrógeno líquido Espátula Pipetas de plástico Gradillas eppendorf y de unicel Balanza Baño maría Centrifuga Vortex Reloj Autoclave Horno Pipetas de 10 ul Pipetas de 100 ul Pipetas de 1000 ul DNeasy Plant Mini Kit 1. mezclar e incubar por 5 minutos en hielo..foxitsoftware. 7. 31 . 3.-. 4.Colocar la DNeasy a un nuevo tubo colector de 2 ml (abastecido) añadir 500 ul de buffer AW a el DNeasy colum y centrifugar por un minuto a = 6000 xg ( = 8000 rpm).Aplicar 650 ul de la mezcla del paso 7. Continúe inmediatamente con el paso 2..Aplicar o transferir el lisado a el QIA Shredder spin column (tubo lila) sentado en un tubo de 2 ml y centrifugar por 2 minutos a máxima velocidad.. 6.

b) Cubrir el gel con el amortiguador TAE1X hasta que quede sumergido a 4 mm de profundidad respecto a la superficie del TAE. 11. cuidar de no formar burbujas en la placa de gel. marcador XIV se usa para DNA de banda pequeña.foxitsoftware. CAB.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.. Se colocan directamente del tubo al pozo.com For evaluation only. Incubar por 5 minutos a temperatura de la boratorio y después centrifugar por un minuto a = 6000 xg (= 8000 rpm) para diluir.Transferir el DNeasy colum a tubos de cetrífuga de 1. se si formaran. 3 µl para un pozo y 6 µl para otro pozo. P27.. P26. S27.Repetir la dilución (paso 12) como esta descrito. una vez que se ponen las muestras en el gel.Añadir 500 ul buffer AW a el DNeasy colum y centrifugar dos minutos a una máxima velocidad para secar la membrana. EQUIPO Y SUSTANCIAS Recipiente de unicel con hielo Marcador λ 50 ng/µl se usa para DNA de banda grande o 3 µl para un pozo del gel y 6 µl para otro pozo. Se colocan directamente del tubo al pozo.5 ml o de 2 ml (no abastecidos) pipetesr 100 ul de buffer AE precalentado (65oC) directamente en la membrana de DNeasy. el marcador se pone en los pozos de los extremos. el marcador se pone en los pozos de los extremos delas muestras. retirarlas con la pipeta de 10 µl 32 . Muestras de DNA de productos DNeasy en este caso. son las siguientes muestras: P16. TA29 (10 µl por muestra) Tinte para electroforesis 2 µl para cada una de las muestras de DNA Gradilla Gel de agarosa en TAE1X (ver elaboración de gel de agarosa) Rotulador Papel de parafilm rotulado con el nombre de las muestras (diseño de corrimiento) en el orden que se colocan en el pozo del gel. 13. O bien. RESULTADOS ELECTROFORESIS PARA DE DNA DE HONGOS FITOPATOGENOS Kit (esta práctica solo se realizara sí los alumnos seleccionan a hongos fitopatógenos en su seminario) MATERIAL. Micropipetas de 10 µl Puntas blancas estériles Pipetas de plástica Centrífuga Equipo de electroforesis Analizador de geles Flúor-S - - PROCEDIMIENTO a) Colocar el gel de agarosa dentro de la cámara de electroforesis.. S28. S26. P25. 12.

C... 2001. rotular en el siguiente orden las muestras de DNA y marcadores. Plant pathogen detection and disease diagnosis.. Este mismo procedimiento se lleva a cabo para cada una de las muestras de ADN. Dewey. evitando derramarlas en los pozos adyacentes.. d) Centrifugar las muestras de DNA a alta velocidad durante 5-10 segundos y se colocan en un recipiente de unicel con hielo. S. Basic Plant Pathology Methods. encender la fuente deponer a 75 voltios y dejarla que corra durante 40-45 minutos. New York. C.. London..B.. CRC Press. C. R. 1985.B. 355 pp SB 732. (Se forma en el papel una gota de 12 µl de cada muestra) g) Los marcadores se aplican directamente del tubo que los contiene. M 3 µl 50 ng/µl P16 Todas P25 las P26 P27 S27 10 µl S26 M +2 µl 6 µl de de 50 DNA tinte ng/µl S28 CA8 TA29 muestras llevan f) Colocar en el papel parafilm 2 µl de tinte y en esta gota formada en el papel . se colocan los 10 µl de DNA de la correspondiente muestra. SB731 N37 Ø Schots. Concepts and Laboratory. T.56 P53 Ø Narayanasamy. R. Asegurarse de que los electrodos de la tapa tengan el rojo al frente y el azul atrás en la tapa y en la consola de mando el rojo (+) en la parte de arriba y azul (-) en la parte de abajo. and Sinclair J. M. P. como lo indica el esquema h) En el mismo orden. 2001. colocar cuidadosamente las muestras de ADN tenidas (gotas) en los respectivos pozos de gel. Modern assay for plant pothogenic fungi. Marcel Dekker Inc. and Oliver. Plant pathogen detection and diseases diagnosis. 267 pp. i) Tapar la cámara de electroforesis. Washinton. en un extremo se colocan 3 µl a una concentración de 50 ng/µl y en el otro extremo se colocan 6 µl a la misma concentración. 518 pp. P.foxitsoftware. D. e) En un trozo de papel parafilm.. 1994. O. 413 pp. SB733 M63 Ø Trigiano. c) Sacar las muestras de DNA del congelador y descongelarlas a temperatura de laboratorio en una gradilla. CRC Press. 2004.5 D45 Ø Narayanasamy. M. Resultados Bibliografía Ø Dhingra.B. D. Marcel Dekker Inc. Plant pathology. and Windham. A. SB 731 N37 33 . N. Windham. F. 518 pp. A. B. C A B International. SB732.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.com For evaluation only. Boca Raton.C.

4. Hemicycliophora. Heterodera y Tylenchus. etc. Generalmente se ubican en el parénquima cortical. de azúcar +100 ml de agua) 34 .Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Esquematización de lo observado. los cuales pasan toda su vida en el suelo y se alimentan externamente de las raíces de las plantas hospederas. ACTIVIDADES. 3. Ditylenchus. Otros géneros pasan una parte de su vida como endoparásitos y la otra parte la pasan en el suelo que se encuentra alrededor de las raíces que parasitan . en donde permanecen o migran hacia otros órganos de las plantas. Plástico de 1 m 2 Probeta 2 cubetas Tamices de 100. Los nemátodos son gusanos cilíndricos con cuerpo alargado y delgado con simetría bilateral. por ejemplo. 1. 100 y 325 mallas /cm2 Pizeta Vasos de precipitados Preparaciones permanentes Muestra de suelo Tubos de centrífuga Centrífuga Agitadores Cajas de petri pequeñas Caolín Solución azucarada (55 gr. Observación de nemátodos vivos. Anguina. después de los insectos.Cricononemoides. 2. Su cutícula es lisa. CUARTA PARTE: NEMATODOS Los nemátodos son organismos fitopatógenos que pertenecen al reino Animal y son probablemente los organismos pluricelulares más abundantes en el mundo. indicando los nombres de las estructuras.5-1 mm. Algunos ejemplos de estos son Meloidogyne. produciendo lesiones internas en los tejidos vegetales. a estos se les conoce como nemátodos semiendoparásitos. Observación de preparaciones permanentes y temporales de nemátodos. no segmentados y carecen de patas u otros apéndices.com For evaluation only.foxitsoftware. Cacopaurus. Los nemátodos fitopatógenos presentan géneros ectoparásitos. Aphelenchoides. nervioso. MATERIALES Y METODOS. Extracción de nemátodos . o bien llegan hasta el cilindro central de las raíces hospederas. Presentan todos los sistemas fisiológicos principales de los animales como lo son el sistema excretor.etc. reproductor y digestivo. Durante el ciclo de vida de los nemátodos se llegan a presentar cinco estados y cuatro mudas. por ejemplo . Otros géneros son endoparásitos. Su tamaño fluctúa entre unas cuantas micras hasta 0. En algunas especies de nemátodos la primera y segunda etapa larval no puede infectar a las plantas y sus funciones metabólicas son realizadas a expensas de la energía almacenada en el huevecillo.

6. EXTRACCION DE NEMATODOS POR EL METODO DE TAMIZADOCENTRIFUGADO 1. a 2900 rpm. Se pasa el sobrenadante por el tamiz de 325 y se lava perfectamente bien hasta eliminar por completo la solución azucarada. 15. 5 y se pasa al mismo vaso de precipitados. procurando que el ángulo que forma el chorro de agua con el tamiz sea lo más agudo posible. etc. La arenilla recogida se distribuye en los tubos de centrífuga y se le agrega un poco de caolín a cada tubo. 35 . 16. Esta operación se repite 2 veces más. Se centrifugan durante 5 min.foxitsoftware. La arenilla que quedo en el tamiz de 325 se recoge en un vaso de precipitados con una pizeta. a 2900 rpm. Se agitan bien. Se recoge el sedimento con una pizeta y se pasa a una caja de petri pequeña con un poco de agua. Esta operación se repite dos veces más. 5. 200 y 325 sobrepuestos y se recoge en la cubeta B. 4. 7. En una probeta o vaso de precipitados se ponen 200 ml de agua y se agrega suelo hasta que la marca del agua llegue a 400 ml. se deshacen los terrones y se retiran las basuras. 14. 13. se deshacen los grumos y se vacía el sobrenadante en los tamices de 100. Esta mezcla se vacía en una cubeta A con un poco más de agua. sobre todo si se desea hacer un estudio cuantitativo. Se coloca la muestra de suelo sobre un plástico. 12. Al sedimento se le agrega la solución azucarada y se agita bien. El agua que se recogió en la cubeta B. 2. 11. Se remueve bien la tierra para homogeneizarla. piedritas. Se centrifugan durante 3 min. se vierte a través del tamiz de 325 y se recoge en la cubeta A. 10. raíces.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. 8. Se tira el sobrenadante. 3.com For evaluation only. Se observa al microscopio. La arenilla que quedó en el tamiz se recoge con una pizeta de la misma forma que se mencionó en el núm. nunca recto. ya que de esta forma el agua ayudaría a pasar a los nemátodos a través de la malla del tamiz y los dañaría. Esto se hace con el objeto de tener una referencia del tamaño de la población que se encuentra en 200 ml de suelo. 9.

siendo los de vida libre los que más se mueven y los que más abundantes resultan en este método de extracción MATERIALES. Cómo están organizadas las células de los hongos? 4. por lo que este método funciona solamente para nemátodos muy móviles. Describa la morfología de la que obtuvo su colonia de bacterias. de diámetro Una pinza Mohr CUESTIONARIO. 1. EXTRACCION DE NEMATODOS POR EL METODO DE EMBUDOS DE BAERMAN Este método se basa en los principios de movilidad de los nemátodos y de mayor densidad de estos que el agua. Se emplea el caolín para sedimentar a los nemátodos y poder eliminar el agua sobrenadante de la muestra. En qué se diferencian bioquímicamente las bacterias Gram (+) y las Gram( -)? 3 . Indique si es Gram (+) o Gram (-).Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. normalmente los nemátodos parásitos tienen escasa movilidad. Embudos preferentemente de vidrio de 15 cm. Este método de extracción brinda la oportunidad de obtener casi todos los nemátodos del suelo de una forma rápida.foxitsoftware. hace que estos floten y queden suspendidos en la solución. mencionando la 36 . 2.com For evaluation only. La solución azucarada. Señale 3 ejemplos de hongos fitopatógenos de cada clase de hongos. como tiene una gravedad específica mayor a la que presentan los nemátodos. El suelo retenido en los tamices se centrifuga para separar a los nemátodos de las partículas orgánicas mediante la flotación de los mismos en una solución de gravedad específica mayor de la que poseen los nemátodos.

355 pp SB 732. enfermedad que provocan. 37 . Plant pathology. 6. 238 pp. 1994.3 M84 11..B. 1997. Elsevier Academic Press. Sydney. C A B International. QK603 A66 3. Elsevier academic Press. and Windham. French. Costa Rica.B. 2004. Paris. SARH. Y. R. y Vol 2 492 pp.foxitsoftware. A1 4. APS Press 225 pp. Kálman Vánky. London. UAM IB UNAM. * 1.5 D45 5. New York. Vol 1. New York.C. Illustrated genera of imperfect fungi.B.Agrios.. end Hunter B. SB731 N37 12. M. Washinton. San José. Barne H. P. Muller. G. 518 pp. M. Trigiano.. SB733 M63 13. QK 628 A1 V35. C. 2004. H. APS Press. y Ulloa. La Sintomatología es la rama de la Fitopatología que estudia la los síntomas y los signos que producen los patógenos en las plantas que atacan.. CRC Press. 1. T.C. C.Plant pathology.. T.. M. QK600. León Gallegos. R. N. Toriello. London. san Francisco. Bills. G. CRC Press. MacMillan Publishing Company. Herbert.56 P53 PRACTICA 4 SINTOMATOLOGIA INTRODUCCION.T. Illustrated genera of ascomycetes. 2005. and Hiratsuka.A1 H35 7. Cummins. Bridge. Modern assay for plant pothogenic fungi. 1985. 5. C. and Sinclair J. 1981. CAB. A. Tokyo. L. Fourth edition. T. 777pp. International. Uredinales (royas) de México. Qué importancia tienen las técnicas de tinción de microorganismos? BIBLIORAFIA. Basic Plant Pathology Methods. 1987. A. Dhingra.. Boston. F.I. APS Press. El conocimiento de la sintomatología es indispensable para el diagnóstico de las enfermedades. F. B. Second edition. C3 8. C.A. Concepts and Laboratory. QK 623. Heidelberg. Biodiversity of fungi inventory and monitoring methods. 6. R. 10. D. Dewey.R. 2001. I. C. D. 440 pp. SB732.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. QK 603 M55. y Cummins. 992 pp. 267 pp. Third Edition. P. E. Narayanasamy.. Oxford. M. N. 5th ed. S. Boca Raton.com For evaluation only. B. Hanlin. OK 627. Hongos microscópicos saprobios y parásitos: Métodos de laboratorio. Marcel Dekker Inc. M. T. 2002. Amsterdam. En qué se diferencian los nemátodos de vida libre de los fitopatógenos? Señale por lo menos 3 características.. 9. O. Plant pathogen detection and disease diagnosis.. S. 218 pp. San Diego. 263 pp. B. 2002. Applications of PCR in mycology. B. Windham. and Foster.. D. Singapore. G. 1980 Métodos de investigación fitopatológico. and Oliver. M. Illustrated genera of rust fungi. 2003. Illustrated genera of smut fungi. G.. QK 625 D1 B3 2. 1998.. 90pp. C.B. 413 pp. H. Volume 1.B. Mier. Schots. G.

Típicamente cada enfermedad produce varios síntomas característicos. tenemos que los síntomas que ocurren en los órganos directamente atacados por los patógenos se llaman Síntomas primarios. los síntomas se agrupan en necrosis. Identificar los diferentes síntomas y signos que ocurren en enfermedades vegetales. Identificación de síntomas y signos en ejemplares vegetales enfermos utilizando las claves incluidas en la metodología.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. ACTIVIDADES. Desde el punto de vista morfofisiológico. debido a condiciones ambientales favorables al patógeno. hipoplasias e hiperplasias. y se siguen las claves indicadas a continuación. denominado a estos síntomas enmascarados. y un SIGNO es la estructura o evidencia del patógeno mismo. se llaman síntomas secundarios. Otras veces los síntomas no se expresan totalmente. del número de patógenos involucrados. mediante la observación de material fresco y de herbario. a los que aparecen en otro órgano de la planta. etc. provocando síntomas complejos. se dice que un SINTOMA es la manifestación visible de una condición patológica en una planta sensible.com For evaluation only.foxitsoftware. sino como una secuela de este. en cambio. del efecto del medio ambiente. no atacado directamente por el patógeno. Así. En algunas ocasiones los hospederos son atacados simultáneamente por más de un patógeno. Debido a la gran cantidad de síntomas que existen. utilizando la lupa y el microscopio cuando sea necesario. se han agrupado bajo diversas condiciones. dependiendo de diversos factores tales como el lugar de aparición. OBJETIVOS. A dicha serie se le denomina síndrome. producida dentro o fuera de los tejidos del hospedero. 38 . MATERIALES Y METODOS Ejemplares fitopatológicos de herbario Ejemplares fitopatológicos frescos Lupas Microscopios compuestos Microscopio estereoscópico Agujas de disección Navaja Los ejemplares a identificar se observan cuidadosamente. que generalmente aparecen en series subsecuentes durante el curso de la enfermedad.

……………………...1..…………………….2....2... acuosas..........….1... 1.1....... diversos colores y tamaños.....2....1.4..2..1.. por lo que el órgano atacado se seca....1..2.1.3.... quedando con un aspecto arrugado.... seco duro.. PODREDUMBRE Si es antecedida por hidrosis con un reblandecimiento de los tejidos………………. Tejidos verdes.........1...1...…. como pequeñas gotas de agua contenidas dentro de los espacios intercelulares.......... Si se presentan tejidos verdes..... AMARILLEO Presencia de tejidos débiles............1.... NECROSIS.....…. HOLONECROSIS 1..1 AHOGAMIENTO ó "DAMPING-OFF" Necrosis localizada alrededor del borde de la hoja………1.. bien definidas.....………………………....1..2....……………………..........1.....2....1.........1.1.3......………………………………………... debido a la pérdida de la turgencia celular provocada por la carencia de agua..3. Caracterizadas por la degeneración y muerte celular Si se presentan antes de que ocurra la muerte celular. MOMIFICACIÓN 1. Marchitez y caída de las plantitas de almácigo. dejando pequeños agujeros.... 1.2.......1...2........ PLESIONECROSIS Si se manifiestan hasta que las células y los tejidos mueren. en ocasiones rodeadas por un borde púrpura o de algún otro color..... Estas acumulaciones de líquidos provienen de células que han sufrido daños en sus membranas celulares.2..... 1..1..... MANCHAS Manchas necrótica que posteriormente se rasga y cae.....Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.1...2.1....…....... flácidos.....2. HOLONECROSIS Si se presentan en tejidos de almacenamiento.1.....1....1..... MARCHITEZ Manchas traslúcidas.....1....1.....2..2......1.2.1....1..2.TIRO DE MUNICION 39 ...2....... 1.2..2. CHAMUSCADO Necrosis extendida en toda la lamina foliar de forma irregular……........2... HIDROSIS 1. casi siempre por el taponamiento de los vasos conductores a causa de los patógenos...........2..2.............1. como consecuencia de la necrosis del cuello del tallo.2...... Si se presentan tejidos leñosos...2.Tejidos de almacenamiento Los tejidos sufren rápidamente una pudrición. El agua es eliminada rápidamente de los tejidos.......foxitsoftware..5...1.... PUDRICIÓN BLANDA......com For evaluation only........ TIZON Zonas de tejido necrótico. PODREDUMBRE 1.....1.........2. PLESIONECROSIS El tejido foliar toma coloraciones amarillentas debido a la destrucción de la clorofila..2...

..........3.. AGOSTAMIENTO Necrosis extensiva que provoca la caída de los frutos……………………………… ... RONCHA ó ERUPCION Manchas necróticas muy pequeñas extendidas en todo el órgano...2...............BANDEADO Repentina desecación debilitación y muerte de toda la hoja debido a la acción indirecta de la actividad del patógeno.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.……...... de consistencia acuosa.... SANGRADURA Exudados de consistencia viscosa (gomosa).......3...3. GOMOSIS 2.........2.......... Lo que ocasiona que las hojas estén muy juntas.11...........2................... generalmente rodeado de un callo de tejido sano.....1.......2........ HIPOPLASIAS...........2................2.....1... debido a la no formación de clorofila.....2...... ESCALDADURA Muerte repentina de brotes o yemas foliares………..... Mancha necrótica sobre la cual hay crecimiento micelial obscuro…………........ Debilidad para alcanzar un tamaño normal...9...... …………………...2.1........generalmente en frutos ……………….... generalmente después de la hibernación..3.4........5....2.............1....12.....2.3. 1... .....foxitsoftware........... Síntomas caracterizados por la debilidad de órganos o plantas para desarrollarse completamente...2... en las regiones intervenales de la lámina ......2.4....................8.......3......10... generalmente coloreados vivamente.. ABIGARRADO Zonas alargadas en necrosis...............1. ........ a lo largo de venas y tallos…..... DESGRANAMIENTO 1.………....2.2.2.com For evaluation only.2.......... 1............2.……1...................……..2...2. 1.QUEMADURA Necrosis epidérmica que da como resultado un blanqueado de la epidermis y de los tejidos adyacentes en el fruto y hojas...........2.. Tejidos leñosos Necrosis restringida a los tejidos corticales del tallo o raíz..6................. ARROSETADO Supresión completa de color en hojas o frutos.....2...1.....3.....2....1..1.........2..2.. CLOROSIS Moteado de colores verdes y amarillos o bien de tonos verdes....2.1....2......7......13.CANCER(CANCRO) Necrosis extensiva que se origina en el apéndice de brotes corre hacia su base....BLANQUEO Las plantas adquieren una coloración amarillenta.....2..2..... MOSAICO 40 ..1. ENANISMO Crecimiento escaso de los entrenudos.. RAYADO Zonas necróticas alargadas.......MUERTE REGRESIVA Exudado de tejidos leñosos.....

elevadas.. generalmente encima de un área constreñida.. HIPERCROMIA 41 .…...1.....8.4... provocando que estos tomen forma aplanada.......3..... 3. Síntomas con desarrollo excesivo.......1. nódulos ó agallas) Desarrollo de órganos adventicios alrededor de un punto local..... SUPRESION (EXTINCION) Tono amarillento blanquecino... 3..1...3.……………….. extendida……………………………. ásperas.... HIPERCROMIA Los órganos se desarrollan fuera de lugar o con otras formas…3..2..3. Debilidad completa de la planta para desarrollar algún órgano…. en forma de pequeñas lesiones. formadas por células con paredes suberizadas……………………………..3.2... GIGANTISMO Síntomas con acumulación excesiva de pigmentos………… 3.. o bien por un desarrollo precoz de los órganos.. . HIPERPLASIAS..1..... Síntomas que resultan de un desarrollo excesivo en tamaño y color.com For evaluation only.. GIGANTISMO.... FASCIACION Desarrollo continuado después de que se alcanza el desarrollo normal..... PROLIFERACION Crecimiento de tejido sano.…………...1....1....3..Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.……………………………………………..2..1. Se da un torcimiento de los brotes o enrollamiento de las hojas por crecimiento excesivo de una parte del órgano……….9........ provocada por la acumulación excesiva de agua.....…. que se tornan quebradizos (aparece en plantas mantenidas en la obscuridad). 3.... METAPLASIA 3.1. de algún órgano de la planta o de la planta completa.6.1.1.2..6. SARCOSIS Hinchazón localizada.1... RIZAMIENTO (VERRUCOSIS) Sobrecrecimiento de tejido epidérmico..2..7..3. COSTRA (ESCARA) Marchitez causada por hinchamientos de las células epidérmicas y subepidérmicas. los tallos con crecimiento excesivo.3. .…………………….1.. FASCICULACION "ESCOBA DE BRUJA" Crecimiento laminar de tallos u otros órganos cilíndricos. proviene de la difusión del patógeno dentro de las áreas adyacentes al tejido sano.foxitsoftware..…………...5.3..... CALLO 3.3. que envuelve a órganos completos…………………………. INTUMESCENCIA Hinchazón provocada por la acumulación excesiva de material nutritivo. en ocasiones acompañado por enanismo.…………..7...TUMEFACCION (tumores. ETIOLACION 3.. generalmente rodeando cánceres. como respuesta a una lesión.

..3..FILODIOS Desarrollo de hojas juveniles en plantas maduras………..... o bien......3..com For evaluation only..........3. localizado en el envés de las hojas. ANTOCIANESCENCIA Coloración cobriza............... la cual puede estar cubierta por una membrana....... Estructura de hongos -micelio y conidios. algunas veces por deficiencia de potasio... son circulares en dicotiledóneas y alargadas en monocotiledóneas.2. con apariencia de fieltro suave.... con micelios......2....3.. casi siempre se observa en el haz una mancha en correspondencia...... 4... ROYA BLANCA O MAL DE LA CAL Presencia de pústulas que contienen una gran cantidad de esporas de uredinales. VIRESCENCIA Coloración púrpura resultante del desarrollo excesivo de antocianinas……………. 3. en pequeños manchones o de forma continua.............3.1.. Todos son producidos por Erysiphales....6........ En algunas ocasiones se observan conidios y cleistotecios.......... debido a la producción y acumulación de ésta en los órganos………….. esporangios.......2....3. SIGNOS Se observa el crecimiento vegetativo del hongo... etc.... 4.………………………………………..2.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www..…. puede estar desnuda…………. de color blanco.. CARBON O HUITLACOCHE. frutos o ramas.1...... Coloración verdosa........ MILDIU O CENICILLA VELLOSA Se caracteriza por la presencia de pequeñas pústulas o ampollas subepidérmicas... como un micelio de color blanquecino o grisáceo..3.. Llegan a formar sobre la epidermis de las hojas.3.2.. FUMAGINA U OLLIN 42 . BRONCEADO 3.4.foxitsoftware.....…………………... pudiendo ser anaranjadas.. 4.3......... 3... compuesta por teliosporas de Ustilaginales.. producidos por Meliolaceas o Capnodiaceas... constituidas por fructificaciones de Albugináceas. 3...4.4......de color oscuro....... Su color varía del amarillo al café oscuros. JUVENILODIOS 4.. ROYA Se presenta una masa de color negro.3. METAPLASIA Desarrollo de órganos en posiciones anormales....... en tejidos normalmente carentes de clorofila. Son producidos por Peronosporales…………......…..1. HETEROTOPIAS Desarrollo de Pétalos u otros órganos florales en forma de hojas. resultado de diversos procesos...3.5.......... OIDIO O CENICILLA POLVOSA Se observa el crecimiento del hongo. verdaderas costras………………………………………4...

E. 7. insect. Hull. P-A Signoret. Tokyo.L.9.T. USA. picnidios. Compendium of tobacco diseases. R. 4. U. Se presentan casi siempre sobre manchas foliares o de frutos. amarillento u otros………………………………………………………………4. Boston. A. Alan. R. Brunt. 1990. Academic Press. Agrios. * 6. 857 pp.. 374 pp. Matthews´ Plant Virology. Sutic.B...R. Tosic. Son exudados bacterianos. E. Enfermedades de Cucurbitaceas: Observar. 5. 1980. R. D. San Francisco. 1996.A. Amsterdam. St. M. Plant Virology. Minn. CAB International Australian Center for International Agricultural Research (ACIAR). Toronto. Centro Internacional de Agricultura Tropical Cali Colombia.. London. 1991. Shew H. Dragoldjub D.S. Descriptions and List from the VIDE Database. U. New York.* 2. Tokyo. Compendium of cucurbit diseases. Heidelberg. Dominique. R. Fourth Ed. PUNTUACIONES NEGRAS Es la apariencia de polvo sobre manchas de diversos órganos. 1999Hand boock of Plant virus diseases. St Paul. 5th ed. 897 pp. R. corresponden casi siempre a fructificaciones de Moniliales………………. Sydney. New York. Press. Paris France. London.E. 992 pp. H:F. 2002. U. Gibbs A. de tipo cremosos.F. Boston. Academic Press. Matthews. Blancard. CRC Press LLC. y son las fructificaciones como acérvulos. 553 pp* * En Biblioteca de la FES Cuautitlán C-4 PRACTICA 5 43 . Paul Minnesota American Phitopatologhical Society.A. Schwartz. 10. Sydney.4.7.. Elselvier/North-Holland. 2004. Crabtree K. * 4. Enfermedades del Tomate: Observar.S. Sydney.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. 1001 pp. Florida.E. Lapierre H. virases diseases of Poaceae (Gramineae). 8. España. 9. 2005. Ed. etc…………………………. S. BIBLIOGRAFIA.Plant pathology. London. London. Kurstak. C. Viruses of Tropical plants. apotecios. Identificar. Galves (eds).8 EFLORESCENCIAS GRISACEAS. Identificar. C. * 1. G. Lucas 1991. de color blanquecino. Dominique. 1990. Mundi-Prensa.com For evaluation only. Biomedical Press. 1991. Paris.F. Luchar. and G. Mundi-Prensa. Elsevier academic Press. 707 pp.* 2. 1. San Diego.F. ZOOGLEAS. San Diego. Francisco. Thomas.foxitsoftware. Oxford. 1991. N. Diagnosis of Plant Virus Diseases. Zitter Th. 1. soil climatic contraints of Phaseolus vulgaris. 424 p. san Francisco. Redwood Press Ltd.* 3. Blancard.K. 1992.C. Hopkins. España.E. Plant virus infections. Singapore. New York.D. Matthews. Luchar. Bean production problems: diseases.E. Ford. Boca Raton. APS Press. INRA.

b. basipétalos si el movimiento es a la inversa. Erradicativos. que hasta ahora han desafiado todos los intentos de control directo mediante compuestos químicos. los hongos y los nemátodos. tratamiento a la semilla. Los compuestos químicos utilizados para prevenir o controlar el desarrollo de las enfermedades se clasifican por: 1. Sitio de aplicación.foxitsoftware. OBJETIVOS. pudiendo ser acropétalos si se mueven de las raíces al follaje. 44 . o bien. a. Protectivos/ Profilácticos. GENERALIDADES SOBRE EL CONTROL QUIMICO DE ENFERMEDADES INTRODUCCIÓN. o bien. Se aplica para proteger a los productos cosechados. b. a. De contacto o residuales. La necesidad de prevenir o controlar el desarrollo de las enfermedades ha motivado la creación de nuevos químicos capaces de obtener la deseada toxicidad selectiva hacia los patogenos problema. La producción agrícola mundial sufre anualmente grandes perdidas debido a enfermedades causadas por agentes de diversa índole. Sistémicos. 3. a.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Tratamiento postcosecha. La acción se restringe al sitio de aplicación. basipétalos si se mueven de las raíces al follaje. El tratamiento se realiza después del periodo de incubación 4. Curativos. Modo de acción. b. Foliar. El tratamiento se realiza. Se requieren varias aplicaciones para proteger los nuevos brotes y para reforzar la capa de crecimiento antes de la infección. c. Se aplica al suelo contra fitopatógenos transmitidos por esta vía y para algunos sistémicos de transmisión aérea. Tratamiento al suelo.com For evaluation only. Orgánicos b. Son transportados en la savia de la planta. d. Su origen químico. durante el período de incubación. entre los que se encuentran los virus. c. Se aplica al follaje. La principal excepción la constituyen los virus. Modo de aplicación. Inorgánicos 2. Hoy día se tiene la capacidad de controlar algunos patogenos con un amplio espectro de compuestos químicos. las bacterias. a. Se aplica a la semilla contra fitopatógenos transmitidos por el suelo y contra los transmitido por la misma semilla.

com For evaluation only.. Conocer algunos productos fitosanitarios . Información adicional. Washington. S. Aplicación l. Origen e. BIBLIOGRAFIA 1. D.pesticidas.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Enfermedades importantes que controla o previene j. Deacon J. h. 1. Durante una entrevista a un productor. Pathogens and integrated defense responses to infection. 1983. G. Defina que es un fungicida. Explique cada uno de ellos. sus características mas importantes. Fungicida curativo o sistémico. A.. 3. a. Tipo o modo de acción d. Mencione los principales factores que afectan la efectividad de campo de un producto químico al momento de su aplicación. J. Cómo respondería usted a este comentario?. Plant. L. puesto que el fabricante solo quiere ganar mas dinero haciendo que el productor aplique una dosis superior a la realmente necesaria. Dosis k. Defina. 2001. Nature 411. MATERIALES Y METODOS. and Jones. un nematicida y un bactericida. 390 pp SB 750 I54 2. Etiquetas de productos químicos comercialmente utilizados para el control o prevención de enfermedades. Usos i. berkshire. 45 . 2. así como su manejo y modo de acción.: Van Nostrand Reinhold. J. residual o de contacto. Precauciones m. W. Deng. A. Induce plant defensor against pathogens and herbivores.833. Nombre químico c. Fungicida protectivo. 826. 1.foxitsoftware.utilizados para el control de enfermedades. Agrawal. Microbial control of plant and diseases. 2. Tuzun. and Bent. Toxicidad f. con la finalidad de obtener la siguiente información: a. 88 pp. E. 2000. este menciona que nunca utiliza la dosis indicada en la etiqueta del producto. Formulación g. Fitotoxicidad CUESTIONARIO. Los alumnos serán los encargados de conseguir las etiquetas en las casas comerciales o directamente con los fabricantes de dichos productos. APS Press. Nombre (s) comercial (es) b. b..

SB 750 V54. 4. Physiology of Disease Resistance in Plants. Volume 1. Press. John Wiley & Sons Inc.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.. Plant Diseases Control.foxitsoftware. Volume 2 pp 128. CAB International. 1993.com For evaluation only. pp 149 SB 750 V54. Towards environmentally acceptable methods. 346 pp. Maloy. 46 . 7. 1993. Principles and practice. T. R. 1993. Vidhyasekaran. Chapman & Hall. P. C. R. SB 7326 S77. 354 pp. SB 731 M338 6. N. Principles of diagnostic techniques in plant pathology. Strange. Fox. Plant diseases control. O. SB 731 F69 5. 1988. CRC. 213 pp.

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