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FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLAN DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AGRICOLAS MANUAL DE LABORATORIO DE FITOPATOLOGIA BIOL. MARCOS ESPADAS RESENDIZ M.C. GLORIA DE LOS ANGELES ZITA PADILLA PROLOGO Siendo la Fitopatología la ciencia que estudia las enfermedades de las plantas, los agentes causales, su interacción con los hospederos, la sintomatología, así como los medios de control de éstas, es notorio el papel que desempeña dentro de esta ciencia el trabajo de gabinete, esto es, el análisis de laboratorio, ya que es en éste lugar donde se establece el conocimiento de cada uno de los enunciados anteriores. El objetivo del laboratorio de Fitopatología es adiestrar al alumno en las principales técnicas de colecta, cultivo, identificación y control de los organismos causales de las enfermedades de las plantas. El presente manual tiene la intención de brindar la mínima información necesaria en el trabajo práctico de la Fitopatología, tratando siempre de establecer la relación hospedero-patógeno, al aportarles el conocimiento básico para que en un futuro sepan y puedan diagnosticar cuando un cultivo está enfermo o dañado y tengan noción de los métodos y técnicas de control que podrían emplear para lograr una mejor producción. No pretende ser éste un trabajo terminado, sino que se espera enriquecerse con la ayuda y crítica de profesores y alumnos. LOS PROFESORES DE FITOPATOLOGIA

OBJETIVOS GENERALES. Al terminar el curso el alumno: Adquirirá la destreza en el manejo de las principales técnicas el diagnóstico fitosanitario y podrá discriminar entre ellas cuando se aplican a determinado grupo fitopatógeno para su reconocimiento y diagnóstico (hongos, bacterias, nemátodos, virus)

DESARROLLO. El trabajo del laboratorio comprende a las prácticas generales y al seminario.

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PRACTICAS. Están contenidas en este manual. Se deberá entregar un reporte de cada una de estas prácticas, una semana después de haberlas concluido. Los reportes deben contener lo indicado en el manual, además de lo que los profesores les indiquen. NO SE ACEPTAN REPORTES DE PRACTICAS EXTEMPORANEOS. SEMINARIO DE INVESTIGACION. Es un trabajo particular que deberá desarrollar cada equipo a través del semestre. Este trabajo pretende que el alumno se familiarice con algún patógeno en particular, siguiendo los postulados de Koch, para lograr la correcta identificación del agente causal, de tal forma que pueda extrapolar sus conocimientos para un diagnóstico adecuado de cualquier enfermedad vegetal en su ejercicio profesional. En la primera sesión de laboratorio se les proponen algunos temas a escoger, aunque puede ser el mismo equipo el que lo proponga. En la segunda sesión todos los equipos deben tener su tema definido. En la tercera sesión deben entregar su proyecto de trabajo, el cual debe contener los siguientes puntos: 1. INTRODUCCION. (Justificación del trabajo, es decir, el QUE, el POR QUE y el PARA QUE). 2. OBJETIVOS. (Ante el planteamiento de un problema, se deben proponer objetivos a cumplir para poder solucionarlo). 3. HIPOTESIS. (Es la probabilidad que se supone como la solución al problema planteado, y por lo tanto, debe corresponder a los objetivos). 4. METODOLOGIA. (Es la descripción de los pasos a seguir para cumplir los objetivos). 5. BIBLIOGRAFIA. Cada equipo tiene que programar la fecha de siembra de las plantas que necesite, indicándolo en la metodología. Una vez que se terminen las prácticas, todas las sesiones subsecuentes se dedican exclusivamente al desarrollo del seminario. Al finalizar el semestre, hay una sesión para la EXPOSICION DE LOS SEMINARIOS. Cada equipo tiene 15 minutos para exponer y 5 minutos para preguntas. El mismo día de la exposición, se entrega un reporte final que contenga los siguientes puntos: 1. 2. 3. 4. INTRODUCCION. OBJETIVOS. HIPOTESIS. REVISION BIBLIOGRAFICA. Esta debe incluir: 4.1 Historia y distribución geográfica del patógeno. 4.2 Importancia económica

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8. 9.

4.3 Etiología 4.3.1 Clasificación 4.3.2 Morfología. 4.3.3 Patogénesis 4.4 Sintomatología 4.5 Epifitiología 4.6 Control METODOLOGIA RESULTADOS. (Se describe lo obtenido en el experimento). DISCUSION. (Es la parte más importante del trabajo, pues es donde se hace el análisis de los resultados, interrelacionándolos con los objetivos e hipótesis planteados, fundamentándose en la información obtenida en la revisión bibliográfica). CONCLUSIONES. (Conocimiento obtenido a través de todo el trabajo experimental). BIBLIOGRAFIA.

El reporte debe ser en Word y con buena presentación. A la entrega de este reporte, debe de anexarse: - la copia de por lo menos 3 artículos recientes referentes al tema del seminario. - Material didáctico de apoyo, en referencia al seminario (diapositivas, láminas, preparaciones, material de herbario). NOTA: No se reciben ningún trabajo o reporte fuera de la fecha indicada. La asistencia al laboratorio es OBLIGATORIA. EVALUACION. Reportes de prácticas...................….....….........................15% Seminario de Investigación...........…...…..........................25% Proyecto.....................................................5% Desarrollo...................................................10% Exposición..................................................5% Reporte final...............................................5% Exámenes parciales.....................…..........…......................10% TOTAL.........50% MATERIAL NECESARIO PARA LAS PRACTICAS QUE DEBEN TRAER POR EQUIPO*. 1 m. de franela 1 m. de manta de cielo 1/2 lt. de blanqueador de ropa 1 marcador indeleble Cerillos 1 caja de porta objetos 1 caja de cubre objetos 1 rollo de masking tape 1 charola de plástico tipo panera

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1 paquete de algodón 1 bolsa de detergente de 200 gr. Etiquetas engomadas de 2 x 2 cm. 1 rollo de papel aluminio 10 goteros en frascos color ámbar 1 rotulador Cepillo para lavar cristalería de laboratorio *Este material es necesario desde la primera práctica

PRACTICA 1 METODOS DE COLECTA
INTRODUCCION. El diagnóstico de las enfermedades de las plantas tiene tanto de arte como de ciencia. Ciertas enfermedades pueden ser reconocidas fácilmente, mientras que otras toman años. No pueden darse normas fijas aplicables a todos los casos, cada uno requiere un enfoque diferente e individual. El diagnóstico es una de las bases indispensables para lograr el control eficaz de una enfermedad. Solo cuando se conoce el agente causal puede consultarse literatura especializada que revela la experiencia de otros fitopatologos y puede servir para planear las medidas de combate. El diagnóstico es más preciso, por lo general, si el que lo realiza ha examinado personalmente la enfermedad en el campo. Un observador cuidadoso puede obtener datos valiosos que facilitan todo el proceso por ejemplo, la distribución local de una enfermedad varía de acuerdo a las circunstancias, es decir, pueden estar afectadas todas las plantas por igual, algunas más que otras, plantas sanas alternadas con plantas enfermas, áreas bien definidas de plantas enfermas, en hileras en los bordes de la plantación, en las partes más bajas o distribuidas al azar. Es importante notar la presencia de focos de infección inicial, a partir de los cuales se extienda la enfermedad, ya que esta información da idea del patrón de diseminación y de la fuente de inóculo primario. En el desarrollo de la Fitopatología práctica, es de suma importancia la colecta del material enfermo, puesto que de esto dependerá el que se puedan realizar las técnicas conducentes a una identificación acertada del patógeno en cuestión. OBJETIVOS: Conocer y manejar las técnicas más comunes de colecta y preservación de material de estudio fitopatológico.

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rayados. serrucho. En el caso de que la planta presente nodulación en la raíz. Es conveniente disponer del mayor número de elementos vegetales colectados que permitan lograr la identificación del agente causal. frutas. por lo que se deben tomar muestras del suelo que haya estado en contacto con la raíz. etc. frascos de boca ancha. DESARROLLO: Los problemas fitopatológicos se pueden presentar en hojas. En el caso de que las plantas sean pequeñas.com For evaluation only. engrapadora manual. Es conveniente colectar también una planta sana para que sirva de comparación. Pala recta. b) Cultivo perenne. pues así no son útiles para el estudio en el laboratorio. etc. sobre pigmentaciones. tijeras de podar. y cerrarla con una liga. 5 . estas bolsas no deben exponerse al sol. Para partes vegetales carnosas. vayan acompañados con los siguientes datos. etiquetas. frutos. cámara fotográfica.) e) Decoloraciones. prensa. Se deberá colectar varias plantas completas que presenten síntomas iniciales y en diferentes etapas de desarrollo de la enfermedad. Se colectan partes representativas. machete. tallo. papel secante. Si el cultivo ya esta muy desarrollado. a) Datos generales. gigantismos. manchas. Las partes vegetales que deben colectarse. Se pueden identificar cuando: a) Crecen anormalmente b) Se secan o se mueren c) Cuando disminuye la cosecha año con año y no se recupera aún con fertilizantes o combatiendo malezas. navaja de campo. se debe sacar la planta entera. (aproximadamente). ligas. tallos.foxitsoftware. Es indispensable que todos los ejemplares que se colecten. lupa de campo. MATERIAL Y EQUIPO UTILIZADO EN LA COLECTA DE PLANTAS ENFERMAS. y sin sacudir el suelo de las raíces. flores. etc. hielera portátil. igualmente con síntomas iniciales y en diferentes etapas de desarrollo de la enfermedad. bolsas de polietileno. libreta de campo. así mismo. es muy probable que se trate de infestaciones de nemátodos. dependen del tipo de cultivos que se trate: a) Cultivo anual. soluciones fijadores. periódico y cartón corrugado. hojas. pero que no están en su totalidad muertas o en estado de descomposición. se deberán colectar partes que estén completamente muertas o en estado de descomposición. se debe meter en una bolsa de plástico junto con 250 gr. d) Alteraciones en el crecimiento (achaparramiento. como raíz. colecte solo proporciones de los órganos afectados.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. se deben colectar en frascos con soluciones fijadoras. Para evitar que los nemátodos mueran. raíces. como frutos o bulbos. de suelo.

foxitsoftware.com For evaluation only. Frecuencia de riego Incorporación de materia orgánica Podas ________________ ________________ ________________ Fertilizaciones Aclareos Otros ________________ ________________ ________________ a) Químicos aplicados al cultivo (concentraciones y dosis). Muestra No. Precipitación Vientos Granizo ________________ ________________ ________________ Humedad relativa Heladas Otros ________________ ________________ ________________ a) Labores culturales. Localidad Fecha Cultivo (hospedero) ________________ ________________ ________________ ________________ Variedad Edad del cultivo Cultivos anteriores Predio ________________ ________________ ________________ ________________ b) Apariencia general del cultivo Marchitez Amarillamiento Areas muertas Manchas foliares __________________ Tizones ________________ Desarrollo anormal ________________ Otros ________________ ________________ ________________ ________________ c) Partes atacadas de las plantas. Raíz Hojas Frutos ________________ ________________ ________________ Brotes o Tallos Flores ________________ ________________ d) Distribución de la enfermedad Plantas aisladas Areas grandes Bandas o franjas Manchones o grupos de plantas ________________ ________________ Areas pequeñas ________________ ________________ Bordes de cultivo ________________ ________________ e) Condiciones prevalecientes durante la aparición de los primeros síntomas y el desarrollo de la enfermedad.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Fertilizantes Herbicidas Defoliantes ________________ Fungicidas ________________ Insecticidas ________________ Otros ________________ ________________ ________________ a) Características del suelo. Drenaje ________________ Textura ________________ 6 .

10 ml... c) Exudaciones (color........ 10 ml........ F....G.. 1975... Manual de Laboratorio de Fitopatología General... a) Características de las lesiones.......50 ml Formalina . empleándose el prensado. cuerpos fructíferos o cualquier estructura (hacer esquemas)..1000 ml.... o bien la preservación en fijadores* como alcohol al 70%......25 ml. Acido acético glacial ... En el primer caso los ejemplares deben ser montados en cartulinas blancas de 25 x 45 cm.. E......... consistencia etc... y H.. b) Presencia de esporas. Echandi... G........... 2....... F......... 7 ....... Cloruro de Zinc . Zn K P __________ Mn __________ Mg __________ Otros _ __________ N __________ Bo __________ __________ __________ Datos del laboratorio que nos ayudarán al diagnóstico de la enfermedad y a la identificación del agente causal......A...100 ml... En este caso se puede prensar o preservarse en refrigeración.... México..... Limusa. SOLUCION DE HESLER Agua destilada . siguiendo las técnicas de herbario acostumbradas... Figueroa. o solución de Hesler. Alcohol al 50% .foxitsoftware. Todo el material preservado debe llevar su etiqueta correspondiente...... Herrero Hnos....... NOTA: Los alumnos traerán la colecta fitopatológica BIBLIOGRAFIA... e) Evidencia de daños mecánicos El material colectado puede emplearse para: a) Realizar aislamientos del agente causal.. pH ________________ Otros ________________ a) Posibles diferencias y/o excesos nutricionales.... micelio..25 ml.. México. Glicerina .. Gaviño. *Preparación de soluciones preservadoras. 1.........A......A Formol al 40% .A.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www..........…..com For evaluation only... 1975. Técnicas Biológicas Selectas de Laboratorio y Campo................) d) Presencia de insectos o ácaros......... b) Como material de herbario...

REVISION BIBLIOGRAFICA El diagnóstico de las enfermedades se fundamenta en los Postulados de Koch.A. Plant pathogen detection and diseases diagnosis. Boca Raton. A. López A. E. 2004. 2. R. 3. y C. Los postulados de Koch son los siguientes. Fungi and Bacteria.N.El agente causal debe estar constantemente asociado con la enfermedad.. 2001.El organismo debe ser aislado y cultivado en el cultivo puro. El proceso de identificación de un patógeno requiere el aislamiento del mismo.. Minneapolis. M.. 413 pp. CRC Press. OBJETIVOS Adiestrar a los alumnos en la preparación de medios de cultivo y en las técnicas de aislamiento de agentes fitopatógenos más utilizadas. G.. D. ya que ahí donde se efectúa la identificación del agente causal. Zaragoza.foxitsoftware. T. González. Que revisten gran importancia dentro de la Fitopatología. London. San Jose de Costa Rica. Concepts and Laboratory. Tesis. Narayanasamy. 8 . Trigiano.com For evaluation only. 5.. el trabajo de laboratorio de suma importancia. Plant Pathological Methods.C. 6. 4. 1977. 7. N. ya que deben seguirse siempre que se está frente a una enfermedad de la que desconozca o se dude del agente causal. para lo que es necesaria la elaboración de medios de cultivo que permitan el desarrollo de dicho patógeno. Méx. J. INTRODUCCION En el diagnóstico de las enfermedades vegetales. Fundamentos de Patología Vegetal.C. 1. Co. Roberts. 1978. PRACTICA 2 PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO Y METODOS DE AISLAMIENTO. I.Al inocular una planta susceptible sana. L. P. Burges Pobl. 1972. 1964. Introducción a la Fitopatología. Técnicas de uso común en el manejo de Hongos fitopatógenos.. Windham.C. 518 pp.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. New York.G. lo que permite la posibilidad de aplicar los métodos de control más adecuados. Marcel Dekker Inc. Acribia. and Windham. Washinton. Plant pathology.A. Boothroyd. Tuite. 3. debe desarrollarse la enfermedad original. S.I. 8.

Para poder estudiarlos y conocerlos se deben cultivar en modos adecuados y aislándolos del suelo o de partes vegetales enfermas. pero en general no influye. hasta lograr que en el medio solo se desarrollen un tipo de organismo. utilizar cámaras húmedas. un CULTIVO PURO. A partir de la primera muestra que se coloca en un medio de cultivo. Los medios de cultivos son mezclas de sustancias nutritivas que se utilizan para el aislamiento. En el caso de que el patógeno se encuentre en las partes vegetales se puede proceder a realizar aislamientos directos. En la naturaleza abundan los microorganismos que se desarrollan estrechamente relacionados entre sí. colocar partes vegetales en el medio de cultivo. tanto de vida libre como parásitos. Para realizar aislamientos a partir del suelo. nitrógenos. Humedad: Deberá proporcionarse una humedad relativa favorable a los fitopatógenos que se desee cultivar. K. mientras que las bacteria en uno alcalino. macroelementos (P. hongos y otros organismos de muy diversos tipos. Medios de cultivo.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. microelementos (Fe. Ca). 4.com For evaluation only. los medios de cultivos deben reunir características especiales. éstos es. Aislamiento. Este es un factor determinante para el desarrollo y reproducción. determinación. reproducción y diagnóstico de aquellos organismos productores de enfermedades en las plantas. de manera que encontramos bacterias. Cu. Zn Mn. pero en general los hongos fitopatógenos se desarrollan y reproducen mejor en pH ligeramente ácido.. desarrollo. Mo ). etc. los valores óptimos son muy variables. vitaminas. deberán estar presentes elementos nutricionales tales como fuentes de carbono. pero la mayoría de ellos pueden crecer en un rango de 10 a 25º C. pH: También en este caso. Luz: Este factor afecta en algunos casos la reproducción de los fitopatógenos. 9 . Mg. Para lograr el desarrollo y producción de las diferentes especies fitopatógenas. que se comportan como parásitos facultativos. etc. del que se deben tomar nuevas muestras para realizar otros cultivos seleccionados de las diferentes colonias. Temperatura: Los valores óptimos de éstas son muy variables para cada especie.El organismo patógeno debe ser aislado de la planta infectada bajo condiciones experimentales. existen diversas técnicas como el de Placa Directa y el de Dilución en Serie. Nutrientes: en el medio de cultivo. se obtiene un cultivo mixto. generalmente requieren de 50% o más. a través de trampas. tomando en cuenta los factores que se mencionan a continuación.foxitsoftware.

Entre los medios de cultivos de uso frecuente en Fitopatología están los siguientes: 1.TSA (jugo de tomate.AA ( agua-agar) 10.MSA ( malta-sal-agar) 10 . Medios sintéticos: Son aquellos medios de cultivo en los que se conoce exactamente la composición de cada uno de sus componentes.. vainas. Se emplean para mantener cultivos por largo tiempo. Contienen esencialmente agar.. 2.agar) 7.JFA ( jugo de frijol agar) 12. Clasificación de los medios de cultivo.. mezclados o separados.. 1. Asepsia: Los medios de cultivo deben esterilizarse y mantenerse a salvo de cualquier contaminación. gelatina u otras sustancias solidificantes.MM ( medio de Martin) 8.Composición 1. etc.agar ) 6.HFA ( harina de frijol-agar) 4. frutos. Consistencia 2.JTA (jugo de tomate-agar) 13. al enfriarse permanecen en estado coloidal.HMA ( harina de maíz-agar) 11.. materiales que al enfriarse quedan completamente sólidos. Medios de cultivos naturales: Se forman a partir de material vegetal natural..3 Medios líquidos: Son preparados sin agar. por ejemplo: harina de maíz-agar. quedando de la siguiente manera: composición o a su 1.AVA ( avena . Muy empleados para el aislamiento y la reproducción de hongos y bacterias. ( 2-3 % ) gelatina ( 10-15 %) albumina etc.V8A ( jugo V8-agar) 5.1 Medios sólidos. Contienen bajas proporciones de agar y gelatina.3.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. por lo que permanecen líquidos aún al enfriarse... Los medios de cultivo pueden ordenarse de acuerdo a su consistencia.VFA (vaina de frijol-agar ) 9.2 Medios semisólidos... tubérculos....AN (agar nutritivo ) 3.. o bien se componen de sustancias naturales y sustancias sintéticas.2. 1. por ejemplo: Agar Czapek.PDA ( papa-dextrosa-agar) 2. raíces. Medios complejos o semisintéticos: En estos la composición de uno de los componentes no se conoce de manera exacta.com For evaluation only.foxitsoftware. se emplean cuando se necesita incrementar el inóculo de hongos o bacterias. 2.sal.1. 2.. por ejemplo: tejidos vegetales.

....... Procedimientos: Se disuelve el agar en el agua destilada.................................. se afora a 1000 ml y se esteriliza.BA 15.... se le agrega la dextrosa y se disuelve...... y se esteriliza. Procedimiento: Partir 200 gr... 14 .. AN ( agar nutritivo o extracto de carne-agar) Este medio de cultivo nos sirve para cultivar bacterias como Erwinia. calentando ligeramente........aforar a 1000 ml 11 .. Pseudomonas y Corynebacterium........BK (Bonner.... calentando ligeramente... Concluido éste tiempo se cuela la infusión o caldo de papa a través de manta de cielo.. Se disuelve el agar en 500 ml.PDA (papa-dextrosa-agar) Este medio de cultivo se utiliza para el aislamiento...200gr Agar.. Agua destilada....................Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www....... Se añade la solución de agar daxtrosa al caldo de papa mezclando bien y se afora con agua destilada a 1000 ml..... Ingredientes : Papa.....20gr............. 3. Agua destilada........aforar a 1000 ml Dextrosa.15gr. de papa sin cáscara y cubrirlo con agua destilada...........AA (agua-agar) Este medio de cultivo se utiliza para el aislamiento de hongos del suelo como Phytium y algunos Actinomicetos.........foxitsoftware................. de agua destilada....... 15gr.....Addicot) (medio B de King) Preparación de los medios de cultivo 1... Se deja hervir durante 15 min.... Ingredientes: Agar. 2.. crecimiento y reproducción de varios hongos y de bacterias como Xanthomonas y Agrobacterium.....com For evaluation only...

....aforar a1000ml........30gr...……….. de harina de frijol..20gr............. luego agregar la peptona y el extracto de carne y disolver.......... 12 .. la dextrosa y la peptona en 300 ml de agua destilada calentando ligeramente...............agar) Este medio de cultivo se utiliza para cultivar algunas especies del género Phytophthora.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www............. Se decanta y se junta el líquido sin sólidos. agar....... agar ... Procedimiento: En 500 ml. Agua destilada. se calienta la solución a 60-70 ºC......20gr..... Procedimiento: En 500 ml...... Disolver el agar........HFA (harina de frijol... dextrosa... Ingredientes: Extracto de carne de res......... 5................. Peptona...... por último aforar con agua destilada a 1000 ml..20gr....... Agua destilada. agua destilada....... Añadir el líquido centrifugado a la solución de agardextrosa-peptona y aforar con agua destilada a 1000 ml.....20gr...........……….................. 4................ La solución filtrada se clarifica centrifugando durante 20 min a 300 RPM.... producto de la centrifugación..5 gr....................... Ingredientes: Harina de maíz ..... de agua destilada a 70º C se agrega la harina de maíz y se calienta por 1 hr.3gr...... agar..........foxitsoftware....HMA (harina de maíz-agar) Este medio de cultivo sirve para aislar hongos de los géneros Pythium y Phytophthora..... de agua destilada se agregan los 30 gr.aforar a 1000 ml.................... a 3000 RPM........ Procedimiento: Disolver el agar en 500 ml..... Decantar y juntar el líquido sin sólidos producto de la centrifugación........................... de agua destilada calentando ligeramente... Ingredientes: Harina de frijol ............. Peptona.20gr. Esterilizar........................................... a 60º C se filtra la infusión a través de manta de cielo....... Se filtra la infusión a través de manta de cielo.........15gr..com For evaluation only.............. La solución filtrada se clarifica centrifugando por 20 min.............aforar a 1000ml.

.......agar ) Este medio se prepara de dos formas............. Agar.....………………………………... Agar. Esterilizar...... Agar .........agar) Este medio de cultivo se emplea para cultivar Colletotrichum lindemuthianum.... Centrifugar para clarificar durante 20 min a 3000 RPM............. CaCo3...... Añadir la solución de agar al jugo de frijol y esterilizar.2gr... Agua destilada.... *En ambas fórmulas se puede sustituir el jugo V8 por jugo de tomate simple.aforar a 1000ml................ Ingredientes: Jugo V8 centrifugado*....... Dejar reposar la solución durante 10 min....V8A (jugo V8......15gr. 7..4.... Disolver el agar en 285 ml.JFA ( jugo de frijol .......10 gr.............foxitsoftware. Procedimiento: Agregar el CaCo3 al jugo V8 o de tomate.... según la especie de hongo que desee cultivar.......5gr..15gr....Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. CaCo3 ...aforar a 1000 ml B) Para aislar a Phytophthora parasitica y Ph.215 ml........ palmivora... 13 ................ Finalmente aforar con agua destilada a 1000 ml.... Procedimiento: Obtener el jugo de frijol prensado o moliendo las vainas verdes. de agua destilada................com For evaluation only........ calentando ligeramente...... Ingredientes: Jugo de frijol proveniente de vainas prensadas o molidas..................... Agua destilada ..aforar a 1000ml.............. Añadir el líquido centrifugado a la solución de agar mezclándolo bien.. Para aislar a Phytophthora infestans y Phythium.100 ml................ hasta completar la cantidad requerida..........20ml................ Se decanta y se junta el líquido sin sólidos.......... Agua destilada.......... resultante de la centrifugación. Agitar hasta disolverlo..... Ingredientes: Jugo V8 centrifugado*...... 6...................………………………………... Disolver el agar en 300 ml de agua destilada calentando ligeramente....

El jugo se mezcla con el CaCo3.... Ingredientes: Jugo de tomate natural. mezclando esta solución con el jugo V8 o de tomate centrifugado.....……. 2 gr. se agita bien y se deja reposar durante 10 min. Agua destilada.... Ingredientes: NaCl…………………. Añadir a esta solución la infusión de avena centrifugada......60 ml... Filtrar la infusion a traves de una manta de cielo.. Para clarificar la solución colada. Ingredientes: Avena…………… ….. Se esteriliza. Para la fórmula A) disolver el agar en agua destilada.. Este medio de cultivo se utiliza para aislar principalmente a los hongos que atacan granos almacenados. Añadir a la solución de agar el jugo V8 o de tomate centrifugado y aforar con agua destilada a 1000 ml. Para la fórmula B) utilizar 900 ml...... centrifugar durante 20 min. mezclando bien..... Disolver el agar en 400 ml de agua destilada calentado ligeramente....0....com For evaluation only. Procedimiento: Se muelen los tomates y se cuelan a través de una manta de cielo..............7.. de agua destilada para disolver el agar. se centrífuga durante 20 min a 3000 RPM......7... MSA (malta -sal-agar)..Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www...aforar a 1000 ml..5 gr 14 .foxitsoftware...60 gr Extracto de levadura….6gr.. Decantar y juntar el líquido sin sólidos producto de la centrifugación. Agar …………………………... 8....AvA (avena-agar) Este medio de cultivo se utiliza para aislar especies de los géneros Phytophthora y Pythium. Procedimieto: En 600 ml de agua remojar 60 gr de avena durante 24 hr........ Disolver el extracto de levadura en la solución de agar. a 300 RPM.. ) y se añade la solución centrifugada. Agar ... 9.. calentando ligeramente... Se decanta y se junta todo el líquido centrifugado hasta completar la cantidad requerida. Después hervir durante 30 min.. mezclar bien y aforar con agua destilada a 1000 ml Esterilizar....5 gr Agar…………………………12 g Agua destilada………aforar a 1000 ml Ca Co3...14gr.. Para clarificar.. Se disuelve el agar en otro poco de agua destilada (800ml.JTA ( jugo de tomate-agar) Este medio de cultivo se utiliza para aislar a Phytophthora capsici..

20 gr Agua destilada ……………….Addicott).0.aforar a1000 ml.808 gr MgSO4 o7H2C (sulfato de magnesio) ..00 gr Agua destilada………………aforar a 1000 ml.. Ingredientes: Jugo de tomate-agar (medio deshidratado) NaCl……………………………100 gr o 90 ml de jugo de tomate de lata Agua destilada ……. BA (Bonner.0369 gr para aislar y desarrollar a Phymatotrichum Ca(NO3)H2O (nitrato de calcio)…0. Añadir la solución de extracto de malta-agar.236 gr KH2PO4 Fosfato diácido de potasio …. Extracto de Malta ……. Aforar con agua destilada a 1000 ml. En 500 ml de agua destilada disolver la sal calentando ligeramente.0. Agar………………………………. y se mezcla bien calentado ligeramente.foxitsoftware.6486 gr gr Glucosa ………………………… 20. calentando ligeramente. 15 .. Ingredientes: KNO3 (nitrato de potasio)…0. Procedimiento. Esterilizar por NO MAS de 15 min. En 400 ml de agua se disuelve la sal calentando ligeramente.0108 gr FeCl3 (tartato férrico)……0.com For evaluation only. a 3000 RPM.15 gr (si se usa medio deshidratado) 30 gr (para jugo de tomate) Procedimiento: En 500 ml de agua destilada se disuelve el jugo de tomate-agar (medio deshidratado) y el agar. mezclando bien. Se añade a esta solución la de jugo de tomateagar mezclando bien y se afora a 1000 ml. se centrifuga durante 20 min. Si se mezcla con el agar y 200 ml de agua. TSA (JUGO DE TOMATE-SAL-AGAR). Disolver el extracto de malta en la solución de agar..aforar a 1000 ml Procedimiento: En 400 ml de agua disolver el agar calentando ligeramente. Este medio de cultivo sirve omnivorum. la solución de sal. Esterilizar.. 12.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Este medio de cultivo se utiliza para aislar hongos de granos almacenados.000gr KCl (cloruro de potasio)………….0. 11..0010 Agar ……………………25.

0-7.. VFA (vainas de frijol-agar).20 gr.5 gr. 16 . Agua destilada…………………aforar a 1000 ml Estreptomicina…………………………………. Rosa de Bengala…………………………………3. Añadir a la solución de glucosa-agar la solución del resto de los componentes.5gr.05 ml de estreptomicina en solución a cada caja de Petri (esto es para inhibir el crecimiento de las bacterias) 14. Agar……………………………. Después se mezclan bien las dos soluciones.1 gr.. Este medio de cultivo se utiliza para aislar a los hongos del suelo.. Agua destilada…………………………aforar a 1000 ml. En 500 ml de agua destilada se disuelve el agar.7H2O(sulfato de magnesio hidratado)…. Se agrega 0.foxitsoftware.5. Este medio de cultivo sirve para aislar a Colletotrichum lindemuthianum.. 15.. La estreptomicina se prepara separadamente.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. En 500 ml de agua destilada disolver todos los demás componentes uno por uno. K2HPO4………………………. Este medio de cultivo sirve para aislar diferentes géneros de bacterias. Peptona…………….. mezclando bien. Ingredientes: Dextrosa……………10 gr. En 500 ml de agua destilada disolver el agar y la glucosa calentando ligeramente. Se mezcla bien y se esteriliza. momentos antes de vaciar el medio en las cajas de Petri.5 ml para agregarlos a 1000 ml de medio de cultivo.5 gr. Se disuelve 1 gr de estreptomicina en 150 ml de agua destilada estéril. midiendo con papel pH y agregando HCl si se necesita acidificar o NaCl si se trata de alcalinizar.10 ml MgSO4…………………1. En otros 300 ml de agua se disuelven los demás componentes agregándole a esta solución la de agar.com For evaluation only. Procedimiento: Se disuelve el agar en 500 ml de agua calentando ligeramente y después se le añade la glicerina.15 gr. Agar………………. BK (B de King). de esta solución se toman los 3. 13. calentando ligeramente. Ajustar el pH a 7.20gr..1. Procedimiento: Para preparar la solución de Rosa de Bengala se disuelve 1 gr de colorante en 100 ml de agua. KH2PO4……………. 5 gr. MgSO4. y en los restantes 500 ml se disuelven uno a uno los demás componentes. Glicerina……………….0.. MM (medio de Martin).5 ml.glicerina.1 gr. Ingredientes: Peptona……………….

1 Soporte universal con tela de asbesto 1 Probeta de 100ml. E. 17 . 1 Balanza granataria* 12 Cajas de Petri limpias y estériles 1 Frasco de agar 2 Cjas de Petri para cámara humeda 1 Frasco de dextrosa* 2 Agujas de disección 1 Frasco de malta 1 Centrifuga 1 Frasco de carbonato de calcio NOTA: Los reactivos para la elaboración de los medios de cultivo puedes variar de acuerdo a la cantidad y diversidad de medios de cultivo que elabore el grupo. Tomar con la mano derecha una caja y levantar la tapa lo suficiente para vertir el medio. MATERIALES 2 Matraces de 250 ml limpios y ertériles.15 gr. Ingredientes: Vainas de frijol………………. Para llenar las cajas de Petri con el medio de cultivo de una manera aséptica. 2 Pinzas de disección 1 Matraz con 500ml. Agua destilada………………. Vaciado del Medio de Cultivo a Cajas de Petri. Se filtran a través de una manta de cielo y papel filtro. se le añade la infusión filtrada. realice lo siguiente: A. Deje solidificar. pasar la boca del recipiente sobre la llama del mechero. Tomar el recipiente con el medio de cultivo y destaparlo con la mano izquierda. Esterilizar.250 gr. H. F. Procedimiento: En 500 ml de agua destilada se añaden las vainas cortadas en trozos muy pequeños. del medio. Colocar la tapa de la caja de Petri suavemente en su sitio y tapar el recipiente con el medio de cultivo. Distribuir uniformemente el medio con movimientos de rotación de la caja sobre una superficie horizontal. Una vez solidificado el medio. de agua estéril 1 Pizeta con cloro al 50% 2 Vasos de precipitado p/calibrar * 2 Papel filtro estéril tamaño de 8 x 12 cm.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. C. Se calienta a 60º C durante 30 min. Se disuelve el agar en 300 ml de agua destilada calentando ligeramente. Conservar el tapón en la misma mano con que sostiene el recipiente del medio. Colocar y encender el mechero o lampara de alcohol.com For evaluation only.aforar a 1000 ml. 1 Mechero 1 Gradilla 1 Agitador 6 Tubos de ensaye c/9 ml. G. D. realizar pruebas de esterilidad por incubación a 35 ºC durante 48 hrs. Limpiar la mesa con una solución de cloro 2:1 en agua o benzal B. Agar…………………………. mezclando bien y se afora a 1000 ml.foxitsoftware. vaciar en cada caja de 10 a 12 ml. de agua destilada estéril 4 Recipientes de plástico p/desif. Poner las cajas y recipientes con el medio sobre la mesa.

2. Cámara húmeda. Cuando se desea aislar bacterias. agua-agar o medio de Martin.3. Agregue a las cajas. Incube a 24ºC y observe a los 7 días. Las colonias de microorganismos se observan de 2 a 3 días después . 1. Después de 4 a 5 días se podrá apreciar el crecimiento del patógeno. 2. Placas directas. previamente. que contenga papel filtro esterilizado. Incube a 24 ºC Cuando hayan crecido colonias de hongos o bacterias. En una caja de Petri estéril. Observe al microscopio de disección el ejemplar enfermo. 2. Se incuba a 24ºC y se observa después de 4 a 5 días.2. usando una para cada dilución. Describa los tipos de colonias que surgieron en los aislamientos a partir del suelo y partes vegetales enfermas. con ayuda de una aguja de disección. Incube a 24 ºC. 1. Se mezcla 1gr de suelo en 10 ml de agua destilada estéril. se recurre al uso de la cámara húmeda. Qué es la esterilización y cuales son los métodos mas frecuentes para esterilizar materiales fitopatológicos? 3. se enjuaga con agua destilada estéril y se coloca en cajas con PDA solidificado. proporcione humedad e incube a temperatura ambiente. si encuentra fructificaciones. semisintético o sintético) pertenecen los utilizados en esta práctica? Explique su respuesta.. Trampas. La porción que interesa se desinfecta en cloro (NaOCl). Proceda a aislarlo con la técnica anterior CUESTIONARIO. a temperatura soportable por el dorso de la mano.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Aislamientos a partir de vegetales enfermos. Cuando la planta presenta micelio y no hay fructificaciones o cuando no se aprecia el crecimiento del patógeno.com For evaluation only. etc. Posteriormente de cada tubo se toma 1 ml y se coloca en una caja de Petri. los tejidos se lavan y se sumergen en un tubo con agua destilada estéril. Sobre el papel se colocan pequeños trozos del vegetal enfermo y se cierra la caja. Se toma una porción de tejido enfermo y se desinfecta en una solución 2:1de cloro (NaOCl). 2. Aislamiento directo. Se transfiere 1 ml del sobrenadante a otro tubo con 9 ml de agua destilada estéril y se repite así tres veces mas. tome una muestra de este material con una aguja de disección estéril y colóquelo directamente sobre el medio de cultivo solidificado. se humedece con agua destilada estéril. TÉCNICAS DE AISLAMIENTO 1.2. 18 .1. Aislamiento a partir del suelo. agregue pequeñas porciones de suelo son una espátula. Dilución en serie.foxitsoftware. micelio. 2. A qué tipo de medios de cultivo (natural. En cajas de petri con medio de cultivo solidificado. transfiera pequeñas placas por separado a nuevas cajas o tubos con medio estéril. 2. Se deja reposar de 1 a 2 min. Se recomienda usar agua-agar. Se incuba a 24ºC durante 2 o 3 días y se observan resultados. Partes vegetales en medio de cultivo. Incube las cajas a 24ºC y observe después de 5 días.1. se hacen diluciones que se agregan a cajas con PDA.4. 1. Plante semillas o porciones vegetales en suelo infectado.

O. 1975. B. N. a partir de vegetales enfermos? BIBLIOGRAFIA 1. New York. 5th ed. Singapore. que 19 . Métodos de Investigación Fitopatológica. Las enfermedades vegetales pueden ser causadas por agentes abióticos y bióticos. A.. y Her. S. London. 2004. 355 pp 3. de colonias x dilución empleada x volumen inicial = No. cit. micoplasmas. Basic Plant Pathology Methods.. CRC Press. * 2. Washinton. Op.com For evaluation only. C A B International. D. Marcel Dekker Inc. de organismos en 1ml Ejemplo: 2 colonias x 1 1000 x 10 ml = 0. C. hongos y nemátodos. Plant pathology. entre los que encontramos virus. F. PRACTICA 3 GENERALIDADES DE MICROORGANISMOS INTRODUCCION. 7.foxitsoftware. Dhingra. M. Plant pathogen detection and disease diagnosis. cit. IICA.. 5. Modern assay for plant pothogenic fungi. Costa Rica. 4. es decir. Dewey. Gaviño.. algunos son tan pequeños o requieren de técnicas microscópicas tan elaboradas para su observación. cit. san Francisco. Paris.R.02 organismos por ml. Schots. 1985. Op. en los microorganismos fitopatógenos. and Sinclair J. 1994. A. Oxford.. espiroplasmas. Amsterdam. Heidelberg.. la identificación del agente causal ocupa un lugar preponderante. D. 2001. 4. Juárez y H.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. and Oliver. 518 pp. Figueroa. French. Calcule el numero de organismos que surgieron en los aislamientos a partir del suelo por el método de dilución. 2005. Sydney. 9. C.G. G. Boston. N. 1975.C. R. En el proceso de diagnóstico de las enfermedades de las plantas. Windham. San Diego. 1980. Elsevier academic Press. Las técnicas de identificación particularizan en los agentes bióticos. Concepts and Laboratory. Cómo realizaría un cultivo de Puccinia graminis tritici y del virus del mosaico amarillo del frijol. Trigiano. E. R. Op. riquettsias. De estos. viroides. M. bacterias. London.Plant pathology. 6. 8. Narayanasamy. López A. 5. 267 pp. 992 pp. T. Tokyo.. and Windham.. Echandi. P.. Agrios. 1978. de la siguiente manera No. G. New York. Boca Raton. CRC Press. 413 pp.

Colocar en bolsa para macerar 9. en caso necesario agregar 1 ml de solución 1 para facilitar la decantación. 14. Enjuagar con agua destilada estéril (150 ml en vaso de precipitado) sobre agitador magnético por un minuto. los hongos y los nemátodos. Solución 3: Fosfato de potasio 0. Dar un enjuage final con con agua destilada estéril (150 ml en vaso de precipitado) sobre agitador magnético por un minuto. Macerar 11. Macerar 13. Lavarlo bajo el chorro de agua corriente 3.25 M. en tanto que otros se prestan a su trabajo en éstos.5. El macerado se homogeniza durante un minuto. Agregar 2 ml de la solución 1 10.5M (1:2 p/v).0% (PEG).5 Solución 4: glicol-polietileno al 20. PRIMERA PARTE: VIRUS (esta parte se hará con equipos que trabajen virus fitopatógenos en su seminario) Purificación de partículas virales REACTIVOS Fosfato potásico Sulfito de sodio Cloroformo Tetracloruro de carbono Glicol-polietileno (PEG) SOLUCIONES Solución 1: Fosfato potásico 0. pH=7. a los hongos y a los nemátodos. Agregar 1 ml de la solución al macerado 12. 8.com For evaluation only. 6. Pesar un gramo del tejido cosechado 2. en preparaciones temporales y permanentes. Solución 2: Glicol-polietileno al 6% (PEG).Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Lavarlo con una solución de cloro al 10% por 4 minutos en agitador magnético 5. METODOLOGÍA 1. Reconocer las características morfológicas que distinguen a las bacterias. con 0. es imposible determinar su morfología en un laboratorio escolar.5% sulfito de sodio. Decantar en un tubo tipo Ependorf. 7. 20 . pH=7.foxitsoftware. Secar en papel filtro. Someterlo a un lavado con Tween 20 sobre agitador magnético por 3 minutos 4. Concretamente. los que resultan mas fáciles de identificar son las bacterias. OBJETIVOS.

y como tales benefician al hombre porque ayudan descomponiendo grandes cantidades de materia orgánica y deshechos animales y vegetales. Elaboración de preparaciones temporales y permanentes de bacterias. Algunas forman esporas.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. de las cuales. carecen de núcleo verdadero.000 rpm durante diez minutos. Su forma puede ser esférica. 20. con pocas excepciones. 19. El manual de Bergey cita 180 especies de bacterias reconocidas como fitopatógenas. 2. ácido murámico y azúcar. bacilar o espiralada. Se encuentran constituidos por una cápsula de secreción. Tinción de cápsula y productos de excreción. Todas las bacterias fitopatógenas conocidas hasta el presente son aerobias. 18. pared celular. 21 . vacuolas. 22. 16. 23. las bacterias pueden teñirse de rojo o de violeta al seguir la técnica de tinción de Gram. El precipitado obtenido se resuspende en la solución 3 y se incuba durante seis horas. 25. Después se centrífuga a 10.com For evaluation only. La mayoría son saprófitas obligadas. RESULTADOS: SEGUNDA PARTE: BACTERIAS Las bacterias son microorganismos pertenecientes al reino Monera.foxitsoftware. facultad que no ejercen dentro del tejido vegetal. 15. 27. Después se resuspende en la solución 3 (0. Se centrífuga a 8 500 rpm durante diez minutos. El precipitado se centrífuga a 12. aunque no es el caso de las fitopatógenas. Se conocen aproximadamente 1600 especies de bacterias. es decir.5 ml de solución por cada 100 g de tejido). Enseguida se agregan al homogenizado Cloroformo y Tetracloruro de carbono (0. 1. El sobrenadante que resulta se trata con la solución 2 y se agita en frío (4º C) durante dos horas. 21. aún cuando existen anaerobias facultativas. pigmentos y material genético disperso.000 rpm durante diez minutos. 17. por lo que pueden ser cultivadas en medios artificiales. membrana y citoplasma este último conteniendo gránulos de grasa. todas son saprófitas facultativas.5:1 v/p de cada uno). pudiendo contener aminoácidos aromáticos. 26. Tinción de flagelos. La pared celular determina la forma de las bacterias y es selectiva. 24. Se usa el sobrenadante para el diagnóstico. Homogeneizar dos minutos más. Después de doce horas.000 rpm durante diez minutos. se centrífuga a 10. Se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza. Dependiendo de la cantidad de estos. Centrifugar a 5000 rpm durante cinco minutos. Al sobrenadante se añade la solución 4 (2 ml PEG/5 ml sobrenadante). Se incuba durante una hora en frío (4º C). Ciertas bacterias son flageladas y pueden desplazarse en medios líquidos. ACTIVIDADES. Tinción de bacterias por el método de Gram.

deje caer el cubreobjetos suavemente. DESINFECTE LA MESA CON CLORO TECNICA PARA REALIZAR PREPARACIONES TEMPORALES Trabaje cerca de la flama.80ml Mezclar las soluciones A y B Solución lugol 22 . Coloque en un portaobjetos una gota de tinta china bacteriológica.0g.8g. 3. Recuerde que a 100X es necesario usar aceite de inmersión. Siempre se empieza por 10X. Observe la preparación al microscopio usando diferentes objetivos.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. TINCION DE PRODUCTOS DE EXCRESION Y CAPSULA DE BACTERIAS. y cuando el líquido se haya extendido por el borde. colóquela en un portaobjetos limpio con una gota de agua destilada. evitando que se formen burbujas colocando inclinado. Reactivos: Solución de Cristal violeta con oxalato de amonio: Solución A: Cristal violeta……………………………2. Las cápsulas aparecen en color azul y violeta y los cuerpos bacterianos en azul obscuro. MATERIALES Y METODOS.0. séquelo al aire.. Lave con sulfato de cobre al 2 % Séquelo con papel absorbente.foxitsoftware. agregue una pequeña muestra de bacterias. indicando los nombres de las estructuras. coloque el cubreobjetos y observe. Observación de preparaciones temporales permanentes de bacterias. Con el asa tome una pequeña muestra de microorganismos del cultivo. Agua destilada……………………………. 1. Porta y cubreobjetos Caja de petri Agujas de disección Cultivos de bacterias Preparaciones de bacterias Mordiente para tinción de flajelos Tejidos vegetales enfermos Cristal violeta para tinción de Gram Safranina para tinción de gram Tinta china bacteriológica Sulfato de cobre Lugol Cristal violeta para flagelos Alcohol etílico ANTES DE EMPEZAR A TRABAJAR. agregue cristal violeta durante 2 min. 4. COLORACION DE GRAM.com For evaluation only. 2. Alcohol etílico……………………………20ml Solución B Oxalato de amonio………………………. Haga un frotis. Puede teñir la preparación siguiendo las técnicas adecuadas. Esquematización de lo observado. Coloque el cubreobjetos. Flamee el asa o aguja de disección para evitar contaminaciones.

... TERCERA PARTE: HONGOS Los hongos comprenden al grupo más numeroso de microorganismos fitopatógenos....2.. 4.. Decolore con alcohol etílico por 30 seg. Observe al microscopio.. Se cubre con cristal violeta se deja actuar 2 min.... Glicerina……………………………………80ml... Debe de ser un cultivo de 24 horas. 23 . y lave con agua corriente.. Se prepara un frotis y se seca al aire.. Cubra la preparación con lugol 1 min y lave con agua corriente.. 2.. Yodo…………………………………………1.5g Etanol a 97%.20ml. Se observa al microscopio con el objetivo de inmersión... Fije la preparación al aire o con calor (a la flama).... TINCION DE FLAGELOS DE BACTERIAS.. Agua destilada………………………………100ml..80ml Posteriormente adicionamos 15 ml Trióxido de Cromo al 2..... Se añade el mordiente filtrado y se deja de 1 a 5 min. 5..... finalmente dejamos reposar durante cuatro días a temperatura de 180. 7.. agitando para una decoloración homogénea.0. Se repite el lavado de la misma forma...com For evaluation only. 1. Absorba el agua con papel sin frotar. Se seca la preparación al aire..5g Fenol………………………………………2... Cubra la coloración con safranina 1 min.. KI…………………………………………….10ml. *Mordiente: Acido tánico………….0g..100ml.…20 gr Agua caliente…………….0g Agua destilada………………………………. 3......... lave con agua corriente.foxitsoftware....5% en alcohol etílico al 95%. siendo además los causantes de las mayores pérdidas económicas agrícolas.... En una gota de agua coloque una pequeña masa de bacterias esparciéndolas a lo largo.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. 6. debido al gran número de enfermedades que ocasionan... y decante. Cubra la preparación con cristal violeta 1 min... Se lava con agua cuidadosamente.5%.... Colorante de contraste ( solución de afranina) Safranina al 2. filtramos y usamos Cristal violeta Cristal violeta……………………………... Agua destilada…………………………………………100ml....

esporodoquios. y muchas son afectadas por un gran número de estos organismos. ACTIVIDADES. Algunas estructuras de reproducción sexual son las oosporas. Porta y cubreobjetos Mechero o lampara de alcohol Caja de Petri Agujas de disección Tejidos vegetales enfermos Azul de lactofenol azul de metileno rojo congo lugol preparaciones de hongos cultivos de hongos Azul de algodón PREPARACIONES TEMPORALES DE HONGOS 1. 1. así como las mitocondrias. indicando los nombres de las estructuras. acérvulos o picnidios.com For evaluation only. ribosomas. 3. clamidosporas. Elaboración de preparaciones temporales y permanentes de hongos. en el agua y dentro o sobre plantas y animales. Con una asa estéril (o una aguja de disección ). uni y pluricelulares. Entre las estructuras de reproducción asexual están . encontrándolos en rangos de temperatura que van desde los 0ºC hasta los 50º .Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.y basidios. 2. que nacen directamente de una espora de resistencia o en basidiocarpos. ya que se encuentran en el suelo. Pueden desarrollarse en condiciones climáticas muy variadas. Observación de preparaciones permanentes de hongos. peritecios y cleistotecios. MATERIALES Y METODOS. esporangios y conidios. ascas -libres o en apotecios. Extienda el micelio y agregue una gota de azul de metileno. Cada hifa está constituida por una pared celular que protege a la membrana celular y al contenido protoplasmático. son microscópicos y macroscópicos. Los hongos pertenecen al reino Fungi. retículo endoplásmico y gránulos de sustancias de reserva. 24 . Se considera que todas las plantas son susceptibles al ataque de por lo menos un hongo. 2. utilizando diferentes técnicas de tinción. En algunos hongos el micelio llega a formar pseudotejidos. en donde se encuentran dispersos sus núcleos verdaderos. carentes de clorofila. Están constituidos por células redondas u ovales solitarias o en plasmodios. Prosénquima y pseudoparénquima . Si las hifas están separadas en celdas. El hábitat de los hongos es muy amplio. cuyo conjunto se denomina micelio.foxitsoftware. Esquematización de lo observado. los oídos. tome una pequeña muestra de hongos y colóquela en un portaobjetos con una gota de agua destilada. se dice que el micelio es septado. y si el protoplasma es continuo en las hifas el micelio es cenocítico. o más frecuentemente por estructuras alargadas y ramificadas llamadas hifa. estos últimos solitario o agrupados en sinemas.

el siguiente paso para cumplir a cabalidad con el segundo postulado de Koch. que va de germinación de la espora. porque. Coloque el cubreobjetos y observe al microscopio.foxitsoftware. Coloque el cubreobjetos y por un extremo agregue una gota de rojo congo*. TINCION CON ROJO CONGO. en caso que este agente causal sea un hongos como en la mayoría de las enfermedades que limitan la producción agrícola: es la técnica de microcultivo. and Sinclair(1985) Trigiano.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. • Esta técnica se puede seguir. con esta técnica se obtienen las distintas fases del ciclo de vida de los hongos. es la identificación del agente causal y una herramienta más para cumplir con este objetivo. Windham. 3. Al final de cada práctica todo el material biológico y medios de cultivo: Antes de lavarlo se esteriliza. diferenciación de las estructuras reproductivas asexuales y sexuales. los desechos sólidos se colocan en el lugar indicado para estos. su crecimiento y esporulación en todos sus detalles y así tener elementos morfológicos de estructuras somáticas y reproductivas completas para así poder hacer la identificación con mayor confiabilidad y conocer a los hongos como agentes causales de enfermedades en los cultivos de importancia agrícola Dhingra. formación del tubo germinativo. se seca se vuelve a esterilizar y se entrega al laboratorista en las mismas condiciones en que lo recibió para llevar a cabo la práctica MICROCULTIVO Introducción. permita que se difunda y observe al microscopio.. • Conocer la técnica de microcultivo para la caracterización de estructuras somáticas y reproductivas para identificar morfológicamente a los hongos fitopatógenos. 1. Realice una preparación temporal de hongos. se desprenden y/o se rompen. 2. Se debe dar un manejo de tiempos en el desarrollo de los hongos para poder observar las estructuras desde el inicio de su formación. sustituyendo colorantes. 25 . se lava. IMPORTANTE.. Por ejemplo esta técnica resulta sumamente útil para aquellos hongos en los que es difícil observar la formación de los conídios sobre los conidióforos y la forma y estructura de éstos. hifas.com For evaluation only. micelio. Mediante este método se puede observar bajo el microscopio. al efectuar el preparado correspondiente. Una vez que se tiene el resultado de las diferentes técnicas de aislamiento como lo es la obtención de la cepa pura. (2004) Objetivo. and Windham. usando lactofenol en lugar de agua para colocar el micelio.

Agua estéril. Bisturí. Pinzas de disección.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.foxitsoftware.com For evaluation only. Pipeta. Caja con cepa pura. Materiales y Métodos. Papel parafí 26 . Puntas. Aguja de disección. Caja de Petri con portaobjeto. Caja de Petri estériles con PDA. cubreobjeto y triangulo de vidrio (estéril). Recipiente con alcohol al 96%.

Biodiversity of fungi inventory and monitoring methods.. and Windham. Bills. F. Plant pathogen detection and disease diagnosis. and Foster.. Basic Plant Pathology Methods. Ø Muller.com For evaluation only. El crecimiento del hongo se detiene cada 24.B. 72 y 96 hrs.. O. Plant pathology. Modern assay for plant pothogenic fungi. D. Marcel Dekker Inc. and Oliver. uno de los cuadros de PDA se transfiere al portaobjetos que esta en la cámara de microcultivo . Se sella el dispositivo de microcultivo con papel parafilm y se rotula. 267 pp.foxitsoftware. UAM IB UNAM. 8. 2004. Dentro de la cámara de flujo laminar.. 413 pp. G. D. 2002. 518 pp. este paso se realiza en el interior de una campana de flujo laminar preparada para trabajar bajo condiciones asépticas 2.. C A B International. QK600. G. 518 pp. Los pasos 1-5 se llevan a cabo en el interior de una campana de flujo laminar o en mesas de trabajo en condiciones asépticas 6. Washinton. CRC Press. M. 777pp. 2001. Marcel Dekker Inc. 7. 1994. N. Se agregan 2ml de agua estéril. Elsevier Academic Press. C.. Boca Raton. respectivamente BIBLIOGRAFÍA Ø Dhingra. M. 5. Windham. y detener su desarrollo a la 48. Toriello. P. 2004.5 D45 Ø Mier. A. sin mojar el área de crecimiento del hongo. R. M. 1.. 90pp. se repiten los pasos del 1 al 7 para mas microcultivos. S. procurando que quede bien centrado. 27 .. CRC Press. T. London.3 M84 Ø Narayanasamy. Con un bisturí estéril se cuadricula el medio de cultivo de la caja de Petri con PDA en cuadros de aproximadamente 1 cm2. Hongos microscópicos saprobios y parásitos: Métodos de laboratorio. Dewey. Plant pathogen detection and diseases diagnosis. R. New York. 355 pp SB 732.B.B.56 P53 Ø Narayanasamy. QK 603 M55. C. Con la aguja de disección estéril o con una asa bacteriológica estéril se lleva el inóculo a las orillas superiores e inferiores del cuadro de PDA 4.. 2001. M. 1985.. F. Se coloca el cubre objetos sobre el cuadro de PDA inoculado. Concepts and Laboratory. B. SB732.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. SB731 N37 Ø Schots. A. T. C. SB 731 N37. P. y Ulloa. S. C.este portaobjetos debe de estar sobre el triangulo de vidrio 3.. C. con la ayuda de un bisturí estéril. M. and Sinclair J.C. SB733 M63 Ø Trigiano.B. en el fondo de la cámara de microcultivo para mantener la humedad.

La identificación del agente causal es básica para precisar el diagnóstico y así poder establecer el mejor método de control para estas limitantes biológicas en la producción agrícola. Metodología.. Hay que evitar que quede invertida la escala (Ver Fig 1). MEDIDA DE ESTRUCTURAS DE AGENTES FITOPATÓGENOS CON MICROSCOPIO ÓPTICO Introducción. acérvulos. Fig 1.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. de los datos morfológicos que hayan resultado de la técnica de microcultivo es necesario saber las medidas de las estructuras somáticas y reproductivas que se observan en el microscopio óptico para tener una identificación confiable del agente causal. óptico para su identificación morfológica Material. La The American Phytopathological Society en todas sus obras de enfermedades de los cultivos agrícolas.. Un microscopio óptico. apotecios. Para identificar a un agente fitopatógeno y cumplir cabalmente con el segundo postulado de Koch de además de los datos correspondientes al aspecto de los síntomas que hayan causado en su hospedante.Escala de la reglilla ocular micrométrica 2. 1. Calibración de los lentes objetivos.. Un micrómetro ocular. y B.. Por ejemplo si se habla de hongos fitopatógenos las estructuras que se miden para identificarlos son: picnidios. Preparaciones permanentes y/o temporales de estructuras fitopatógenos. esporodoquios. Objetivo. o de las colonias que hayan formado sobre las placas en medios de cultivo. las claves que usa para la identificación de los diferentes grupos de hongos fitopatógenos están en función del tamaño de las estructuras somáticas y de reproducción de este grupo de fitopatógenos. 28 .Sobre la platina del microscopio se pone el micrómetro del objeto similar portaobjeto como si fuese una preparación.com For evaluation only. estructuras somáticas y reproductivas de importancia taxonómica de agentes fitopatógenos con el microscopio. sinemas.Se coloca en el ocular del microscopio óptico el micrómetro ocular –aunque a menudo se trabaja con el ocular micrométrico permanente puesto en el microscopio. Un portaobjetos micrométrico. clestotecios entre otras.A. • Que el alumno aprenda a calibrar y medir células. peritecios.Colocación de la reglilla ocular.foxitsoftware..

Vista simultánea del ocular y de la reglilla micrométrica 4.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. con ese ocular y objetivos respectivamente.009 mm = 9 µm y este valor es el que utilizamos para definir el tamaño de cada estructura que se mide. Y se hacen los cálculos correspondientes. Puesto que cada división de éste equivale a 10 µm. es obvio que esta calibración es para este microscopio. y se puede saber cuantas líneas del micrómetro ocular concuerdan con cuantas lineas del micrómetro del objeto se hace coincidir el margen de una raya del micrómetro ocular con una del micrómetro del objeto. Ejemplo 2: Se hace coincidir los ceros de ambas reglillas (ver imagen 2) y se observa que siete divisiones del ocular micrométrico coinciden con dos divisiones del portaobjetos micrométrico. el • 29 .97 mm.. en el otro extremo de las reglillas se observa cual de las 100 líneas de la reglilla ocular coinciden con otra de la reglilla del portaobjetos.Moviendo la platina se observa a través de microscopio con ambas reglillas colocadas se les puede ver superpuestas en el campo visual. y se puede saber cuántas líneas del micrómetro ocular concuerdan con cuántas líneas del micrómetro del objeto.Escala de la reglilla portaobjeto 3. 3. como cada línea del micrómetro del objeto corresponde a 10 micras..Moviendo la platina se hace coincidir el margen de una raya del ocular micrométrico con una del portaobjetos micrométrico.Cuando se observa a través del microscopio con ambas reglillas micrométricas colocadas. Ver figura 3 Fig 3.. • Ejemplos 1: Se hace coincidir los ceros de ambas reglillas (ver imagen 1) y se observa que en el otro extremo de las reglillas el 100 de la reglilla ocular coincide con el 97 de los trazos de la reglilla del objeto. Puesto que las rayas del portaobjetos aparecen tanto más gruesas cuanto mayor son los aumentos.. la reglilla ocular se encuentra graduada del 0 al 10 a un lado la reglilla del objeto con 100 divisiones. la superposición de las líneas ha de ser siempre al comienzo del margen exterior de éstas.. es decir 0. por lo tanto. se hacen coincidir ambas reglillas en el cero. una línea del micrómetro ocular es equivalente a 0. Fig 2.foxitsoftware. se les puede ver superpuestas en el campo visual.com For evaluation only. Esta operación se deberá repetir cuando se cambie de microscopio o de objetivos para evitar errores. En el campo visual.

2ª. CECSA editor. 86pp.foxitsoftware. esta medición se puede realizar en un microscopio mono o binocular.Si se llega a cambiar el objetivo por otro menor aumento se debe repetir la operación para encontrar nuevos valores en la reglilla. 96 pp.Una vez que se ha cuantificado el valor de cada línea en la reglilla del ocular ( 9 y 2.Iztacala-UNAM P y V editores. D. se puede retirar el portaobjetos micrómetro y en su lugar se puede colocar un portaobjetos normal con el espécimen a medir y se deja colocado el micrómetro ocular. Lee.Medición de ejemplares y estructuras de micromicetes. por tanto el tamaño total de esta célula es de 16 x 9. Barcelona. M. Mateu. y A. Estado de México. Omega editores. 1. según se explicó antes. Fig 4. 1972.. Guía de los hongos microscópicos. FES Zaragoza UNAM.. se hace coincidir una raya de la escala con los márgenes de la estructura fúngica elegida. en este caso. una división del ocular = 20/7 = 2. España. R. E. • Ejemplo 3: Si la estructura del hongo se extiende a lo largo de 16 líneas y cada una de ellas vale 9 micras. donde coinciden la primera línea de las dos reglillas y la línea 2 de la reglilla portaobjetos con la siete de la ocular b).. valor de cada división del ocular se obtiene mediante una simple regla de tres: 7 divisiones del ocular = 20 µm. R. F. J. Dawson. Muntañola. Edición. 148 pp. B. BIBLIOGRAFIA Barrera. pero en este último caso se tiene que mantener inalterada la distancia interpupilar. de manera que se puede colocar una célula o estructura celular cualquiera. F. México. ____________.8 µm (Ver Fig 4). 167 pp. El Microscopio Óptico. 30 . puesto que el cambio altera la distancia mecánica y el valor del micrómetro depende de ella. 2.com For evaluation only. 1999. 1984.. 4ª. Barcelona.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Cárdenas 1997 El microscopio óptico FES. España.Vista simultánea del ocular y de la reglilla micrométrica. México. Edición.8 µm en los ejemplos). 1ª. México. México. E. Atlas de Microscopia. H y R. Jover Ediciones.. Técnicas para el Laboratorio de Biología. 1996. es decir 144 micras. y se cuenta el número de divisiones de la escala comprendidas en la longitud y en el ancho de dicha estructura. E. Edición. D. Barthelemy.

Opcional centrifugar el lisado por 5 minutos a alta velocidad 5.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Mezclar dos o tres veces durante la incibación invirtiendo el tubo.. AISLAMIENTO DE DNA FUNGICO DE CULTIVOS PUROS CON DNeasy Plant Mini Kit (esta práctica solo se realizara sí los alumnos seleccionan a hongos fitopatógenos en su seminario) OBJETIVO: Obtener DNA de cultivos puros de hongos fitopatógenos. INTRODUCCIÓN: MATERIALES Y METODOS 100 g.Tranferir el flujo del paso 5 a un nuevo tubo (no abatecido) sin provocar disturbios o perturbar el peller de desechos celulares.Añadir 130 ul de buffer AP2 a el lisado. tejido vegetal Mortero con pistilo estéril Tubos eppendorf Hielo Nitrógeno líquido Espátula Pipetas de plástico Gradillas eppendorf y de unicel Balanza Baño maría Centrifuga Vortex Reloj Autoclave Horno Pipetas de 10 ul Pipetas de 100 ul Pipetas de 1000 ul DNeasy Plant Mini Kit 1.Añadir 400 ul de Buffer AP1 y 4 ul de RNAsa solución stock (100 mg/ml) para unmáximo de 100 mg (peso fresco) o 20 mg (peso seco) de tejido vegetal y agitar vigorosamente en vortex..com For evaluation only... 4. Desechar el fluido y reusar el tubo colector en el paso 11.Colocar la DNeasy a un nuevo tubo colector de 2 ml (abastecido) añadir 500 ul de buffer AW a el DNeasy colum y centrifugar por un minuto a = 6000 xg ( = 8000 rpm).. incluyendo el precipitado que pudo haberse formado a el DNeasy mini spin colum sentado en un tubo colector de 20 ml (abastecido).Añadir 1. 3. mezclar e incubar por 5 minutos en hielo... 9. transferir el tejido en polvo a un tubo eppendorf permitiendo que el nitrógeno se evapore impidiendo que las muestras se descongelen. 6.5 volúmenes de buffer AP3/E a el lisado clarificado y mezcle por pipeteo.foxitsoftware.Incubar la mezcla por 10 minutos a 65o C. 31 . 7.Aplicar 650 ul de la mezcla del paso 7. 2..Pesar directamente en un mortero 100 mg de tejido fungico y macerarlo con nitrógeno líquido hasta un polvo fino usando el pistilo. Centrifugar por 1 minuto a = a 6000 xg corresponde a = 8000 rpm para la mayoría de las centrífugas y desechar el fluido.-. Continúe inmediatamente con el paso 2.Aplicar o transferir el lisado a el QIA Shredder spin column (tubo lila) sentado en un tubo de 2 ml y centrifugar por 2 minutos a máxima velocidad. 8.

Repetir la dilución (paso 12) como esta descrito. S28. cuidar de no formar burbujas en la placa de gel. Muestras de DNA de productos DNeasy en este caso.Transferir el DNeasy colum a tubos de cetrífuga de 1. una vez que se ponen las muestras en el gel.Añadir 500 ul buffer AW a el DNeasy colum y centrifugar dos minutos a una máxima velocidad para secar la membrana.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. TA29 (10 µl por muestra) Tinte para electroforesis 2 µl para cada una de las muestras de DNA Gradilla Gel de agarosa en TAE1X (ver elaboración de gel de agarosa) Rotulador Papel de parafilm rotulado con el nombre de las muestras (diseño de corrimiento) en el orden que se colocan en el pozo del gel. S26.. 12. Se colocan directamente del tubo al pozo. se si formaran. son las siguientes muestras: P16.foxitsoftware.. S27. marcador XIV se usa para DNA de banda pequeña. CAB. b) Cubrir el gel con el amortiguador TAE1X hasta que quede sumergido a 4 mm de profundidad respecto a la superficie del TAE. 13. Incubar por 5 minutos a temperatura de la boratorio y después centrifugar por un minuto a = 6000 xg (= 8000 rpm) para diluir.. retirarlas con la pipeta de 10 µl 32 . Micropipetas de 10 µl Puntas blancas estériles Pipetas de plástica Centrífuga Equipo de electroforesis Analizador de geles Flúor-S - - PROCEDIMIENTO a) Colocar el gel de agarosa dentro de la cámara de electroforesis. P26. el marcador se pone en los pozos de los extremos. 3 µl para un pozo y 6 µl para otro pozo. O bien. RESULTADOS ELECTROFORESIS PARA DE DNA DE HONGOS FITOPATOGENOS Kit (esta práctica solo se realizara sí los alumnos seleccionan a hongos fitopatógenos en su seminario) MATERIAL.5 ml o de 2 ml (no abastecidos) pipetesr 100 ul de buffer AE precalentado (65oC) directamente en la membrana de DNeasy. P27. P25. 11. el marcador se pone en los pozos de los extremos delas muestras.com For evaluation only. EQUIPO Y SUSTANCIAS Recipiente de unicel con hielo Marcador λ 50 ng/µl se usa para DNA de banda grande o 3 µl para un pozo del gel y 6 µl para otro pozo. Se colocan directamente del tubo al pozo.

C.5 D45 Ø Narayanasamy. SB733 M63 Ø Trigiano. SB731 N37 Ø Schots. R. 2004. como lo indica el esquema h) En el mismo orden. Dewey. C. R. and Oliver.com For evaluation only. P. O. 2001. e) En un trozo de papel parafilm. T. C. 355 pp SB 732.B. CRC Press. Modern assay for plant pothogenic fungi. Windham. en un extremo se colocan 3 µl a una concentración de 50 ng/µl y en el otro extremo se colocan 6 µl a la misma concentración.. and Windham. evitando derramarlas en los pozos adyacentes.. Marcel Dekker Inc. 518 pp. CRC Press. and Sinclair J. SB732.. encender la fuente deponer a 75 voltios y dejarla que corra durante 40-45 minutos. Washinton. D. New York.56 P53 Ø Narayanasamy. colocar cuidadosamente las muestras de ADN tenidas (gotas) en los respectivos pozos de gel. M 3 µl 50 ng/µl P16 Todas P25 las P26 P27 S27 10 µl S26 M +2 µl 6 µl de de 50 DNA tinte ng/µl S28 CA8 TA29 muestras llevan f) Colocar en el papel parafilm 2 µl de tinte y en esta gota formada en el papel .B. Basic Plant Pathology Methods. B. D. S. SB 731 N37 33 . M. 267 pp. Boca Raton. Resultados Bibliografía Ø Dhingra. 2001. i) Tapar la cámara de electroforesis.B. Plant pathogen detection and diseases diagnosis. 1985. A. se colocan los 10 µl de DNA de la correspondiente muestra. rotular en el siguiente orden las muestras de DNA y marcadores. M. (Se forma en el papel una gota de 12 µl de cada muestra) g) Los marcadores se aplican directamente del tubo que los contiene.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Este mismo procedimiento se lleva a cabo para cada una de las muestras de ADN. d) Centrifugar las muestras de DNA a alta velocidad durante 5-10 segundos y se colocan en un recipiente de unicel con hielo. Marcel Dekker Inc. F. Plant pathogen detection and disease diagnosis. A.. N. C. 1994.foxitsoftware. London.. 413 pp. c) Sacar las muestras de DNA del congelador y descongelarlas a temperatura de laboratorio en una gradilla. Concepts and Laboratory... Asegurarse de que los electrodos de la tapa tengan el rojo al frente y el azul atrás en la tapa y en la consola de mando el rojo (+) en la parte de arriba y azul (-) en la parte de abajo. P. Plant pathology.. 518 pp. C A B International.

Su cutícula es lisa.etc. Observación de nemátodos vivos. de azúcar +100 ml de agua) 34 . MATERIALES Y METODOS. reproductor y digestivo. Los nemátodos son gusanos cilíndricos con cuerpo alargado y delgado con simetría bilateral. 100 y 325 mallas /cm2 Pizeta Vasos de precipitados Preparaciones permanentes Muestra de suelo Tubos de centrífuga Centrífuga Agitadores Cajas de petri pequeñas Caolín Solución azucarada (55 gr. los cuales pasan toda su vida en el suelo y se alimentan externamente de las raíces de las plantas hospederas. produciendo lesiones internas en los tejidos vegetales.Cricononemoides. por ejemplo . o bien llegan hasta el cilindro central de las raíces hospederas. 3. Plástico de 1 m 2 Probeta 2 cubetas Tamices de 100. por ejemplo. Cacopaurus. Ditylenchus. Heterodera y Tylenchus. nervioso. En algunas especies de nemátodos la primera y segunda etapa larval no puede infectar a las plantas y sus funciones metabólicas son realizadas a expensas de la energía almacenada en el huevecillo.5-1 mm. a estos se les conoce como nemátodos semiendoparásitos. en donde permanecen o migran hacia otros órganos de las plantas. 1. Hemicycliophora. Los nemátodos fitopatógenos presentan géneros ectoparásitos. no segmentados y carecen de patas u otros apéndices. Algunos ejemplos de estos son Meloidogyne. Observación de preparaciones permanentes y temporales de nemátodos. Otros géneros pasan una parte de su vida como endoparásitos y la otra parte la pasan en el suelo que se encuentra alrededor de las raíces que parasitan . 2.com For evaluation only. Generalmente se ubican en el parénquima cortical. Extracción de nemátodos . Su tamaño fluctúa entre unas cuantas micras hasta 0. Presentan todos los sistemas fisiológicos principales de los animales como lo son el sistema excretor. etc. Esquematización de lo observado. Aphelenchoides. después de los insectos.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. ACTIVIDADES. Anguina. indicando los nombres de las estructuras. CUARTA PARTE: NEMATODOS Los nemátodos son organismos fitopatógenos que pertenecen al reino Animal y son probablemente los organismos pluricelulares más abundantes en el mundo. 4.foxitsoftware. Durante el ciclo de vida de los nemátodos se llegan a presentar cinco estados y cuatro mudas. Otros géneros son endoparásitos.

nunca recto. piedritas. Se observa al microscopio. 35 . etc. 11. Al sedimento se le agrega la solución azucarada y se agita bien. se deshacen los terrones y se retiran las basuras. 16. se vierte a través del tamiz de 325 y se recoge en la cubeta A. 6. Se recoge el sedimento con una pizeta y se pasa a una caja de petri pequeña con un poco de agua. 200 y 325 sobrepuestos y se recoge en la cubeta B. 9. a 2900 rpm. se deshacen los grumos y se vacía el sobrenadante en los tamices de 100. sobre todo si se desea hacer un estudio cuantitativo. 13. 15. Se pasa el sobrenadante por el tamiz de 325 y se lava perfectamente bien hasta eliminar por completo la solución azucarada. 2. Se tira el sobrenadante. La arenilla que quedo en el tamiz de 325 se recoge en un vaso de precipitados con una pizeta. Se coloca la muestra de suelo sobre un plástico. a 2900 rpm. La arenilla recogida se distribuye en los tubos de centrífuga y se le agrega un poco de caolín a cada tubo. 7. Esta operación se repite 2 veces más. 5 y se pasa al mismo vaso de precipitados. Esta mezcla se vacía en una cubeta A con un poco más de agua. EXTRACCION DE NEMATODOS POR EL METODO DE TAMIZADOCENTRIFUGADO 1. En una probeta o vaso de precipitados se ponen 200 ml de agua y se agrega suelo hasta que la marca del agua llegue a 400 ml. 14. raíces. El agua que se recogió en la cubeta B.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. procurando que el ángulo que forma el chorro de agua con el tamiz sea lo más agudo posible. 8. 3. 10. Se agitan bien. Se remueve bien la tierra para homogeneizarla. 4. Se centrifugan durante 3 min. ya que de esta forma el agua ayudaría a pasar a los nemátodos a través de la malla del tamiz y los dañaría. 5. Se centrifugan durante 5 min.com For evaluation only. La arenilla que quedó en el tamiz se recoge con una pizeta de la misma forma que se mencionó en el núm.foxitsoftware. Esta operación se repite dos veces más. Esto se hace con el objeto de tener una referencia del tamaño de la población que se encuentra en 200 ml de suelo. 12.

En qué se diferencian bioquímicamente las bacterias Gram (+) y las Gram( -)? 3 . de diámetro Una pinza Mohr CUESTIONARIO. Cómo están organizadas las células de los hongos? 4. Indique si es Gram (+) o Gram (-).foxitsoftware. siendo los de vida libre los que más se mueven y los que más abundantes resultan en este método de extracción MATERIALES. El suelo retenido en los tamices se centrifuga para separar a los nemátodos de las partículas orgánicas mediante la flotación de los mismos en una solución de gravedad específica mayor de la que poseen los nemátodos. normalmente los nemátodos parásitos tienen escasa movilidad. Señale 3 ejemplos de hongos fitopatógenos de cada clase de hongos. 2. 1. Describa la morfología de la que obtuvo su colonia de bacterias. mencionando la 36 .com For evaluation only. EXTRACCION DE NEMATODOS POR EL METODO DE EMBUDOS DE BAERMAN Este método se basa en los principios de movilidad de los nemátodos y de mayor densidad de estos que el agua.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Este método de extracción brinda la oportunidad de obtener casi todos los nemátodos del suelo de una forma rápida. hace que estos floten y queden suspendidos en la solución. Se emplea el caolín para sedimentar a los nemátodos y poder eliminar el agua sobrenadante de la muestra. por lo que este método funciona solamente para nemátodos muy móviles. La solución azucarada. Embudos preferentemente de vidrio de 15 cm. como tiene una gravedad específica mayor a la que presentan los nemátodos.

. Vol 1. CRC Press. QK603 A66 3. M. C. M. 5. Bills. Bridge. y Vol 2 492 pp.. I.C..B. Washinton. CRC Press. san Francisco. Cummins.Agrios. Herbert. T. 2004. León Gallegos. Trigiano. y Cummins. Applications of PCR in mycology. C. enfermedad que provocan. APS Press. C A B International. R. D.. SB731 N37 12.I. 1980 Métodos de investigación fitopatológico. San Diego. UAM IB UNAM. 1985. Plant pathology. B. B. Sydney.A. En qué se diferencian los nemátodos de vida libre de los fitopatógenos? Señale por lo menos 3 características. Marcel Dekker Inc. and Hiratsuka.T. C. B. OK 627. D. H. and Sinclair J. 1981.Plant pathology. A. 1987. F. end Hunter B. 6.foxitsoftware. * 1. Muller. D. Hongos microscópicos saprobios y parásitos: Métodos de laboratorio. F. T. 90pp.56 P53 PRACTICA 4 SINTOMATOLOGIA INTRODUCCION..R. 9. Qué importancia tienen las técnicas de tinción de microorganismos? BIBLIORAFIA. Schots. 992 pp. El conocimiento de la sintomatología es indispensable para el diagnóstico de las enfermedades. N. La Sintomatología es la rama de la Fitopatología que estudia la los síntomas y los signos que producen los patógenos en las plantas que atacan. E. Third Edition. APS Press 225 pp. SARH. New York.B.A1 H35 7. Boca Raton. Elsevier Academic Press. 1997. 2002. y Ulloa. 263 pp. 355 pp SB 732. Mier. H. M. San José. CAB. M. Second edition. Y. Barne H. G. Volume 1.com For evaluation only. Illustrated genera of smut fungi.5 D45 5. M. T. 777pp. Heidelberg. C. R.. Boston. Paris.3 M84 11. Kálman Vánky. L. Costa Rica. Singapore. Windham. QK 623. 2003. 238 pp.B. QK600. 2004. MacMillan Publishing Company. 440 pp. 1. Biodiversity of fungi inventory and monitoring methods. London. G. 1998. QK 603 M55. Illustrated genera of ascomycetes. Fourth edition. Uredinales (royas) de México. 518 pp. T. 5th ed.B.. M. and Oliver. G.. A1 4. 2005.. Modern assay for plant pothogenic fungi. and Windham. Illustrated genera of imperfect fungi. Basic Plant Pathology Methods. SB732. Dewey.. Elsevier academic Press. 267 pp.B. Amsterdam. 218 pp. C3 8. 37 . C. Tokyo. Toriello. 10. P. APS Press. 2001. London. and Foster.. C. Illustrated genera of rust fungi.. New York. S. 6. B. International. Concepts and Laboratory.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Dhingra. Hanlin. 413 pp.. SB733 M63 13. S. 1994. QK 628 A1 V35. QK 625 D1 B3 2. Narayanasamy. N. Plant pathogen detection and disease diagnosis. P. A.C. R. G. 2002. Oxford. French. G. O.

etc. 38 . a los que aparecen en otro órgano de la planta. tenemos que los síntomas que ocurren en los órganos directamente atacados por los patógenos se llaman Síntomas primarios. en cambio. Típicamente cada enfermedad produce varios síntomas característicos. los síntomas se agrupan en necrosis. OBJETIVOS. sino como una secuela de este. se llaman síntomas secundarios. debido a condiciones ambientales favorables al patógeno. Desde el punto de vista morfofisiológico. Otras veces los síntomas no se expresan totalmente. del número de patógenos involucrados. y un SIGNO es la estructura o evidencia del patógeno mismo. MATERIALES Y METODOS Ejemplares fitopatológicos de herbario Ejemplares fitopatológicos frescos Lupas Microscopios compuestos Microscopio estereoscópico Agujas de disección Navaja Los ejemplares a identificar se observan cuidadosamente. provocando síntomas complejos. hipoplasias e hiperplasias.com For evaluation only. ACTIVIDADES. no atacado directamente por el patógeno.foxitsoftware.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. se han agrupado bajo diversas condiciones. y se siguen las claves indicadas a continuación. Identificar los diferentes síntomas y signos que ocurren en enfermedades vegetales. se dice que un SINTOMA es la manifestación visible de una condición patológica en una planta sensible. Identificación de síntomas y signos en ejemplares vegetales enfermos utilizando las claves incluidas en la metodología. del efecto del medio ambiente. producida dentro o fuera de los tejidos del hospedero. dependiendo de diversos factores tales como el lugar de aparición. que generalmente aparecen en series subsecuentes durante el curso de la enfermedad. denominado a estos síntomas enmascarados. A dicha serie se le denomina síndrome. Así. utilizando la lupa y el microscopio cuando sea necesario. mediante la observación de material fresco y de herbario. En algunas ocasiones los hospederos son atacados simultáneamente por más de un patógeno. Debido a la gran cantidad de síntomas que existen.

. debido a la pérdida de la turgencia celular provocada por la carencia de agua....... como pequeñas gotas de agua contenidas dentro de los espacios intercelulares...foxitsoftware.1...1...1. 1... Tejidos verdes...........TIRO DE MUNICION 39 ..1....1...2... NECROSIS.5.. HOLONECROSIS 1. CHAMUSCADO Necrosis extendida en toda la lamina foliar de forma irregular…….....2.. quedando con un aspecto arrugado.......2...........1.2.2... HIDROSIS 1.. Caracterizadas por la degeneración y muerte celular Si se presentan antes de que ocurra la muerte celular..2.........3.. MANCHAS Manchas necrótica que posteriormente se rasga y cae..1..…………………….....................1.......2......2.1.com For evaluation only... como consecuencia de la necrosis del cuello del tallo.......1.....……………………..…..2. PODREDUMBRE 1...... HOLONECROSIS Si se presentan en tejidos de almacenamiento.1...... AMARILLEO Presencia de tejidos débiles...............1... Estas acumulaciones de líquidos provienen de células que han sufrido daños en sus membranas celulares..…....3. El agua es eliminada rápidamente de los tejidos.…………………….....2. casi siempre por el taponamiento de los vasos conductores a causa de los patógenos..... TIZON Zonas de tejido necrótico....1.2.2.2...2.1..1..1..1.2.....4. MARCHITEZ Manchas traslúcidas...... diversos colores y tamaños... PLESIONECROSIS El tejido foliar toma coloraciones amarillentas debido a la destrucción de la clorofila...………………………………………..Tejidos de almacenamiento Los tejidos sufren rápidamente una pudrición... flácidos..2..1.1...1.. PLESIONECROSIS Si se manifiestan hasta que las células y los tejidos mueren........ PODREDUMBRE Si es antecedida por hidrosis con un reblandecimiento de los tejidos………………... 1........2.1........ en ocasiones rodeadas por un borde púrpura o de algún otro color.2.. por lo que el órgano atacado se seca.1..2..3...........2..........2.1..................2.2... PUDRICIÓN BLANDA..1.2.. seco duro.. bien definidas. acuosas........1. Si se presentan tejidos verdes.....…..1..... Marchitez y caída de las plantitas de almácigo.2..………………………....1 AHOGAMIENTO ó "DAMPING-OFF" Necrosis localizada alrededor del borde de la hoja………1....... Si se presentan tejidos leñosos.1.2. 1.…....Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www...... 1.1. MOMIFICACIÓN 1... dejando pequeños agujeros..1.........1..........

.7....... ESCALDADURA Muerte repentina de brotes o yemas foliares………......2.................6...2.............BANDEADO Repentina desecación debilitación y muerte de toda la hoja debido a la acción indirecta de la actividad del patógeno.............2. GOMOSIS 2.. debido a la no formación de clorofila..3....…….........1..3.2. AGOSTAMIENTO Necrosis extensiva que provoca la caída de los frutos……………………………… ..2...……1.............2.. …………………......1.2... 1..2.3.......2.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.2.......... ENANISMO Crecimiento escaso de los entrenudos................2....12..2.. RONCHA ó ERUPCION Manchas necróticas muy pequeñas extendidas en todo el órgano....1... Tejidos leñosos Necrosis restringida a los tejidos corticales del tallo o raíz....2...............2...... a lo largo de venas y tallos…........ HIPOPLASIAS.…….. ..2..2......9.....1..2.... 1........1.2... Lo que ocasiona que las hojas estén muy juntas..... RAYADO Zonas necróticas alargadas......................MUERTE REGRESIVA Exudado de tejidos leñosos.. generalmente rodeado de un callo de tejido sano.1...2....3.... 1......5.......foxitsoftware...BLANQUEO Las plantas adquieren una coloración amarillenta.......1....3....4.........CANCER(CANCRO) Necrosis extensiva que se origina en el apéndice de brotes corre hacia su base....2..1.3...generalmente en frutos ……………….... SANGRADURA Exudados de consistencia viscosa (gomosa)...1.. en las regiones intervenales de la lámina ..2.. DESGRANAMIENTO 1.....10...........2.QUEMADURA Necrosis epidérmica que da como resultado un blanqueado de la epidermis y de los tejidos adyacentes en el fruto y hojas........................2................. generalmente después de la hibernación.2.....1.... generalmente coloreados vivamente......2...............8.... ARROSETADO Supresión completa de color en hojas o frutos.. MOSAICO 40 ...2....2...4........3.……….......... ABIGARRADO Zonas alargadas en necrosis............. de consistencia acuosa....com For evaluation only.....11.. CLOROSIS Moteado de colores verdes y amarillos o bien de tonos verdes... Síntomas caracterizados por la debilidad de órganos o plantas para desarrollarse completamente.... Debilidad para alcanzar un tamaño normal........... Mancha necrótica sobre la cual hay crecimiento micelial obscuro…………...2....13................. ..

foxitsoftware.. extendida……………………………. provocada por la acumulación excesiva de agua.7.………….…...... FASCICULACION "ESCOBA DE BRUJA" Crecimiento laminar de tallos u otros órganos cilíndricos.1. formadas por células con paredes suberizadas…………………………….8.1.2.....…………...9.....4. HIPERCROMIA Los órganos se desarrollan fuera de lugar o con otras formas…3.7. SUPRESION (EXTINCION) Tono amarillento blanquecino.6.2.. .1. INTUMESCENCIA Hinchazón provocada por la acumulación excesiva de material nutritivo.... como respuesta a una lesión. SARCOSIS Hinchazón localizada........ Debilidad completa de la planta para desarrollar algún órgano…..…………. generalmente encima de un área constreñida...1.. nódulos ó agallas) Desarrollo de órganos adventicios alrededor de un punto local.. en ocasiones acompañado por enanismo. FASCIACION Desarrollo continuado después de que se alcanza el desarrollo normal.3. Síntomas con desarrollo excesivo...……………………. o bien por un desarrollo precoz de los órganos.. HIPERCROMIA 41 .3. 3....1....2..... que se tornan quebradizos (aparece en plantas mantenidas en la obscuridad)..….6.... HIPERPLASIAS.. ...3.5.. 3..... generalmente rodeando cánceres...1...2. RIZAMIENTO (VERRUCOSIS) Sobrecrecimiento de tejido epidérmico.3......3.. elevadas. ásperas. los tallos con crecimiento excesivo.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.. CALLO 3...3.2.. proviene de la difusión del patógeno dentro de las áreas adyacentes al tejido sano.com For evaluation only.. Síntomas que resultan de un desarrollo excesivo en tamaño y color....3.....3.... de algún órgano de la planta o de la planta completa. en forma de pequeñas lesiones... COSTRA (ESCARA) Marchitez causada por hinchamientos de las células epidérmicas y subepidérmicas....………………. que envuelve a órganos completos…………………………..1. PROLIFERACION Crecimiento de tejido sano... Se da un torcimiento de los brotes o enrollamiento de las hojas por crecimiento excesivo de una parte del órgano……….1.....1.3..1..1. ETIOLACION 3. METAPLASIA 3. GIGANTISMO Síntomas con acumulación excesiva de pigmentos………… 3. GIGANTISMO.TUMEFACCION (tumores. 3.……………………………………………. provocando que estos tomen forma aplanada..1......

. en pequeños manchones o de forma continua......... resultado de diversos procesos. 4.…..2..... 4..foxitsoftware...1.. ROYA Se presenta una masa de color negro.. compuesta por teliosporas de Ustilaginales..Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.......... BRONCEADO 3..5.. En algunas ocasiones se observan conidios y cleistotecios.3.3...... debido a la producción y acumulación de ésta en los órganos…………...3...2... MILDIU O CENICILLA VELLOSA Se caracteriza por la presencia de pequeñas pústulas o ampollas subepidérmicas. esporangios........ casi siempre se observa en el haz una mancha en correspondencia......3..3.. pudiendo ser anaranjadas.. Su color varía del amarillo al café oscuros...... HETEROTOPIAS Desarrollo de Pétalos u otros órganos florales en forma de hojas. de color blanco. en tejidos normalmente carentes de clorofila.………………….. con apariencia de fieltro suave.. SIGNOS Se observa el crecimiento vegetativo del hongo. FUMAGINA U OLLIN 42 ... o bien..1............. Estructura de hongos -micelio y conidios....3....... 3. son circulares en dicotiledóneas y alargadas en monocotiledóneas. constituidas por fructificaciones de Albugináceas....3. etc.6.de color oscuro.. verdaderas costras………………………………………4.. Llegan a formar sobre la epidermis de las hojas. METAPLASIA Desarrollo de órganos en posiciones anormales....3. como un micelio de color blanquecino o grisáceo.. 3...........com For evaluation only.2. CARBON O HUITLACOCHE. Coloración verdosa. la cual puede estar cubierta por una membrana...... ROYA BLANCA O MAL DE LA CAL Presencia de pústulas que contienen una gran cantidad de esporas de uredinales.... 4... puede estar desnuda………….FILODIOS Desarrollo de hojas juveniles en plantas maduras………...…..4. Son producidos por Peronosporales………….………………………………………. JUVENILODIOS 4......... OIDIO O CENICILLA POLVOSA Se observa el crecimiento del hongo.. producidos por Meliolaceas o Capnodiaceas...2........ 3..4...... Todos son producidos por Erysiphales.......... VIRESCENCIA Coloración púrpura resultante del desarrollo excesivo de antocianinas…………….3.... frutos o ramas...............2.. localizado en el envés de las hojas........3..... algunas veces por deficiencia de potasio.4..3. con micelios....... ANTOCIANESCENCIA Coloración cobriza.1.

A. Matthews. Crabtree K. R. Plant Virology. corresponden casi siempre a fructificaciones de Moniliales………………. S. 1990.. etc…………………………. 5th ed.F. Lucas 1991. Matthews. 10. Luchar. Ed. Thomas. U. 1992. apotecios.T. Hopkins. Toronto. St Paul. Singapore. Centro Internacional de Agricultura Tropical Cali Colombia. and G. Galves (eds).E. U. Academic Press. San Francisco.F. soil climatic contraints of Phaseolus vulgaris.E. Elselvier/North-Holland. de tipo cremosos. 992 pp. Tokyo.* 2.7.4. * 4. Son exudados bacterianos. 2004. Sydney. España. Mundi-Prensa.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Press.* 2.E.A. H:F. St. * 6. PUNTUACIONES NEGRAS Es la apariencia de polvo sobre manchas de diversos órganos. CRC Press LLC.8 EFLORESCENCIAS GRISACEAS. 707 pp. C. * 1.R. Se presentan casi siempre sobre manchas foliares o de frutos. USA. D.9.. Hull.. 374 pp. Paul Minnesota American Phitopatologhical Society. 424 p. Shew H.E. Enfermedades de Cucurbitaceas: Observar. 857 pp. Brunt. Agrios. de color blanquecino. Schwartz. Amsterdam. Francisco. Paris. Identificar. 1. 1990. Alan. Compendium of cucurbit diseases.B. Sydney. New York. Academic Press. Viruses of Tropical plants. Luchar. London.C. M. 1991. San Diego. Diagnosis of Plant Virus Diseases. 897 pp. insect. Descriptions and List from the VIDE Database. Tokyo. 1996. R. R. INRA. Tosic. Fourth Ed.. Heidelberg. Bean production problems: diseases. España.S. picnidios. U. 1001 pp. R. 1991. Enfermedades del Tomate: Observar. 1999Hand boock of Plant virus diseases. 8. 5. Kurstak. London. y son las fructificaciones como acérvulos. Redwood Press Ltd.A. New York. 1980. New York. Paris France. 2002. Matthews´ Plant Virology. Zitter Th. 9. Identificar. 1. APS Press. E. Boston.. C. Dominique. san Francisco. Lapierre H. Dragoldjub D. 7. Compendium of tobacco diseases. San Diego.K. Boca Raton. P-A Signoret.com For evaluation only. 1991. Dominique. R. Mundi-Prensa. 2005.S. Elsevier academic Press. CAB International Australian Center for International Agricultural Research (ACIAR). Boston. Sutic. Blancard. London. Florida. BIBLIOGRAFIA. ZOOGLEAS. Plant virus infections. Sydney. 4.foxitsoftware. Ford.* 3.F.L. G. Minn. London.Plant pathology.E. Gibbs A. amarillento u otros………………………………………………………………4. Oxford. virases diseases of Poaceae (Gramineae). Biomedical Press. 553 pp* * En Biblioteca de la FES Cuautitlán C-4 PRACTICA 5 43 .D. Blancard. N.

c. durante el período de incubación. De contacto o residuales. pudiendo ser acropétalos si se mueven de las raíces al follaje.com For evaluation only. La principal excepción la constituyen los virus. entre los que se encuentran los virus. Se aplica para proteger a los productos cosechados. basipétalos si se mueven de las raíces al follaje. OBJETIVOS. las bacterias. a.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. La acción se restringe al sitio de aplicación. tratamiento a la semilla. Orgánicos b. Erradicativos. Su origen químico. Foliar. Se aplica a la semilla contra fitopatógenos transmitidos por el suelo y contra los transmitido por la misma semilla. La producción agrícola mundial sufre anualmente grandes perdidas debido a enfermedades causadas por agentes de diversa índole. a. Sitio de aplicación. Son transportados en la savia de la planta. Sistémicos. Modo de acción. GENERALIDADES SOBRE EL CONTROL QUIMICO DE ENFERMEDADES INTRODUCCIÓN. b. Se requieren varias aplicaciones para proteger los nuevos brotes y para reforzar la capa de crecimiento antes de la infección. 3. d. Inorgánicos 2. La necesidad de prevenir o controlar el desarrollo de las enfermedades ha motivado la creación de nuevos químicos capaces de obtener la deseada toxicidad selectiva hacia los patogenos problema. c. que hasta ahora han desafiado todos los intentos de control directo mediante compuestos químicos. El tratamiento se realiza después del periodo de incubación 4. Tratamiento al suelo. b.foxitsoftware. o bien. a. los hongos y los nemátodos. Se aplica al suelo contra fitopatógenos transmitidos por esta vía y para algunos sistémicos de transmisión aérea. Los compuestos químicos utilizados para prevenir o controlar el desarrollo de las enfermedades se clasifican por: 1. Tratamiento postcosecha. Se aplica al follaje. Curativos. a. 44 . basipétalos si el movimiento es a la inversa. El tratamiento se realiza. o bien. b. Modo de aplicación. Protectivos/ Profilácticos. Hoy día se tiene la capacidad de controlar algunos patogenos con un amplio espectro de compuestos químicos.

Fitotoxicidad CUESTIONARIO. A. Conocer algunos productos fitosanitarios . Aplicación l. Información adicional. D. con la finalidad de obtener la siguiente información: a. A. Origen e. APS Press. 45 . berkshire.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.pesticidas. un nematicida y un bactericida. Tuzun. 1. Dosis k. h.com For evaluation only. Durante una entrevista a un productor. 1. Agrawal. Fungicida protectivo. Los alumnos serán los encargados de conseguir las etiquetas en las casas comerciales o directamente con los fabricantes de dichos productos. 2. Usos i. 2001. Toxicidad f. Precauciones m.. J. Induce plant defensor against pathogens and herbivores. Nombre (s) comercial (es) b. E. Nombre químico c. Defina que es un fungicida.foxitsoftware.: Van Nostrand Reinhold. BIBLIOGRAFIA 1. puesto que el fabricante solo quiere ganar mas dinero haciendo que el productor aplique una dosis superior a la realmente necesaria. Deng. L. 3. Enfermedades importantes que controla o previene j. Pathogens and integrated defense responses to infection. b. Explique cada uno de ellos. Microbial control of plant and diseases. Plant. 826. and Bent. Defina.833.utilizados para el control de enfermedades. W. Deacon J. MATERIALES Y METODOS. G. 88 pp. este menciona que nunca utiliza la dosis indicada en la etiqueta del producto. residual o de contacto. Fungicida curativo o sistémico. Cómo respondería usted a este comentario?. S. Tipo o modo de acción d. así como su manejo y modo de acción. Washington. sus características mas importantes. Nature 411. 1983.. Mencione los principales factores que afectan la efectividad de campo de un producto químico al momento de su aplicación.. Etiquetas de productos químicos comercialmente utilizados para el control o prevención de enfermedades. 390 pp SB 750 I54 2. a. J. 2000. and Jones. 2. Formulación g.

com For evaluation only. Plant diseases control. R. Plant Diseases Control. Fox. N. T.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Strange. 354 pp. 1988. 1993. SB 731 F69 5. Chapman & Hall. SB 7326 S77. John Wiley & Sons Inc. Vidhyasekaran. 1993.foxitsoftware. SB 731 M338 6. 213 pp. 46 .. CRC. Volume 2 pp 128. Maloy. Volume 1. 7. 1993. Towards environmentally acceptable methods. SB 750 V54. C. P. 346 pp. Press. CAB International. 4. pp 149 SB 750 V54. O. Physiology of Disease Resistance in Plants. Principles and practice. R. Principles of diagnostic techniques in plant pathology.

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