Depto. Bioqumica Clnica e Inmunologa. Inmunologa Facultad de Ciencias de la Salud.

Escuela de Tecnologa Mdica

LABORATORIO 2:

CELULAS SANGUNEAS Y SEPARACIN DE CELULAS MONONUCLEARES

INTEGRANTES: Sindy Bravo. Nicole Inostroza. Vanesa Manriquez. PROFESOR: Marcelo Alarcn FECHA: 18 de Nov del 2011

Introduccin
El sistema inmunolgico es la defensa natural del cuerpo contra las infecciones. Por medio de una serie de pasos, el cuerpo combate y destruye organismos infecciosos invasores antes de que causen dao. Para que el sistema inmune acte se requiere la participacin de diferentes poblaciones celulares que son conocidas como clulas inmunocompetentes. Cada componente tiene una tarea especial enfocada a reconocer el material extrao (antgenos) y/o reaccionar en contra de los materiales extraos. Algunos componentes tienen como funcin nica y principal el reconocer el material extrao. Otros componentes tienen la funcin principal de reaccionar contra el material extrao. Estas clulas, que mayoritariamente son leucocitos, circulan por la sangre y la linfa, adems se encuentran en todo el cuerpo: piel, mucosas, ganglios linfoides, etc. Esto hace que sea posible el encuentro de estas clulas con los antgenos y adems que sea posible la interaccin entre ellas, aspectos que son necesarios para el desarrollo de una respuesta inmune adecuada tanto innata como adaptativa. Los leucocitos son un conjunto heterogneo de clulas, son las principales clulas que participan en la respuesta inmune se encuentran en menor cantidad que los eritrocitos. El nmero promedio de leucocitos en la sangre circulante es de 5000 a 10000 mm3.; se clasifican en mononucleares o granulocitos (linfocitos y monocitos) y en polimorfonucleares tambin llamados granulocitos (neutrfilos, eosinfilos y basfilos). Todas estas clulas derivan por diferenciacin de las clulas madre CD34+ presentes en la mdula sea. Mediante procesos de diferenciacin de las clulas madre pluripotentes, se forman dos tipos distintos de clulas, son los progenitores mielomonocticos y los progenitores de leucocitos o glbulos blancos. Los progenitores mielo-monocticos, se diferencian a su vez en siete lneas celulares que, tras diferentes grados de maduracin, terminan formando los eritrocitos, plaquetas, basfilos, eosinfilos, neutrfilos, monocitos y clulas dendrticas mielomonocticas. Por otra parte los progenitores linfocticos, se diferenciaran en linfocitos T (timo), B (mdula sea), clulas NK (timo y mdula) y ciertos tipos de clulas dendrticas (mdula) Los linfocitos presentan un ncleo redondo u oval, con escaso citoplasma y constituyen aproximadamente el 20-25 % de los leucocitos circulantes en el adulto. Son las clulas responsables del reconocimiento especfico de los agentes patgenos, iniciando las respuestas inmunitarias adaptativas, los linfocitos se dividen en tres grupos funcionales: Linfocitos T, Linfocitos B y Clulas Natural Killer. Los linfocitos T y B, cuando no estn activados presentan un gran ncleo simple rodeado por una aureola de citoplasma (en

anillo), aparato de golghi pequeo, pocos grnulos y RER poco desarrollado. Adems tiene gran nmero de ribosomas libres. Por otro lado, los monocitos presentan un ncleo excntrico arrionado, con abundante citoplasma y representan entre un 4-10 % de los leucocitos sanguneos, su funcin se relaciona con la fagocitosis de microorganismos, clulas alteradas y restos celulares, ya que en su citoplasma contienen grnulos con enzimas hidrolasas cidas que en complemento con los mecanismos oxidativos intervienen en la destruccin de partculas fagocitadas. Son precursores de los macrfagos, ya que luego de circular un tiempo por sangre pasan a los tejidos para transformarse en stos. Para estudiar las clulas sanguneas, en especfico las clulas inmunoconpetentes, se debe tratar en primera instancia una muestra de sangre con anticoagulantes, puesto que este impide que se formen los coagulos, de modo que la fase lquida de la sangre permanezca mezclada con los componentes celulares. De los anticoagulantes disponibles el utilizado fue la Heparina, por su rapidez casi inmediata de reaccin. La heparina corresponde a un glicosaminoglicano compuesto por varias cadenas, en las que se alternan residuos de D-glucosamina y cido urnico. Su efecto anticoagulante est determinado por un pentasacrido nico con alta afinidad por la antitrombina III (ATIII). La interaccin de la heparina con la ATIII induce un cambio conformacional en esta ltima, acelerando en forma importante su capacidad para inactivar la trombina y los factores IXa, Xa, XIa y XIIa; dentro de stos, la trombina y el factor Xa son los ms sensibles a la inhibicin. Como paso clave en el estudio de las clulas inmunocompetentes, se tiene la centrifugacin, para separar las clulas sanguneas por peso con la ayuda de una sustancia de densidad conocida, que en este caso fue Histopaque, que es una solucin de polisucrosa y diatrizoato sdico, ajustada a una densidad de 1,077 0,001 g/ml, densidad a la que se separan las clulas mononucleares (linfocitos y monocitos) de las polimorfonucleares (neutrfilos, eosinofilos, basfilos). En la fase de observacin se debe teir un frotis sanguneo con las clulas separadas, con colorantes en este caso eosina, que tiene afinidad por las sustancias acidas como las del citoplasma, y el azul de metileno, que tienen afinidad por las sustancias bsicas como los componentes del ncleo celular, tcnica llamada May Grunwalds-Giemsa. Luego de esta tincin las clulas se pueden distinguir por color y observarse al microscopio ptico. Como objetivos principales se tiene separar de clulas sanguneas, seleccionar clulas mononucleares y observar las mismas en un frotis sanguneo.