Comprobacin de la Identificacin de cadveres a travs de muestras biolgicas no convencionales en el anlisis de ADN. Hernndez Pineda W. E, Romero Taura L.

H, Durn Chavarra J.C.

1. Introduccin (motivacin, justificacin y alcance del trabajo) El reconocimiento medico legal de un cadver constituye uno de los puntos cardinales en todo proceso de investigacin judicial, situacin que a su vez contribuye a esclarecer las causas y circunstancias en las que se produce una muerte violenta o sospechosa de criminalidad. Sumado a ello, la investigacin persigue identificar o individualizar a la persona victima de un presunto hecho delictivo. En el ejercicio de la prctica forense; muchos de los hallazgos evidenciados durante el reconocimiento medico legal de un cadver, son el resultado de la transformacin biolgica de la materia; es decir, los fenmenos cadavricos, nombre con que se designan los cambios que sufre un organismo sin vida a partir del momento en que se extinguen los procesos bioqumicos y fisiolgicos vitales. Dichos cambios deforman las caractersticas anatmicas y fisonmicas de un individuo, lo que dificulta su individualizacin y filiacin, teniendo que recurrir a tcnicas de laboratorio gentico-forense mediante la extraccin y anlisis de muestras biolgicas provenientes del cadver teniendo en cuenta que aun el ms simple de los organismos contiene una enorme cantidad de informacin gentica. Convencionalmente y para dichos fines se han utilizado muestras biolgicas tales como piezas dentales y fragmentos de huesos largos (epfisis), estructuras que posteriormente son sometidas a un riguroso proceso de extraccin del material gentico que ser el sustrato utilizado para establecer la identificacin o consanguinidad a demostrar. La eleccin de dichas estructuras anatmicas se fundamenta en su grado de resistencia a la transformacin y degradacin en comparacin con el resto de tejidos corporales. No obstante y pese a ser consideradas las matrices biolgicas de escoge para este tipo de anlisis; existe en el organismo una serie de regiones anatmicas a partir de las cuales se puede obtener muestras no usuales o no convencionales en

donde creemos es posible aislar la materia prima (el suficiente ADN) que admita una inequvoca identificacin cadavrica. Fundamentados en los principios biolgicos referentes a las clulas eucariticas presentes en nuestro organismo (clulas nucleadas), estas constituyen el primer eslabn en la cadena evolutiva celular (clulas con mayor nivel de organizacin) mismas a las que se puede someter a un proceso de anlisis que arroje los resultados de identificacin esperados, por lo que el desarrollo cientfico ha permitido la introduccin de la tecnologa del ADN en la investigacin forense, posibilitando el estudio de indicios biolgicos mnimos, hecho que unos pocos aos atrs era imposible. Adems considerando el deterioro tisular propio de los fenmenos cadavricos as como la accesibilidad misma para la toma de muestras; estructuras anatmicas tales como musculo cardiaco y medula sea asi como fluidos corporales entre ellos el humor vtreo, los cuales seran una alternativa ms de eleccin para la extraccin y anlisis de ADN encaminado a la identificacin cadavrica. Dicha alternativa de eleccin resolvera hallazgos propios de escenas del delito en donde nicamente se evidencia la presencia de cuerpos incompletos, regiones anatmicas mutiladas (extremidades, torsos, cabezas edntulas), cuerpos carbonizados, as como tambin frente a cadveres en diferentes estadios de putrefaccin. La identificacin mdico-legal a travs del anlisis del ADN se realiza sobre regiones no codificantes del genoma, es decir, aquellas que no contienen informacin alguna sobre las caractersticas fenotpicas de las personas. Es decir, que por medio del anlisis forense del ADN no se puede saber sin un individuo es rubio, alto, gordo,... ni conocer si va a sufrir alguna enfermedad o si tiene tendencia a padecer determinados tipos de patologas, ya que el ADN no codificante no contiene esa informacin. Por lo que se establece que El estudio del ADN ha supuesto un enorme "paso de gigante" en la identificacin mdico-forense de la investigacin criminal. 1.1. Antecedentes del problema de investigacin:

Desastres Naturales en el territorio nacional Accidentes areos en el territorio nacional.

 Motines en crceles de El Salvador Localizacin de cadveres calcinados o putrefactos

1.2.

Objetivo General viabilidad de su anlisis con respecto al

Comprobar la utilidad de idenficacin cadavrica a partir de muestras no convencionales, diferenciando la vitales. mecanismo de muerte y al tiempo transcurrido del cese de las funciones

1.3.

Objetivos especficos

Demostrar la efectividad de muestras no convencionales como matriz biolgica de eleccin para el anlisis de material gentico. Determinar la viabilidad de la muestra biolgica mediante la data de muerte Elegir la muestra de escoge partiendo del mecanismo de muerte

2. Marco terico Todo organismo, an el ms simple, contiene una enorme cantidad de informacin gentica. Esa informacin le permite tener caractersticas que lo diferencien de otros individuos. Como se sabe, todas esas caractersticas estn ubicadas en un conjunto de molculas orgnicas de gran tamao llamadas cidos nucleicos. En cada una de las clulas de un organismo encontramos dos molculas de este tipo: el cido desoxirribonucleico (ADN) y el cido ribonucleico (ARN). Ambos tienen propiedades y funciones muy diferentes en la clula. Pero es el ADN el que lleva la transmisin de informacin gentica de los padres a los hijos, llamada herencia. El ADN es una macromolcula orgnica compuesta por dos cadenas de polinucletidos enrolladas en forma de doble hlice. Esta molcula se encuentra principalmente en los ncleos de las clulas y tiene la funcin de regular todo lo que pasa en la clula y mantener las caractersticas hereditarias

del ser vivo. El ADN est conformado por nucletidos que a su vez tienen tres componentes principales: un grupo fosfato, un azcar (desoxirribosa, de seis carbonos y una base nitrogenada, que puede ser cualquiera de las siguientes cuatro sustancias: adenina, guanina, citosina y timina. El ADN a su vez tiende a enrollarse formando estructuras llamadas cromosomas, en unin con protenas y alguna cantidad de ARN. Estos cromosomas estn divididos en unidades llamadas genes, las cuales se encargan de la codificacin de las caractersticas de los seres vivos. Los defectos de los genes pueden causar malfuncionamientos en el metabolismo del cuerpo, y es el origen de muchas enfermedades genticas. Como es posible deducir de lo anteriormente expuesto, un control sobre la transmisin de la informacin gentica nos permitira la erradicacin de una gran variedad de enfermedades que tienen origen gentico a partir del ADN codificante. Existen muchos mtodos para lograr todos estos avances como la transferencia de genes, ADN recombinante, activadores genticos, clonacin, hibridizaciones, electroforesis, reaccin en cadena de la polimerasa entre otros. En el pasado se utilizaban los sistemas biolgicos. La identificacin en Medicina Legal tiene unas consecuencias inmediatas sobre el individuo que no aparecen en otros campos de la ciencia. La identificacin en el contexto mdico-forense nos identifica al individuo, pero tambin a parte de sus circunstancias, ya que, al margen de su participacin o no en los hechos nos relaciona a la persona con unos determinados sucesos criminales, lo cual puede acarrearle una serie de consecuencias sociales que en ocasiones pueden ser difcilmente reparables y justificables. Basndonos en la funcin del ADN podemos dividirlo en dos grandes grupos: ADN CODIFICANTE Conforman los genes y que se expresa en aminocidos y protenas. Se supone que es un 10% del total del genoma humano, donde se encuentran unos 30,000 genes. Son aquellos fragmentos de cido nucleico que determinan, por el orden de sus nucletidos a los diferentes genes que definirn las caractersticas de las personas a travs de la sntesis proteica. Es decir que determinan en principio la secuencia de aminocidos de las protenas que codifican y el grado de expresin del gen en cada tejido.

Es el ms interesante desde el punto de vista mdico y carece de inters en ciencias forenses, con fines de identificacin humana. Posee poca variabilidad y est representado por los EXONES o copias de ADN en el citoplasma que son utilizados para la codificacin de protenas. Esta funcin del ADN se corresponde con la idea generalizada que se tiene sobre el mismo. ADN NO CODIFICANTE. No transmite informacin gentica en forma de aminocidos o protenas, lo cual no significa que no tenga utilidad. Se supone que representa un 90% del genoma humano y ha sido llamado no esencial o basura (Junk) por los clnicos, por carecer de valor especial con lo referente a los genes, ya que no contiene regiones que tienen que ver con caractersticas de las personas y representa el ADN ESENCIAL para la investigacin forense, por ser til para la identificacin de personas. Es tremendamente variable y polimrfico. En l se encuentran los marcadores genticos. Son representados por los INTRONES o secuencias de ADN sin editar, por las enzimas biolgicas. La identificacin mdico-legal a travs del anlisis del ADN se realiza sobre regiones no codificantes del genoma, es decir, aquellas que no contienen informacin alguna sobre las caractersticas fenotpicas de las personas. Es decir, que por medio del anlisis forense del ADN no se puede saber sin un individuo es rubio, alto, gordo,... ni conocer si va a sufrir alguna enfermedad o si tiene tendencia a padecer determinados tipos de patologas, ya que el ADN no codificante no contiene esa informacin. Es cierto que si disponemos un archivo con material biolgico (sangre o saliva) la muestra podra destinarse a otro tipo de anlisis, diferente a la identificacin mdico-legal, pero tambin es cierto que las muestras archivadas en esas bases de datos, no podrn ser utilizadas en otros estudios clnicos por la cantidad de material (que es mnima, suficiente para el estudio forense, pero difcilmente para un anlisis clnico) y por las condiciones y caractersticas del mismo, ya que este se guardan en forma de manchas secas, con lo cual la calidad del ADN se ver afectada. El desarrollo cientfico ha permitido la introduccin de la tecnologa del ADN en la investigacin forense, posibilitando el estudio de indicios biolgicos mnimos, hecho que unos pocos aos atrs era imposible. El Mdico Forense se encuentra en una posicin privilegiada para recoger algunos vestigios que por

su fragilidad pueden alterarse o perderse como consecuencia de una actuacin retrasada, permitiendo su estudio y la resolucin del caso, con las consecuencias beneficiosas que de ello se derivaran. El estudio del ADN ha supuesto un enorme "paso de gigante" en la identificacin mdico-forense, tanto en la investigacin criminal, como en la investigacin biolgica de la paternidad. Las especiales circunstancias en las que se desenvuelve la primera de ellas hace que el potencial tecnolgico no sea suficiente para la consecucin del objetivo si previamente no se ha realizado un buen trabajo por parte del equipo de investigacin encabezado por el Mdico Forense, que por su formacin y especializacin es el profesional idneo para valorar los indicios biolgicos.

3. Diseo Metodolgico 3.1. 3.2. Tipo de estudio: Descriptivo Poblacin objetivo: Personas fallecidas no identificadas por mtodos convencionales 3.2.1. Ubicacin: Instituto de Medicina Legal Regin Metropolitana, departamentos de Patologa y Gentica forense. 3.2.2. Criterios de inclusin y exclusin: Criterios de inclusin: Cadveres no identificados Criterios de exclusin: Cadveres identificados 3.3. Universo y muestra: Todos los cadveres no identificados, que lleguen al departamento de patologa durante el periodo de estudio (Octubre Diciembre 2011) 3.4. Procedimientos analticos: Extraccin: Muestras convencionales (Sangre, Semen, Tejidos, Pelos, Saliva, Uas, Hueso, etc.) o muestras no convencionales (Humor vtreo, Medula osea, musculo cardiaco, etc.) + Buffer + Proteinasa K, para obtener ADN Extrado

Amplificacin: se realiza por medio de la reaccin en cadena de polimerasa o PCR, en un termociclador: ADN Extrado + Nucletidos + Primers + Taq Polimerasa, para obtener Copias de un fragmento Visualizacin de resultados: se realizara a travs de la tcnica de electroforesis capilar, con fluorescencia, utilizando el equipo analizador gentico ABI 310, separado a travs de polmeros. 4. Anlisis de resultados: 5. Conclusiones y recomendaciones: