Material didtico de apoio disciplina BVE 270

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Assimilao do Nitrognio
Prof. Marcelo Ehlers Loureiro Indice analtico Assimilao do Nitrato............................................................................................................................ 3 Reduo do nitrato a nitrito............................................................................................................... 4 A reduo do nitrito a amnia ........................................................................................................... 6 Assimilao da amnia: ..................................................................................................................... 7 Assimilao do nitrato nas razes. ..................................................................................................... 8 Custo energtico e regulao da assimilao do nitrato.................................................................. 9 Um grande espectro de aminocidos o produto final da assimilao do nitrato...................... 11 A sntese do glutamato requere a participao do metabolismo mitocondrial ........................... 12 Biossnese de prolina e arginina....................................................................................................... 12 O aspartato o precursor da sntese de cinco aminocidos.......................................................... 13 Aminocidos aromticos so sintetizadas via a rota do cido chiqumico................................... 13 Glutamato o precursor para a sntese de clorofilas e citocromos .............................................. 14 Altos nveis de amnia ou nitrato podem ser txicos..................................................................... 14 Fixao Simbitica do Nitrognio........................................................................................................ 15 A fixao de nitrognio requer condies anaerbicas.................................................................. 15 Fixao simbitica do nitrognio em plantas leguminosas............................................................ 16 O estabelecimento da simbiose requer uma troca de sinais entre a planta e a bactria ........... 21 O complexo enzimtico nitrogenase fixa o N2 ................................................................................ 23 Os ndulos exportam amidas e uredeos......................................................................................... 25 A planta hospedeira fornece carbono para os bacteriides na forma de cidos dicarboxlicos 26 Outras formas de fixao de nitrognio.......................................................................................... 27 Benefcios econmicos da fixao de nitrognio............................................................................. 29

Em mdia, a matria seca que uma planta acumula composta em 96% por carbono, oxignio e hidrognio. Entre os elementos minerais, o nitrognio o elemento presente em maior concentrao, o qual situa-se em torno de 1,5% da matria seca. O nitrognio faz parte de um grande nmero de diferentes substncias as quais perfazem muitas diferentes funes na planta, como podemos ver na figura abaixo:

Fig. 1. Estrutura de algumas substncias que contm nitrognio e que realizam diferentes funes nas plantas.

Durante o crescimento auxotrfico das plantas, o nitrognio inorgnico assimilado na sntese de molculas orgnicas, e se encontra presente nestas principalmente na forma NH3. Duas principais formas de assimilao do nitrognio podem existir: Fixao do nitrognio molecular (N2) do ar Assimilao do nitrato (NO3-) ou amnia (NH4) contido na gua ou no solo Dentre essas duas formas, a predominante a assimilao do nitrato, a qual responsvel por 99% do nitrognio na biosfera. A assimilao na forma de amnia relativamente insignificante, exceto em solos pouco drenados ou alagados, quando essa forma de nitrognio no pode ser prontamente convertida pelas bactrias nitrificadoras presentes no solo. A amnia, contudo, continuamente adicionada naturalmente aos solos como produto final da degradao da matria orgnica dos organismos em decomposio, sendo rapidamente convertida em nitrato na maioria dos solos.

Fig.2: Esquema resumido do ciclo do nitrognio. O ciclo do nitrognio apresenta as principais origens e transformaes do nitrognio, onde ocorre um processo cclico de sua transformao da forma inorgnica orgnica, e vice-versa, dentro das cadeias trficas da biosfera. Como pode-se observar a fixao biolgica muito maior do que a soma da fixao atmosfrica com a fixao industrial. Tambm podemos observar que a fixao biolgica fornece menos do que 10% do total de N adquirido pelas plantas. Outros valores no apresentados na figura acima correpondem por exemplo a voltatizao da amnia.

Assimilao do Nitrato A assimilao do nitrato corresponde a 99% do nitrognio adquirido pelas plantas, e catalizada pela ao das enzimas redutase do nitrato e redutase do nitrito.A enzima redutase do nitrato (NR) uma enzima citoslica que cataliza a reao de reduo do nitrato a nitrito, enquanto a enzima redutase do nitrito (NiR) uma enzima cloroplastdica que converte o nitrito a amnio, conforme a reao abaixo:

Fig. 3: Reaes de assimilao do nitrato pelas enzimas NR e NiR Reduo do nitrato a nitrito Cada subunidade de uma NR das plantas superiores composta de trs grupos prostticos: FAD (dinucleotdeo da flavina-adenina), grupo heme, e de uma pterina (molcula orgnica contendo o molibdnio complexado; fig 3). Devido a importncia desse elemento mineral para a atividade dessa enzima que plantas com deficincia de molibdnio apresentam acumulao de nitrato. O domnio FAD da NR reponsvel pelo captura de dois eletrons do NAD(P)H. Os eltrons passam ento para o grupo heme, chegando ento a pterina (abreviada como MoCo), aonde os eltrons so cedidos a uma molcula de nitrato, formando ento uma molcula de nitrito. Essa enzima tambm capaz de transportar eltrons do NADPH ao Fe3+, ou do metil-violognio ao nitrato, ou do NADPH ao clorato (ClO3-), transformando-o em clorito (ClO2-), o qual toxico podendo levar a planta a morte. O clorato tem sido utilizado para obter mutaes que anulam ou reduzem fortemente a atividade da NR, e tem sido utilizado no passado com um herbicida no seletivo para matar plantas daninhas nas estradas de ferro.

Fig. 4. Estrutura da enzima nitrato redutase e seqncia de transporte de eltrons entre os seus grupos prostticos. O nitrato assimilado nas folhas e tambm nas razes das plantas. Na maioria das plantas herbceas, as quais possuem um crescimento relativamente rpido, a assimilao do nitrato ocorre primariamente nas folhas, embora a assimilao nas razes pode frequentemente ter um papel importante nos estgios iniciais do desenvolvimento dessas mesmas plantas. Em contraste, muitas plantas lenhosas (arbustos e rvores), e tambm legumes, podem ter a assimilao do nitrognio ocorrendo em altos nveis nas razes.

Fig. 5. Possveis rotas na Assimilao do nitrognio em plantas.

As razes das plantas contm um sistema de absoro de nitrato o qual dependente indiretamente de energia (dependente do gradiente de prtons criados pela ATPase da membrana), o qual pode ter alta afinidade pelo nitrato, podendo absorver nitrognio do solo mesmo que em concentraes to baixas quanto 10 uM. Para cada molcula de NO3- absorvida, dois prtons so cotransportados por um carregador simporte do nitrato. Dessa forma, a absoro do nitrato altamente dependente da gerao do ATP pelas mitocndrias das clulas das razes, podendo essa absoro ser drasticamente reduzida ou mesmo anulada quando a gerao do ATP reduzida, como quando da ocorrncia da hipoxia (baixos nveis de oxignio) nas razes. Tambm os ons NH4+ enibem a absoro de nitrato.

Fig. 6: Absoro do nitrato por uma clula e as possveis rotas de seu metabolismo ou compartimentalizao. . O nitrato absorvido pelas razes podem ser armazenados temporariamente neste orgo nos vacolos de suas clulas corticais e epidrmicas. A amnia utilizada pode ser utilizada nessas clulas para a sntese de amidas (como por exemplo, da asparagina e da glutamina). Esses dois aminocidos so ento transportados para a parte area da planta atravs do xilema (fig. 5). O transporte de amidas da raiz pode coexistir com o transporte de nitrato. 0 nitrato transportado at as clulas do mesfilo reduzido a nitrito pela enzima redutase do nitrato presente no citosol e ento at amnia pela enzima redutase do nitrito no cloroplasto (fig. 5). A reduo do nitrito a amnia A reduo do nitrito a amnia requer mais energia do que a reduo do nitrato a nitrito. Na reduo do nitrito requerido o uso de seis eltrons, os quais so catalizados pela enzima redutase do nitrito (NiR), a qual localiza-se exclusivamente nos plastdeos. O doador de eltrons a ferredoxina. A redutase do nitrito contm um grupo 4Fe-4S, uma molcula de FAD e um grupo siroheme. Esses trs grupos formam uma cadeia de transporte de eltrons da ferredoxina ao nitrito.

Fig. 7: Esquema mostrando a reao catalizada pela NiR e a seqncia de transporte de eltrons entre os grupos prostticos da enzima.

A capacidade de reduo do nitrito no cloroplasto muito maior do que a capacidade de reduo do nitrato no citosol, em parte devido a alta afinidade daquela enzima pelo nitrito. Este fato importante, visto que o nitrito pode ser txico a clula vegetal Assimilao da amnia: A assimilao da amnia envolver principalmente a atividade de duas enzimas que atuam seqencialmente, a sintetase da glutamina (GS) e a sintase do glutamato (GOGAT). A enzima GS est presente nos cloroplastos e transfere a recm sintetizada molcula de amnia em glutamina, s custas de ATP e glutamato. A sintetase da glutamina tambm possui alta afinidade pela amnia, de tal forma que no ocorre acmulo desse composto que tambm pode ser bastante txico clula vegetal.

Fig. 8: Detalhes das reaes catalizadas pela GS e GOGAT na assimilao da amnia Nas plantas C3 ocorre um alto nvel de fotorespirao. A quantidade de amnia liberada durante a oxidao da glicina cerca de 5 a 10 vezes maior do que a quantidade de amnia gerada pelo assimilao do nitrato. Dessa forma somente uma pequena proporo da sintese de glutamina nas folhas diretamente envolvida na assimilao do nitrato. Existe tambm uma isoforma de sintetase da glutamina no citosol das clulas das plantas.

Fig. 9. Compartimentalizao das reaes da assimilao do nitrato e da fotorespirao em clulas mesoflicas. A amnia pode ser formada na descaboxilao da glicina na fotorespirao (colorida em preta), ou atravs da assimilao do nitrato.

O herbicida glicofosinato (Nome comercial Basta) um anlogo do glutamato, e enibe a enzima sintetase de glutamina (GS). Este herbicida, ao ser aplicado as plantas enibe a GS, levando a planta a morte devido a acumulao de amnia.

Fig. 10. Estrutura qumica do herbicida Basta (glicofusinolato), inibidor da GS. A glutamina formada no cloroplasto serve como substrato juntamente com uma molcula de -cetoglutarato, e convertida a duas molculas de glutamato atravs da enzima sintase do glutamato (tambm chamada de glutamina-oxoglutarato aminotransferase, GOGAT), utilizando o poder redutor da ferredoxina. Algumas plantas podem conter uma outra enzima equivalente, a qual utiliza, o NADPH como redutor ao invs da ferredoxina. O -cetoglutarato, requerido para a reao catalisada pela sintase do glutamato, transportada aos cloroplastos por uma protena translocadora especfica, a qual um carregador antiporter, o qual utiliza como contraon o malato . Este transporte pode ocorrer em ambas direes, ou seja, do cloroplasto para o citosol ou vice-versa. Outra protena transportadora transporta glutamina para fora do cloroplasto, s custas do contratransporte de glutamato do citosol para essa organela. Outra reaes de assimilao de amnia a reao promovida pela enzima desidrogenase do glutamato (GDH). Essa enzima normalmente possui baixa atividade, contribuindo pouco para a sntese de glutamato em relao a enzima GOGAT (figura 11)

Fig. 12. Detalhes da reao catalizada pela enzima GDH. . Assimilao do nitrato nas razes. A assimilao do nitrato pode ocorrer somente na folha, tanto na folha como na raiz, ou exclusivamente na raiz, dependendo do gentipo da planta. Enquanto o poder redutor nas folhas

fornecido diretamente no local onde necessrio o maior consumo de poder redutor (reduo do nitrato a nitrito no cloroplasto), o poder redutor necessrio para promover as mesmas reaes na raiz provm da oxidao dos carboidratos transportados pelo floema (sacarose), atravs do Ciclo Oxidativo das Pentoses. Este ocorre dentro de plastdeos denominados de leucoplastos, necessitando ento do transporte de hexoses-P do citosol para dentro dessas organelas.

Fig. 12. Esquema da reduo do nitrato nos leucoplastos das razes e a importnica do Ciclo das pentoses no suprimento de poder redutor . Para ocorrer essa reduo do nitrato no leucoplasto de uma clula da raiz, necessria a atuao de uma protena carregadora antiporter, a qual contratransporta triose-P do leucoplasto para o citosol. Essa triose-P originada no prprio Ciclo das Pentoses. Esse ciclo produz ento o poder redutor necessrio para a produo de ferredoxina reduzida (necessrio para a reduo do nitrito) e para sustentar a atividade da sintase do glutamato dependente de NADPH. A reduo do nitrato nas razes geram amidas como subprodutos (glutamina e asparagina), as quais ento so transportadas para as folhas via a corrente transpiratria do xilema. Custo energtico e regulao da assimilao do nitrato A assimilao do nitrognio pelas tem um alto custo energtico para as plantas. A regulao dessa rota metablica exerce-se principalmente no controle da atividade da NR e da GS. Fig. 13. Custo energtico da assimilao do nitrognio. O gasto de poder redutor foi transformado em ATP de forma a permitir a comparao. Este gasto no est especificado para a sntese de outros aminocidos ou substncias sintetizadas a partir desses.

A reduo do nitrato e a assimilao do CO2 pelo Ciclo de Calvin so reaes competidoras pelo poder redutor e por energia (NADPH e ATP), e precisam ser bem reguladas de forma que uma no prejudique a outra. A assimilao do nitrognio dessa forma deve ser favorecida somente a partir do momento quando a planta possui nveis adequados de carboidratos, visto que o esqueleto dos aminocidos composto basicamente de carbono originado de metablitos intermedirios da respirao. O nvel de assimilao de nitrognio precisa tambm ser regulado de forma que a a produo de aminocidos no exceda a demanda. Tambm importante que a reduo do nitrato no exceda a reduo do nitrito, visto que o nitrito, quando acumulado, pode ser txico a clula. Acumulao do nitrito pode ocorre r sob hipoxia, quando a reao da NiR inibida. O NADH requerido para a reduo do nitrato no citosol pode tambm ser providenciado durante a noite, via a degradao glicoltica de carboidratos. Contudo, a reduo do nitrito e a assimilao da NH4+ nos cloroplastos depende fundamentalmente da fotossntese, a qual produz poder redutor e ATP necessrios s reaes. A capacidade do Ciclo das Pentoses nas folhas em suprir o poder redutor para essas duas reaes bastante limitado. Sendo assim, durante a noite, a reduo do nitrato precisa ser fortemente reduzida ou mesmo desligada, de forma a impedir a acumulao do nitrito em nveis txicos. Uma forma de obter essa regulao a soma do efeito de duas caractersticas, como a vida curta da protena NR (vida mdia de poucas horas) , a qual degradada no final do dia, e da transcrio de seus genes de forma controlada pela luz. Assim, nveis significativos dessa enzima somente sero observados durante o dia. Uma maneira de regular a assimilao do nitrognio de forma a no prejudicar outros processos metablicos , tambm pode ocorrer via a regulao da transcrio dos genes da NR. Altos nveis de nitrato ou de carboidratos podem estimular a transcrio, de forma que a enzima esteja presente em nveis adequados ao nvel de energia disponvel da planta, bem como na disponibilidade de seu substrato (fig. 11). De maneira oposta, a transcrio pode ser inibida, quando a clula acumula altos nveis de glutamina, por exemplo, de forma que a atividade dessa enzima no leve a acumulao de aminocidos acima da demanda da clula, o que poderia levar a reduo, por exemplo, da concentrao de outros metablitos necessrios a respirao ou outros rotas bioqumicas.

Fig. 14. Regulao da atividade da NR a nvel transcricional e atravs de sua inibio pela protena 14-3-3.

A regulao a nvel de transcrio um mecanismo que pode necessitar mais do que uma hora, e pode no ser rpida para evitar efeitos quando a sua atividade est acima da demanda da clula. Outros mecanismos mais rpidos so necessrios. A fosforilao da enzima um passo essencial na reduo da atividade dessa enzima. Ela necessria para que um inibidor, a protena 14-3-3 possa ligar-se a essa enzima, redultando ento em sua inativao (fig. 14). A cinase da NR estimulada por ons Ca2+ e inibida por triose-P e Glicose 6-P. Outra enzima, a fosfatase da NR, necessria para desfosforilar a NR, e ento reativ-la. Esse processo lembra tambm a SPS, a qual torna-se menos ativa quando fosforilada (fig. 14). Um grande espectro de aminocidos o produto final da assimilao do nitrato A sntese de aminocidos ocorre principalmente no cloroplasto. O espectro de aminocidos sintetizados depende da espcie de planta e das condies metablicas. Na maioria dos casos, so o glutamato e a glitumina a maior poro dos aminocidos sintetizados. O glutamato exportado do cloroplasto em troca pelo malato, e a glutamina na troca pelo glutamato. Tembm serina e glicina, os quais so formados como produtos da fotorespirao, podem representar uma condirvel porcal do total de aminocidos presentes em uma clula mesoflica. J em plantas C4 a alanina e o aspartato podem representar frao significativa da composio de aminocidos de clulas das folhas. O carbono assimilado pela fotossntese a fonte dos carbonos que vo compor o esqueleto dos aminocidos. A figura abaixo ilustra as origens dos aminocidos a partir dos intermedirios da gliclise ou da fotossntese.

Fig. 15. Principais rotas de biossntese de aminocidos em folhas de plantas. O glutamato e a glutamina tambm participam em vrias reaes de transaminao na sntese de outros aminocidos (detalhe no mostrado na figura) Como pode ser observado na figura acima, o 3-PGA o precursor mais importante para a sntese de aminocidos. A enzima PEPC tambm tem importncia na sntese de aminocidos. A reao catalizada por essa enzima tambm mostrada na figura acima. Ela produz o oxalacetato a partir do PEP, e o oxalacetato possui dusas funes bsicas na assimilao do nitrato. Ou ele convertido por transaminao a aspartato o qual precursor para a sntese de cinco outros aminocidos (asparagina, treonina, isoleucina, lisina e metionina), ou, junto com o piruvato, o precursor para a formao do cetoglutarato, o qual convertido por transaminao a glutamato, sendo o precursor de outros

aminocidos (glutamina, arginina e prolina). J o glicolato formado pela fotorespirao o precursor para a formao da glicina e serina. A sntese do glutamato requere a participao do metabolismo mitocondrial Como visto anteriormente, o glutamato formado a partir do -cetoglutarato, o qual pode ser fornecido pelo desvio deste intermedirio do Ciclo de Krebs. O piruvato e o oxalacetato podem ser transportados do citosol para a mitocndria por translocadores especficos (fig. 16). Parte das reaes do Ciclo de Krebs podem tambm existir no citossol das plantas devido a presena da desidrogenase do isocitrato dependente do NADP e da aconitase neste compartimento celular o qual pode ento sintetizar esse importante precursor da sntese dos aminocidos. Para que isso ocorra, o citrato tem que ser transportado para o citosol por um carregador antiporter o qual utiliza o oxalacetato como molcula contra-transportada.

Fig. 16. Esquema mostrando os intermedirios da respirao e outras rotas metablicas associadas a sntese de aminocidos.

Biossnese de prolina e arginina A sntese de prolina a partir do glutamato consome dois NADPH e um ATP. Este aminocido, alem de ser um constituinte das protenas, tem uma importante funo como molcula protetora contra o estresse ligado a perda de gua por uma clula vegetal (dissecao). Quando as plantas so submetidos a seca, ou a salinidade excessiva, ou mesmo temperaturas muito baixas, elas podem acumular prolina como um mecanismo de reduzir o potencial osmtico da clula e com isso evitar a potencial dissecao. A acumulao de prolina como osmlito nessas condies deve-se ao fato que a prolina no prejudica o metabolismo mesmo quando presente em altas concentraes, sendo designada devido a essa caracterstica como uma substncia compatvel. Outras substncias compatveis que podem desempenhar similar funo so os lcool-accares (manitol, pinitol, sorbitol) e as betanas (derivadas dos aminocidos). Essas substncias podem ser acumuladas no citosol, no cloroplasto e tambm na mitocndria, reduzindo potencialmente a dissecao.

A argina sintetizada a partir do glutamato com a participao da acetil-CoA, sendo necessria ainda a participao de mais uma molcula de glutamato e aspartato como fornecedoras de grupos amino atravs de reaes de transaminao. O aspartato o precursor da sntese de cinco aminocidos A sntese do aspartato j foi vista anteriormente. A asparagina contm um grupo amino a mais do que o aspartato, e este doado por uma molcula de glutamina. Essa reao de transaminao necessita maior energia do que a reao de transaminao do -cetoglutarato, a qual pode ser deduzida do gasto adicional de um ATP a mais na reao de sntese da asparagina. Asparagina normalmente sintetizada em maior nvel nas razes do que nas folhas, sendo um dos principais aminocidos, junto com a glutamina transportados pelo xilema das razes s folhas. Lisina, treonina e metionina tambm so sintetizadas a partir do asprtato, em reaes que tambm necessitam do consumo de ATP e de poder redutor (NADPH e/ou NADH). A rota de sntese de aminocidos por outros aminocidos tambm sujeita a forte inibio retroativa, aonde vrios intermedirios sintetizados em reaes posteriores a uma enzima, quando acumulam-se a partir de certos nveis, podem inibir vrias enzimas dessa rota biossinttica. A partir do piruvato, so sintetizados os aminocidos alanina, valina e leucina e isoleucina. A rota de valina e lecina possuem uma rota inicial comum a qual envolve a transformao de 2 molculas de piruvato a -acetolactato. Essa reao tem como cofator enzimtico a vitamina tiamina, a qual um grupo prosttico da enzima sintase do -acetolactato (ALS). J o aminocido isoleucina formado a partir do piruvato e tambm da treonina, formando tambm o -acetolactato pela mesma enzima que utiliza a tiamina como seu grupo prosttico. A sntese da valina, leucina e isoleucina tambm sujeita a inibio retroativa. Um exemplo a inibio da enzima sintase do -acetolactato (ALS) pela valina e leucina. Uma grande classe de herbicidas denominadas de sulfoniluria (clorosulfurona; Du Pont; seletivo a cereais) e imidazolinanas (imazethapyr; Cyanamide) tem sua ao herbiciada baseada na inibio da enzima ALS. Estes herbicidas tem sido utilizadas para a produo de mutantes de milho, soja colza e trigo, e esses mutantes tem sido utilizados em programas de melhoramento de multinacionais produtoras de sementes, as quais aumentaram a seletividade desses herbicidas a um grande nmero de culturas importantes economicamente. Aminocidos aromticos so sintetizadas via a rota do cido chiqumico Esta classe de aminocidos derivada a partir do PEP e da eritrose-4P. Essas duas molculas so condensadas, e aps uma srie de reaes sintetizado o cido chiqumico. Uma segunda molcula de PEP necessria em uma reao que ir formar o cido 5enolpiruvilchiqumico3P (EPSP) pela enzima sintase do SPSP. O prximo composto sintetizado constitui a encruzilhada de outras reaes, que iro formar ou o triptofano ou a fenilanina e a tirosina. Seja qual desses aminocidos seja sintetizado, sempre uma glutamina ser fornecedora de um grupo amino em uma reao de transaminao na srie de reaes da sntese de cada um desses aminocios. Essa rota de sntese de aminocidos aromticos tambm muito importante para a sntese de outros compostos muito importantes, os quais podem ser originados a partir da fenilalanina, como os flavonoides e as ligninas, bem como um grande nmero de compostos secundrios e hormnios vegetais. A soma desses produtos, principalmente em espcies lenhosas de plantas, pode alcanar em alguns casos at 50% da matria seca de uma planta, razo pela qual nessas situaes pode ser considerada a rota biossinttica do cido chiqumico com uma das principais rotas biossintticas das plants.

Glutamato o precursor para a sntese de clorofilas e citocromos A clorofila constitui cerca de 1 a 2% do peso seco das folhas. Sua sntese ocorre nos cloroplastos, e seus anis tetrapirrlicos so sintetizados a partir do aminocido glutamato. Algumas de suas reaes so reguladas pela luz, sendo utilizado o poder redutor na forma de NADPH em suas reses biossintticas. Essa rota biossinttica que ocorre tambm importante para o metabolismo das mitocndrias. A incorpora;o de um tomo de ferro na protoporfirina IX por uma enzima ferro0quelatase resulta na formao do agrupamento heme, componente do grupo prosttico dos citocromos tanto envolvidos nas reaes fotossintticas como nas reaes da cadeia de transporte de eltrons mitocondrial. Outras enzimas envolvidas em vrias outras rotas metablicas tambm possuem o grupo prosttico heme sintetizado no cloroplasto. Dessa forma o cloroplasto possui uma fun;o central na sntese de compostos contendo anis tetrapirrlicos. Altos nveis de amnia ou nitrato podem ser txicos As plantas podem armazenar seignificantes quantidades de nitrato em seus vacolos. Quando este armazenamento se realiza em altos nveis, quando por exemplo as plantas so cultivadas sob excesso de adubao nitrogenada, ele pode resultar em risco de morte para seres humanos. O nitrato (NO3-) pode ser convertido a nitrito (NO2) no fgado. O nitrito ento pode-se ligar a hemoglobina de forma irreversvel, e torn-la incapaz de ligar o oxignio. A deficincia no transporte de oxignio derivado desse efeito pode levar a morte ou leses cerebrais, em uma doena denominada de methemoglobinemia. Outro aspecto txico do nitrato na sade humana sua converso em nitrosaminas, uma classe de compostos com alta capacidade mutagnica. Contudo, altos nveis de nitrato podem no ser txicos s plantas, principalmente devido a sua capacidade de transport-lo para o vacolo, evitando efeitos osmticos ou inicos negativos no metabolismo das clulas vegetais. Ao contrrio do nitrato, altos nveis de amnia podem ser txicos tanto para as plantas como para os animais. No caso do ltimo, um receptor olfativo presente, o qual ligado a reao de repulso ao cheiro da amnia. A toxidez da amnia deve-se ao seu poder de dissipar gradientes de prtons presentes entre as duas faces de uma mesma membrana. Na figura abaixo exemplifica-se a potencial atuao da amnia na reduo do gradiente protnico em diferentes compartimentos das clulas das plantas.

Fig. 17. Esquema representando o efeito txico da amnia na dissipao de gradiente de protons entre as duas faces de uma membrana. A dissipao do gradiente inico leva a reduo da gerao de ATP, da polaridade da membrana (e, portanto, leva a reduo da atividade de protenas transportadoras), resulta em alteraes de pH

(diminuindo atividade de vrias enzimas). Plantas assimilam a amnia prximamente ao seu stio de absoro ou gerao, e rapidamente armazenam qualquer excesso em seus vacolos, evitando assim o seu efeito txico em outras membranas da clula. Fixao Simbitica do Nitrognio A fixao de nitrognio corresponde anualmente no globo terrestre a uma fixao total de 190 x 106 toneladas de N. Ela pode ocorrer por vrios processos, como j vimos no Ciclo do Nitrognio: Fixao luminosa: esta reponsvel por cerca de 8% do nitrognio fixado, e converte o vapor de gua e o oxignio em radicais hidroxil (OH.--)tomos livres de hidrognio e oxignio, os quais reagem com o nitrognio molecular (N2) para formar cido ntrico (HNO3). Este cido, presente na atmosfera ento incorporado ao solo atravs da chuva. Rees fotoqumicas: essas reaes ocorrem entre o xido ntrico (NO) e o oznio (O3), produzindo tambm o xido ntrico que incorporado ao solo da mesma maneira. Aproximadamente 2% do nitrognio fixado ocorre dessa forma . Fixao biolgica de nitrognio: Organismos como bactrias e algas verde-azuis (cianobactrias) fixam N2 em NH4, correspondendo este processo a cerca de 90% da fixao de nitrognio. A fixao do nitrognio atmosfrico pode ocorrer de vrias formas (reveja o tem ciclo do nitrognio abordado anteriormente). Contudo a fixao biolgica contribui para a maioria da fixao do N2 atmosfrico. A fixao biolgica restringe-se a alguns tipos de bactrias e algas. A maioria dos organismos fixadores de nitrognio so organismos de vida livre no solo. Um pequeno nmero deles forma associaes simbiticas com as plantas, fornecendo as plantas carboidratos para esses microorganismos, os quais so "trocados" por compostos nitrogenados fornecidos por este. Os tipos mais comuns de simbiose ocorrem entre as plantas da famlia Leguminosae e as bactrias do gnero Azorhizobium, Bradyrhizobium, Photorhizobium, Rhizobium e Sinorhizobium. Essas bactrias so chamadas coletivamente de rizbios. Outro tipo de simbiose envolve principalmente espcies lenhosas de plantas com as bactrias do gnero Frankia, Gunnera, pteridfitas aquticas como Azolla em associao cianobactrias (Nostoc e Anabaena). A fixao de nitrognio requer condies anaerbicas Devido ao oxigenio poder inativar irreversivelmente a nitrogenase, enzima chave da fixao do nitrognio, a fixao nesses organismos deve ocorrer em um meio com reduzidas concentraes desse gs. Nas cianobactrias, condies anaerbicas so criadas em clulas especializadas denominadas de heterocistos.. Essas clulas tem parede celular espssa, e se diferenciam somente quando essas cianobbactrias esto sendo crescidas em meio com baixas concentraes de NH4. Cianobactrias que no possuem a capacidade de formar heterocistos fixam nitrognio somente em condies anaerbicas, como em solos alagados. As bactrias de vida livre que so capazes de fixar o nitrognio pode ser classificadas em aerbicas, facultativas ou anaerbicas (tabela 1). - Aerbicas: mantm baixos nveis de oxignio atravs do alto nvel respiratrio (Azotobacter), ou separam temporalmente a a fotossntese (liberao de O2; dia) da fixao (noite; Gloeothece sp.). - Facultativos: crescem tanto sob condies aerbicas como anaerbicas, fixando nitrognio geralmente sob condies anaerbicas. -anerbicos: por crescerem em ambiente anaerbico, sua nitrogenase no necesita de proteo contra o oxignio.

Microrganismos

Gnero

Espcies (exemplos)
C. pasteurianum D. vulgaris D.ruminis K. oxydoca B. polymyxa; B. macerans; B. azotojfixans Erwinia herbicola C. freundii E. intermedia P. sherrnanfi X. Jlavum; X. autotroficum A. brasilensis; A. amazonensis A. lipoferum A. peregrinum A. chroococcum A. vineland A. agilis A. macrocystogenes B.indica;'B.numinensis D. gummosa H. seropedicae A. diazotrophus C. vinosurn C. limicola E. shapovnikovii R. rubrum R. palustris P. borvanum L. aestuarii

Quimiorganotrficos estritamente anaer6bios Clostridium Desulfovibrio Desulfotomaculum Anaer6b. facultativos (quando em aerobiose no fixam N) Klebsiella Bacillus Enterobacter Citrobacter Escherichin Propionbacterium Microaeroflicos Xanthobacter Azospirillum Aguasptrillum Azotobacter Azotococcus Azomonas Beijerinckia Derxia Fototitotrficos Herbaspirillum Acetobacter Anaer6bios Chromatium CNorobium Ectothiospira Anaer6bico facultativo Rhodospirillum Rhodopseudomonas Microaeroflicos Plectonema Lyngbia Oscillatoria Anabaena, Nostoc

Aer6bios

Tab. 1. Diviso da bactrias fixadoras de N quando a sua tolerncia ao oxignio e metabolismo A fixao simbitica do nitrognio ocorre dentro de estruturas especiais da planta denominada de ndulos. Contudo nem toda fixao simbitica envolve a diferenciao de ndulos, como por exemplo nas monocotiledneas, onde permanecem as bactrias fixadoras envolta das razes na zona de elongao ou pelfera da raiz. Por exemplo, em cana-de-aucar, a bactria Acetobacter diazotrophicus vive no caule da cana de aucar e pode garantir a independncia de adubao nitrogenada por essa planta Fixao simbitica do nitrognio em plantas leguminosas As bactrias produtoras de ndulos em leguminosas pertencem famlia Rhizobiaceae, dela fazendo parte os gneros Rhizobium (espcies de crescimento rpido) a Bradyrhizobium (espcies de

crescimento lento). A simbiose entre cada bactria especfica a somente uma esp[ecie de planta hospedeira ou a um grupo limitado de espcies, como podemos observar na tabela 2: . Espcies
Rhizobium leguminosarum biovar vicieae biovar trifolii biovar phaseoli R. meliloti R. loti Bradyrhizobium B. japonicum B. sp

Hospedeiros
Pisum, Vicia, Lens, Lathirus Trifolium Phaseolus vulgaris Medicago, Melilotus, Trigonella Lotus, Lupinus, Anthylis, Cicer, Ornithopus, Caragna, Leucaena, Mimosa Glycine max, Macroptilium atropurpureum Vigna, Lupinus, Ornithopus, Arachis, Cicer, Sesbania, Leucaena,Desmodium, Mimosa, Lablab, Acacia, Stylosanthes, Glycine, Macroptilium, Lotus, Phaseolus.

Tab. 2. Hospedeiros de Rhizobium e Bradyrhtzobium A formao de ndulos principalmente encontrada em plantas leguminosas, e seu processo de formao pode ser resumidamente dividido nas fases abaixo descritas (ver tambm fig. 18), vrias das quais podem coexistir para um mesmo determinado momento da diferenciao de um ndulo: 1) Liberao de flavonides pelas razes da planta 2) Quimotaxia do rizbio em direo superfcie das razes 3) Proliferao do rizbio na rizosfera e induo da diferenciao do primrdio do ndulo 4) Aderncia do rizbio s razes 5) Diferenciao do meristema secundrio do ndulo (conexo vascular) 6) Encurvamento do plo radicular e formao da via de infeco 7) Mltipla infeco das clulas do ndulo e crescimento do ndulo f) Crescimento do ndulo, diferenciao dos bacteriides, e comeo da fixao simbitica de N

Fig. 18: Fases da formao da simbiose entre a planta e o rizbio.

O processo de infeco pelo microorganismo e o processo de formao do ndulo podem ocorrer simultaneamente na formao do ndulo. Durante a infeco, os rizbios ligados aos pelos das razes liberam os fatores Nod que induzem o encurvamento do pelo da raiz. O encurvamento aprisiona o rizbio em um pequeno compartimento formado pelo pelo da raiz (fig. 19). A parede da clula do pelo nessa regio degradada, o que ocorre tambm em resposta ao fator de nodulao, permitindo o acesso da bactria ao lado externo da membrana plasmtica. A prxima fase a formao da via de infeco, a qual um tbulo formado pela invaginao da membrana da clula do pelo, formada pela contnua coalescncia de vesculas derivadas do Aparelho de Golgi. Ao mesmo tempo em que a via de infeco formada, comea a haver uma diviso pronunciada de algumas clulas do crtex perto do pelo infectado, a qual esto originando um primrdio do ndulo (obtenha mais informaes no endereo www.plantphys.net, no tpico 12.1).

Fig. 19: Esquema mostrando as fases da infeco da raiz de uma planta pelo rizbio. A via de infeco contendo um grande nmero de clulas de rizbio cresce ento em direo ao primrdio do ndulo. Quando essa via alcana essas clulas, ela funde-se com a membrana da clula do primrdio, e as clulas dos rizbios so englobados por uma invaginao da clula hospedeira. Ao mesmo tempo sobre a via de infeco contnuas ramificaes, repetindo-se esse processo vrias vezes de forma que vrias clulas obtenham o rizbio.

Fig. 20: Formao do simbiossoma pelo englobamento do rizbio pela membrana plasmtica da clula hospedeira.

Dentro da vescula formada pela clula hospedeira do ndulo, continua o rizbio a multiplicarse at que seja um sinal produzido pela planta, quando ento ocorre a interrupo da multiplicao celular e comea a diferenciao da bactria em bacteriide. O bacteriide uma forma modificada de bactria, a qual sofre profundas mudanas no padro de expresso gnica e no seu metabolismo, perdendo tambm a sua capacidade de multiplicar-se, podendo ou no alterar a sua forma (fig. 21). Vescula formada pela invaginao dos bacteriides so considerados como organelas endosimbiticas, cuja membrana denominada de membrana peribacteriide. Essa organela denominada de simbiossoma.

Fig. 21. Esquema das principais diferenas entre a bactria e o bacteriide de diferentes espcies de rizbio. . O ndulo como um orgo independente desenvolve um sistema vascular prprio, o qual responsvel pela troca entre os nutrientes formados pela bactria pelos nutrientes formados pela planta. O ndulo tambm possui um camada de clulas com a funo de exlcuir o O2 da interior do ndulo (fig 22). Um importante aspecto da estrutura de um ndulo fixador de nitrognio a regulao da sua permeabilidade ao oxignio. Essa regulao ocorre de tal forma que a concentrao deste gs suficiente para manter a respirao, mas insuficiente para evitar a inativao e degradao da nitrogenase, a qual ocorre rapidamente do oxignio. A permeabilidade controlada pela camada de clulas mais externa do ndulo. Essa permeabilidade aumenta durante o dia e diminui sob dfice hdrico ou presena de nitrato. Pouco conhecido sobre o mecanismo controlando e regulando essas alteraes de permeabilidade. Alm dessa reduzida permeabilidade, h uma importante contribuio da elevada respirao observada nos bacteriides, a qual reduz o oxignio presente favorecendo a proteo da nitrogenase.

Fig. 22. Estrutura geral da estrutura de um ndulo apresentando a localizao dos bacteriides e da barreira de excluso do oxignio . Os ndulos possuem uma protena heme denominada de leghemoglobina, a qual presente em altas concentraes no citoplasma das clulas centrais dos ndulos (podem constituir at 40% da protena total de um ndulo), e conferem a tpica colorao rosada a esse orgo. A leghemoglobina possui uma afinidade notvel pelo oxignio (Km de 0.01 uM), a qual uma afinidade 10 vezes superior ao oxignio do que aquela apresentada pelo hemoglobina responsvel pelo transporte do oxignio nos animais. Inicialmente a funo atribuda era a de impedir o efeito negativo do oxignio na nitrogenase, contudo hoje seu papel definido principalmente como a responsvel pelo transporte do oxignio ao bacteriide para suportar sua respirao. Cada clula de um ndulo pode conter milhares de bacterides, podendo o ndulo conter mais de 1 bilho de bacteriides. H uma elevada variao quanto morfologia, nmero a posio.dos ndulos. A forma do ndulo depende da planta, podendo ser esfrica, cilndrica, multilobada ou coralide. O tamanho tmbm relacionado espcie da planta e efetividade da simbiose. A posio na raiz principal a/ou junto ao colo da planta, indica uma formao precoce a efetiva, ao contrrio de formao nas razes secundrias que indica uma infeco tardia a/ou estirpes pouco competitivas ou pouco efetivas. O crescimento do ndulo ocorre at atingir o tamanho mximo, em funo da espcie. Em solos com poucas clulas do rizbio, os poucos ndulos formados tendem a, crescer ao mximo, pela exigncia da planta em nitrognio. Ao atingir o florescimento ou o final do ciclo da planta, os ndulos senescem e o pigmento da hemoglobina (vermelha) muda de cor para verde ou castanho. Esta mudana corresponde ao final do perodo de fixao de nitrognio, o qual precedido pela fase de reduo da fotossntese da planta, na qual ocorre uma sinalizao induzindo a senescncia do ndulo por um mecanismo ainda no compreendido (fig. 23). Em condies de estresse ambiental, por exemplo, os ndulos podem senescer precocemente. Em algumas espcies arbreas ocorrem ndulos indeterminados ou perenes, cujo crescimento contnuo a anual.

Fig. 23. Perfil da fixao de nitrognio durante o desenvolvimento de uma planta leguminosa de ciclo anual e sua relao com o seu perfil fotossinttico.

Ao contrrio das outras hiperplasias provocadas nos vegetais por insetos, nematides ou Agrobacterium tumefaciens, os ndulos tm estrutura perfeitamente organizada: a) camada de clulas corticais mais ou menos espessa, que envolve todo o ndulo; b) rea meristemtica, de crescimento apical, ou circundando quase todo o ndulo; e c) rea fixadora, central ou apical, constituda de clulas de tamanho vrias vezes maior que o normal, contendo os bacterides. O estabelecimento da simbiose requer uma troca de sinais entre a planta e a bactria A colonizao da rizosfera das plantas por microorganismos fixadores de nitrognio bastante comum. A rizosfera representa um stio ecolgico favorvel fixao biolgica de nitrognio, no s por apresentar disponibilidade de substratos de carbono devido aos exsudatos radiculares, mas tambm por manter baixas taxas de oxignio devido respirao das razes. A simbiose entre legume e o rizbio no obrigatria. Tanto a planta como o microorganismo simbionte pode viver de forma independente um do outro. Contudo, sob limitao de nitrognio no solo, os simbiontes trocam sinais e estabelecem a simbiose. A sinalizao, a subsequente infeco da planta pelo microorganismo, e o desenvolvimento do ndulo fixador de nitrognio envolve a ao de genes especficos em ambos os simbiontes. Os genes das plantas especificamente expressos nos ndulos so denominados de nodulinas (genes Nod), enquanto os genes das bactrias so denominados de genes de nodulao (genes nod). Muitas das nodulinas esto envolvidas na metabolizao de nitrognio e carbono, no tranporte de compostos atravs da membrana simbionte e no estabelecimento de um ambiente pobre em oxignio, o qual necessrio para a atividade da nitrogenase. Outras nodulinas podem codificar para protenas da parede celular, importantes para o processo de infeco, podendo ainda participar em outros aspectos da infeco, transduo de sinais e diferenciao dos ndulos (fig. 24).

Fig. 24: Esquema geral mostrando o local de sntese de nodulinas e algumas de suas funes.

Os genes nod podem ser divididos como genes nod comuns a todos os rizbios (nodA, nodB, e nodC) e genes nod que determinam a especificidade de hospedeiro (nodP, nodQ, nodH) e genes nod que determinam a amplitude de hospedeiros (nodF, nodE e nodL). De todos esses genes, somente o

gene nodD constitutivamente expresso na bactria, codificando para um fator transcripcional essencial para a expresso de outros genes nod.

Fig. 25. Estrutura geral e especfica de alguns compostos secretados pelas razes que induzem a quimiotaxia e a expresso dos genes nod em rizbio A primeira fase no estabelecimento da relao simbitica a migrao da bactria em direo ao hospedeiro, e esta uma resposta quimiosttica que ocorre em resposta a secreo pela planta de compostos falvonides ou derivados de aminocidos (fig. 25). Estes compostos so percebidos pela bactria, resultando na ativao do fator transcripcional codificado pelo gene nodD, resultando ento na transcrio de outros genes nod (fig. 26) .

Fig. 26. Esquema mostrando a induo dos genes nod atravs do fator transcricional NodD em resposta a diversos sinais.

Os genes nod iro induzir a produo de fatores de nodulao. Esses fatores correspondem a uma famlia de substncias (fig. 27) que contm quitina (polmero de n-glucosamina) e cidos graxos. Os genes nodA, nodB e nodC, codificam para os fatores nodA, nodB e nodC, os quais codificam para

enzimas que iro codificar para esses compostos. Os gens nod que conferem a especificiadade de hospedeiro, variam entre diferentes espcies ou raas de rizbios, e codificam enzimas que modificam o cido graxo ou adicionam radicais laterais especficos a estrutura bsica de um fator de nodulao.

Fig. 27: Estrutura genrica de fatores de nodulao produzidas pela bactria que sero percebidos pela planta e induziro a nodulao. A presena de vrios radicias laterias a cadeia central de acetil-glucosamina determina a especificidade de hospediro. A estrutura desse fator de Cada espcie de planta que estabelece essa simbiose responde especificamente a um fator de nodulao especfico, e reconhecido por um receptor especfico. Os receptores dos fatores de nodulao pertencem a uma grande famlia de protenas denominada de lectinas (protenas que ligam a acares), e esto presentes nas membranas plasmticas das clulas das razes dessas plantas. O complexo enzimtico nitrogenase fixa o N2 Este complexo responsvel pela fixao do N2 atmosfrico em NH3, Ele esta presente em todas as bactrias fixadoras de nitrognio, e cataliza a reao apresentada na fig. 28.

Fig. 28. Esquema da estrutura da nitrogenase e de sua reao de fixao do nitrognio atmosfrico.

A reao necessita de 8 , dos quais somente 6 que so incorporados amnia, sendo os dois restantes envolvidos na gerao de hidrognio molecular. O complexo nitrogenase pode ser dividida em duas partes: protena Fe: composta de dusa subunidades proteicas, contendo cada uma um grupo ferroenxofre (4Fe-4S2-), o qual participa na reao de xido-reduo de formao de amnia. Essa protena irreversivelmente inativada pelo O2, sendo aps a protena rapidamente degradada (meia vida de protena redu-se a 30-45 segundos). Protena MoFe: composta de 4 subunidades proteicas, cada uma delas contendo dois grupos MoFe-S. Essa protena tambm inativada pelo oxignio, o qual tambm reduz sua meia-vida para 10 minutos. O doador de eltrons para a reduo do N2 a ferredoxina, a qual doa seus eltrons para a protena Fe, a qual ainda necessita hidrolizar o ATP para conseguir reduzir a protena MoFe. Esta ltima reduz ento o N2, entre outros aceptores naturais ou artificais, como o acetileno (utilizado como substrato para medir a atividade enzimtica dessa enzima), N2O e azida, entre outros. A fonte de eltrons para produzir ferredoxina reduzida em ndulos de razes pode advir atravs da ao da enzima piruvato-ferredoxina oxidoredutase, a qual pode transferir eltrons tanto do piruvato como do -cetoglutarato ferredoxina. A mesma reao da nitrogenase pode ser produzida por um processo qumico, o qual utilizado para a sntese do fertilizante uria, e que necessita de grande quantidade de energia (temperaturas de 400oC e alta presso; processo de Haber-Bosch), a qual necessria para quebrar a tripla ligao qumica na molcula de N2. Para a planta simbionte, o nitrognio recebido atravs da fixao tambm significa um alto gasto de energia. Estima-se que para cada grama de nitrognio fixado, necessrio o consumo de 12-17bgramas de carbono. Sob condies naturais, quantidades substanciais de ons H+ so consumidas na reao da nitrogenase, gerando tambm quantidade substanciais do gs H2, e esta reao pode competir por eltrons com a reao de reduo do N2 pela nitrogenase. Em rizbio, 30 a 60% da energia suprida a nitrogenase pode ser perdida como H2, diminuido a eficincia energtica da fixao de nitrognio. Alguns rizbios, contudo, possuem a enzima hidrogenase, a qual degrada o H2 formado, doando os eltros produtos dessa reao nitrogenase, melhorando a eficincia da fixao de nitrognio. Os microrganismos fixadores de nitrognio desenvolveram um sistema complexo de controle para o processo de fixao biolgica de nitrognio. Quando h disponibilidade de nitrognio (por

exemplo, NH4+, N03- , aminocidos, etc), a biossntese da nitrogenase reprimida. A nitrogenase sintetizada apenas quando no h outra fonte de nitrognio disponvel. Os ndulos exportam amidas e uredeos Os legumes fixadores de nitrognio podem ser divididos em exportadores de amida (asparagina e glutamina) ou exportadores de uredeos (fig. 29). Normalmente legumes exportadores de amida so leguminosas de clima temperado, como a ervilha, o trevo, alfafa e lentilha, enquanto que os exportadores de uredeos correspondem a legumes de origem tropical (soja, feijo, amendoim, feijo de corda).

Fig. 29. Estrutura qumica dos principais uredeos sintetizados em ndulos de plantas. A amnia produzida pelos bacteriides precisa ser rapidamente assimilada de forma a no causar toxidade. Inicialmente ela transportada pela membrana peribacteriide para a clula hospedeira e rapidamente utilizada pela GS (glutamina sintase), a qual possui uma alta afinidade pela amnia, reagindo rapidamente, evitando ento o acmulo e a conseqente potencial toxidade desta molcula. A glutamina pode ento ser transportada aos leucoplastos da clula hospedeira e transportada em xantina, e posteriormente em cido rico, o qual ento transportado para as clulas no infectadas e transformado em uredeos, os quais so ento transportados via xilema (fig 30).

Fig. 30. Esquema geral comparativo da assimilao de nitrognio entre plantas que nodulam ou no. A sntese dos diferentes uredeos podem ocorer em diferentes compartimentos celulares. Enquanto a alantona sintetizada no peroxissoma, o cido alantico sintetizado no retculo

endoplasmtico. Alternativamente, a glutamina pode ser transformada ou no em asparagina, sendo ento ambos transportados para a parte area da planta via o xilema (fig. 31).

Fig.31. Esquema geral da sntese de uredeos em ndulos apresentando a compartimentalizao das diferentes reaes enzimticas entre as diferentes clulas ou compartimentos celulares que o compe. A planta hospedeira fornece carbono para os bacteriides na forma de cidos dicarboxlicos O fotoassimilato transportado at o ndulo na forma de sacarose, via floema. Nas clulas do ndulo a sacarose transformada em cidos orgnicos. A sacarose transformada em PEP via a rota glicoltica, e a enzima PEPC o transforma em oxalacetato o qual ento transformado em malato s custas de NADH (fig. 32). A membrana peribacteriide do simbiossoma somente transporta cidos dicarboxlicos, como o malato. O malato serve ento como substrato respiratrio, necessrio para produzir o ATP necessrio a atividade da nitrogenase. O alto nvel respiratrio, necessrio para suprir o alto consumo de ATP na fixao de nitrognio tambm ajuda a proteger a nitrogenase.

Fig. 32. Esquema do fornecimento de energia pela clula do ndulo ao bacteriide. .

O custo total do funcionamento dos ndulos chega a consumir entre 13 a 28% da energia

presente nos produtos fotossintetizados pela planta. Apesar do maior custo energtico envolvido no processo de fixao biolgica de nitrognio nas leguminosas em relao assimilao do nitrognio mineral (a reduo de nitrato consome tambm muita energia. A assimilao do nitrato quando ocorre nas folhas utiliza no prprio cloroplasto o poder redutor (NADPH) produzido durante a fotossntese. Isso significa tambm menor custo energtico, visto que a sntese de sacarose, seu transporte, e sua transformao em malato necesitarem de gasto extra de energia. A fixao simbitica de nitrognio ento inibida na presena de nveis adequados de nitrognio do solo em virtude de seu maior consumo energtico. Outras formas de fixao de nitrognio Em plantas no leguminosas (tab. 3) pode haver a fixao biolgica do nitrognio pelo actinomiceto Frankia, este ltimo formando ndulos denominados de actinorrizas. 0 termo actinomiceto identifica microrganismos classificados como bactrias, apesar de apresentarem similaridades com fungos, pois produzem filamentos finos a ramificados de miclio no solo . Cerca de

200 espcies de plantas no leguminosas, distribudas em 20 gneros e 8 ordens, podem ser noduladas por Frankia, dos quais alguns so apresentados na tabela abaixo Famlia
Betulaceae Casuarinaceae Coriariaceae Datiscaceae Elaeagnaceae Myricaceae Rhamnaceae

Gnero
Alnus Mill. Casuarina Adans. Coriaria Hook. Datisca L. Elaeagnus L. Hippophae L. Shepherdia Nutt. Myrica L. Ceanothus L. Colletia Comm. Discaria Hook. Kentrothamnus Suess. &Overkott Talguenea Miers Trevoa Miers ex Hook. Dryas L. Cercocarpus Kunth Chamaebatia Benth. Cowrrnia D. Don Purshia DC. Rubus L.

Rosaceae

Tab. 3. Plantas formadoras de ndulos com actinomicetos 0 ndulo de plantas actinorrzicas uma estrutura perene formada por repetidas ramificaes das razes laterais a que termina em um ndulo lobular. 0 sistema de estabelecimento da simbiose segue o mesmo processo inicial de infeco observado para o rizbio em leguminosas arbreas. A infeco primria ocorre quando da entrada do microrganismo dentro do pelo radicular com o desenvolvimento intercelular de uma fina hifa do actinomiceto; o processo continua com as clulas do crtex da raiz sofrendo divises celulares, antes de serem infectadas pela hifa. Com a maioria das clulas do crtex infectadas, forma-se um ramalhete de hifas com vesculas nas extremidades.A presena de micorrizas em razes de rvores auxilia no processo de fixao biolgica do nitrognio. Vrios outros microorganismos podem realizar a fixao simbitica de nitrognio: Vegetais/ Cianobactrias N fixado (kg ha-1 ano-1) fungos Fungos Nostoc 1-10 Calothrix Scytonema Stigonema Dichothrix Brifitas Nostoc 1-10 Blasia Anthoceros Cavicularia Shagnum Pteridfitas Anabaena 10-100 Azofa Gimnospermas Nostoc 20 Cycas Macrozamia

Ceratozomia Angiospermas Nostoc 10-70 Gunnera Tabela 4. Associaes simbiticas entre cianobactrias, vegetais e fungos Ndulos foliares tm sido descritos em espcies de plantas arbustivas a lenhosas. Representantes destas plantas pertencem aos gneros Ardisia (famlia Myrsinaceae), Pauetta e Psychotria (famlia Rubiaceae). A bactria mantida sobre a planta, por secrees da brotao da parte area da planta, sendo essas secrees constitudas por uma mucilagem composta de carboidratos e protenas. Posteriormente, a bactria invade a cmara subestomtica, presentes na superfcie das folhas. Com o desenvolvimento e a proliferao da camada da epiderme, ao redor do poro, as bactrias so empurradas para o interior da lmina foliar a encapsuladas, formando um pequeno ndulo interno. Benefcios econmicos da fixao de nitrognio Nas plantas leguminosas cultivadas, a fixao simbitica de nitrognio consegue oferecer a planta o nitrognio necessrio para a sua maior produtividade, dispensando o uso de fertilizantes qumicos fornecedores de nitrognio. O nvel de fixao do N2 na simbiose rizbio-legume varia com a bactria, a planta a as condies ambientais. Leguminosas forrageiras possuem um alto nvel de fixao de (tabela 5). Nas plantas forrageiras a fixao total depende tambm da durao do ciclo da planta e do nmero de cortes ou intensidade do pastejo. Leguminosa Estimativa do N2 fixado (Kg ha-1ano-1)
100-300 125 100-150 125 240-325 100 150-200 50 60-80 55 155 100-140

Alfafa, Medicago sativa Trevo doce, Melilotus sp Trevo, Trifolium sp Caupi, Vigna unguiculata Fava, Vicia faba Lentilha, Lens sp Lupinus, Lupinus sp Amendoim, Arachis hypogaea Soja, GIycine max Feijo de corda, Vigna radiata Mucuna, Mucuna pruriens Leguminosas forrageiras, Desmodium sp., Lespedez sp

Tabela 5. Nitrognio fixado por virias associaes rizbio/leguminosas Dentre os fatores do solo que condicionam o nvel de fixao de nitrognio, podemos citar as caractersticas das populaes de rizbio especfico existentes no solo e o teor de nitrognio mineral do mesmo. Maior nvel de fixao ocorre em solos pobres em N, e os efeitos da inoculao so maiores quando o rizbio nativo inespecfico ou est em baixo nmero. O rizbio pode viver saprofiticamente sem fixar N2 no solo, sendo uma bactria tpica de rizosfera. Nestas condies, utiliza as fontes de energia, N e nutrientes da soluo do solo. As estirpes variam quanto rapidez relativa em dominar os stios de nodulao, quando em presena de outras estirpes. Seja em ambiente estril, seja no solo, a proporo de ndulos formados por uma das estirpes em uma mistura depende tambm da proporo relativa de cada uma no inculo. Essa propriedade denominada competitividade. Entretanto, o termo competitividade inadequado, pois o que se avalia a proporo de estirpes formadoras de ndulos e no a real populao daquela estirpe junto s razes.Na rizosfera, o rizbio interage com os demais microrganismos, alm de competir com outras estirpes

pelos stios de infeco. A sobrevivncia do rizbio no solo afetada por fatores edafoclimticos a biolgicos. O Brasil possui um grande nmero de espcies de plantas leguminosas arbreas. Pouco ainda conhece-se sobre o nvel de fixao de nitrognio nessas espcies. Alguns exemplos so apresentados na tabela 6: Famlia
Caesalpinoideae Mimosoideae

Gneros
Dimorphandra Sclerolobium Tachigalia Acacia Albizia Anadenanthera Affonsea Calliandra Enterolobium Inga Mimosa Newtonia Piptadenia Pithecellobium Andira Centrolobium Ciclolobium Dalbergia Derris Erythrina Lonchocarpus Machaerium Ormocarpum Swuruia

Papilionoideae

Tabela 6. Exemplos de algumas espcies de Leguminosas arbreas no Brasil Algumas espcies lenhosas de plantas tropicias podem ter altos nveis de fixao de nitrognio, como mostra a tabela abaixo:

Especie

Nitrognio fixado
(Kg/ha/ano)

Leguminosas Acacia mearnsii 200 A. holasericea 6,4 A. penatula 34,3 Gliciridia sepium 12 9 Inga jinicuil 35,0 Leucaena larisiliqua 500 L. leucoeephala 2O0 No leguminosas Casuarina equisetifolia 58 C. littoralis 218 Paraspottia 850 Tabela 7. Estimativas de fixao potencial anual de nitrognio em rvores tropicais.

Algumas rvores fora da famlia das Leguminosas possuem associao com o rizbio. Uma delas a Parasponia, um gnero da famlia Ulmaceae, ordem Urticales, a qual anteriormente era denominada de Trema. Esta rvore apresenta hbitos de planta pioneira, claramente demonstrados pelo crescimento e colonizao de solos originados de atividade vulcnica a solos virgens de montanhas A bactria associada no parece ser especfica ao gnero Parasponia, pois forma ndulos com espcies leguminosas, tais como Vigna unguiculata a Macroptilium atropurpureum, e com outros gneros de plantas no leguminosas como as plantas da famlia Zygophyllaceae. Esta famlia ocorre principalmente em regies tropicais a subtropicais, consistindo de vegetao xerfita e haloftica lenhosa perene. As espcies descritas pertencem aos gneros Zygophilhum, Tribulus a Fagonia. Zygophilhum A estrutura interna dos ndulos de Parasponia possui certas particularidades, como uma zona apical meristemtica que produz contnuo elongamento dos ndulos. Os ndulos tornamse coralides, de forma similar aos de Alnus-FranhiaA importncia econmica de Parasponia est em seu use para: sombreamento de culturas agrcolas como caf, cacau a ch; produo de madeira para moures de cerca a fibras para celulose e papel. Para Zygophilhum, Trbulus a Fagonia seu principal potencial de uso a revegetao de reas desrticas, fixao de dunes a plantio consorciado com culturas agrcolas em regies semi-rida. 0 impacto econmico do use de plantas no leguminosas noduladores com Frankia maior na Silvicultura do que para culturas agrcolas (tabela 8). Hospedeiro Atnus crispa A. glutinosa Aincana A. rubra A. rugosa Casuarina equisetifolia Myrica cerifera M.rubra Nitrognio fixado (kg ha-1 ano-1) rvores 61 56 40 300 193 229 3

Plantas herbceo-arbustivas Ceanothus spp. 60 Dryas drumondii 18-36 Hippophae rhamnoides 179 Tabela 8. Fixao anual de nitrognio por plantas no leguminosas associadas com Frankia. rvores como Alnus a Casuarina fornecem madeira para muitos pases , sendo que Alnus largamente utilizado para colonizar solos alterados a com resduos urbanos incorporados a em consorciamento com essncias florestais no fixadoras como Fraxinus, Liquidambar, Liriodendron, Pinus, Platanus, Populus a Pseudo suga. Alm da simbiose, Alnus tambm fornece compostos orgnicos para o solo, que podem estimular o crescimento de microrganismos fixadores de vida livre. Plantas herbceo-arbustivas associadas com Frankia como, por exempo, Ceanothus, podem ser empregadas para enriquecimento de solos florestais com deficincia de nitrognio, principalmente em consorciamento.,