EXPERIMENTAO NO ENSINO DE QUMICA

Catalisando a Hidrlise da Uria em Urina

Vanessa Vivian de Almeida, Elton Guntendorfer Bonaf, Flvia Braidotti Stevanato, Nilson Evelzio de Souza, Jeane Eliete Laguila Visentainer, Makoto Matsushita e Jesu Verglio Visentainer
Neste artigo, proposto um experimento simples realizado com material de fcil aquisio para ilustrar a hidrlise da uria em urina catalisada pela urease extrada de sementes de melancia. semente de melancia, urina, uria

Recebido em 4/9/06, aceito em 1/4/08

42 a natureza, constatamos transformaes qumicas ocorrendo o tempo todo ao nosso redor. Enquanto algumas dessas transformaes acontecem rapidamente (como a exploso da dinamite), outras so mais demoradas como, por exemplo, a formao do petrleo. Podemos destacar ainda as

transformaes que se desenvolvem numa velocidade moderada, como a deteriorao dos alimentos por bactrias. Por sua vez, a velocidade das reaes de degradao de alimentos de origem vegetal (como frutas e verduras) pode ser mais ou menos rpida, dependendo de fatores existentes no meio como, por exemplo, atividade

Figura 1: Efeito do uso de catalisadores na velocidade da reao qumica. A seo Experimentao no ensino de Qumica descreve experimentos cuja implementao e interpretao contribuem para a construo de conceitos cientcos por parte dos alunos. Os materiais e reagentes usados so facilmente encontrveis, permitindo a realizao dos experimentos em qualquer escola. Neste nmero, a seo apresenta dois artigos.
QUMICA NOVA NA ESCOLA Catalisando a Hidrlise da Uria em Urina

de gua, temperatura e composio do alimento. A Cintica Qumica uma cincia que estuda a velocidade das reaes qumicas e os fatores que as influenciam. Dentre os diversos fatores que interferem na velocidade de uma reao (temperatura, concentrao de reagentes, superfcie de contato, entre outros), podemos destacar a presena de catalisadores. Catalisadores so substncias que aumentam a velocidade das reaes qumicas e no so consumidos durante o processo, sendo regenerados no final. Eles atuam diminuindo a barreira de energia necessria aos reagentes para que ocorra a transformao qumica, como mostra a Figura 1. Essa energia chamada de energia de ativao, ou seja, a energia mnima necessria para que os reagentes possam se transformar em produtos. Caso a reao ocorra sem a presena de um catalisador, a energia de ativao maior, diminuindo assim a velocidade da reao. Ao atingir a energia de ativao, formado o complexo ativado, que uma estrutura intermediria entre os reagentes e os produtos, com
N 28, MAIO 2008

ligaes intermedirias entre as dos de ons de nquel ativa o stio da reagentes e as dos produtos. O comurease e essencial tanto para a plexo ativado apresenta uma eneratividade funcional como para a ingia mais alta para a tegridade estrutural molcula ou o eledessa enzima. Catalisadores so mento original. Esse Alm de ter sido substncias que aumentam aumento de energia, a primeira enzima a velocidade das reaes chamado de entalpia isolada na forma crisqumicas e no so de ativao H, retalina, em 1926, a consumidos durante presenta exatamente urease uma subso processo, sendo a energia necessria tncia extensamente regenerados no final. para quebrar as liestudada, devido gaes na molcula sua aplicabilidade na e formar o complexo ativado, que agricultura e na medicina. Atualmente se decompe posteriormente nos a urease utilizada em procedimentos produtos. de diagnsticos clnicos, na determiSendo catalisadores celulares nao de uria em fludos biolgicos poderosos, as enzimas so protenas como urina e sangue. A hidrlise da especializadas em acelerar reaes uria, empregando essa enzima como biolgicas e geralmente atuam espebiocatalisador, na temperatura de cificamente em um dado substrato. O 20C, at 1014 vezes mais rpida que substrato liga-se enzima num stio a hidrlise realizada em meio cido a especial desta, chamado stio ativo, uma temperatura de 60 C (Souza e onde ocorre a reao enzimtica. Fatibello-Filho, 2006). Essa a regio da enzima que possui A urina humana constituda de 2 certos aminocidos que se ligam ao a 5% em uria. Essa a forma utilizada substrato por ligaes no covalentes pelo metabolismo do organismo para (Motta, 2006). eliminar os resduos nitrogenados indesejveis produzidos a partir das Caractersticas da urease protenas. Atualmente, a uria utiliA urease uma enzima que, em zada como suplemento na alimentameio aquoso, catalisa a hidrlise da o de animais, na agricultura (como uria em amnia e dixido de carbofertilizante), na fabricao de plstino (Figura 2) e ocorre em algumas cos, na indstria farmacutica, entre sementes, tais como soja, melo, outros (Peruzzo e Canto, 1999). melancia, entre outras. Algumas enInfluncia do meio sobre a atividade zimas requerem um componente no enzimtica protico para sua atividade denominado cofator. O cofator enzimtico A estrutura e a forma do stio ativo da urease o on metlico Ni2+ (Ciurli das enzimas so decorrentes da estrue cols., 1999), portanto, a presena tura tridimensional da enzima e podem

ser afetadas por quaisquer agentes capazes de provocar mudanas conformacionais na estrutura protica. Isso torna a atividade enzimtica dependente do meio em que se encontra, notadamente do pH e da temperatura.

Efeito do pH sobre a atividade enzimtica

Geralmente as enzimas so ativas em uma estreita faixa de pH e, na maioria dos casos, h um pH timo definido. A Figura 3 apresenta a curva do efeito do pH na atividade enzimtica. Podemos verificar que o pH timo da enzima definido pelo mximo da curva. Um estudo sobre purificao de urease obtida de sementes de melancia verificou que essa enzima possui atividade tima em pH 8,0 (Mohamed e cols., 1999). O efeito do pH sobre a atividade enzimtica se deve s variaes no estado de ionizao dos componentes do sistema e medida que o pH varia. Como as enzimas so protenas, contm inmeros grupos ionizveis e existem em diferentes estados de ionizao. Por isso, a atividade cataltica restrita a uma pequena faixa de pH. importante destacar, contudo, que a estabilidade da enzima ao pH timo depende inclusive de muitos fatores como temperatura, fora inica, concentrao de ons metlicos, concentrao de substratos ou cofatores da enzima, contaminantes (metais pesados e fluoreto, acima de 2,0 mg/dL, so inibidores da urease), entre outros (Bioclin, 2006).

43

Efeito da temperatura sobre reaes enzimticas

O efeito da temperatura sobre a cintica de reao enzimtica resultado de dois eventos simultneos. O primeiro evento caracterizado pelo aumento na velocidade da reao catalisada em resposta ao aumento da temperatura do sistema. A elevao da temperatura provoca o aumento da energia cintica das molculas componentes do sistema. Esse efeito observado em um intervalo de temperatura compatvel com a estrutura espacial da enzima. No segundo evento, temperaturas mais altas levam desnaturao enziN 28, MAIO 2008

Figura 2: Reao de decomposio da uria e carter bsico da amnia em meio aquoso.

QUMICA NOVA NA ESCOLA Catalisando a Hidrlise da Uria em Urina

Figura 3: Curva do efeito do pH na atividade enzimtica.

44

mtica por alterarem as ligaes que conservam a estrutura tridimensional da enzima. Aps o rompimento das ligaes de hidrognio, que so termolbeis, desencadeia-se uma srie de alteraes na estrutura enzimtica, levando a uma nova conformao ou a um estado conformacional indefinido. A maioria das protenas (incluindo as enzimas) passvel de desnaturao irreversvel a temperaturas acima de 40C ou 50C, porm a temperatura tima de uma enzima um termo sem significado at que seja registrado o tempo de sua exposio a essa temperatura, assim como a composio do meio em anlise, pH e fora inica, por exemplo (Morris, 1972). No estudo sobre urease extrada de sementes de melancia, Mohamed e colaboradores (1999) acompanharam o comportamento dessa enzima submetida temperatura de 40C durante 30 minutos em pH 7,5 e verificaram que no houve perda significativa da atividade enzimtica. A mesma enzima, submetida a 80 C por 5 minutos, teve perda total da atividade cataltica. O experimento proposto neste artigo utiliza materiais de fcil acessibilidade e ilustra a reao de decomposio da uria em urina humana, catalisada por urease obtida de sementes de melancia. Contudo, a utilizao de urina deve ser tratada com devida ateno pelo professor, pois se trata de um substrato que apresenta diferenciados valores de pHs e concentrao de sais. A reao
QUMICA NOVA NA ESCOLA

pode ser lenta caso o meio reacional interfira no stio ativo enzimtico, devido ionizao de aminocidos na molcula que provoquem mudana da conformao da enzima.

Material e reagentes
Estante para tubos de ensaio 4 tubos de ensaio Pipeta 5,0 mL Extrato de repolho roxo Sementes de melancia Soluo aquosa de uria 1,0% (a uria pode ser facilmente adquirida em lojas de produtos agropecurios) Urina humana Liquidificador Filtro de papel Funil Erlenmeyer lcool etlico (comercial)

picadas com aproximadamente 100 mL de lcool etlico comercial. Filtrar a mistura e utilizar o extrato alcolico como indicador cido-base. A extrao das antocianinas (pigmentos da classe dos flavonides, responsveis pelas cores azul, violeta, vermelho e rosa de flores e frutas e indicadores cido-base naturais) pode inclusive ser realizada por imerso da folha de repolho roxo em etanol, seguido de repouso por 24 ou 48 horas (Terci e Rossi, 2002; Couto e cols., 1998). d) Tubo 1 No tubo de ensaio nmero 1, adicionar 1,0 mL de extrato de repolho roxo, 2,0 mL de urina recm-coletada e acrescentar 1,0 mL da frao lquida resultante da triturao de sementes de melancia em gua (sem fervura). Agitar e observar a cada 10 minutos. e) Tubo 2 No tubo de ensaio nmero 2, adicionar 1,0 mL de extrato de repolho roxo, 2,0 mL de urina recm-coletada e acrescentar 1,0 mL do lquido resultante da triturao de sementes de melancia (fervido). Agitar e observar a cada 10 minutos. f) Repetir os procedimentos (acima) para os tubos 3 e 4, substituindo a urina pela soluo de uria a 1%.

Procedimento
a) Para identificao, enumerar 4 (quatro) tubos de ensaio. b) Adicionar aproximadamente 100 mL de gua e cerca de 40 sementes de melancia em um liquidificador e triturar por 15 segundos. Filtrar a mistura e recolher a parte lquida. Dividir a frao lquida em duas partes iguais e levar uma delas a fervura a 100C por 1 minuto (inativao enzimtica). Deixar em repouso para atingir a temperatura ambiente. c) Para a obteno do extrato de repolho roxo, triturar no liquidificador 3 folhas de repolho roxo
Catalisando a Hidrlise da Uria em Urina

Resultados e discusso
Tubos de ensaio 1 e 3 A enzima urease (ativa), em meio aquoso e em contato com o substrato, decompe a uria em amnia (NH3) e dixido de carbono (CO2). Pela estequiometria dessa reao qumica, verifica-se que a decomposio de um mol de uria, em meio aquoso, origina a formao de dois mols de NH3 e um mol de CO2, conforme a reao: 1(NH2)2CO (s) + 1H2O (l) 2NH3 (g) + 1CO2 (g) Sabe-se que o gs carbnico est presente na atmosfera e advm
N 28, MAIO 2008

naturalmente da respirao de animais, da decomposio de resduos orgnicos e indiscriminadamente da queima de combustveis fsseis. Alm de ocasionar o efeito estufa, o gs carbnico (e outros gases poluentes) acidificam as guas das chuvas. O carter cido da molcula de CO2, em gua, se deve formao do cido carbnico: CO2 (g) + H2O (l) H2CO3 (aq) H2CO3 (aq) H+ (aq) + HCO3- (aq) Em razo da presena de CO2 no meio reacional, poderamos esperar que houvesse uma variao do pH do meio para nveis inferiores ao pH 7,0 (neutro). Contudo, a mudana de colorao do indicador (passando de violeta para verde) indicou que o pH da soluo aumentou para um nvel igual ou superior ao pH 11,0 (indicando um pH maior do que sete soluo bsica). A Tabela 1 apresenta a variao de cores do extrato de repolho roxo em diferentes pHs. Podemos atribuir, portanto, o aumento do pH da soluo presena de amnia que, em meio aquoso, se ioniza, disponibilizando para a soluo ons hidroxilas (OH): NH3 (g) + H2O (l) NH4OH (aq) NH4OH (aq) NH4+ (aq) + OH (aq) Como a reao de decomposio da amnia libera quantidade de amnia duas vezes superior quantidade de gs carbnico, o carter predominante do meio reacional ser bsico, o que confere a colorao verde, observada nos tubos de ensaio 1 e 3. Tubos de ensaio 2 e 4 Como a frao lquida da mistura de gua e sementes de melancia foi submetida ao aquecimento, a enzima urease foi inativada pelo calor. Portanto, a reao representada na Figura 1 pode ocorrer, contudo, em menor velocidade. No havendo liberao da hidroxila (OH-) em soluo, o pH resultante no ser alterado, portanto, no esperado mudana na colorao do indicador utilizado.
QUMICA NOVA NA ESCOLA

Tabela 1: Mudanas de cores do extrato de repolho roxo nas faixas de pH. COR FAIXA DE pH Vermelho 1-4 Violeta 5-8 Azul 9-10 Verde 11-12 Amarelo >13 Fonte: Bernardino e cols., 2000.

Os resultados esperados nesse experimento podem ser observados na Figura 4.

lues observadas nos tubos de ensaio. 2. Se durante a decomposio da uria formado, alm da amnia, dixido de carbono, sendo este um dos responsveis pela acidez das chuvas, qual a razo do meio ficar bsico? Proponha uma explicao para o fenmeno. 3. De acordo com o experimento e as observaes feitas, como voc poderia definir uma enzima? Pesquise a definio de enzima e compare-a com sua resposta.
Vanessa Vivian de Almeida (va_vivian@yahoo. com.br), licenciada e bacharel em Qumica pela Universidade Estadual de Maring (UEM), mestre em Qumica (UEM), professora do Ensino Mdio no Colgio Estadual Pedro Viriato Parigot de Souza, em Marialva - PR. Elton Guntendorfer Bonaf aluno do curso de licenciatura em Qumica (UEM). Flvia Braidotti Stevanato bacharel em Qumica (UEM) e mestre em Qumica (UEM). Nilson Evelzio de Souza, licenciado em Qumica (UEM), mestre em Cincia de Alimentos (UEL), doutor em Qumica (UNICAMP), docente do Departamento de Qumica da UEM. Jeane Eliete Laguila Visentainer, graduada em Farmcia Bioqumica (UEM), mestre em Cincias Biolgicas (UEM), doutora em Cincias Mdicas (UNICAMP), docente do Departamento de Anlises Clnicas (UEM). Makoto Matsushita, licenciado em Qumica (UEM), doutor em Ecologia de Ambientes Aquticos (UEM), docente do Departamento de Qumica da UEM. Jesu Verglio Visentainer, licenciado em Qumica (UEM), mestre em Cincia e Tecnologia de Alimentos (UFV), doutor em Cincia de Alimentos (UNICAMP), professor do Departamento de Qumica da UEM.

Notas
De acordo com o site Diagnsticos da Amrica (2006), normalmente o pH urinrio varia entre 5,0 a 7,0. Valores elevados podem ser encontrados em dietas com grande ingesto de vegetais e frutas ctricas, na presena de clculos renais e infeco das vias urinrias. Valores baixos de pH podem ser encontrados devido perda de potssio, dieta rica em protenas, infeco das vias urinrias por Escherichia coli, uso de anestsicos e de cido ascrbico, assim como de outras drogas.

45

Questes propostas
1. Apresente suas observaes sobre o aspecto visual das so-

Figura 4: Resultados esperados nesse experimento.

Catalisando a Hidrlise da Uria em Urina N 28, MAIO 2008

Referncias
BERNARDINO, A.M.R.; PEREIRA, A.S.; ARARIPE, D.R.; SOUZA, N.A. e AZEVEDO R.V.D. Antocianinas - papel indicador de pH e estudo da estabilidade da soluo de repolho roxo, 2000. Disponvel em <http://www.sbq.org. br/ranteriores/23/resumos/0256/index. html>. (Acesso em 2000). BIOCLIN. Uria Cintica, 2006. Disponvel em <www.bioclin.com.br/iuso/ ureiacinetica.pdf>. (Acesso em 2006). CIURLI, S.; BENINI, S.; RYPNIEWSKI, W.R.; WILSON, K.S.; MELETTI, S. e MANGANI, S. Structural properties of the nickel ions in urease: novel insights into the catalytic and inhibition mechanisms. Coordination Chemistry Reviews, v. 190-192, p. 331-355, 1999. COUTO, A.B.; RAMOS, L.A. e CAVALHEIRO, E.T.G. Aplicao de pigmentos de flores no ensino de qumica. Qumica Nova, v. 21, n. 2, p. 221-227, 1998.

DIAGNSTICOS DA AMRICA. Urina, 2006. Disponvel em <http://www.diagnosticosdaamerica.com.br/exames/ urina_elementos_anormais.shtml>. (Acesso em 2006). MOHAMED, T.M.; MOHAMED, M.A.; MOHAMED, S.A. e FAHMY, A.S. Purification of urease from water melon seeds for clinical diagnostic kits. Bioresource Technology, v. 68, p. 215-223, 1999. MORRIS J.G. Fsico-Qumica para Bilogos. Trad. M. N. Cipolli. So Paulo: Polgono, 1972. MOTTA, V.T. Bioqumica Bsica Enzimas, 2006. Disponvel em <http://www.laboratorioautolab.com/infomed/fulltext/3enzimas. pdf>. (Acesso em 2006). PERUZZO, T.M. e CANTO, E.L. Coleo base: Qumica. So Paulo: Moderna, 1999. SOUZA, F.S. e FATIBELLO-FILHO, O. Obteno, caracterizao e purificao da enzima urease de feijo guandu (Cajanus cajan L. Milsp). Congresso de Iniciao

Cientfica, 14, 2006, So Carlos. Anais de Eventos da UFSCar, v. 2, p.731, 2006. TERCI, D.B.L. e ROSSI, A.V. Indicadores naturais de pH: usar papel ou soluo? Qumica Nova, v. 25, n. 4, p. 684-688, 2002.

Para saber mais

FONSECA, M.R.M. Interatividade qumica: cidadania, participao e transformao: volume nico. So Paulo: FTD, 2003. SILVA, E.R.; NBREGA, O.S. e SILVA, R.H. Qumica: transformaes e aplicaes. So Paulo: tica, 2001. http://www.ciagri.usp.br/~luagallo/ Enzimas2.htm. (Acesso em dezembro 2006). http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/ disc_eng_bioq/lista_exerc/enzimas_ aspectos_gerais.pdf. (Acesso em dezembro 2006).

Abstract: Catalyzing urea hydrolysis in urine. In this article it is proposed a simple essay carried out with material of easy acquisition to show the urea hydrolysis from human urine catalyzed by urease extracted of watermelon seeds.

46

Keywords: watermelon seeds, urine, urea

Resenha O mesmo e o no-mesmo

O autor, Roald Hoffmann, professor de cincias mdicas da Universidade de Cornell. Nasceu em uma cidade da Polnia em 1937, hoje pertencente Ucrnia, vindo de uma famlia de origem judia. Imigrou para os EUA em 1949, tendo se bacharelado pela universidade de Columbia e se doutorado pela universidade de Harvard em 1960, onde trabalhou orientado pelo Nobel de Qumica, William Lipscomb. Em 1981, dividiu o prmio Nobel de Qumica com Kenichi Fukui. O livro O mesmo e o no-mesmo tem 341 pginas e divido em dez captulos. Nessas pginas, Hoffmann vai desenvolvendo suas argumentaes tentando explicar a um pblico hipoteticamente leigo sobre o que os qumicos fazem e o que ele considera que seja o objetivo epistemolgico da cincia Qumica. Uma explicao sobre o motivo do ttulo: [...] quer um ser humano racional possa ser ambivalente em relao aos produtos qumicos, neles vendo coisas benficas e prejudiciais, no um sinal de irracionaliQUMICA NOVA NA ESCOLA

dade, mas de humanidade. A utilidade e o perigo so os dois plos de uma dualidade [...]. Dano ou proveito, dano ou proveito, so apenas uma das polaridades que tornam a qumica interessante. (p. 14) O corao da atividade da cincia Qumica criar molculas. Existem catalogadas cerca de 10 milhes de novas molculas que no existiam nesse nosso mundo natural (p.125). A quantidade aproximada de nitrognio fixado pelo processo Haber-Bosch equivalente a todo o nitrognio fixado por processos biolgicos em todos os tempos (p. 287). Cerca de do PIB dos pases industrializados produzido pela indstria Qumica (p. 260). Sem dvida, a Qumica mexe de maneira indelvel com a natureza e com o destino das pessoas. Se todo esse nitrognio no fosse fixado, no haveria certamente alimento para todos. Se esses milhes de novas molculas no existissem, nossa vida seria diferente, para pior ou melhor? Hofmann argumenta que a cincia e a tecnologia mudaram o mundo para melhor (com poucas conseqncias ruins). E vai mais alm afirmando que a Qumica tem uma natureza democratizante. O mundo brutal e hostil do passado foi transformado para melhor de maneira a proporcionar uma vida com
Catalisando a Hidrlise da Uria em Urina

mais qualidade para um maior nmero de pessoas. O livro de Hoffmann tambm traz outras discusses importantes como o tema da reduo da Qumica (item quatro), o qual ele se coloca como contrrio, argumentando que o que a Qumica faz substancialmente diferente do que a Fsica faz. Discute tambm a idia de representao e realidade e afirma que o mais relevante nessa discusso a comunicao entre os qumicos, no exatamente saber se o que representamos a realidade. Por fim, acreditamos que esse livro deva ser uma leitura obrigatria para todos os qumicos: professores de nvel mdio, formadores de professores, professores universitrios e pesquisadores em geral. No entanto, o desejo de Hoffmann que seu livro atinja os leigos em Qumica, o cidado comum que, de posse de informaes e reflexes contidas nesse livro, possa formar uma opinio mais qualificada sobre o que que a cincia Qumica faz e, assim, poder fazer seu prprio julgamento. Nelson Rui Ribas Bejarano (UFBA) HOFFMANN, Roald. O mesmo e o no-mesmo. So Paulo: Ed. UNESP 2007. , 344p. ISBN: 9788571397613.
N 28, MAIO 2008