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Diseño, síntesis y evaluación de la actividad antifúngica del pirazol novedoso-

Carboxamidas de tiazol como inhibidores de succinato deshidrogenasa

Bin Yu, Shuang Zhou, Lixin Cao, Zesheng Hao, Dongyan Yang, Xiaofeng Guo,* Nailou Zhang,
Vasiliy A. Bakulev y Zhijin Fan*

Cite esto: J. Agric. Food Chem.2020, 68, 7093-7102 Leer en línea

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RESUMEN: Succionar deshidrogenasa (SDH) se considera como un objetivo prometedor para el descubrimiento de fungicidas. Para continuar nuestro continuo
estudios sobre el descubrimiento de nuevos inhibidores de SDH como fungicidas, pirazol novedoso-tiazol carboxamidas fueron diseñadas, sintetizadas,
Descargado vía UNIV DE EXTREMADURA el 16 de julio de 2021 a las 12:29:05 (UTC).

y evaluados por su actividad antifúngica. Los resultados indicaron que los compuestos9ac, 9bf, y 9cb mostró excelente in vitro ocupaciones
en contra Rhizoctonia cerealis con EC50 valores de 1.1 a 4.9 mg / L, superior al del fungicida comercial thifluzamida (EC50 =
23,1 mg / L). Compuesto9 cd (CE50 = 0,8 mg / L) fue mucho más activo que thifluzamida (EC50 = 4,9 mg / L) contra Sclerotinia
sclerotiorum. Compuesto 9ac exhibido prometedor en vivo actividad contra Rhizoctonia solani (90% a 10 mg / L), que fue mejor que
el de estefluzamida (80% a 10 mg / L). LafiEl experimento de campo mostró que el compuesto 9ac tenía 74,4% efficacy contra Rhizoctonia
solani el día 15 después de dos pulverizaciones consecutivas a una tasa de aplicación de 4,80 g ia / 667 m2, que estaba cerca de la de thifl
uzamida (83,3%). Además, el acoplamiento molecular explicó el posible modo de unión del compuesto.9ac en el RcSitio activo SDH. Nuestros
estudios indicaron que el pirazol-tiazol carboxamida híbrido es un nuevo scaffantiguo de los inhibidores de SDH.
PALABRAS CLAVE: inhibidores de la succinato deshidrogenasa, estructura-relaciones de actividad, actividad fungicida, acoplamiento molecular

■ INTRODUCCIÓN
Succinato deshidrogenasa (SDH), también conocida como succinato-
La ubiquinona reductasa (SQR, o complejo II), es un complejo enzimático
clave en el ciclo del ácido cítrico (ciclo de Krebs) que cataliza la oxidación
del succinato a fumarato en la matriz mitocondrial.1-4 SDH juega un papel
importante en la cadena de transferencia de electrones de la
respiración. Su inhibición interrumpe el ciclo de Krebs; por lo tanto, se
ha considerado como un objetivo fungicida ideal.5,6 Se han
comercializado veintitrés inhibidores de la succinato deshidrogenasa
(SDHI) para el control de enfermedades desde la fiLa primera carboxina
fungicida SDHI se lanzó en 1966.7
Sin embargo, muchos hongos han desarrollado resistencia
debido a la adopción irrestricta de SDHI y la falta de eff
opciones alternativas eficaces.8-10
Es bien sabido que la mayoría de los fungicidas SDHI consisten en un
enlace amida esencialmente común, una estructura diversa "centro"
resto unido al carbonilo del enlace amida, y un resto amina sustituido.6
Los estudios recientes se han centrado principalmente en modificar la
fracción amina y retener la fracción central de las SDHI comerciales;11-17
por lo tanto, todos los SDHI comerciales poseen un escaffviejo, lo que
puede conducir fácilmente a resistencias cruzadas. La exploración de
una scaffde edad avanzada para evitar hongos basados en SDH, la
resistencia cruzada necesita atención urgente.
En los últimos años, nuestro grupo ha descubierto algunos
derivados de tiazol e isotiazol con diffdiferentes actividades
fungicidas con un grupo pirazol como resto central (p. ej.,
fluxapyroxad, benzovindiflupyr, bixafen, sedaxano e
isopirazam) han logrado logros considerables en el
mercado de agroquímicos (Figura 1).25 Además, algunos
derivados de carboxamida con un diffSe reportaron
diferentes anillos aromáticos de pirazol con buena actividad
fungicida.26,27 Estos informes nos inspiraron a investigar si
un pirazol-híbrido de tiazol carboxamida sería un nuevo sca
ffviejo de los fungicidas SDHI.
Para continuar nuestros estudios en curso sobre el
descubrimiento de nuevos fungicidas SDHI, thiflSe seleccionó
uzamida como compuesto principal y el grupo pirazol sustituido se
introdujo por empalme. Una serie de pirazol novedoso-derivados
de tiazol carboxamida 9aa-9 como fueron diseñados, sintetizados y
evaluados por sus actividades antifúngicas (Figura 2). Para nuestro
deleite, compuestos9ac, 9af, 9ah, y 9 como se muestra bien in vitro
actividades antifúngicas contra Rhizoctonia cerealis. Para explorar
más a fondo el potencial effefecto del anillo de tiazol sobre su
actividad antifúngica, sobre la base de la estructura-relaciones de
actividad (SAR) de 9aa-9 como, otros dos tipos de pirazol-tiazol
carboxamidas 9ba-9cg fueron diseñados y sintetizados por scaff
salto antiguo y modi bioisostéricoficatión, y su en
Recibió: 4 de enero de 2020
Revisado: 20 de mayo de 2020

fungicidas.18-23 Entre ellos, compuesto 6g, descubierto por Aceptado: 12 de junio de 2020
Publicado: 12 de junio de 2020
acoplamiento molecular y una mayor optimización estructural, se
encontró como un potente SDHI con excelente actividad contra
Sclerotinia sclerotiorum.24 Mientras tanto, el representante SDHI

© 2020 Sociedad Química Estadounidense https://dx.doi.org/10.1021/acs.jafc.0c00062

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Figura 1. Fungicidas inhibidores de la succinato deshidrogenasa representativos (SDHI) que contienen pirazol.
Figura 2. Diseño molecular de los compuestos diana.
vitro Se evaluaron las actividades antifúngicas. Para estos compuestos
activos, suen vivo También se determinaron las actividades antifúngicas
contra cuatro hongos. El mejor compuesto activo fue validado por unfi
experimento de campo contra Rhizoctonia solani y simulación de
■
acoplamiento molecular.
MATERIALES Y MÉTODOS
Equipos y Materiales. Los puntos de fusión de los nuevos compuestos
se determinaron en un aparato de micro punto de fusión con pantalla
digital X-4 (Henan Gongyi Yingyi Yuhua Instrument Co., Ltd.) y no se
corrigieron. 1H RMN (400 MHz) y 13Los espectros de RMN C (101 MHz) se
registraron en un espectrómetro Bruker Avance-400 MHz
con TMS como estándar interno y CDCl3 o DMSO-D6 como solución. Los
espectros de masas de alta resolución se registraron con un Varion
Instrumento 7.0T FTICR-MS (Ion-Spec). La estructura cristalina se
determinó en un Rigaku 007 Saturn 70 diffractómetro (Rigaku,
Tokio, Japón).
Procedimientos sintéticos. Síntesis de 3- (Difluorometil) -1-
metil-1H-pirazol-4-carboxamida (2). Cloruro de oxalilo (9,7 ml,
114 mmol) y N, N-Se añadieron gota a gota dimetilformamida (0,1 ml) a
una suspensión de compuesto 1 (10,0 g, 56,8 mmol) en diclorometano
(100 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 30 min a temperatura
ambiente. Una vez completada la reacción, todos los sólidos se
disolvieron y la solución se volvió transparente. Una vez eliminado el
disolvente, se añadió diclorometano seco (20 ml) al residuo bruto. La
solución de cloruro de acilo se añadió gota a gota a una solución acuosa
de amoníaco al 25% (15,4 g, 227 mmol) usando una constante
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embudo de caída de presión a 0 °C, y la mezcla de reacción fue agitado
durante la noche. Despuésfifiltración y evaporación a sequedad, dio
compuesto 2 (sólido blanco, 9,7 g, 98%).
Síntesis de 3- (Difluorometil) -1-metil-1H-pirazol-4-carbo-
tioamida (3). Una solución de compuesto 2 (5,0 g, 28,6 mmol) y
Lawesson'El reactivo s (6,9 g, 17,1 mmol) en tetrahidrofurano (30 ml) se
agitó a 65ºC. °C durante 30 min. Después de la estafafiCuando se
completó la reacción mediante cromatografía en capa fina (TLC), la
mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo fue
diluido con acetato de etilo (20 mL), lavado con K saturado2CO3 (25
mL × 2) y salmuera (10 mL), y se secó sobre Na anhidro2ENTONCES4, y
luego, se eliminó el solvente. El residuo resultante fue purifieditado por
gel de sílice flcromatografía en columna de cenizas para dar el compuesto 3.
Datos para 3. Sólido amarillo; rendimiento, 92%; mp: 135-137 °C. 1H NMR
(400 MHz, CDCl3) δ 8,23 (s, 1 H), 7,76 (s, 1 H), 7,58 (s, 1 H), 6,79 (t,
J = 54,1 Hz, 1 H), 3,91 (s, 3 H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ
191,43, 139,63 (t, J = 29,9 Hz), 139,44, 121,68, 112,14 (t, J = 232,7
Hz), 39,53. HRMS (ESI)m / z calculado para C6H8F2norte3S [M + H] +:
192.0402; hallado: 192.0404.
Síntesis de N-metoxi, N-metil-1-metil-3- (difluorometil) - 1H-
pirazol-4-amida carboxílica (4). Compuesto 4 fue sintetizado
de acuerdo a los procedimientos previamente reportados.18 A una suspensión de
1 (5,0 g, 28,4 mmol) en diclorometano (40 ml), trietilamina (3,2
g, 31,2 mmol), EDCI (6,0 g, 31,2 mmol) y DMAP se añadieron
sucesivamente; la solución resultante se agitó a temperatura ambiente
durante 30 min. Luego, a la mezcla de reacción se le añadióNO-
clorhidrato de dimetilhidroxilamina (2,8 g, 28,4 mmol) y la mezcla se
agitó durante la noche a temperatura ambiente. Después
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estafafiCuando se completó la reacción por TLC, la mezcla de
reacción se lavó con agua (30 mL) y se extrajo con diclorometano
(10 mL × 2), y las capas orgánicas combinadas se lavaron
adicionalmente con salmuera (20 ml), se secaron sobre anhidro
N / A2ENTONCES4, y concentrado a presión reducida. El residuo fue purified
por gel de sílice flcromatografía en columna de cenizas afford 4.
Datos para 4. Blanco sólido; rendimiento, 91%; pf: 89-91 °C. 1RMN H (400
MHz, CDCl3) δ 7,91 (s, 1 H), 7,30 (t, J = 54,4 Hz, 1 H), 3,98 (s, 3 H),
3,69 (s, 3 H), 3,33 (s, 3 H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 162,08,
147,95 (t, J = 23,4 Hz), 133,28, 113,09, 109,73 (t, J = 236,6 Hz),
61,12, 39,62, 32,50. HRMS (ESI)m / z calculado para C8H12F2norte3O2 [M +
H] +: 220,0892; hallado: 220,0893.
Síntesis de 1- (3- (Difluorometil) -1-metil-1H-pirazol-4-il) - etan-1-
ona (5). Bromuro de metilmagnesio (solución de 3 mol / L en
tetrahidrofurano (THF), 6,8 ml, 20,5 mmol) se añadió gota a gota a 0ºC.
°C bajo nitrógeno a una suspensión agitada de 4 (1,5 g, 6,8 mmol) en
tetrahidrofurano seco (40 ml) durante 1 h. La mezcla de reacción se
inactivó cuidadosamente a 0ºC.°C con agua (10 mL) y se extrajo con
acetato de etilo (10 mL × 2). Las capas orgánicas combinadas se secaron
sobre Na anhidro2ENTONCES4, fifiltrado y concentrado a presión
reducida. El residuo fue purified por gel de sílice flcolumna de ceniza
cromatografía afford 5.
Datos para 5. Blanco sólido; rendimiento, 99%; mp: 74-76 °C. 1RMN H (400
MHz, CDCl3) δ 7,89 (s, 1 H), 7,12 (t, J = 54,0 Hz, 1 H), 3,98 (s, 3 H),
2,45 (s, 3 H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 191,48, 145,71 (t, J =
24,5 Hz), 134,87, 121,49 (t, J = 2,7 Hz), 109,63 (t, J = 236,4 Hz),
39,65, 28,53. HRMS (ESI)m / z calculado para C7H9F2norte2O [M + H] +:
175,0677; hallado: 175,0677.
Síntesis de 2-Bromo-1- (3- (difluorometil) -1-metil-1H-pirazol-4-il)
etan-1-ona (6). Una solucion de 5 (0,97 g, 5,6 mmol) pulg.
Se diluyó diclorometano (14 ml) con etanol (3 ml) y se le añadió en
porciones tribromuro de piridinio (1,8 g, 5,6 mmol). La mezcla de
reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Después de
la estafafiCuando se completó la reacción por TLC, la mezcla de
reacción se diluyó con diclorometano (10 ml) y agua (10 ml).
mL), tratado con sulfato sódicofite (0,17 g) y se agitó durante 10 min. La
La capa orgánica se secó sobre Na anhidro.2ENTONCES4, fifiltrado y
concentrado a presión reducida. El residuo fue purifieditado por
gel de sílice flcromatografía en columna de cenizas afford 6.
Datos para 6. Líquido amarillo; rendimiento, 96%.1H RMN (400 MHz, CDCl3)
δ 8,13 (s, 1 H), 7,09 (t, J = 53,9 Hz, 1 H), 4,27 (s, 2 H), 4,01 (s, 3 H).
13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 185,08, 146,32 (t, J = 24,7 Hz),
135,52, 117,64 (d, J = 2,4 Hz), 109,54 (t, J = 236,6 Hz), 39,77, 32,58.
HRMS (ESI) m / z calculado para C7H8BrF2norte2O [M + H] ^ {+}: 252,9783;
hallado: 252,9787.
Síntesis de etilo 2- (3- (Difluorometil) -1-metil-1H-pirazol-4- il)
tiazol-4-carboxilato (7a). Bromopiruvato de etilo (0,45 ml, 2,9
mmol) se añadió gota a gota a una solución de 3 (0,50 g, 2,6 mmol) en
etanol a temperatura ambiente. Luego, la solución se calentó para volver
aflux a los 80 °C durante 2 h. Después de la estafafiCuando se completó
la reacción por TLC, la solución se enfrió a temperatura ambiente y el
disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se diluyó con acetato
de etilo (20 ml) y se lavó con solución saturada.
NaHCO3 (10 ml × 2) y salmuera (10 mL) y se extrajo con acetato de
etilo (10 mL × 2). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre
Na anhidro2ENTONCES4, fifiltrado y concentrado a presión reducida.
El residuo fue purified por gel de sílice flcolumna de ceniza
cromatografía para producir 7a.
Datos para 7a. Sólido amarillo claro; rendimiento, 86%; mp: 101-103 °C. 1H
RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,04 (s, 1 H), 7,97 (s, 1 H), 6,96 (t, J =
53,9 Hz, 1 H), 4,35 (q, J = 6,9 Hz, 2 H), 3,89 (s, 3 H), 1,34 (t, J = 6.5
Hz, 3 H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 160,25, 157,72, 146,31,
141,83 (t, J = 27,5 Hz), 131,13, 125,90, 113,90, 109,84 (t, J = 234,7
Hz), 60,44, 38,51, 13,30. HRMS (ESI)m / z calculado para
C11H11F2norte3NaO2S [M + Na] +: 310,0432; hallado: 310,0435.
Síntesis de etilo 2- (3- (Difluorometil) -1-metil-1H-pirazol-4-
il) -4-metiltiazol-5-carboxilato (7b). Una solucion de 3 (4,6 g, 24,0 mmol) y
2-cloroacetoacetato de etilo (4,4 g, 26,4 mmol) en 50 mL de etanol se
calentó a reflux durante 10 h. Después de la estafafiCuando se completó
la reacción por TLC, la solución se enfrió a temperatura ambiente.
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temperatura y se eliminó el disolvente. El residuo se diluyó con
acetato de etilo (20 mL) y se lavó con agua (30 mL) y salmuera (20
mL) y se extrajo con acetato de etilo (15 mL).× 2). El combinado
Las capas orgánicas se secaron sobre Na anhidro.2ENTONCES4, fifiltrado
y concentrado a presión reducida. El residuo fue purifieditado por
gel de sílice flcromatografía en columna de cenizas para producir 7b.
Datos para 7b. Sólido amarillo; rendimiento, 69%; mp: 147-149 °C. 1H NMR
(400 MHz, CDCl3) δ 7,94 (s, 1 H), 7,15 (t, J = 53,9 Hz, 1 H), 4,34 (q,
J = 7,1 Hz, 2 H), 3,98 (s, 3 H), 2,73 (s, 3 H), 1,38 (t, J = 7,1 Hz, 3 H).
13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 162,16, 160,46, 160,15, 143,14 (t, J =
26,3 Hz), 131,79, 121,25, 115,36, 110,40 (t, J = 235,3 Hz), 61,26,
39,61, 17,36, 14,32. HRMS (ESI)m / z calculado para C12H14F2norte3O2S [M
+ H] +: 302,0769; hallado: 302,0775.
Síntesis de etilo 4- (3- (Difluorometil) -1-metil-1H-pirazol-4- il)
tiazol-2-carboxilato (7c). Una solucion de 6 (0,39 g, 1,52 mmol)
y tiooxamato de etilo (0,22 g, 1,7 mmol) en 25 ml de etanol se
calentó para volver aflux durante 8 h. Después de la estafafiCuando
se completó la reacción por TLC, la solución se enfrió a temperatura
ambiente y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se
diluyó con acetato de etilo (15 ml) y se lavó con agua (10 ml) y
salmuera (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo (5 ml).× 2). La
Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na anhidro.2ENTONCES4, fifiltrado
y concentrado. El residuo fue purified por gel de sílice flcolumna de ceniza
cromatografía para producir 7c.
Datos para 7c. Sólido amarillo claro; rendimiento, 67%; mp: 71-73 °C. 1H
RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,06 (s, 1 H), 7,79 (s, 1 H), 6,86 (t, J =
54,0 Hz, 1 H), 4,49 (q, J = 7,1 Hz, 2 H), 3,95 (s, 3 H), 1,45 (t, J = 7.1
Hz, 3 H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 159,88, 157,53, 148,35,
142,17 (t, J = 29,0 Hz), 132,32, 120,22 (t, J = 5,3 Hz), 115,42, 112,14
(t, J = 232,9 Hz), 62,63, 39,30, 14,26. HRMS (ESI)m / z calculado para
C11H12F2norte3O2S [M + H] +: 288,0613; hallado: 288,0618.
Procedimientos generales de síntesis de los compuestos 8a-8c.
Compuestos 8a-8c fueron sintetizados de acuerdo con los procedimientos
previamente reportados.28 Una suspensión de intermedios 7a-7c (1 equiv) en 2
mol / L de hidróxido de sodio se diluyó con etanol (4: 1, v /
v) y calentado a reflux durante 30 min. Una vez completada la reacción, la
solución se enfrió a temperatura ambiente y se acidificó.fied a pH = 2 con una
solución de HCl 1 mol / L. El sólido precipitado fuefifiltrado y secado para
proporcionar los intermedios de ácido carboxílico 8a-8c.
Datos para 8a. Off-Blanco sólido; rendimiento, 91%; mp: 213-215 °C. 1H
RMN (400 MHz, DMSO-D6) δ 13,14 (s, 1 H), 8,59 (s, 1 H), 8,45 (s, 1
H), 7,41 (t, J = 53,6 Hz, 1 H), 3,98 (s, 3 H). 13C NMR (101 MHz,
DMSO-D6) δ 162,34, 158,81, 147,86, 141,94 (t, J = 25,4 Hz), 133,58,
128,51, 114,53, 110,95 (t, J = 233,5 Hz), 39,75. HRMS (ESI)m / z
calculado para C9H7F2norte3NaO2S [M + Na] +: 282,0119; hallado: 282,0122.
Datos para 8b. Blanco sólido; rendimiento, 85%; mp: 240-242 °C. 1H NMR
(400 MHz, DMSO-D6) δ 13,36 (s, 1 H), 8,57 (s, 1 H), 7,35 (t, J = 53,5
Hz, 1 H), 3,94 (s, 3 H), 2,63 (s, 3 H). 13C NMR (101 MHz, DMSO-D6)
δ 163,32, 160,21, 159,52, 142,29 (t, J = 25,5 Hz), 133,89, 122,15,
114,51, 110,91 (t, J = 233,8 Hz), 39,79, 17,39. HRMS (ESI)m / z
calculado para C10H10F2norte3O2S [M + H] +: 274,0456; hallado: 274,0459.
Datos para 8c. Sólido amarillo claro; rendimiento, 92%; mp: 134-136 °C. 1H
RMN (400 MHz, DMSO-D6) δ 14,13 (s, 1 H), 8,36 (s, 1 H), 8,01 (s, 1
H), 7,33 (t, J = 53,7 Hz, 1 H), 3,95 (s, 3 H). 13C NMR (101 MHz,
DMSO-D6) δ 161.09, 159.46, 148.27, 141.57 (t, J = 25,9 Hz), 132,69,
120,93, 115,28, 111,75 (t, J = 232,5 Hz), 39,79. HRMS (ESI)m / z
calculado para C9H8F2norte3O2S [M + H] +: 260,0300; hallado: 260,0308.
Procedimientos generales de síntesis de los compuestos diana 9aa-
9cg. Los intermedios 8a-8c (0,10 g, 0,39 mmol) se disolvieron en
diclorometano (10 ml) y N, N-diisopropiletilamina (DIPEA,
0,13 mL, 0,77 mmol) y benzotriazol-1-il-oxitripirrolidinofosfonio hexa
flSe añadieron fluorofosfato (PyBOP, 0,22 g, 0,42 mmol) a 0ºC. °C. La
mezcla de reacción se agitó a 0ºC. °C durante 15 min y se añadió la
amina correspondiente (0,42 mmol). Luego, la mezcla de reacción
se agitó durante la noche. Después de la estafafiPara completar la
reacción por TLC, la solución se lavó con agua (10 mL) y salmuera
(10 mL) y se extrajo con diclorometano (5 mL). × 2). Las capas
orgánicas combinadas se secaron sobre
Na anhidro2ENTONCES4, fifiltrado y concentrado a presión reducida.
El residuo fue purified por gel de sílice flcolumna de ceniza
https://dx.doi.org/10.1021/acs.jafc.0c00062
J. Agric. Food Chem.2020, 68, 7093-7102
Diario de la química agrícola y alimentaria
Figura 3. Ruta sintética de los compuestos diana 9aa-9cg. Reactivos y condiciones: (a) cloruro de oxalilo / DMF / CH2Cl2, NUEVA HAMPSHIRE3·H2O / CH2Cl2; (
b) Lawesson's reactivo, THF, reflux, 1 h; (c) EtOH, reflux; (d) NaOH, EtOH / H2O; (e) CH3NHOCH3, EDCI, DMAP, etc.3NORTE; (f) 3M CH3MgBr, THF; (g) Py·HBr3 /
EtOH / CH2Cl2, N / A2ENTONCES3 /H2O / CH2Cl2; y (h) PyBOP, DIPEA, CH2Cl2, rt, durante la noche.
cromatografía para dar 9aa-9cg19-99%). Los datos físicos y
químicos de los compuestos objetivo.9aa-9cg en detalle se incluyen
en el información de soporte.
Determinación de la estructura cristalina del compuesto 9ac.
Compuesto 9ac se recristalizó en una mezcla de disolventes de acetato de
etilo y norte-hexano (1: 4, v / v). La radiografía monocristalina diffLos datos de
racción se registraron en un Rigaku 007 Saturn 70 diffractómetro usando Mo K
α radiaciónλ = 0,71073 Å). La estructura fue resuelta por el Olex2
1.2 software. Los átomos de hidrógeno se añadieron según un
modelo teórico.
Actividad antifúngica. Las actividades antifúngicas de los compuestos
del título. 9aa-9cg en contra Alternaria solani (A. solani), Botrytis cinerea
(B. cinerea), Cercospora arachidicola (C. arachidicola), Gibberella zeae (G.
zeae), Phytophthora infestans (Mont.) De Bary (
P. infestans), Physalospora piricola (P. piricola), Pellicularia sasakii (P.
sasakii), Rhizoctonia cerealis (R. cerealis), y Sclerotinia sclerotiorum (
S. sclerotiorum) fueron probados in vitro a 50 mg / L de acuerdo con el método
informado.29 El fungicida SDHI disponible comercialmente thiflSe seleccionó uzamida
como control positivo. Los compuestos con buenas actividades inhibidoras se
evaluaron adicionalmente para su mediana effefectivo
concentración (EC50) valores de acuerdo con los procedimientos previamente
reportados.29 Cada tratamiento se procesó para tres repeticiones.
La en vivo actividades antifúngicas de los compuestos diana contra
Erysiphe graminis, Puccinia sorghi Schw., Pyricularia oryzae Cav. Y
Rhizoctonia solani fueron evaluados de acuerdo con un método previamente
publicado.30 ThiflSe eligió uzamida como control positivo.
Pruebas de campo. La fiLos ensayos de campo se llevaron a cabo en un arroz fi
campo que fue naturalmente infectado por R. solani. Compuesto 9ac se preparó
como un emulsionante al 6,3%ficoncentrado capaz (EC), y thiflSe seleccionó uzamida
(240 g / L, concentrado de suspensión acuosa, SC) como control positivo y luego se
diluyó a 4,80 g de ia / 667 m2 con agua para pulverizar. Cada tratamiento se repitió
tres veces. El índice y el control de la enfermedad efficacy se calcularon de acuerdo
con los criterios de clasificación.31 La fiexperimento de campo de 9ac en detalle se
incluye en el información de soporte.
Modelado y acoplamiento molecular. La estructura cristalina SDH de
R. cerealis aún no se ha informado; por lo tanto, un modelo estructural
tridimensional (3D) de SDH deR. cerealis fue construido por modelo de
homología. Las secuencias de proteínas diana (ANG58741.1,
ANG58742.1 y ANG58743.1 se refieren a las subunidades B,
C y D, respectivamente)32 se obtuvieron del sitio web del NCBI
7096
pubs.acs.org/JAFC Artículo
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). Luego, se realizó la búsqueda BLAST
(BLASTp), las plantillas se seleccionaron del Protein Data Bank (PDB) y las
estructuras cristalinas de SDH deSus scrofacódigo de entrada: 4YXD) y
Gallus galluscódigo de entrada: 1YQ3) se aplicaron como plantillas. El
modelado se realizó en Modeler 9.18 y se eligió el mejor modelo en
función de la puntuación DOPE.33,34 El sitio de unión de SDH fue
construido por las subunidades B, C y D; por lo tanto, la subunidad A de
R. cerealis SDH no se construyó en este estudio. Los submodelos
individuales (modelos de subunidades B, C y D) se ensamblaron luego
superponiéndolos en 4YXD utilizando el software CHIMERA.35
El modelo de homología se evaluó mediante la gráfica de Ramachandran.
Además, el centro de unión del ligando deRcSDH fue identifieditado por
Autodock Tools.36,37 Las estructuras de ligandos se optimizaron con el
protocolo de minimización de ligandos. El análisis de acoplamiento molecular
fue realizado por Autodock Tools con valores predeterminados. Finalmente,
compuesto9ac y estoflLa uzamida se acopló a los modelos de homología
utilizando AutoDockVina.38
■
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Síntesis química. Las rutas sintéticas de los compuestos objetivo.
9aa-9cg se ilustran en figura 3. 3- (Difluor-ometil) -1-metil-1H-ácido
pirazol-4-carboxílico 1 se utilizó como material de partida, se trató
con cloruro de oxalilo para obtener el correspondiente cloruro de
acilo, y luego se añadió a una solución acuosa de amoníaco al 25%
para obtener la amida 2. Reemplazo del oxígeno del intermedio 2
con azufre vía Lawesson's reactivo produjo tioamida 3. Entonces, el
intermedio 3 se condensó con bromopiruvato de etilo y 2-
cloroacetoacetato de etilo para formar el tiazol correspondiente 7a
o 7b,
respectivamente. La cetona5 fue sintetizado vía Amida de
Weinreb 4 formación y la reacción de Grignard y luego se trató
con tribromuro de piridinio para obtener el compuesto 6.
El tiazol 7c se obtuvo de una ciclación intermolecular entre
el intermedio 6 y tiooxamato de etilo. Los intermedios7a-7c
eran saponified con una solución de NaOH 2 mol / L y
posteriormente acidificadafied con una solución de HCl 1
mol / L para obtener los intermedios ácidos 8a-8c,
respectivamente. Finalmente, los intermedios clave8a-8c reaccionó
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Figura 4. Estructura cristalina del compuesto 9ac por X-ray diffracción.

Tabla 1. In vitro Actividad antifúngica de los compuestos diana 9aa-9 como en 50 mg / L

tasa de inhibicióna (%)

compd ComoB Antes de Cristo C. a G. z Pi P. p P. s R. c S. s

9aa 19 ± 2 0 10 ± 1 28 ± 1 12 ± 1 0 25 ± 0 30 ± 1 6±1
9ab 48 ± 1 30 ± 2 21 ± 1 78 ± 2 15 ± 0 36 ± 2 26 ± 1 46 ± 2 35 ± 1
9ac 40 ± 0 27 ± 1 26 ± 2 dieciséis ± 2 0 18 ± 0 22 ± 2 85 ± 1 44 ± 2
9ad 41 ± 1 14 ± 1 52 ± 1 39 ± 1 23 ± 0 29 ± 1 37 ± 1 38 ± 1 6±0
9ae 22 ± 1 24 ± 1 24 ± 1 50 ± 1 33 ± 1 1±0 28 ± 0 15 ± 0 35 ± 2
9af 22 ± 0 57 ± 1 31 ± 2 50 ± 2 31 ± 1 29 ± 1 45 ± 2 86 ± 1 29 ± 0
9ag 70 ± 2 35 ± 2 55 ± 0 67 ± 1 52 ± 0 50 ± 1 47 ± 1 42 ± 0 53 ± 2
9ah 20 ± 2 73 ± 2 21 ± 1 39 ± 1 31 ± 1 22 ± 1 25 ± 1 78 ± 1 sesenta y cinco ± 2

9ai 48 ± 1 57 ± 0 17 ± 1 56 ± 2 12 ± 1 32 ± 0 21 ± 1 12 ± 1 35 ± 0
9aj 70 ± 2 68 ± 1 79 ± 2 56 ± 0 12 ± 1 71 ± 1 33 ± 1 35 ± 1 35 ± 1
9ak 67 ± 2 68 ± 0 62 ± 1 67 ± 1 36 ± 2 64 ± 0 49 ± 2 30 ± 1 24 ± 1
9al 11 ± 1 14 ± 0 28 ± 2 22 ± 1 12 ± 0 22 ± 0 33 ± 2 0 0
9 a. M. 56 ± 2 68 ± 1 62 ± 0 67 ± 2 44 ± 2 0 42 ± 2 50 ± 0 53 ± 2
9an 38 ± 1 72 ± 0 72 ± 1 78 ± 2 44 ± 0 29 ± 2 42 ± 1 67 ± 1 59 ± 0
9ao 0 68 ± 1 3±0 33 ± 0 63 ± 1 15 ± 0 54 ± 2 67 ± 2 47 ± 2
9ap 4±1 78 ± 2 21 ± 1 39 ± 1 20 ± 0 57 ± 1 49 ± 0 76 ± 2 88 ± 1
9aq 48±1 41 ± 1 52 ± 2 56 ± 0 47 ± 2 22 ± 0 61 ± 1 52 ± 0 59 ± 2
9ar 15 ± 0 46 ± 1 35 ± 2 50 ± 1 36 ± 2 55 ± 2 42 ± 2 64 ± 1 47 ± 1
9 como 70 ± 1 75 ± 2 69 ± 1 89 ± 2 47 ± 1 15 ± 0 61 ± 2 79 ± 2 59 ± 1
estofluzamida sesenta y cinco ± 0 59 ± 1 82 ± 2 35 ± 2 13 ± 0 39 ± 1 15 ± 0 56 ± 2 88 ± 1
a Los valores son la media ± desviación estándar (DE) de tres repeticiones. BComo: A. solani; Antes de Cristo: B. cinerea; C. a: C. arachidicola; G. z: G. zeae;

Pi: P. infestans (Mont.) De Bary; P. p:P. piricola; P. s: P. sasakii; R. c: R. cerealis; y S. s: S. sclerotiorum.

con la amina correspondiente en presencia de PyBOP para dar los
compuestos del título 9aa-9cg. Las estructuras químicas de todos
los compuestos objetivo. 9aa-9cg estaban estafadosfirmed por 1H
NMR y 13C NMR espectroscopias y espectrometría de masas de alta
resolución (HRMS), y las propiedades físicas y químicas se
proporcionan en el información de soporte. La estructura cristalina
de9ac (CCDC: 1960316) fue identified por radiografía monocristalina
ffanálisis de acción como se muestra en Figura 4 y Cuadro S1.
In vitro Actividad antifúngica y estudio SAR. La in vitro
actividades antifúngicas de los compuestos diana 9aa-9 como se
muestran en Tablas 1 y 2, donde thiflSe utilizó uzamida como control
positivo. tabla 1 muestra la actividad antifúngica preliminar contra
nueve hongos patógenos de cultivos representativos a 50 mg / L; la
mayoría de los derivados mostraron actividades fungicidas de regulares
a buenas contraB. cinerea, G. zeae, R. cereales, y S. sclerotiorum. Entre
ellos, 9ac, 9af, 9ah, 9ap, y 9 como exhibió mayor actividad antifúngica
contra R. cerealis que thifluzamida (56%); 9ap
(88%) mostró igual actividad fungicida contra S. sclerotiorum
a la de thifluzamida (88%); 9ap y 9 como mostró más del 75% de
actividad inhibidora contra B. cinerea, que era más alto que el de thi
fluzamida (59%). ParaG. zeae, 9ab, 9ak, 9an, y 9 como mostró
actividades antifúngicas considerablemente más altas que estefl
uzamida (35%). Estos resultados indicaron que el resto de anilina
con un solo sustituyente en la orto o metaposición (es decir, 9ab,
9ac, 9af, 9ah, y 9ak) exhibió actividades fungicidas prometedoras
contra los cuatro hongos descritos anteriormente. Modificationes
en la para-posición del resto de anilina con un grupo de extracción
o donación de electrones no signifimejorar significativamente la
actividad antifúngica en comparación con 9aa. Por ejemplo, 9ab y
9ac mostró mejores actividades antifúngicas que el
correspondiente compuesto para-sustituido 9ad en contra R.
cerealis. Además, reemplazar el resto de anilina con un
flgrupo amina exible como 9 comoexhibió> 50% de actividad
contra siete hongos) conduciría a un espectro fungicida más
amplio.
Para evaluar la potencia fungicida, los compuestos con más del
75% de inhibición a 50 mg / L se examinaron más a fondo para

7097 https://dx.doi.org/10.1021/acs.jafc.0c00062
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Tabla 2. In vitro CE50 de los compuestos seleccionados 9aa-9 como

hongos compd CE50 (mg / L) 95% de estafafiintervalo de dencia ecuación de regresión R2

Como 9 como 73,1 68,9-87,3 y = 0,801x + 3.508 0,998
estofluzamida 7,6 6.4-9.0 y = 1.460x + 2.567 0,999
Antes de Cristo 9ap 45,2 33,2-54,2 y = 0.594x + 4.039 0,990
9 como 35,3 26,6-49,7 y = 1.525x + 2.655 0,976
estofluzamida 11,7 10.0-13,7 y = 1.122x + 3.831 0,992
G. z 9ab 45,8 38,6-58,2 y = 1.732x + 2.145 0,983
9ak 33,3 26,9-40,2 y = 0,284x + 4.575 0,989
9an 2.2 1,5-3,0 y = 0.398x + 4.876 0,994
9 como 1.1 0,6-2.3 y = 0,700x + 4.973 0,965
estofluzamida > 100
R. c 9ac 2.0 1.4-2.4 y = 0,702x + 4.805 0,999
9af 6.2 4.1-10,7 y = 1.105x + 4.139 0,965
9ah 10.0 7.0-14,8 y = 1,558x + 3.481 0,966
9ap 29,8 21,8-42,7 y = 0,690x + 3.985 0,962
9 como 20,1 12,5-29,1 y = 1.892x + 2.603 0,928
estofluzamida 23,1 15.0-37,6 y = 0,632x + 4.145 0,963
S. s 9ap 24,4 21,2-30,5 y = 1.121x + 3.455 0,987
9ar 58,9 28,5-133,5 y = 0.423x + 4.253 0,942
estofluzamida 4.9 3.9-6,9 y = 0,841x + 4.426 0,986

Tabla 3. In vitro Actividad antifúngica de los compuestos diana 9ba-9cg a 50 mg / L

tasa de inhibición (%)a

compd Como Antes de Cristo C. a G. z Pi P. p P. s R. c S. s

9ba 17 ± 0 35 ± 2 23 ± 0 37 ± 1 7±1 14 ± 0 3±0 3±1 74 ± 2
9bb 20 ± 2 38 ± 1 18 ± 0 26 ± 0 7±1 14 ± 0 9±1 68 ± 0 61 ± 0
9 a. C. 22 ± 0 37 ± 0 18 ± 0 33 ± 1 7±1 33 ± 1 3±0 42 ± 1 64 ± 1
9bd 22 ± 0 56 ± 1 28 ± 0 26 ± 0 13 ± 0 14 ± 0 9±1 42 ± 0 56 ± 1
9be 28 ± 2 52 ± 0 31 ± 2 dieciséis ± 2 13 ± 0 12 ± 2 3±1 43 ± 1 71 ± 2
9bf 17 ± 0 43 ± 0 15 ± 2 8±1 13 ± 0 19 ± 0 3±0 49 ± 2 90 ± 2
9ca 9±0 33 ± 0 13 ± 0 0 1±0 24 ± 1 0 10 ± 1 0
9cb 35 ± 1 59 ± 1 28 ± 0 18 ± 0 24 ± 2 33 ± 1 24 ± 2 62 ± 1 97 ± 2
9cc 13 ± 0 35 ± 2 23 ± 2 10 ± 0 0 14 ± 0 47 ± 1 11 ± 0 57 ± 0
9 cd 44 ± 1 54 ± 2 44 ± 1 63 ± 2 42 ± 1 52 ± 1 52 ± 1 87 ± 0 92 ± 0
9ce 24 ± 2 35 ± 2 8±0 14 ± 0 3±1 17 ± 0 12 ± 0 31 ± 1 56 ± 0
9cf 13 ± 0 56 ± 1 18 ± 0 10 ± 0 5±2 10 ± 0 15 ± 2 18 ± 0 sesenta y cinco ± 1

9cg 13 ± 3 37 ± 0 8±0 14 ± 0 0 10 ± 0 3. ± 0 20 ± 1 61 ± 2
estofluzamida 59 ± 1
sesenta y cinco ± 0 82 ± 2 35 ± 2 13 ± 0 39 ± 1 15 ± 0 56 ± 2 88 ± 1
aLos valores son la media ± desviación estándar (DE) de tres repeticiones.

obtener su mediana effconcentración efectiva (CE50) valores. Como actividad, 9ac, 9af, 9ah, y 9 como fueron seleccionados como nuevo cliente potencial

se muestra enTabla 2, 9ac, 9af, 9ah, y 9 como en contra R. cerealis
mostró mejores actividades fungicidas con EC50 valores dentro de
un rango de 2.0 y 20.1 mg / L en comparación con estefluzamida
con una CE50 valor de 23,1 mg / L. En particular,9ac (R = 3-BrPh)
fue el compuesto más potente contra R. cerealis con un
CE50 valor de 2.0 mg / L, que fue aproximadamente 11 veces más
activo que el de thifluzamida. ParaG. zeae, 9ab, 9ak, 9an, y 9 como
mostró mejores actividades antimicóticas con EC50 valores dentro de
un rango de 1,1 y 45,8 mg / L en comparación con estefluzamida
(CE50> 100 mg / L). Entre estos,9 como exhibido significautelosamente
mayor actividad antifúngica (con un EC50 valor de 1,1 mg / L)
que thifluzamida. Aparte de eso,9 como exhibió una amplia
espectro de actividad antifúngica con EC50 valores dentro de un
rango de 1,1 y 35,3 mg / L contra A. solani, B. cinerea, G. zeae, y
R. cerealis.
Los estudios de SAR indicaron que el resto de anilina con un solo
sustituyente en la posición orto o meta exhibió una actividad antifúngica
prometedora, especialmente contra R. cerealis. Por lo tanto, para
investigar más a fondo el effefecto del anillo de tiazol en antifúngico
compuestos, donde el resto del núcleo fue reemplazado por otros dos
tipos de pirazol-sca de tiazolffTambién se investigaron los antiguos
y sus derivados relativos orto o meta-sustituidos. Las actividades
fungicidas preliminares de los compuestos objetivo.9ba-
9cg están listados en Tabla 3; la mayoría de los compuestos exhibieron actividades
antifúngicas de regulares a buenas contraB. cinerea, R. cerealis, y S.
esclerotiorum, y su CE50 Los valores fueron evaluados más a fondo y se
enumeran en Cuadro 4. Los resultados revelaron que la mayoría
Los compuestos mostraron una disminución en la actividad antifúngica en
comparación con los correspondientes compuestos de plomo. En general,9ba-9bf
mostró mejores actividades antifúngicas que 9ca-9cg, lo que
indica que el sustituyente metilo en el anillo de tiazol sería más
favorable para las interacciones hidrófobas con SDH. Sin
embargo,9cb y 9 cd mostró una tendencia opuesta contra R.
cerealis y S. sclerotiorum en comparación con 9bb y 9bd.
Además, 9cfCE50 = 13,0 mg / L) mostraron mayor
actividad antifúngica que 9beCE50 = 34,6 mg / L) contra S.
sclerotiorum. Entre 9ba-9cg, 9bb, 9bf, 9cb, y 9 cd (CE50 =
1.1-8,8 mg / L) exhibieron mayores actividades antifúngicas contra R.

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Cuadro 4. In vitro Actividad antifúngica con EC50 en contra B. cerealis que thifluzamida (EC50 = 23,1 mg / L). En particular,
cinerea, R. cerealis, y S. sclerotiorum de El Objetivo 9bf mostró la actividad más potente con un EC50 valor de
Compuestos 9ba-9cg 1,1 mg / L, que era aproximadamente 21 veces más activo que el de
estofluzamida y aproximadamente dos veces más activo que el de la
CE50 (mg / L)
Compuesto de plomo 9ac (CE50 = 2,0 mg / L). ParaS. sclerotiorum,
compd B. cinerea R. cerealis S. sclerotiorum 9 cd exhibió una excelente actividad antifúngica con una CE50 valor de
9ba > 100 35,0 39,3 0.8 mg / L, que fue aproximadamente seis veces mayor actividad inhibitoria
9bb > 100 8.7 85,8 que el de thifluzamida (EC50 = 4,9 mg / L). ParaB. cinerea,
9 a. C. 22,9 45,5 92,0 9ba-9cg no mostró la potencia deseada, y la inhibición
9bd 27,9 27,7 40,6 Las actividades de esta serie de derivados fueron menores que las de
9be 21,5 34,0 34,6 estofluzamida (EC50 = 11,7 mg / L).
9bf 36,4 1.1 4.9 En vivo Actividad antifúngica. La en vivo protector
9ca > 100 > 100 > 100 actividades de 9aa-9cg en contra E. graminis, P. sorghi Schw, P.
9cb 29,0 4.9 14,2 oryzae, y R. solani se muestran en Cuadro 5, y esteflSe utilizó
9cc > 100 > 100 34,2 uzamida como control positivo. La mayoría de los compuestos9aa-
9 cd 58,7 8.8 0,8 9 como mostró excelentes actividades contra R. solani a 200 mg / L.
9ce > 100 > 100 > 100
Entre ellos,9ac, 9ad, 9af, y 9bf exhibió una buena actividad
9cf > 100 > 100 13,0 antifúngica (más del 70% de inhibición) a 100 mg / L. Especialmente,
9cg > 100 > 100 > 100
9ac exhibió mayor actividad que thifluzamida (90% vs 80%),
estofluzamida 11,7 23,1 4.9
incluso a 10 mg / L. 9ac también mostró un amplio espectro de
actividad fungicida contra P. sorghi Schw (70%) y P. oryzae
(70%) a 200 mg / L. Además,9cb mostró un 100% de inhibición

Cuadro 5. En vivo Actividad antifúngica de los compuestos 9aa-9cg

tasa de inhibición (%)

E. graminisa P. sorghi Schw. P. oryzae R. solani

compd 200 mg / L 200 mg / L 200 mg / L 200 mg / L 100 mg / L 10 mg / L

9aa 50 20 0 100 30 0
9ab 20 20 50 100 10 0
9ac 40 70 70 100 100 90
9ad 40 70 0 100 70 40
9ae 0 20 0 100 50 40
9af 20 50 0 100 80 30
9ag 0 0 0 90 40 20
9ah 20 0 90 100 0 0
9ai 0 0 0 90 0 0
9aj 0 0 0 80 0 0
9ak 0 30 50 90 60 20
9al 0 0 0 90 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE

9 a. M. 0 0 0 60 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE

9an 0 0 70 60 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE

9ao 0 0 0 80 0 0
9ap 0 20 0 20 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE

9aq 20 0 0 100 0 0
9ar 0 0 0 100 0 0
9 como 0 20 0 100 0 0
9ba DAKOTA DEL NORTEB 45 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 0 DAKOTA DEL NORTE

9bb DAKOTA DEL NORTE 30 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 40 DAKOTA DEL NORTE

9 a. C. DAKOTA DEL NORTE 0 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 30 DAKOTA DEL NORTE

9bd DAKOTA DEL NORTE 0 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 0 DAKOTA DEL NORTE

9be DAKOTA DEL NORTE 10 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 20 DAKOTA DEL NORTE

9bf DAKOTA DEL NORTE 60 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 70 50
9ca DAKOTA DEL NORTE 0 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 0 DAKOTA DEL NORTE

9cb DAKOTA DEL NORTE 100 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 0 DAKOTA DEL NORTE

9cc DAKOTA DEL NORTE 0 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 0 DAKOTA DEL NORTE

9 cd DAKOTA DEL NORTE 80 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 50 20

9ce DAKOTA DEL NORTE 30 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 60 DAKOTA DEL NORTE

9cf DAKOTA DEL NORTE 45 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 30 DAKOTA DEL NORTE

9cg DAKOTA DEL NORTE 45 DAKOTA DEL NORTE DAKOTA DEL NORTE 50 DAKOTA DEL NORTE

estofluzamida 98 100 50 100 90 80

E. graminis: polvo blanco de trigo; P. sorghi Schw .: roya del maíz; P. oryzae: explosión de arroz; R. solani: tizón de la vaina del arroz.
a B ND = no detectado.

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Cuadro 6. E relativofficacia del Compuesto 9ac contra R. solani en ensayos de campo

7mo día después del fiprimera pulverizacióna 5to día después de la segunda pulverizacióna 15 ° día después de la segunda pulverizacióna

Velocidad enfermedad control efficacy control de enfermedades e control de enfermedades e

compd (g ia / 667 m2) índice (%) DDB ffiíndice de cacy (%) DDB ffiíndice de cacy (%) DDB
9ac (6,3%, CE)C 4,80 0,88 70,9 ± 2.8 Ab 1,89 75,7 ± 1.3 Ab 3,60 74,4 ± 0,6 Ab
estofluzamida (240 g / L, 4,80 0,54 82,0 ± 1.1 1,09 86,0 ± 1,9
Automóvil club británico 2,35 83,3 ± 1,7
Automóvil club británico Automóvil club británico
SC)D

CK 0 3,04 7.78 14.06

Los valores son la media ±
error estándar (SE) de tres
a
replica. BSignifino puedo differencia; las letras mayúsculas representan el significance en el nivel 0.01 (PAG
> 0.01), y las letras minúsculas representan el significance en el nivel 0.05 (P> 0,05). CEmulsificapaz de concentrarse. DConcentrado en suspensión.

Figura 5. Modos de encuadernación de (A) thifluzamida y (B) 9ac con R. cerealis SDH.

actividad contra P. sorghi Schw a 200 mg / L. 9ah mostró un 90% de
actividad inhibidora contra P. oryzae, que era mejor que el de thifl
uzamida (50%) a 200 mg / L. Para nuestra decepción,
9bf mostró más bajo en vivo actividad contra R. solani que thifl
uzamida a 100 y 10 mg / L, que posiblemente sea el resultado de
factores biológicos (p. ej., metabolismo de las plantas) y factores
ambientales como la fotólisis UV.
Los resultados de en vivo La actividad antifúngica sugirió que estos
compuestos mostraban actividades prometedoras contra R. solani.
Entre ellos, 9ac fue identified como el candidato potencial más práctico
para estudios posteriores.
Ensayos de campo del compuesto 9ac. Para validar aún más la potencia de
9ac contra el tizón de la vaina del arroz, fiLos experimentos de campo se
llevaron a cabo en un arroz ficampo que estaba naturalmente infectado con
R. solani. Como se muestra en Tabla 6, aplicaciones foliares de 9ac y esto
fluzamida mostró 70,9 y 82,0% efficacies en el séptimo día después de la
fiprimera pulverización, respectivamente. Entonces, la effiLas cacies se
incrementaron, respectivamente, a 75,7 y 86,0% en el quinto día
después de la segunda pulverización (con un intervalo de 7 días entre las
fiprimera y segunda pulverización) para 9ac y estofluzamida.
Posteriormente, el efficacies mostraron una ligera disminución a 74,4 y
83,3% en el día 15 después de la segunda pulverización para 9ac y estofl
uzamida, respectivamente. No se observó fitotoxicidad obvia para cada
tratamiento. Aunque existía un efficacy diffdiferencia entre 9ac y el
control positivo thifluzamida según lo analizado por el difference signifi
prueba de cance, el ficampo efficacy differencia
no fue muy significativofihipocresía; Esto puede deberse a dos factores
importantes de la irradiación ultravioleta y el metabolismo del cultivo bajo el
ficondiciones de campo. Nuestros estudios indicaron que, como un
potente fungicida líder para una mayor optimización,9ac mostró efficacy
muy cercano al de thifluzamida bajo el ficondición de campo.
Estudio de acoplamiento para validación de objetivos. Validar los
posibles mecanismos antifúngicos de estos novedosos pirazol.-
tiazol carboxamidas, 9ac y estofluzamida se acoplaron en el
sitio de unión teórico de RcSDH. Las interacciones de9ac
y estofluzamida con RcLos SDH se ilustran en Figura 5. En el
complejo atracado de thifluzamida y RcSDH (Figura 5A), el
átomo de oxígeno del enlace amida formó un enlace de
hidrógeno con el residuo clave Trp-B203, que fue crucial para la
unión de un inhibidor y RcSDH. El resto de anilina se estiró en
un bolsillo hidrófilo que consistía en los residuos Phe-C65, Trp-
C74 e Ile-C78. El átomo de nitrógeno del anillo de tiazol formó
otro enlace de hidrógeno con Arg-C81, y el anillo de tiazol
formó un débilπ-π interacción de apilamiento con His-B246. Sin
embargo, la presencia de un grupo metilo en la posición 2 del
resto de tiazol dio como resultado una interacción de repulsión
desfavorable con Asp-D127, lo que puede explicar su potencia
fungicida relativamente más débil.
Como se muestra en Figura 5B, el pirazol-núcleo de tiazol de 9ac
fue enterrado en la cavidad polar (incluidos Trp-B203, His-B246,
Arg-C81 y Cys-D124) de RcSDH, un flátomo de orina de difl
uorometil formó un enlace de hidrógeno con Arg-C81, y

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el anillo de pirazol formó una π-π interacción con His-B246.
Además, el átomo de oxígeno del enlace amida y Trp-B203
también formaron un enlace de hidrógeno con una distancia
más corta y un ángulo de enlace ligeramente mayor, que era
más fuerte que el de thifluzamida. Además, el resto de fenilo se
estiró a través del bolsillo hidrófobo y formó un Br-π
interacción con el residuo Phe-C65. Todos estos differences
explicaron que 9ac fue más activo que thifluzamida contra R.
cerealis debajo in vitro condiciones.
En este estudio, una serie de pirazol novedoso-tiazol carboxamidas
9aa-9 como fueron diseñados, sintetizados y evaluados racionalmente
por su in vitro y en vivo actividades antifúngicas. Los resultados de lain
vitro bioensayo mostró que 9ac, 9af, 9ah,
y 9 como exhibió mejores actividades antifúngicas que thifluzamida
contra R. cerealis. Según el SAR de 9aa-9 como, dos series
novedosas de pirazol-tiazol carboxamidas 9ba-9cg fueron
diseñados y sintetizados por scaffsalto antiguo y modi bioisostéricofi
catión. Los resultados del bioensayo antifúngico indicaron que el
resto de anilina con un solo sustituyente en la posición orto o meta
exhibió una actividad antifúngica prometedora, y las simulaciones
de acoplamiento molecular también explicaron el SAR en detalle.
Además, elen vivo La actividad antifúngica reveló que
9ac exhibió mayor actividad antifúngica que thifluzamida contra R.
solani. Más arroz fiexperimentos de campo demostraron que el
compuesto 9ac exhibió 74.4% efficacy contra R. solani a razón de
4,80 g ia / 667 m2 el día 15 después de la segunda pulverización, lo
que sugiere que 9ac podría ser un candidato potencial práctico para
■
estudios posteriores.
CONTENIDO ASOCIADO
*sI información de soporte
La información complementaria está disponible de forma gratuita en
https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.jafc.0c00062.
Datos cristalográficos (CIF)
Datos físicos y químicos de los compuestos objetivo.
9aa-9cg; datos de cristal de 9ac; CE50 valor de los compuestos
objetivo 9ba-9cg; fidetalles del experimento de campo; secuencia
identidades entre RcSDH y diffdiferentes especies SDH;
alineación entreRcSDH y la proteína molde; Parcela de
RamachandranRcSDH; y espectros de RMN de
compuestos representativos (PDF)
■
INFORMACIÓN DEL AUTOR
Autores correspondientes
Xiaofeng Guo - Facultad de Biología, Universidad de Hunan, Changsha
410082, PR China; Correo electrónico: guoxf@hnu.edu.cn
Fan de Zhijin - Laboratorio estatal clave de química orgánica de
elementos, Facultad de química, Universidad de Nankai, Tianjin
300071, República Popular China; orcid.org/0000-0001-5565-0949;
Teléfono: +86022-23499464; Correo electrónico:fanzj@nankai.edu.cn;
Fax: +86022-23503620
Autores
Bin Yu - Laboratorio Estatal Clave de Química Orgánica de Elementos,
Facultad de Química, Universidad de Nankai, Tianjin 300071, PR
China; orcid.org/0000-0001-9423-1691
Shuang Zhou - Laboratorio estatal clave de química orgánica de
elementos, Facultad de química, Universidad de Nankai, Tianjin
300071, PR China
Lixin Cao - Laboratorio estatal clave de química orgánica de
elementos, Facultad de química, Universidad de Nankai, Tianjin
300071, PR China
7101
pubs.acs.org/JAFC Artículo
Zesheng Hao - Laboratorio estatal clave de química orgánica de
elementos, Facultad de química, Universidad de Nankai, Tianjin
300071, PR China
Dongyan Yang - Laboratorio estatal clave de química orgánica de
elementos, Facultad de química, Universidad de Nankai, Tianjin
300071, PR China
Nailou Zhang - Laboratorio estatal clave de química orgánica de
elementos, Facultad de química, Universidad de Nankai, Tianjin
300071, PR China
Vasiliy A. Bakulev - La Universidad Federal de los Urales lleva el
nombre del primer presidente de Rusia BN Yeltsin, Ekaterinburg
orcid.org/0000-0002-3312-7783
620002, Rusia;
La información de contacto completa está disponible en:
https://pubs.acs.org/10.1021/acs.jafc.0c00062
Notas
■
Los autores declaran no competir fiinterés financiero.
EXPRESIONES DE GRATITUD
Este trabajo fue apoyado en parte por la Fundación de Ciencias
Naturales de Tianjin (No. 18JCZDJC33500), la Fundación
Nacional de Ciencias Naturales de China (No. 31872007), los
Fondos de Investigación Fundamental para las Universidades
Centrales, la Universidad de Nankai (No. Programa de
Cooperación en Ciencia y Tecnología de China (No.
2014DFR41030) y el Programa de Desarrollo de Tianjin para la
■
Innovación y el Emprendimiento (Tianjin Talent 2019-11-6).
DEDICACIÓN
Este documento está dedicado al aniversario de la colaboración de
14 años con el profesor Vasiliy A. Bakulev y su 70 cumpleaños.
También dedicamos este documento al 101 aniversario de la
Universidad de Nankai y al 101 aniversario del cumpleaños del
■
profesor Ruyu Chen.
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