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Las plantas intactas pueden fabricar su propio alimento, pero el cultivo in vitro de clulas o partes de la planta requiere una

variedad de nutrientes y condiciones fsicas adecuadas para su crecimiento. La composicin del medio de cultivo de tejidos vegetales depende del tipo de tejidos de las plantas o clulas que se utilizan para el cultivo. No solo medio puede ser utilizado para todo tipo de plantas y de los rganos, por lo que la composicin del medio de cultivo para cada material de la planta tiene que ser resuelto. Un medio de cultivo tpica se compone de los siguientes componentes: una nutrientes) inorgnicos (micro y macro elementos, - C, H, O, N, P, S, Ca, K, Mg, Fe, Mn, Cu, Zn, B, MB), los seis elementos a saber, nitrgeno, fsforo, potasio, calcio, magnesio y azufre son los macronutrientes esenciales para el cultivo de tejidos. La concentracin ideal de nitrgeno y el potasio es de alrededor de 25 mmol l-1, mientras que para el calcio, fsforo, azufre y magnesio, que est en el rango de 3.1 mmol l-1. Entre los micronutrientes, necesidad de hierro es muy importante. Quelado forma de hierro y cobre se utilizan comnmente en los medios de cultivo. b) una fuente de carbono y una fuente de energa (generalmente sacarosa)) - Las clulas vegetales y tejidos en el hetertrofos mediumare la cultura y por lo tanto, dependen de la externa de carbono para obtener energa. Entre las diversas fuentes de energa, la sacarosa es el ms preferido. Durante la esterilizacin del medio, la sacarosa se hidroliza en glucosa y fructosa y las clulas vegetales utilizan primero la glucosa y de fructosa. Los hidratos de carbono tales como lactosa, maltosa, galactosa, etc se han utilizado en los medios de cultivo, pero con xito limitado. c) suplementos de vitaminas orgnicas (por ejemplo, cido nicotnico, tiamina, piridoxina y myo-inositol), aminocidos (arginina, por ejemplo), las clulas vegetales en cultivo son capaces de sintetizar vitaminas igual que las plantas naturales, pero en cantidades subptimas que no es compatible con el crecimiento apropiado de clulas en cultivo. Por lo tanto, el medio es suplementado con vitaminas para lograr un buen crecimiento de las clulas. Del mismo modo los aminocidos se aaden a los cultivos de clulas para estimular el crecimiento celular y estabilish las lneas celulares. cidos orgnicos, especialmente los intermediarios del ciclo de Krebs citrato por ejemplo, malato, succinato, el piruvato tambin mejora el crecimiento de las clulas vegetales. A veces los antibiticos (por ejemplo, la estreptomicina, kanamicina) tambin se aaden al medio para prevenir el crecimiento de los microorganismos. d) Los reguladores de crecimiento (auxinas, por ejemplo, las hormonas giberelinas citoquininas y plantas desempean un papel importante en el crecimiento y la diferenciacin de las clulas cultivadas y los tejidos Las hormonas de crecimiento incluidas en los medios de cultivo incluyen:.. auxinas, citoquininas, auxinas y giberelinas La facilitar la divisin celular y diferenciacin de las races. El citoquininas induce la divisin celular y la diferenciacin y las giberelinas se utiliza principalmente para inducir la formacin de plntulas a partir de embriones adventicias formadas en la cultura. Las auxinas inducen la divisin celular, la elongacin celular y la formacin de un callo en los cultivos. 2,4-diclorofenoxiactico cido actico es una de las auxinas ms comnmente agregado en cultivos de clulas vegetales. Citoquininas, promueve la sntesis de ARN y protenas y estimular las actividades de la enzima en los tejidos. Kinetina y bencilo aminopurina son las citoquininas ms utilizados en cultivos de clulas vegetales.

La relacin de las auxinas y citoquininas juegan un papel importante en la morfognesis de los sistemas de cultivo. Cuando la relacin de las auxinas de citoquininas es la embriognesis de alta, de iniciacin del callo, y el inicio de raz se producen. Para la proliferacin de la axila y disparar, la proporcin de las auxinas de citoquininas se mantiene baja. Entre las giberelinas, giberelinas A3 (GA3) es el ms utilizado para el cultivo de tejidos. GA3 mejora el crecimiento de callos y plntulas enanas induce a alargarse. e) Solidificacin de agentes como el agar. En general, un agente gelificante agar (un polisacrido obtenido de algas rojas, Gelidium amansil) se aade al medio lquido para su solidificacin. . El agar obtenido de algas marinas proporciona una superficie slida para el crecimiento de las clulas, porque en el medio lquido, el tejido se sumerge y mueren debido a la falta de oxgeno. Las clulas se cultivan en un medio de agar con la suspensin de las culturas, pero como se airean con regularidad, ya sea por burbujas de aire estril o por una suave agitacin. Algunos otros de uso menos frecuente son los agentes de solidificacin biogel (pellets polyacrlyamide), Phytagel, gelrita, y agarosa purificada. f) Otros compuestos como el hidrolizado de casena, leche de coco, extracto de malta, extracto de levadura, el jugo de tomate, etc se pueden agregar para fines especficos. g) pH - El pH ptimo (generalmente 5.7) es tambin muy importante. A pH superior a 7,0 e inferior a 4,5, las clulas dejan de crecer las plantas en los cultivos. El medio ms utilizado de nutrientes es el medio MS (desarrollado por Murashige y Skoog en 1962). Los principales tipos de medios de comunicacin - Medio Blanca - es uno de los medios de comunicacin antes cultivo de tejidos vegetales - El medio MS - formulado por Murashige y Skoog (MS) es el ms ampliamente utilizado para muchos tipos de sistemas de cultivo - Medio B5 - desarrollado por Gamborg de suspensin de clulas y cultivos de callos y en la actualidad de forma modificada para el cultivo de protoplastos - Medio N6 - formuladas por Chu y utilizado para el cultivo de cereales de anteras -Nitsch 's medio desarrollado por Nitsch y Nitsch y se utiliza para el cultivo de anteras Preparacin de los medios de comunicacin La metodologa para la preparacin de los medios de comunicacin implica la preparacin de soluciones madre (en el rango de 10 veces a concentraciones 100 veces) los productos qumicos de alta pureza y agua desmineralizada. Las soluciones de archivo se almacenan en recipientes de vidrio o de plstico y se congela hasta que otro requisito. Hoy en da, los medios de cultivo de tejidos vegetales son preparados comercialmente, y estn disponibles en el mercado en forma de polvo seco. Los medios de cultivo suele ser esterilizados en autoclave a 1210C y 15 psi durante 20 minutos. Hormonas y otros compuestos orgnicos de calor sensible se esterilizado por filtracin y aadidos al medio de autoclave. Mantenimiento de condiciones aspticas Es muy importante mantener condiciones aspticas durante el cultivo in vitro de clulas de las plantas y los tejidos. Los siguientes son algunos de los mtodos utilizados para la

esterilizacin: (A) La esterilizacin del material de vidrio-El material de vidrio puede ser esterilizado en un horno de aire caliente a 160-1800C durante 2-4 horas. (B) la esterilizacin de los instrumentos, los instrumentos metlicos son incinerados por inmersin en etanol al 75% seguida de llamas y de enfriamiento. (C) La esterilizacin de los medios de comunicacin de nutrientes-Los medios de cultivo se transfieren en un recipiente de vidrio, tapados con algodn o sellados con tapones de plstico y esterilizados en autoclave a 15 psi durante 30 minutos. El autoclave desnaturaliza las vitaminas, extractos vegetales, aminocidos y hormonas por lo tanto, la solucin de estos compuestos se esterilizan mediante el uso de papel de filtro Millipore con un tamao de poro de 0,2 micrmetros de dimetro. (D) de la planta de esterilizacin de materiales-La superficie del material vegetal se hace estril por el uso de desinfectantes, por ejemplo el hipoclorito de sodio, perxido de hidrgeno, cloruro de mercurio, o el etanol. La transferencia de material vegetal estril a medio nutriente se realiza bajo el gabinete de flujo laminar. (E) Esterilizacin de sala de Cultura y la transferencia de la zona, el suelo y las paredes de la sala de cultivo deben ser lavados con detergente y luego el hipoclorito de sodio al 2% o el 95% de etanol. La esterilizacin se puede hacer tambin por la exposicin a los rayos UV. El gabinete de flujo laminar de aire se esteriliza mediante la exposicin a la luz UV durante 30 minutos. y el 95% de etanol 15 minutos antes de iniciar el trabajo.
http://www.biotechnology4u.com/plant_biotechnology_nutrient_media.html

Ordoez, L., Arbelez, M., & Prado, L. 2004. Manejo de Semillas Forestales Nativas de la Sierra del Ecuador y Norte del Per. (eds.) Quito, EC: Ecopar-Fosepor-Samiri. , pg. 73-75.

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