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Método de Estudio para el Diagnostico Bacteriológico

Prof. Edgar A. Mejías Tirado

“ La muestras es el comienzo

Toda

la información diagnostica del laboratorio depende de conocer que muestras clínicas se escogen y con que cuidado son tomadas y transportadas”

Cynthia A. Needham

Paciente Enfermo Clínico interpreta e instaura terapia Medico establece diagnostico presuntivo Identificación del
Paciente Enfermo
Clínico interpreta e
instaura terapia
Medico establece
diagnostico presuntivo
Identificación del
agente, informe final,
envío al clínico
El ciclo clínico
Toma de muestra,
recipiente bien rotulado
Evaluación de cultivos
y pruebas especiales
Traslado e ingreso al
laboratorio
Informe presuntivo y
cultivo en medios
especiales
Examen directo de la
muestra al microscopio

Criterios para recurrir al laboratorio

1. Enfermedad aguda.

2. Proceso febril.

3. Muerte súbita.

4. Cuadros gastrointestinales o diarreicos.

5. Reacciones inflamatorias con formación de abscesos y/o exudados.

6. Cualquier otra que el veterinario requiera de acuerdo a su experiencia clínica.

Clínico

Obtener la muestra adecuada de acuerdo al caso evaluado

Laboratorio

Proporcionar al clínico sobre la presencia o ausencia de microorganismos que pueden estar involucrados en el cuadro patogeno

¿Que se espera del clínico con los resultados?

Establecer un diagnóstico

Indicar la prognosis y posibles complicaciones de la enfermedad

Identificar el origen de la infección y riesgo de transmisión a humanos u otros animales

Identificar producto específico necesario para inmunización que ayude a prevenir la infección en otros animales

Formular programas específicos de tratamientos

Los Resultados

Van a depender de:

• Calidad de la muestra

• Tiempo

y

cuidado

durante

la

recolección • Habilidad

de

la

técnica

y

experiencia laboratorio

del

personal

de

Recordar

• Ninguna prueba permitirá la identificación y caracterización de todos los patógenos potenciales

• La

información

clínica es

importante

Consideraciones para toma de muestras

Análisis Requerido

Muestra o espécimen Tinción Antibiograma Cultivo Serología Etcétera
Muestra o espécimen
Tinción
Antibiograma
Cultivo
Serología
Etcétera

Muestra o Espécimen

Elemento más importante

Su selección depende de:

Anamnesis

Evaluación clínica

Diagnostico Presuntivo

Condiciones de las Muestras

Debe ser identificada (acompañada) con una Historia clínica. Historia clínica.

La muestra debe ser Representativa del proceso infeccioso. Representativa del proceso infeccioso.

Debe ser Oportuna. Oportuna.

Suficiente.Representativa del proceso infeccioso. Debe ser Oportuna. Debe evitarse en lo posible su contaminación por la

Debe evitarse en lo posible su contaminación por la flora normal.del proceso infeccioso. Debe ser Oportuna. Suficiente. Recolectar las Esterilidad . muestras en condiciones de

Recolectaren lo posible su contaminación por la flora normal. las Esterilidad . muestras en condiciones de

las

Esterilidad.

muestras

en

condiciones

de

Asepsia

y

Transportada y procesada prontamente. y procesada prontamente.

Materiales para Recolección

ASPIRACION DE MUESTRAS LÍQUIDAS.Materiales para Recolección HISOPADOS. BIOPSIAS DE TEJIDO. ANIMALES ENTEROS U ÓRGANOS.

HISOPADOS.Materiales para Recolección ASPIRACION DE MUESTRAS LÍQUIDAS. BIOPSIAS DE TEJIDO. ANIMALES ENTEROS U ÓRGANOS.

BIOPSIAS DE TEJIDO.Materiales para Recolección ASPIRACION DE MUESTRAS LÍQUIDAS. HISOPADOS. ANIMALES ENTEROS U ÓRGANOS.

ANIMALES ENTEROS U ÓRGANOS.Materiales para Recolección ASPIRACION DE MUESTRAS LÍQUIDAS. HISOPADOS. BIOPSIAS DE TEJIDO.

Materiales Usados

Materiales Usados
Materiales Usados

Forma Apropiada

Forma Apropiada
Forma Apropiada

Manejo del animal

Uso de medidas de contención:

“Aguaitacaina”

Tranquilizante Anestesia local o general

Limpieza previa de detritus de la zona

necrotico,

Pelos,

tierra,

tejido

costras, etc.

Evitar riesgos sanitarios

Descarte loe materiales perforantes y/o cortantes (agujas, laminas, bisturíes, tubos quebrados o conteniendo fluidos): En cajas especiales o de paredes rígidas, bien identificadas.

bisturíes, tubos quebrados o conteniendo fluidos): En cajas especiales o de paredes rígidas, bien identificadas.
bisturíes, tubos quebrados o conteniendo fluidos): En cajas especiales o de paredes rígidas, bien identificadas.

Evitar riesgos sanitarios

Materiales contaminados y/o potencialmente infectantes (jeringas, gorros, algodones, gasa):

En bolsas adecuadamente identificadas

contaminados y/o potencialmente infectantes (jeringas, gorros, algodones, gasa): En bolsas adecuadamente identificadas
contaminados y/o potencialmente infectantes (jeringas, gorros, algodones, gasa): En bolsas adecuadamente identificadas

Transporte de la Muestra

Hisopados Para Cultivo de Bacterias Aeróbicas y Facultativas: Medios de

transporte: Cary y Blair, Stuart, Amies, o Culturette Swab . No requiere refrigeración.

Hisopados Para Cultivos de Bacterias Anaeróbicas: Mantener condiciones anaeróbicas, pH, y temperatura ( incluyen muchas bacterias entéricas):

Medio de Cary y Blair, sistemas especiales para anaeróbios como tubos de Port-A-Cult, Tubos de Scott, Sistemas BD de Vacutainer. No deben ser refrigerados.

Aspirados: Transportados en jeringa, tubos estériles o medios de cultivo especiales. Leche, exudados bronquiales, nasofaringeos, orina, no deben refrigerarse (relativo).

Las Muestras De Tejido, en frascos transporte para anaerobios.

de vidrio estéril

o

medios de

Embalaje de la Muestra

• Establecer un adecuado sistema de envasado y protección de la muestra

debe ser

identificado de forma clara y legible • Colocarlo en bolsa hermética y sellada para evitar derrame

• El

recipiente

identificado de forma clara y legible • Colocarlo en bolsa hermética y sellada para evitar derrame

Embalaje de la Muestra

• Si el traslado es lejos, se recomienda colocar en un envase mas resistente

se una muestra, se debe proteger cada una

v a r i a d a s

(bacteriología, serología,

histopatología)

mas de

• Si

va a enviar

• M u e s t r a s

deben

ser

envueltas bien selladas

individualmente,

histopatología) mas de • Si va a enviar • M u e s t r a

Embalaje de la Muestra

• Si es necesario, se colocan en cavas, bien sujetas para evitar movimientos bruscos y protegidos del agua generada por el sistema de refrigeración (hielo)

bien sujetas para evitar movimientos bruscos y protegidos del agua generada por el sistema de refrigeración

Requerimiento de Historia

• Nombre del propietario, dirección y teléfono

• Nombre

teléfono • Identificación

especie, raza, sexo • Tratamiento, si viene al caso • Diagnostico presuntivo o sospecha clínica Tipo de análisis requerido:

del

medico

veterinario, dirección,

del

animal:

Nombre,

edad,

Tinciones de muestras, biopsias de tejidos, aislamiento e identificación en cultivos, detección de antígeno, presencia de toxina microbiana, detección de genes específicos del patógeno, etc.

Tipos de Muestras

Aspirado o Punción

Vejiga (orina).Aspirado o Punción Líquidos: Pleural Sinovial Pericardico Cefalorraquideo Peritonial Sangre Lesiones

Líquidos:Aspirado o Punción Vejiga (orina). Pleural Sinovial Pericardico Cefalorraquideo Peritonial Sangre

Pleural

Pleural

Sinovial

Sinovial

Pericardico

Pericardico

Cefalorraquideo

Cefalorraquideo

Peritonial

Peritonial

SangrePleural Sinovial Pericardico Cefalorraquideo Peritonial Lesiones cerradas (abscesos encapsulados)

Lesiones cerradas (abscesos encapsulados)o Punción Vejiga (orina). Líquidos: Pleural Sinovial Pericardico Cefalorraquideo Peritonial Sangre

Pleural Sinovial Pericardico Cefalorraquideo Peritonial Sangre Lesiones cerradas (abscesos encapsulados)
Pleural Sinovial Pericardico Cefalorraquideo Peritonial Sangre Lesiones cerradas (abscesos encapsulados)
Pleural Sinovial Pericardico Cefalorraquideo Peritonial Sangre Lesiones cerradas (abscesos encapsulados)
Pleural Sinovial Pericardico Cefalorraquideo Peritonial Sangre Lesiones cerradas (abscesos encapsulados)

Consideraciones para una Punción

Rasurar el sitio.Consideraciones para una Punción Lavar con agua y jabón. Desinfectar con solución de iodo jabonosa por

Lavar con agua y jabón.Consideraciones para una Punción Rasurar el sitio. Desinfectar con solución de iodo jabonosa por 1 min.

Desinfectar con solución de iodo jabonosa por 1 min.para una Punción Rasurar el sitio. Lavar con agua y jabón. Limpiar con alcohol al 70

Limpiar con alcohol al 70 %.Desinfectar con solución de iodo jabonosa por 1 min. Permitir el secado espontáneo. Utilizar jeringa y

Permitir el secado espontáneo.Desinfectar con solución de iodo jabonosa por 1 min. Limpiar con alcohol al 70 %. Utilizar

Utilizar jeringa y aguja estériljabón. Desinfectar con solución de iodo jabonosa por 1 min. Limpiar con alcohol al 70 %.

Secreciones Respiratorias

Hisopados intranasales

Lavados traqueales

Lavado endotraqueal

Lavado Broncoalveolar

Broncoscopía Aspiración pulmonar por aguja fina

• Lavado endotraqueal • Lavado Broncoalveolar • Broncoscopía • Aspiración pulmonar por aguja fina
• Lavado endotraqueal • Lavado Broncoalveolar • Broncoscopía • Aspiración pulmonar por aguja fina
• Lavado endotraqueal • Lavado Broncoalveolar • Broncoscopía • Aspiración pulmonar por aguja fina
Hisopados • Usar hisopos de rayón o alginato de Ca, no usar algodón • Evitar

Hisopados

Usar hisopos de rayón o alginato de Ca, no usar algodón

Evitar contaminar con flora normal.

Limpiar área a muestrar.

Muestrar la zona afectada.

Colocar el hisopo en medio de transporte

normal. • Limpiar área a muestrar. • Muestrar la zona afectada. • Colocar el hisopo en

Hisopados

Canal auditivo externo

Piel, para algunos casos, en otros no

Abscesos abiertos o supuraciones

Secreciones vaginales o uterinas

Heces (algunos casos)

Biopsias

Se recomienda cuando es difícil obtener liquido.

Debe manejarse con asepsia quirúrgica.

Se evalúan adicionalmente las alteraciones en lo tejidos lo cual puede ayudar en diagnostico.

Tejidos

Condiciones: Enviar muestras inmediatamente

En necropsias: Enviar hasta 35 cm 3 de sección de órgano o tejido

Separar cada muestra en recipientes estériles o bolsa plásticas

Recolectar los órganos con lesiones patológicas

Conservación: refrigeración

Biopsias: Se manejan como proceso quirurgicos

LABORATORIO

Medico Veterinario

Realizar pruebas bacteriológicas simples

Interpretar los resultados

Los procedimientos complejos se dejan al bacteriólogo clínico

Comunicacion Clínico-Laboratorio

Considerar el numero de agentes que causan enfermedades

Tecnicas de laboratorio varían de acuerdo al síndrome clínico y el tipo de agente

La información clínica es importante

Comunicacion Clínico-Laboratorio

Clinico: Establece un diagnostico presuntivo (agente que se sospecha) sin esperar resultados

Solicitar las pruebas que considere pertinentes

Casos extremos: Informes preliminares

Criterios para NO Recibir una Muestra

No hay historia clínica y descripción de lesiones observadas.

Transportadas inadecuado.

Conservadas en formol neutro al 10 %.

Colocadas en envases inadecuados, no estériles o contaminados, muestras derramadas, varios órganos junto a secciones de intestino, envases mal sellados o rotos.

Insuficientes.

Inapropiada.

Mal estado de conservación.

Sembrada en medios líquidos para aislamiento primario y se reciben con sobrecrecimiento bacteriano.

Pruebas de Laboratorio

C

e

n

t

r

o

s

e

s

p

e

c

i

a

l

i

z

a

d

o

s

Espécimen
Espécimen
Detección del microorganismo
Detección del
microorganismo
Aislamiento o detección de sus productos Componentes estructurales o extracelulares
Aislamiento o
detección de sus
productos
Componentes
estructurales o
extracelulares

T

o

d

o

s

Componentes estructurales o extracelulares T o d o s Ac Serología Inmunología Detección del genoma
Ac Serología
Ac
Serología

Inmunología

Detección del genoma
Detección del
genoma
Hibridación Amplificación
Hibridación
Amplificación

Pruebas de Laboratorio

Muestra o espécimen Bacteriología convencional Bacteriologia no convencional Identificación: Cultivo medios
Muestra o
espécimen
Bacteriología
convencional
Bacteriologia no
convencional
Identificación:
Cultivo medios
crecimiento
Pruebas
bioquímicas,
serologicas, etc.
Molecular
Inmunologica
Aislamiento Pruebas de susceptibilidad a agentes antimicrobianos
Aislamiento
Pruebas de
susceptibilidad a
agentes
antimicrobianos
Molecular Inmunologica Aislamiento Pruebas de susceptibilidad a agentes antimicrobianos Genero y especie, tratamiento
Genero y especie, tratamiento

Genero y especie, tratamiento

Genero y especie, tratamiento
Genero y especie, tratamiento

Flujograma de Laboratorio

Flujograma de Laboratorio
Flujograma de Laboratorio

Esquema de Aislamiento e Identificación

1.- Recolección de la muestra

1.- Recolección de la muestra Muestra de: Técnica de recolección:  Hisopado  Aspirado  Biopsia

Muestra de:

Técnica de recolección:

Hisopado

Aspirado

Biopsia

Necropsia

Fecha:

Datos Clínicos Transporte al laboratorio:

Esquema de Aislamiento e Identificación

2.- Examen macroscópico y microscópico de la muestra

Características Macroscópicas:

Características Microscópicas

Coloración de Gram

Gram +:

Morfología: cocos

bacilos

cocobacilos

pleomórficos

espirilos

Agrupación: sencillo

parejas

cadenas

racimos

otros

Gram -:

Morfología: cocos

bacilos

cocobacilos

pleomórficos

espirilos

Agrupación: sencillo

parejas

cadenas

racimos

otros

Esquema de Aislamiento e Identificación

3.- Aislamiento Primario

Agar Sangre Bovina

3.- Aislamiento Primario Agar Sangre Bovina Temperatura:  25ºC  37ºC  42ºC Atmósfera:  Aerobiosis
3.- Aislamiento Primario Agar Sangre Bovina Temperatura:  25ºC  37ºC  42ºC Atmósfera:  Aerobiosis

Temperatura: 25ºC

37ºC

42ºC

Atmósfera: Aerobiosis Microaerofília Anaerobiosis

Agar Manitol Sal

 Microaerofília  Anaerobiosis Agar Manitol Sal 37ºC 24-48 h Crecimiento: Caract. colonias: Utilización
37ºC 24-48 h
37ºC
24-48 h

Crecimiento:

Caract. colonias:

Utilización de manitol Pigmentos:

Otros

Agar MacConkey

37ºC 24-48 h
37ºC
24-48 h
de manitol Pigmentos: Otros Agar MacConkey 37ºC 24-48 h Crecimiento: Caract. colonias: Utilización de lactosa:
de manitol Pigmentos: Otros Agar MacConkey 37ºC 24-48 h Crecimiento: Caract. colonias: Utilización de lactosa:

Crecimiento:

Caract. colonias:

Utilización de lactosa:

Pigmentos:

Otros:

Crecimiento:

Caract.

Colonias:

Hemolisis:

Pigmentos:

Olor:

Sistema API

Sistema API
Sistema API

Causas de un Cultivo Negativo

No había infección.

Muestra no representativa, insuficiente e inoportuna.

Agente causal no es cultivable por medios ordinarios de que dispone el laboratorio.

Los agentes microbianos no eran viables.

Presencia de sustancias antimicrobianas en la muestra.

Retraso excesivo en la siembra de la muestra.

Mala selección de los medios de cultivo por falta de información.

Condiciones de incubación inadecuadas.

Error humano.

GRACIAS