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En Microbiologa, todas las manipulaciones deben ser llevadas a cabo de modo que se impida cualquier tipo de contaminacin en el rea

de trabajo. Se aconseja que la siembra de todas las muestras a los medios de cultivos se realice bajo una cabina de flujo de aire laminar o en un gabinete de seguridad biolgica, con los protectores de plstico o vidrio para el cuello y la cara, las muestras procesadas se las debe considerar como potencialmente infecciosas y manipularlos adecuadamente. Tambin se deben utilizar guantes de goma o latex biolgicos La mesada de trabajo debe estar equipada con todos los materiales necesarios para efectuar las siembras, tambin se debe contar con todos los medios de cultivos necesarios para realizar las siembras. -Las asas deben esterilizarse antes de utilizarlas y enfriarse sobre el agar o el material de vidrio (en zonas estriles) antes de tomar la muestra de microorganismos, con objeto de no destruirlos por calor. -Despus de utilizarlas, las asas se vuelven a esterilizar en todo su permetro -Las bocas de los tubos y matraces de vidrio se flamean ligeramente una vez destapadas, antes y despus de la inoculacin. -Durante la inoculacin, los tapones se mantienen en la mano sujetndolos por la parte que no entra en contacto con tubos y matraces. -Los tubos abiertos deben mantenerse en posicin inclinada hacia el frente para que el riesgo de contaminacin sea mnimo. -Las tapas de las placas Petri no deben colocarse nunca sobre la mesa de trabajo boca arriba trabajando con bacterias. Los pasos de un proceso de aislamiento de una especie microbiana se pueden resumir en los siguientes: -Siembra en placa de la muestra de partida. -Tomar una colonia de la placa una vez incubada y sembrar una segunda placa, en la que todas las colonias que crezcan deben ser idnticas. -A partir de la segunda placa se puede resuspender una de las colonias en medio lquido, consiguindose ya un cultivo puro. -Para la conservacin de los cultivos puros de un microorganismo existen diversos mtodos, el ms simple es la resiembra en tubos inclinados que se mantienen, normalmente refrigerados, durante 3-6 meses.

El equipo necesario para la inoculacin es muy simple. Consta de un alambre, con una punta en ojal, recta o en gancho, y el otro extremo insertado en un mango cilndrico (el conjunto es llamado asa u ansa).
La inoculacin primaria puede hacerse con un asa, hisopo u otro material sobre la superficie del medio agarizado en la placa de petri o sobre caldos de cultivos.

Toma de muestras:

Cuestionario 1. Defina los siguientes trminos :

Cepa : una variante fenotpica de una especie o, incluso, de un taxn

inferior, usualmente propagada clonalmente, debido al inters en la conservacin de sus cualidades definitorias. De una manera ms bsica puede definirse como un conjunto de especies bacterianas que comparten, al menos, una caracterstica. Ejemplo : se ha sembrado una cepa salmonella altamente patgena

Inoculo: Es la Cantidad o Nmero de Grmenes infectantes que son

introducidos accidental o voluntariamente en los tejidos vivos o en medios de cultivos especiales.

Asa de Digarski : son asas de vidrio con forma de triangulo que

sirven para extender un inoculo liquido y se usa para material de siembra o inoculacin

2.

Cules son los tipos de siembra en placa y para que sirven?


ESTRA MLTIPLE: Con un asa de siembra, previamente esterilizada, se toma una muestra del cultivo de microorganismos y se extiende sobre un rea pequea de la superficie de la placa con agar nutritivo, en forma de estras muy juntas, pero sin hacer presin para no daar el agar. Se flamea el asa, se enfra y despus de rozar la siembra realizada previamente, se extiende de nuevo por otra zona de la placa haciendo nuevas estras. Este proceso se repite sucesivamente, flameando y enfriando el asa al comienzo de las sucesivas siembras en estra. Se lleva la placa a incubar, a la temperatura adecuada, siempre en posicin invertida. Mediante esta tcnica se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra que contenga un elevado nmero de grmenes.

Ejemplo de resultado con estra mltiple

ejemplo de estra mltiple crecida TCNICA DE LOS CUATRO CUADRANTES:

Se divide la placa en cuatro cuadrantes. Se toma el inculo y se siembra consecutivamente en 1-2-3-4.Incubar. En el cuarto cuadrante, al menos, obtendramos colonias aisladas.

SIEMBRA POR AGOTAMIENTO (O EN SUPERFICIE) Se realiza una descarga y se realiza estra por toda la placa.

2.-SIEMBRA PARA RECUENTO: Tcnica de Barry En una placa de Petri vaca se deposita un pequeo volumen conocido de muestra y a continuacin se aade el medio de cultivo (agar nutritivo) fundido y atemperado aproximadamente a 45C. Se mezclan ambos por rotacin suave de la placa. De esta

forma los microorganismos se distribuirn de forma homognea en el medio de cultivo, permitiendo el desarrollo de colonias separadas por todo el agar. de inoculo a dilucin conocida y con asa de Dygraski (Barry modificada): Depositar sobre la superficie de una placa con agar nutritivo una gota 0,1 ml de una determinada dilucin del cultivo de microorganismos problema y extenderlo con ayuda del cayado, previamente esterilizado, en todas las direcciones hasta que est completamente seco. Incubar la placa, en posicin invertida, a la temperatura deseada (durante 24, 48 72 horas) segn el tipo de microorganismo. La posicin invertida evitar que el agua de condensacin se deposite sobre la superficie del medio, dificultando la obtencin de colonias aisladas. Es una tcnica usada para el aislamiento de colonias, que permite igualmente el recuento de bacterias viables en la muestra, si conocemos exactamente la dilucin.

3.

Qu significa siembra por agotamiento?

En este caso se inocula la segunda placa con el cultivo del primer y se realiza siembra por agotamiento, es decir se realizan estras sucesivas hasta agotar el inculo. Sirve para cultivos muy concentrados. A partir de la ltima estra podremos contar las colonias. Tendremos un cultivo puro

4.

Por qu se coloca invertida la placa petri en la estufa?

Para que al generarse vapores no se queden en la tapa y al condesarse caigan gotas al medio de cultivo, pudiendolo contaminar. Por eso se observan gotas en la tapa cuando se enfria.