INFORME DE LABORATORIO

"Cuanticación colorimétrica de la concentración"

Juan Esteban Ramírez Beltrán, Giovanny Andrés Palacios Muñoz

21 de mayo de 2020

Resumen
Este informe es el producto de una práctica en la que se emplea la colorimetrería como técnica para la deter-
minación de un analito. Las soluciones coloreadas absorben luz en la región visible del espectro electromagnético y
de forma cuantitativa la intensidad de luz es medida en los espectrofotómetros. Esa propiedad permite determinar
la concentración de un soluto coloreado en solución, ya que la luz absorbida es directamente proporcional a la
intensidad de color, en un cierto rango de concentraciones que debe ser determinado experimentalmente.

1. Objetivos 2.2. Transmitancia y absorbancia

Cuando una muestra absorbe luz, la irradiancia del haz de luz dis-
Aanzar los conocimientos en preparación de diluciones.
minuye. La irradiancia, P, es la energía por segundo y por unidad de
Determinar la concentración de una solución empleando co-
área del haz de luz.
lorimetría.

Construir curvas de calibración e interpretar la ecuación de la

recta y el coeciente de correlación.

2. Aspectos conceptuales
Figura 2: Diagrama esquemático de un experimento espectro-
La espectrofotometría es el conjunto de técnicas que utilizan la luz fotométrico de haz simple.
para medir concentraciones químicas.

La luz se hace pasar a través de un monocromador (prisma, red de

difracción o incluso un ltro) para seleccionar una longitud de onda.
2.1. Radiación electromagnética
La luz de una sola longitud de onda se llama monocromática, o sea,

Es conveniente describir la luz tanto en términos de partículas como de un color. La luz monocromática, con una irradiancia P0 , incide
de ondas. Las ondas de la luz constan de campos eléctricos y mag- en una muestra de longitud b. La irradiancia del haz que emerge por

néticos que oscilan en planos perpendiculares entre sí. En la gura 1 el lado opuesto de la muestra es P. Como la muestra puede haber

se muestra una onda polarizada en el plano. En esta gura el campo absorbido algo de luz , P <P0 :
eléctrico se encuentra en el plano xy, y el campo magnético en el
plano xz. La transmitancia, T se dene como la fracción de la luz incidente
que pasa a través de la muestra.

P
T=
P0

Por tanto, T puede valer de 0 a 1. El porcentaje de transmitancia es

simplemente 100 T y puede valer desde 0 a 100 %. La absorbancia
se dene como:

Figura 1: Radiación electromagnética polarizada en el plano de P

)= logT
longitud de onda , que se propaga a lo largo del eje x. El A = log(
P0
campo eléctrico de la luz polarizada está reducido a un único
plano. La luz ordinaria no polarizada tiene componentes de Cuando no se absorbe luz, P =P0 y A = 0. Si se absorbe el 90 % de
campo eléctrico en todos los planos. luz, se transmite el 10 %, y P = P0 /10: Este cociente vale A = 1.

1
Si solamente se transmite el 1 % de luz, A = 2. La absorbancia a de banda espectral de 20 nm, una exactitud de longitud de onda de
veces también se llamaba densidad óptica, y es un concepto rela- 62.5 nm y una exactitud fotométrica de 64 % T. Una opción permite
cionado con la muestra que nos indica la cantidad de luz absorbida que el instrumento se conecte en interfaz a una computadora para
por la misma. La absorbancia es importante porque es directamen- el almacenamiento y análisis de datos.
te proporcional a la concentración, c, de la especie que absorbe la
luz en la muestra. En el cuadro 1 podemos notar la relación entre
transmitancia y absorbancia.

P /P0 %T A
1 100 0
0.1 10 1
0.01 1 2

Cuadro 1: Relación entre transmitancia y absorbancia

2.3. Ley de Beer-Lambert

La Ley de Beer-Lambert describe el proceso de absorción, y sirve

para cuanticar la concentración de las especies que absorben. La
ley de Beer arma que la absorbancia es directamente proporcio-
nal a la concentración de la especie absorbente. La fracción de luz
que pasa a través de una muestra (transmitancia) se relaciona lo-
garítmicamente, no linealmente, con la concentración de la muestra.
Figura 3: Espectrofotómetro Spectronic 20. Una fotografía se
A = "bc muestra en a), mientras que el diagrama óptico se puede obser-
var en b). La radiación proveniente de una lámpara de tungs-
La Ley de Lambert-Beer se utiliza dentro de la colorimetría para
teno pasa a través de una apertura de entrada hacia el mo-
determinar cantidades de sustancias en muestras desconocidas. Al
nocromador. Una rejilla de reexión difracta la radiación y la
existir una relación directa entre la concentración de las especies
banda de la longitud de onda seleccionada pasa a través de
en una solución coloreada y la absorbancia de la misma, es posible
establecer una curva de calibración a partir de una serie de soluciones
la apertura de salida hacia la cámara de la muestra. Un de-
de diferente concentración de la muestra. El único requisito que debe
tector de estado sólido convierte la intensidad de luz en una
cumplir la muestra es que absorba dentro del intervalo de longitud señal eléctrica relacionada que es amplicada y mostrada en
de onda seleccionado. Los equipos modernos generalmente cubren un lector digital.(Thermo Fisher Scientic, Inc. Madison, WI.)
desde el ultravioleta hasta el infrarrojo (200 nm-900 nm). El equipo
más sencillo para colorimetría es el Spectronic 20 diseñado en 1952
por Bausch Lomb, y que con algunos cambios se sigue utilizando
en la actualidad. 3. Experimental
2.4. Espectrofotómetro
Se realizó el procedimiento según lo indicado en el pre-informe de la

El Spectronic 20 puede leer la transmitancia o la absorbancia y práctica: Aspectos adicionales en el estudio de disoluciones: cuanti-
1)
desplegarla en una pantalla de cristal líquido. El instrumento está cación colorimétrica de la concentración

equipado con un oclusor, que consiste en una veleta que se interpone

de manera automática entre el haz o rayo y el detector cada vez
que la celda cilíndrica se remueve de su soporte. El dispositivo de
control de luz consiste en una apertura en forma de V que se
mueve dentro y fuera del haz para controlar la cantidad de luz que
alcanza la apertura de salida. Para obtener una lectura del porcentaje
de transmitancia, el indicador digital de lectura de salida se coloca
en cero con el compartimento de la muestra vacío de tal manera
que el oclusor bloquea el haz, lo que impide que llegue radiación
al detector. Este proceso se llama calibración o ajuste a 0 % T.
Una celda que contiene el blanco (comúnmente el disolvente) se
inserta entonces en el contenedor de la celda, y el puntero se lleva
a la marca de 100 % T ajustando la posición de la apertura de
control de la luz y, por lo tanto, la cantidad de luz que llega al
detector. Este ajuste se denomina calibración o ajuste a 100 % T.
Por último, la muestra se coloca en el compartimento de la celda,
y el porcentaje de transmitancia o absorbancia se lee directamente
en la pantalla de cristal líquido. El intervalo espectral del Spectronic
20 es de 400 a 900 nm. Otras especicaciones incluyen un paso

2
4. Resultados y cálculos 4.2. Curva de calibración colorimétrica

4.1. Curva espectral

Longitud de onda (nm) Absorbancia (±0,001)
0.4 0.068
Longitud de onda (nm) Absorbancia (±0,001) 1 0.185
450 0.091 2 0.387
500 0.468 3 0.513
550 0.567 4 0.769
600 1.431 5 0.922
620 1.46 6 1.126
630 1.537 7 1.272
650 2.434 8 1.583
660 2.525 9 1.634
670 2.42 10 1.769
680 2.386 Muestra problema 0.803
690 0.761
700 1.009 Cuadro 3: Datos simulados

Cuadro 2: Datos simulados

Figura 5: Curva de calibración en mg/L para el azul de metileno

A partir de la ecuación matemática de la curva de calibración en

Figura 4: Curva espectral de una muestra diluida de Azul de mg/L para el azul de metileno es posible calcular la concentración de
Metileno (AM). la muestra problema; tras haber determinado su valor de absorban-
cia (0.803), no sin antes considerar que para obtener la verdadera

Notamos que la muestra presenta un pico de absorción a 660 nm, absorbancia a cada concentración, a la absorbancia de la muestra

siendo este su max se le resta la absorbancia de la línea base; aún cuando el dato de
la absorbancia de la línea base (0.0 mg/L) no fue medido durante
la práctica experimental, su valor corresponde al intercepto con el
eje y de la ecuación matemática que describe la curva de calibración
del azul de metileno, por lo que la absorbancia del blanco sería de
0.008, y al restar este valor a la absorbancia de la muestra problema
obtenemos que la verdadera absorbancia es de 0.795. Ahora reem-
plazamos este dato en la ecuación de la recta, así:

y = 0,18294964028777 x + 0,00841726618705039

0.795 = 0,18294964028777 x + 0,00841726618705039

0.795 - 0,00841726618705039 = 0,18294964028777 x

0;795 0; 00841726618705039
= x
0; 18294964028777

3
x =4;299ppm
La concentración de la muestra original resulta del producto de con-
centración de la muestra problema y el factor de dilución (1/450),
así:
ppm Stock =4;299ppm  450=1934;55ppm
A partir de la Ley de Beer-Lamberd, establecemos la relación para
calcular la absortividad molar del azul de metileno, suponiendo el
uso de una cubeta estándar en la experimentación con longitud de
camino óptico de 1,000 cm:
Conviene expresar la concentración de la disolución problema en
términos de Molaridad (M), para lo que se plantea el siguiente factor
de conversión:
La absortividad molar es la característica de una sustancia que nos
dice cuánta luz absorbe a una longitud de onda determinada, en
este caso, fue determinada para el azul de metileno a una longitud
de onda de 660 nm, y su valor es de 59148.8136 M 1
cm 1
; al
comparar con la información consignada en el Cuadro 6 notamos
que el pico de absorción para el MB se da a los 664 nm, por su
parte, el coeciente de absortividad molar tiene un valor de 95,000
(dm /mol:cm ):
3
La variación entre los valores de la longitud máxi-
ma es mínima, esto puede explicarse en que los intervalos usados
en la medición de longitud de onda variaban en decenas, más no en
unidades, siendo 660 nm el valor más próximo a los 664 nm. En los
valores de absortividad molar encontramos una gran diferencia, esto
puede deberse a una diferencia en la concentración de la muestra de
azul de metileno usada en los estudios de Bergmann y O'Konski; da-
do que la Absorbancia y " dependen de la longitud de onda de la luz.

 101mgg  319
1mol
3
=1;344  10 M
5
4.299 mg
;85g

A = "bc
A
"=
bc
0;795
"= ;8136M
=59148
1
cm 1
(1;000cm )(1;344  10 5 M)

5. Análisis de resultados Figura 6: Longitudes de onda () y coecientes de absortivi-

dad molar del azul de metileno ((1) Bergmann and O'Konski
La construcción de la curva espectral de una muestra diluida de Azul (1963); (2) Lewis and Bigeleisen (1943); (3) Braswell (1968).)
de Metileno (AM) tiene como propósito la identicación de la lon-
gitud de onda a la cual la muestra presenta un pico de absorción,
Es de resaltar también que la escogencia de la concentración de la
dado que para hacer un adecuado análisis espectrofotométrico se
muestra atiende a la conveniencia de modo que la absorbancia caiga
precisa escoger la longitud de onda de máxima absorbancia, esto
en un intervalo medio. Si pasa muy poca luz por la muestra (gran
puede explicarse en que la curva es relativamente aplanada en las
absorbancia), es difícil medir la intensidad. Si pasa demasiada luz
proximidades del máximo, de manera que las variaciones en la ab-
(baja absorbancia), es difícil apreciar la diferencia entre la muestra
sorbancia sea infímina si se desajusta un poco el monocromador o
y la referencia.
en caso de que se presenten variaciones en la anchura de banda es-
cogida. Además, la sensibilidad del análisis es máxima en el máximo
de absorbancia, es decir, se consigue la máxima respuesta para una
6. Conclusiones
concentración dada de analito.

La ley de Beer-Lamberd se cumple mejor cuando la absorbancia es

Cuando se registra un espectro de absorbancia, se hace necesario
casi constante a lo largo de la banda de longitudes de onda escogida.
primero registrar el espectro de la línea base con las disoluciones
de referencia (disolvente puro o blanco), esto ya que normalmente
La ley de Beer se cumple para una radiación monocromática que
presenta pequeñas absorbancias positivas y negativas. Para obtener
atraviesa una disolución diluida, cuando la especie absorbente no
la verdadera absorbancia a cada longitud de onda y a una determi-
participa en un equilibrio que depende de su concentración.
nada concentración, resulta de la diferencia entre la absorbancia de
la muestra y la absorbancia de la línea base.
El registro del espectro de la línea base es un factor a tener en cuenta
en la determinación de un espectro de absorbancia para despreciar
En la ecuación matemática de la curva de calibración en mg/L para
valores de pequeñas absorbancias positivas y negativas presentes en
el azul de metileno comprobamos la relación de directa proporcio-
toda muestra en una práctica experimental.
nalidad existente entre la Absorbancia y la concentración de una
disolución, puesto que la Absorbancia es operada como producto y
La curva de calibración obtenida a partir de los datos exprimentales
crece a razón de una pendiente, aumentando también el valor de la
muestran una relación de directa proporcionalidad entre la Absor-
concentración de la muestra.
bancia y la concentración de una disolución.

4
La concentración de la muestra original es de 1934.55 ppm, valor
determinado por análisis espectrofotométrico, considerando el valor
medido de la absorbancia del analito y la longitud de onda a la cual la
muestra presenta un pico de absorción, y la longitud de trayectoria.
Las absortividades son funciones de variables como el disolvente, la
composición de la disolución y la temperatura, por lo que es ne-
cesario preparar una serie de disoluciones estándar del analito para
construir una curva de calibración,y así obtener una ecuación de
regresión lineal.
se encuentra la absortividad molar) cambian algo. A concen-
traciones muy altas, los solutos se convierten prácticamente
en disolvente. Las propiedades de una molécula no son exac-
tamente las mismas en diferentes disolventes. Los solutos de
una disolución que no absorben también pueden interaccionar
con las especies absorbentes y alterar la absortividad.
Discuta la importancia de calibrar el equipo antes de realizar
las medidas.

En la colorimetría, es importante la calibración del especto-

7. Referencias
1.Edición de los profesores de la Sección de Química General. BLO-
QUE 2.Aspectos adicionales en el estudio de las disoluciones: cuanti-
cación colorimétrica de la concentración y conductividad eléctrica.
En Guías de Laboratorio de Técnicas  1000025 Grupos 01 a 12
Documento de Trabajo  Departamento de Química  Universidad
Nacional de Colombia, Bogotá: 2020; pp 70-77.
2. D.A. Skoog; D.M. West; F.J. Holler; S.R. Crouch Fundamentos
fotómetro para asegurar la precisión de los datos obtenidos,
ya que si las bandas de las longitudes de onda seleccionadas
para mediciones espectrofotométricas corresponden a una re-
gión del espectro de absorción en la cual la absortividad molar
es esencialmente constante, entonces las desviaciones de la
.
ley de Beer serán mínimas. Otas desviaciones instrumentales
a considerar en el manejo del esoectrofotómetro son la ra-
diación esporádica, usualmente llamada luz errante, que co-
rresponde a la radiación del instrumento que está fuera de la

de química analítica; Cengage Learning Editores: México D.F, 2015. banda de la longitud de onda nominal elegida para la determi-

3. C.A. Trujillo; J.E. Sánchez.Técnicas y medidas básicas en el la-

nación; así como también las celdas desicuales, ya que si las

boratorio de química. Universidad Nacional de Colombia. Unibiblos. celdas que contienen las disoluciones del analito y del blan-
co no son de la misma longitud de trayectoria y equivalentes
Bogotá, 2007; pp 73-76/114-119.
4. K.W.Whitten; R.E. Davis; M.L.Peck; G.G. Stanley Químimica. en sus características ópticas, se observará una ordenada al

Décima edición; Cengage Learning Editores: México D.F, 2015.

origen en la curva de calibración.

5. R.H. Petrucci; F.G. Herring; J.D. Madura; C. Bissonnette Quí- Investigue que sustancias pueden actuar como interferentes
mimica general. Décima edición; PEARSON EDUCACIÓN, S. A.: en la colorimetría.
Madrid, 2011
6. D.C. Harris Análisis químico cuantitativo. Tercera edición;EDITORIAL Las desviaciones en la colorimetría pueden tener como origen
REVERTÉ, S. A.: Barcelona, 2007, 2016
la asociación, disociación o reacción de las especies absorben-
tes con el disolvente para dar lugar a productos que absorben
de manera distinta al analito. La interferencia en la colorime-
8. Anexos tría también puede verse en pérdidas por reexión y dispersión
en las paredes de la celda. La luz también puede ser disper-
Discuta la fórmula empleada para hallar la concentración de
sada en todas direcciones desde la supercie de moléculas o
las diluciones preparadas. Consulte el signicado del término
partículas grandes, como el polvo en un disolvente, y esta dis-
factor de dilución.
persión puede aumentar la atenuación en el haz conforme el
haz pasa a través de la disolución.
Para hallar la concentración de la dilución preparada se em-
pleo la la ecuación matemática de la curva de calibración en
mg/L para el azul de metileno, ya que en esta se relaciona
la absorbancia, valor ya determinado; y la concentración del
patrón. El factor de dilución (FD) es un número que indica las
veces que debe diluirse una solución para obtener una de me-
nor concentración. La concentración de la solución depende
del número de partículas del soluto y del volumen total.

Discuta la recta obtenida al elaborar la curva de calibración.

Discuta entre cuáles concentraciones se puede emplear esta
gráca, según las limitaciones de la Ley de Lambert- Beer.

La curva de calibración obtenida a partir de los datos expri-

mentales muestran una relación de directa proporcionalidad
entre la Absorbancia y la concentración de una disolución. La
ley de Beer arma que la absorbancia es proporcional a la
concentración de la especie absorbente. Esta ley se aplica a
la radiación monocromática, y funciona muy bien con disolu-
ciones diluidas (0,01 M) de la mayoría de las sustancias.
En disoluciones concentradas, las moléculas de soluto interac-
cionan entre sí debido a su proximidad. Cuando las moléculas
del soluto se aproximan entre sí, sus propiedades (entre las que