CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS DE ALTA RESOLUCION

QU ES? Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamao de las partculas de fase fija se fue disminuyendo hasta el tamao de los micrones, esto genero la necesidad de utilizar altas precisiones para lograr que fluya la fase mvil, de esta manera, inicio la tcnica de la cromatografa liquida de alto rendimiento. Este requiere de instrumentos especiales que permita trabajar con las altas precisiones requeridas. Dependiendo de la fase fija y fenmeno fsico que provoca la separacin, la CLAR puede ser: Cromatografa de adsorcin Cromatografa de reparto Cromatografa inica Cromatografa de exclusin por tamao

Dentro de las ventajas de las columnas de cromatografa de lquidos de alta resolucin sobre las cromatografas convencionales de lquidos de columna abierta estn: Velocidad de elucin Capacidad para separar compuestos termo-lbiles Alta eficiencia Posibilidad de usarse nuevamente

Se requieren precisiones de varios centenares de atmosferas para conseguir caudales razones con los modernos empaquetados de cromatografa de lquidos que constan partculas de dimetro inferior o igual a 10 m.

PARTES DEL EQUIPO Consiste de un sistema de inyeccin, un reservorio para el disolvente, una bomba peristltica, una columna, un detector y un aparato de registro. Para purificar una mezcla de compuestos, un pequeo volumen de sta es inyectado en la columna y eluido con la fase mvil ms adecuada. La elucin de la muestra puede ser obtenida con disolventes de composicin constante (modo socrtico) o con disolventes de composicin variable (modo gradiente) Los componentes que son eluidos de la columna pueden ser detectados por luz ultravioleta, fluorescencia, ndice refractario y por deteccin electroqumica. DEPOSITO DE FASE MOVIL Y SISTEMAS DE TRATAMIENTO DE DISOLVENTES: un aparato moderno de CLAR est de ordinario equipado con uno o ms depsitos de vidrio o acero inoxidable que contienen 500 ml o mas de sus correspondientes disolventes ( se pueden incluir accesorios para eliminar gases disueltos y partculas en suspensin. SISTEMAS DE BOMBEO: estos sistemas deben de cumplir con ciertas exigencias que son: (1) posibilidad de presin hasta unas 480 atm, (2) salida libre de pulsaciones, (3) caudales entre 0,1 y 10 ml/min, (4) reproducibilidad de caudales al menos del 0,5%, (5) resistencia a la corrosin debido a los diferentes disolventes. Se emplean dos tipos de bombas mecnicas: (1) bomba tipo jeringa impulsada por un tornillo y (2) bomba aspirante-impelente. DETECTORES: el detector usado en la CLAR depende de la naturaleza de la muestra, estn basados en la absorcin de la radiacin ultravioleta/visible.

USOS La cromatografa de alta resolucin es utilizada para: Identificacin Cuantificacin Aislamiento de los componentes de una mezcla.

APLICACIONES TPICAS DE LA CROMATOGRAFA DE REPARTO DE ALTA RESOLUCIN Farmacia: antibiticos, sedantes, esteroides, analgsicos. Bioqumica: aminocidos, hidratos de carbono, lpidos. Qumica industrial: aromticos condensados, agentes de propulsin, tintes. Medicina clnica: estrgenos, metabolitos de frmacos, extractos urinarios. Productos alimentarios: edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas, aditivos.

Por talas razones mencionadas anteriormente el equipo de cromatografa de lquidos de alta resolucin es un equipo muy elaborado y ms costoso que otros cromatografos existentes en la industria.