Universidad Autónoma de San

Luis Potosí

Facultad de Ciencias Químicas

Laboratorio de Biología Molecular

Aplicada

Aislamiento y purificación de
ADN genómico

Nombre: Castillo Esquivel Arian Dalai

Grupo: Lunes 10:00-12:00

Docente: Dra. Elizabeth Reynaga Hernández

1. Describir cual es el fundamento para aislar ácidos nucleicos por
medio de la técnica denominada “lisis alcalina”
Consiste en la alcalinización con NaOH en presencia de un
detergente fuertemente aniónico, provoca la lisis celular.
2. Mencionar 3 ventajas de utilizar bacterias (E. coli) para clonar ADN y
3 preocupaciones que se deben de seguir al manejarlas.
VENTAJAS
1. Mayor velocidad específica de crecimiento.
2. No posee requerimientos costosos asociados a medios
de cultivo.
3. Es un microorganismo aprobado por las entidades
reguladoras para su utilización como hospedero en la
producción de biofármacos.
PRECAUCIONES
1. Se deberá evitar el contacto directo con las bacterias.
2. No se debe pipetear ninguna solución con la boca.
3. Siempre usar guantes y lavarse las manos.
3. ¿Que es una bacteria competente?.
Son bacterias son capaces de tomar ADN del ambiente

4. Indique ¿Cuáles son las etapas que involucra un proceso de

extracción de ADN de plásmido con su fundamento.
1. Crecimiento de las bacterias en un medio selectivo de
aquellas que llevan el plásmido.
2.Lisis de las bacterias para la liberación del plásmido.
Este método explota las diferencias en las propiedades de
desnaturalización y renaturalización entre el DNA plasmídico
(pequeños círculos de DNA cerrados covalentemente) y el DNA
cromosómico (fragmentado). La alcalinización con NaOH en
presencia de un detergente fuertemente aniónico (SDS),
provoca la lisis celular, la desnaturalización del DNA
cromosómico y de las proteínas, y la liberación de los plásmidos.
Los plásmidos se ven menos afectados por su pequeño tamaño
y estructura superenrollada.
3. Purificación del DNA plasmídico.
 La neutralización del medio en presencia de una
concentración alta de sal (acetato potásico), provoca la
precipitación de las proteínas (por el tratamiento con el
detergente y la insolubilidad de la sal potásica del dodecil
sulfato) y la del DNA cromosómico (por reasociaciones
aleatorias intracatenarias). Los agregados insolubles de
proteínas y DNA cromosómico se separan por centrifugación
del DNA plasmídico que queda en el sobrenadante y conserva
mayoritariamente su estructura nativa.
BIBLIOGRAFÍA

● José, Prieto Álamo. Purificación de Ácidos Nucleicos ,

www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/37%20PURIFICACION%20ACS%20NUCLEICOS.pdf. Accessed
2 Sept. 2023.
● José, García. “Estrategias de Obtención de Proteínas Recombinantes
En Escherichia Coli.” Finlay Ediciones , 2013,
scielo.sld.cu/pdf/vac/v22n2/vac06213.pdf.