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INTRODUCCION

Los humanos y muchos otros animales estn constantemente expuestos en su medio ambiente a una vasta variedad de agentes xenobiticos; los cuales pueden ser de origen natural o formados por intervencin del hombre. En general los compuestos ms lipoflicos son ms fcilmente absorbidos a travs de la piel, pulmones o del tracto gastrointestinal. La constante exposicin a este tipo de sustancias podra resultar en su acumulacin dentro del organismo, al menos que se presente un sistema eficaz de eliminacin. Con excepcin de la exhalacin, para que un agente xenobitico pueda ser eliminado del organismo, requiere que sea soluble en fase acuosa, lo anterior funciona para compuestos no voltiles y en consecuencia sern excretados por la orina y las heces, que son las predominantes rutas de eliminacin. Sin embargo, los compuestos lipoflicos que se encuentran en los fluidos de excrecin tienden a difundir hacia las membranas y en consecuencia son reabsorbidos, mientras que los compuestos solubles en agua son excretados, lo que dejara aparentemente una acumulacin de los agentes xenobiticos lipoflicos dentro del organismo. En el presente trabajo trataremos de explicar la biotransformacin de los xenobiticos y sus procesos esperando que sea beneficioso para los estudiantes de la Escuela Profesional de Ingeniera Ambiental.

CAPITULO I METABOLISMO Y BIOTRANSFORMACION 1.-METABOLISMO. El origen de la palabra metabolismo viene de la voz griega metabol que quiere decir cambio, transformacin. Para muchos organismos, incluyendo al hombre la materia y la energa son suministradas por ciertas sustancias orgnicas como carbohidratos, protenas, grasas, que sufren algunas transformaciones para ayudar a los organismos a cumplir sus funciones vitales. A estas transformaciones se les denomina como metabolismo por lo tanto, metabolismo se podra definir como el conjunto de cambio de sustancias y transformaciones de energa que tiene lugar en los seres vivos. 1.1.-FASES DEL METABOLISMO: El mantenimiento de la vida requiere de un cambio continuo de sustancias y una constante transformacin de la energa, para que ocurran estos cambios se deben cumplir tres fases que son las siguientes: 1.1.1.-ABSORCION. Es la fase donde penetran en el protoplasma las sustancias qumicas y la energa que procede del medio ambiente. La energa puede penetrar en la clula: bajo forma de energa radiante (calor, luz electricidad, etc.) La absorcin de la materia consiste en la penetracin de especies qumicas a travs de la membrana plasmtica. Esto implica que todo lo que absorbe el protoplasma debe hallarse en solucin sean, slidas, lquidas o gaseosas. 1.1.2.-TRANSFORMACION. La fase de transformacin abarca todos los actos por los que el protoplasma transforma las especies qumicas y la energa absorbidas. Comprende especialmente:

a) La secrecin.- Consiste en que el protoplasma produzca compuestos (enzimas o fermentos) que intervienen en las transformaciones. b) La digestin.- Consiste en hacer solubles las sustancias absorbidas que las pone en condiciones de entrar en reaccin con formacin de otras sustancias qumicas. c) La asimilacin.- Consiste en que el protoplasma se transforme en algunos de sus componentes propios. d) La desasimilacin.- Consiste en que en el protoplasma se desintegra parte de sus componentes o de sus reservas, de los que resultan los compuestos y la energa que interviene en la asimilacin. 1.1.3.-EXCRECION Consiste en la eliminacin de las especies qumicas que no s incorporados al protoplasma o se dispersa energa (calor, luz). La absorcin, transformacin y excrecin que constantemente se produce en los organismos vivos dan un crecimiento de la materia y de la energa (anabolismo) o de un decrecimiento o prdida de materia y energa (catabolismo)

2.-BIOTRANSFORMACION. Modificacin que sufre todo xenobitico en su paso a travs del organismo Objetivo: transformarlos en compuestos ms hidrosolubles que puedan ser excretados. En trminos generales, las reacciones de biotransformacin generan metabolitos inactivos, ms polares e hidrosolubles para su eliminacin. Sin embargo, en algunos casos se generan metabolitos con mayor actividad biolgica, ms reactivos y en consecuencia con propiedades txicas. 2.1.-BIOTRANSFORMACIONES: Transformaciones enzimticas de los xenobiticos en el organismo, resultando otro(s) producto(s). Los Xenobiticos que son objeto de estas transformaciones y acaban degradndose se denominan BIODEGRADABLES. Se pueden efectuar en varios rganos: piel, intestino, rin, pulmn, hgado, etc. Biotransformaciones mediante reacciones enzimticas localizadas especialmente en lo micro somas hepticos, con la importante participacin de las isoenzimasCit P450.

2.1.1.-UN XB EN EL ORGANISMO: Un XB en el organismo: _Puede eliminarse sin alteracin. _Pro-txicos, txico o no _Experimenta transformaciones que facilitan la eliminacin.

_Experimenta modificaciones estructurales que aumenten o disminuyan su cualidad txica Responsables: Enzimas metabilizantes de Xenobiticos Todos los organismos tienen un conjunto de enzimas que les otorgan su capacidad metabolizadora o biotransformadora. Los organismos tienen diferente capacidad Biotransformadora.

CAPITULO II XENOBITICOS

2.1 CONCEPTO DE XENOBITICOS: La palabra xenobitico deriva del griego "xeno" ("extrao") y "bio" ("vida"). Se aplica a los compuestos cuya estructura qumica en la naturaleza es poco frecuente o inexistente debido a que son compuestos sintetizados por el hombre en el laboratorio. La mayora han aparecido en el medio ambiente durante los ltimos 100 aos. Despus del desarrollo industrial son muchos los compuestos qumicos presentes en el medio ambiente que son exgenos a la composicin y extraos al metabolismo natural de los seres vivos; a ese conjunto de sustancias referidas como ajenas o extraas a los organismos vivos, se les denomina xenobiticos. Los procesos ms importantes por los que se degradan los compuestos xenobiticos son la fotodegradacin por radiaciones solares, los procesos de oxidacin y reduccin qumica y la biodegradacin por los microorganismos. Pero debido a su estructura inusual, algunos xenobiticos persisten mucho tiempo en la biosfera sin alterarse y por eso se dice que son recalcitrantes a la biodegradacin, llegando a ser contaminantes. La razn fundamental de que muchos compuestos sintticos no sean fcilmente biodegradables radica en la gran estabilidad de su estructura qumica. Muchos compuestos sintticos tienen estructuras qumicas distintas a las de compuestos naturales, pero incluso los que tienen estructuras similares a las naturales suelen contener modificaciones que los hacen muy estables. Esto hace que las capacidades degradativas de los seres vivos acten ms lentamente.

2.2 CLASIFICACION DE XENOBIOTICOS: Los ms habituales son: - Plaguicidas: herbicidas, insecticidas, nematicidas, fungicidas, etc. Como ejemplo nombrar los cidos clorofenoxialquil carboxlicos, ureas sustituidas, nitrofenoles, triacinas, fenilcarbamato, organocloradosy organofosforados. Algunas de estas sustancias pueden actuar como donadores de electrones o como fuente de carbono para ciertos microorganismos.

- Detergentes sintticos: aninicos (todava los de mayor uso en lavado de ropa); catinicos, que son txicos para microorganismos en las concentraciones normalmente utilizadas para limpieza y no inicos del tipo alquilato, que tienden a persistir en aguas naturales alterando procedimientos de reproduccin de peces y otros organismos acuticos. - Hidrocarburos aromticos policclicos (PAH) se forman por la combustin incompleta de materia orgnica, de forma natural y por procesos comerciales con combustin de carbn incompleta, fabricacin de gas, etc. Son lipoflicos, afectan a la piel y al hgado, son cancergenos. - Hidrocarburos alifticos clorados CAH con dos tomos de carbono, que pueden ser saturados o insaturados. - Hidrocarburos aromticos clorados, como PCB, PCP o dioxinas(de sus muchos congneres posibles, el ms txico es la 2, 3, 7, 8tetraclorodibenzopdioxina o TCDD, que se piensa sea el producto qumico sinttico ms venenoso que jams se haya producido). - Explosivos del tipo del TNT, RDX y HMX. 2.3 BIODEGRADACIN DE XENOBITICOS: Muchos de los compuestos xenobiticos mas usados son los plaguicidas, componentes comunes de los desechos txicos. Dado que los xenobiticos son compuestos sintetizados qumicamente que jams han existido en la naturaleza, los organismos capaces de degradarlos no pueden existir en la naturaleza. Esto constituye un punto clave para comprender la dificultad de su degradacin microbiolgica. Los plaguicidas son una amplia variedad de tipos qumicos, por ejemplo los cidos clorofenoxialquilcarboxilcos, las ureas sustituidas, los nitrofenoles, triacinas, fenilcarbamatos, organocloros, organofosfatos y otros. Estos incluyen principalmente herbicidas, insecticidas y fungicidas.

Algunas de estas sustancias constituyen una adecuada fuente de carbono y donadores de electrones para ciertos microorganismos del suelo, mientras que otras no lo son. Un compuesto qumico de las caractersticas que estamos tratando puede ser atacado por microorganismos y ocasionalmente desaparecer del terreno. Tal degradacin en la tierra, suele ser deseable, ya que evita las acumulaciones txicas de compuestos. Sin embargo, la biodegradabilidad, aun de compuestos muy relacionados, puede diferir marcadamente como se demuestra por los niveles relativos de persistencia de varios herbicidas en la tabla 1. No obstante, estas cifras son solamente aproximadas pues una variedad de factores ambientales, como la temperatura, el pH, la aireacin y el contenido de sustancias orgnicas en el suelo tienen influencia en la descomposicin. Algunos de los insecticidas clorados son tan difciles de destruir que han persistido despus de 10 aos. Ntese que la

desaparicin de un plaguicida de un ecosistema no significa necesariamente que fue degradado por microorganismos, dado que la perdida de un plaguicida tambin se puede deber a volatilizacin, filtracin o degradacin qumica espontanea. Los organismos que pueden degradar a los pesticidas y herbicidas son diversos e incluyen distintos gneros tanto de bacterias como de hongos. Algunos pesticidas pueden actuar perfectamente como fuente de carbn y energa y son oxidados completamente hasta CO2. Sin embargo, otros compuestos son mucho ms difciles de degradar y son atacados tan solo ligeramente, aunque frecuentemente son degradados, ya sea total o parcialmente, si est presente algn material orgnico adicional como fuente energtica primario, fenmeno que se denomina Cometabolismo. Cuando la degradacin es exclusivamente parcial, el producto de degradacin microbiana de un pesticida puede en ocasiones ser aun ms txico que el compuesto original.

Tabla 1 Persistencia de herbicidas e insecticidas en los suelos Tiempo para la desaparicin del 75-100%

Sustancia

Insecticidas clorados

DDT Aldrin Clordano Heptacloro Lindano

4 aos 3 aos 3 aos 2 aos 3 aos

Insecticidas organofosforados

Diazinn Malatin Paratin

12 semanas 1 semana 1 semanas

Herbicidas

2,4-D(cido 2,4-dicloro-fenoxiactico) 2,4,5-T(cido 2,4,5-tricloro-fenoxiactico) Daladin Atrazina Simazina Propazina

4 semanas 20 semanas 8 semanas 40 semanas 48 semanas 1,5 aos

2.4 ABSORCIN DE XENOBITICOS: Cuando administramos bien voluntaria o involuntariamente un xenobitico, lo primero que ha de ocurrir es que se absorba, es decir, la llegada del xenobitico a la sangre (puede ocurrir a travs de la piel, aparato digestivo, respiratorio,.), una vez en la sangre puede metabolizarse, pero la mayor parte va a distribuirse, pudiendo quedar muy restringido a algunos tejidos o que sea una distribucin muy homognea, pero siempre en equilibrio entre la concentracin de la sangre y los tejidos. Dentro del tejido podr metabolizarse. El principal rgano metabolizador de los xenobiticos es el hgado. El rin filtra la sangre para excretar sustancias, pudiendo excretar el xenobitico tal cual o los metabolitos resultantes. La mayor parte de los xenobiticos se excretan por la orina, pero hay otras vas de excrecin como son la bilis, el sudor, la respiracin, ABSORCIN Cuando se administra un xenobitico, su concentracin plasmtica es igual a 0, subiendo su concentracin a medida que pasa el tiempo, hasta que se alcanza una concentracin mxima y a partir de esa concentracin mxima ira disminuyendo de manera gradual debido a la metabolizacin, hasta que llega a desaparecer del plasma.

Concentracin mnima eficaz (CME): es la concertacin mnima a partir de la cual vamos a tener un efecto farmacolgico. Concentracin mnima txica (CMT): es la concertacin mnima a partir de la cual vamos a tener efectos nocivos o txicos.

Para conseguir un efecto farmacolgico, deber mantenerse la concentracin del frmaco entre estos dos valores, a esto se le conoce como intervalo de seguridad. CMT Intervalo de seguridad

CME Hay factores, entre ellos los alimentos, que aumentan o disminuyen estos valores. Cuanto ms grande sea el intervalo de seguridad, el frmaco ser ms efectivo. Cualquier xenobitico o alimento que aumente la excrecin o el metabolismo de un frmaco o xenobitico, bajar la concentracin mnima eficaz. En caso contrario, cualquier xenobitico o alimento que disminuya la excrecin o el metabolismo de un frmaco o xenobitico, aumentara la concentracin mnima txica. La absorcin de los frmacos va a depender de la va por la que llega al organismo:

Parenteral, intravenosa: no hay absorcin, ya que se introduce el xenobitico directamente a la sangre, por tanto se puede decir que se trata de una absorcin del 100%. Parenteral, extravascular. Endotelios capilares: los capilares del msculo o la piel son vasos pequeos que tienen pocas capas, la absorcin es bastante rpida y buena, salvo las formas de absorcin retardadas. Oral. Epitelio gstrico, intestinal y clico: es una capa de clulas mucho ms gruesas, encontrando muchos xenobiticos que son inestables en medio acido, degradndose con facilidad. Sublingual y bucal. Epitelios bucales: es una absorcin rpida para sustancias liposolubles. Nasal, son frmacos que se depositan en la mucosa nasal. Epitelio nasal. Ocular: epitelio de la cornea y conjuntiva. Transpulmonar: junto con la oral es la mas importante, no es importante para la aplicacin de frmacos pero si para contaminantes. Epitelio del tracto respiratorio y de los alvolos. Rectal. Epitelio rectal. Es una absorcin mala, estando cada vez ms en desuso. Drmica o cutnea: epidermis (piel), siendo los frmacos liposolubles los mejores que se absorben en este medio.

2.5 DISTRIBUCIN DE XENOBITICOS: La absorcin no se hace de forma homognea a todos los tejidos, estando condicionada a unos factores como son:

Caractersticas fsico-qumicas: pH, grado de ionizacin. Los frmacos pequeos y liposolubles se distribuyen mejor porque pueden atravesar fcilmente las barreras. Unin a protenas plasmticas: los frmacos en la sangre viajan unidos sobre todo a protenas como la albmina. A mayor unin menor absorcin. Flujo sanguneo de los tejidos: tejidos muy vascularizados facilitan la llegada del frmaco. Existencia de tropismo (igualdad, afinidad). Liposolubles a grasas. Existencia de barreras especiales: hematoenceflica, placentaria.

FLUJO SANGUNEO Los tejidos masvascularizados son el hgado y el rin, despus el corazn y el cerebro (pero poco debido a la barrera hematoenceflica), msculo esqueltico en reposo y por ltimo la piel, el hueso y el tejido adiposo. Barreras que separan el sistema nervios de la sangre:

Hematoenceflica: separa el sistema nervioso de la sangre, es la menos permeable que hay en el organismo, pasaran bien pequeas sustancias y sustancias liposolubles o que tengan un transportador especifico. La mayora de los frmacos son cidos y bases dbiles y tienen un peso medio-alto, por lo que no pasaran por la barrera. En ocasiones han de suministrarse va punzn, en infecciones del sistema nervioso. Plexo coroideo: separa sangre que del lquido cefalorraqudeo, es ms permeable que la primera ya que esta formada por una capa de clulas epiteliales, sin dejar poros entre ellas. Placentaria: aparece en el 4 mes, pone en contacto la sangre fetal con la sangre materna, es mucho ms permeable que la hematoenceflica, aunque pasan bien frmacos liposolubles, tambin el resto de los frmacos.

Volumen de distribucin: es el volumen en el que se disuelve un frmaco cuando se ha alcanzado el equilibrio de distribucin. Cuanto ms alto sea ms se queda en el plasma. Volumen de distribucin = dosis administrada (mg) / [ ] plasmtica (mg/ml)

CAPITULO III PROCESOS DE BIOTRANSFORMACION DE LOS XENOBIOTICOS Los humanos y muchos otros animales estn constantemente expuestos en su medioambiente a una vasta variedad de agentes xenobiticos. En general los compuestos ms lipoflicos son msfcilmente absorbidos a travs de la piel, pulmones o del tracto gastrointestinal. La constanteexposicin a este tipo de sustancias podra resultar en su acumulacin dentro del organismo, almenos que se presente un sistema eficaz de eliminacin. Con excepcin de la exhalacin, para que un agente xenobitico pueda ser eliminado del organismo, requiere que sea soluble en faseacuosa, lo anterior funciona para compuestos no voltiles y en consecuencia sern excretados porla orina y las heces, que son las predominantes rutas de eliminacin. Sin embargo, loscompuestos lipoflicos que se encuentran en los fluidos de excrecin tienden a difundir hacia lasmembranas y en consecuencia son reabsorbidos, mientras que los compuestos solubles en aguason excretados, lo que dejara aparentemente una acumulacin de los agentes xenobiticoslipoflicos dentro del organismo

1. ABSORCIN Afortunadamente, los animales superiores han desarrollado un nmero de sistemasmetablicos que convierten los agentes xenobiticos liposolubles en metabolitos hidrosolublescapaces de ser excretados por las vas de

eliminacin. A esta actividad bioqumica se le hadenominado proceso de Biotransformacin, el cual se ha dividido a su vez en dos grandes gruposde actividad enzimtica: Reaccin de Fase I y Fase II como se observa en la Figura 1.2.

La funcin principal del proceso de Biotransformacin es la transformacin de los agentesxenobiticos para facilitar su remocin a travs del rin y la bilis principalmente. Sin embargo,cuando se modifica la estructura qumica del agente xenobitico, se puede presentar en algunoscasos, que se modifique la actividad farmacolgica y en ocasiones hasta un aumento de latoxicidad, lo que se conoce como bioactivacin, como es el caso de las sustancias denominadas procarcinognicas, las cuales requieren del proceso de biotransformacin para manifestar el efecto 2. REACCIONES FASE I. La funcin de este tipo de reacciones, es modificar la estructura qumica de la molcula,por introduccin de grupos funcionales como son hidroxilo, amino, carboxilo entre otros. Tambin,se puede obtener una mayor polaridad del agente xenobitico por exposicin de gruposfuncionales como es el proceso de hidrlisis. Posiblemente la oxidacin es la reaccin msimportante de las reacciones de fase I; en general estas reacciones estn mediadas por el sistemade oxidacin microsomal que contiene el citocromo P-450, tambin conocido como sistemaoxidasa de funcin mixta, el cual requiere del cofactor nicotin-adenin-dinucletido-reducido (NADPH) como donador inicial de electrones y oxgeno molecular como oxidante, segn seobserva en la Figura 2.1

En el esquema anterior, un electrn del NADPH se transfiere al citocromo P-450mediante la enzima NADPH-Citrocromo P-450-reductasa. Hay que hacer notar que el origen delcitocromo P-450, se refiere a que es una protena cromgena que cuando se une al monxido decarbono, da una forma reducida que presenta un mximo de absorcin espectral a 450 nm. Aunqueeste sistema oxidativo forma parte de muchos tejidos del organismo, el sitio de la oxidacin de lamayora de los xenobiticos se presenta en el retculo endoplsmico liso del hgado. Hay muchasformas de citocromo P-450 o isoenzimas que le dan caractersticas particulares al organismo que lascontiene, presentndose una diferenciacin en el proceso de Biotransformacin intra einterespecie. 2.1. Hidroxilacin aromtica. La hidroxilacin aromtica, para el sistema ms simple se describe en la Figura 2.1.1, elcual es uno de los procesos oxidativos de mayor importancia. Los mayores productos de lahidroxilacin aromtica son fenoles, pero tambin se pueden formar catacoles y quinoles.

Sin embargo, hay que mencionar que la hidroxilacin aromtica procede va la formacinde un epxido como intermediario. Lo anterior se puede ilustrar en la hidroxilacin del naftaleno,ya que

generalmente se forma tanto el 1-naftol como el 2-naftol, la cual se realiza va la formacindel epxido intermediario 1, 2-xido como se observa en la Figura 2.1.2. Cabe mencionar queprecisamente el naftaleno es el precursor de los denominados hidrocarburos aromticospolicclicos (HAP), donde el efecto carcinognico de algunos de ellos se debe a la formacin de unepxido intermediario.

La oxidacin va formacin de epxidos es muy importante, ya que estos metabolitosintermediarios pueden reaccionar con biomolculas celulares; as tenemos, que los epxidosestabilizados pueden reaccionar con sitios nucleoflicos de constituyentes celulares como sonciertos cidos nucleicos, y producir un evento mutagnico. Eventos de este tipo se presentan conalgunos hidrocarburos aromticos policclicos, as como en algunas micotoxinas. 2.2. Hidroxilacin heterocclica. Compuestos heterocclicos con tomos de nitrgeno tales como la piridina y quinoleina,sufren la oxidacin microsomal por hidroxilacin en la posicin 3; as, en el caso de la quinolena,el anillo aromtico sufre la hidroxilacin en la posicin 3 pero tambin se obtiene el metabolitohidroxilado en la posicin 6 como se observa en la Figura 2.2.1. Este tipo de reaccin esinteresante, ya que sabemos que los alcaloides tienen como caracterstica estructural, poseer untomo de nitrgeno heterocclico.

2.3 N-Dealquilacin La N-dealquilacin es la remocin de grupos alquilo del tomo de nitrgeno y en realidad,se podra considerar como un proceso donde se exponen los grupos funcionales como es el grupoamino. Los grupos N-alquil son removidos oxidativamente por conversin al correspondientealdehdo como se observa en la Figura 2.3.1.

2.4. N-Hidroxilacin La N-hidroxilacin de arilaminas primarias, arilamidas e hidrazinas, es catalizada por elsistema de oxidacin microsomal involucrando la participacin del citocromo P-450 y requiriendoNADPH y oxgeno molecular. As, el ejemplo ms simple es el de la N-hidroxilacin de la anilinapara producir fenilhidroxilamina como se observa en la Figura 2.4.1. Hay que mencionar que losmetabolitos formados por este proceso oxidativo, pueden ser molculas muy reactivas.

2.5. Desulfuracin. La sustitucin del tomo de azufre por un tomo de oxgeno en una molcula orgnica poroxidacin microsomal, se conoce como desulfuracin y es un proceso comn para laBiotransformacin de los insecticidas organofosforados, los cuales se usan ampliamente en lasactividades agrcolas. En la Figura 2.5.1 se tiene un ejemplo ilustrativo como es la desulfuracindel paratin, con lo cual se obtiene el metabolito oxidado que tiene mayor efecto inhibidor sobre la acetilcolinestarasa. (Timbrell, 1985; Miyamoto et al, 1988). Este proceso de oxidacin microsomal es aprovechado en la bioactivacin de losinsecticidas organofosforados. As, tenemos por ejemplo que el Paratin tiene un DL50 de 10 a 12mg/Kg p.c., en tanto que el Paraoxn (metabolito desulfurado) incrementa su toxicidad con unDL50 entre 0.6 a 0.8 mg/Kg p.c.; los anteriores datos de toxicidad corresponden a evaluaciones enrata por va intraperitoneal.

2.2. REACCIONES DE OXIDACIN NO MICROSOMAL Aunque el sistema de oxidacin microsomal con la participacin del citocromo P-450, esel proceso enzimtico ms comn en la oxidacin de un compuesto extrao, hay otras vasmetablicas que pueden llevar a cabo la oxidacin de algunas molculas orgnicas como son: laoxidacin de aminas, alcoholes, aldehidos y purinas entre otras En la oxidacin de aminas, hay la participacin ya sea de monoamino o diamino oxidasas,ambas involucradas en la desaminacin tanto de aminas primarias, secundarias y terciarias,resultando como productos sus respectivos aldehidos como se puede observar en la Figura 2.6.1. La enzima monoamina oxidasa se localiza en las mitocondrias de varios tejidos; en tanto que ladiamino oxidasa se encuentra en el citosol de las clulas.

Aunquein vitroel sistema microsomal oxidativo ha demostrado que puede oxidar eletanol; sin embargo, in vivo la enzima que lleva a cabo esta funcin es la alcohol deshidrogenasa,la cual se encuentra en la fraccin soluble de varios tejidos. Los productos de oxidacin de estaenzima, son los correspondientes aldehdos o cetonas, de acuerdo a s son alcoholes primarios osecundariosrespectivamente.Losproductoscarbonlicosde laaccin del alcoholdeshidrogenasa, pueden sufrir una posterior oxidacin por la aldehidos deshidrogenasa y producirlos respectivos cidos orgnicos, como se muestra en el ejemplo de la Figura 2.6.2.

En este proceso oxidativo presentamos el caso de la bioactivacin que corresponde al alcohol allico, ya que al actuar sobre este compuesto la alcohol deshidrogenasa se forma el respectivo aldehdo, que en este caso corresponde a la acrolena, el cual es un hepatotxico que causa necrosis periportal en animales de experimentacin (Figura 2.6.3. Precisamente, este aldehdo por tener un carcter muy reactivo, esta implicado en la formacin de cidos grasos cclicos, los cuales al parecer tienen un efecto txico.

2.3. REDUCCIN. Aunque el sistema de oxidacin microsomal que contiene citocromo P450 normalmentelleva a cabo la oxidacin xenobitica; este sistema puede funcionar como un proceso de biotransformacin reductivo. El proceso reductivo se presenta cuando hay una baja tensin deoxgeno molecular (baja concentracin) y por consiguiente ciertos substratos xenobiticos puedenaceptar uno o dos electrones que son proporcionados por el sistema microsomal con participacindel Citocromo P-450, en lugar del oxgeno. En este panorama reductivo, incluso el oxgeno actacomo inhibidor de esta ruta, ya que compite con los substratos por los electrones; adicionalmente,los mismos productos de reduccin son inhibidores de este sistema, ya que pueden competir conlos propios sitios de unin del Citocromo P-450 y por consiguiente detener el flujo de electrones,por lo cual este proceso es menos efectivo que la oxidacin En la figura 2.7.1 se tiene esquematizado las principales reacciones, recordando que esta ruta solo se presenta en un ambienteanaerbico. En base a lo anterior, se establece que la microflora intestinal tiene una graninfluencia en este proceso de reduccin; ya que estos microorganismos tienen su sistema deoxidacin microsomal normal, pero debido al medio en que se encuentran (reduccin de la tensinde oxgeno), pueden llevar a cabo el proceso de reduccin en lugar de la oxidacin

2.8. HIDRLISIS. En ciertos tejidos de los mamferos y especialmente en el plasma sanguneo seencuentran varias esterasas, las cuales tienen la capacidad de producir hidrlisis de diferentestipos de steres. Estas esterasas son clasificadas como aril-esterasas y acetil-esterasas; inclusocabe mencionar que enzimas tales como tripsina y quimotripsina pueden producir la hidrlisis deciertos carboxi-steres. En la Figura 2.8.1 tenemos el esquema genrico de este procesohidroltico con un ejemplo ilustrativo

La hidrlisis de amidas es catalizada por amidasas; sin embargo, este proceso hidrolticoes ms lento en comparacin al proceso de hidrlisis de los steres. Adicionalmente, el plasma noes un lugar de alta actividad de

hidrlisis de amidas, sino que sta se presenta en otros tejidos,como es el caso de algunas carboxil-amidasasmicrosomales del hgado En la Figura 2.8.2 se presenta el esquema genrico y un ejemplo de la hidrlisis de unaamida.

Los epxidos que son anillos de tres miembros que contienen un tomo de oxgeno,pueden ser metabolizados por la enzima epxido-hidratasa; esta enzima adiciona una molcula deagua al epxico produciendo un transdihidrodiol. Este tipo de reaccin es de suma importancia enel proceso de biotransformacin, ya que en la hidroxilacin de xenobiticos que es comn y seproducen epxidos como metabolitos intermediarios, los cuales son molculas muy reactivas quepueden generar un evento mutagnico. La epxido-hidaratasa es una enzima que se encuentra en la fraccin microsomal de lasclulas, muy prxima al sistema oxidasa de funcin mixta; por lo tanto, la epxido-hidratasa llevaa cabo un proceso de destoxificacin sumamente importante, ya que desactiva intermediariosinestables muy reactivos, que son producidos en la hidroxilacin mediada por Citocromo P-450.Figura 2.8.3

3. REACCIONES DE FASE II. Este tipo de reacciones metablicas son de biosntesis por lo cual requieren de un gastoenergtico (formacin de enlaces qumicos); por lo tanto, son reacciones enzimticas que apartede requerir de ciertos cofactores, necesitan de substratos de alta energa como es el ATP. Las reacciones de fase II tambin se denominan como reacciones de conjugacin,involucran la adicin a los compuestos xenobiticos de molculas endgenas, las cualesgeneralmente son polares y de alta disponibilidad por parte del organismo. Estos gruposendgenos son adicionados a grupos funcionales presentes ya en los compuestos xenobiticos, oque fueron introducidos o expuestos en la fase I del proceso de biotransformacin. El propsitofinal es de obtener molculas polares y con bajo coeficiente de particin lpido/agua, para que sefacilite su excrecin al disminuir substancialmente su carcter lipoflico

3.1.

GLUCURONIDACIN La principal reaccin de conjugacin que se presenta en la mayora de las especiesanimales es la incorporacin de cido glucurnico a travs del cido uridndifosfoglucurnico(UDPGA). La obtencin del anterior complejo donador proviene de precursores disponibles delmetabolismo normal; o sea, que el UDPGA es formado en la fraccin soluble de las clulashepticas a partir de la glucosa-1-fosfato como se observa en la Figura 3.1.

La conjugacin del UDPGA con los xenobiticos involucra un ataque nucleoflico de estoscompuestos a travs de los tomos de oxgeno, nitrgeno o azufre al carbono C-1 del cido

glucurnico, y se observa una inversin de dicho enlace ya que pasa de forma a a b, como sepuede observar en la Figura 3.1.2, donde se ilustra el ataque nucleoflico del fenol sobre el cido uridndifosfoglucurnico.

La enzima responsable de la catlisis del proceso de conjugacin con UDPG, es la UDPglucuronosil-transferasa, la cual se encuentra en la fraccin microsomal de varios tejidos comohgado, rin, piel, intestino y cerebro, siendo cuantitativamente de mayor importancia en elhgado. En si, la glucuronidacin es el principal proceso de conjugacin de las reacciones deFaseII, tanto para compuestos endgenos como exgenos, y el resultado es la obtencin de conjugados polares solubles en fase acuosa, que puedan ser eliminados del organismo a travs dela orina o bilis. Debido a la amplitud de substratos que pueden ser aceptados y la suficientedisponibilidad del donador (UDPGA), hace que la conjugacin con cido glucurnidico tanto cualitativa como cuantitativamente sea la ms importante reaccin de conjugacin; as, en la Figura 3.1.3. se muestran los principales tipos de glucurnidos que se pueden formar a partir de diferentes grupos funcionales de los agentes xenobiticos.

3.2.

SULFATACIN.

En los mamferos, una importante conjugacin para varios tipos de grupos hidroxilo es laformacin de steres de sulfato. Esta misma reaccin tambin se puede presentar con gruposamino; as, pueden ser substratos de esta conjugacin: alcoholes alifticos, aminas aromticas,fenoles y compuestos endgenos tales como esteroides y carbohidratos. En este proceso deconjugacin el donador del compuesto endgeno (sulfato) es el 3-fosfoadenosin-5fosfosulfato(PAPS), el cual a su vez requiere ATP para su formacin, como se observa en la Figura 3.2.1. Elsulfato inorgnico precursor del PAPS puede ser agotado cuando concentraciones significativasson requeridas para este proceso de conjugacin.

El proceso de sulfatacin es un efectivo proceso de destoxificacin, ya que los conjugadosformados, son sulfatos orgnicos ionizados que son relativamente fciles de excretar, principalmentea travs del rin. Sin embargo, debido a que el sulfato inorgnico requerido para la sntesis delPAPS parece provenir de la cistena, este aminocido es un factor limitante de dicho proceso deconjugacin; as, tenemos que la sulfatacin de fenoles o aril-alcoholes tiene una baja capacidad y por consiguiente la mayor alternativa para este tipo de compuestos es la glucuronidacin. Para llevar a cabo la conjugacin con sulfato se requiere de la participacin de unasulfotransferasa, de la cual hay una amplia variedad para diferentes substratos y estas se encuentran en la fraccin soluble de las clulas de varios tejidos, particularmente del hgado,mucosa intestinal y rin. En la Figura 3.2.2 se tiene ilustrado la sulfatacin de alcoholesaromticos y alifticos

3.3. CONJUGACIN CON GLUTATIN Cierto tipo de compuestos xenobiticos son excretados como conjugados de N-acetilcistena (conjugados del cido mercaptrico). Estos conjugados, generalmente son el resultado dela ruptura enzimtica de los conjugados con glutatin. La conjugacin inicial con glutatin para losdiferentes substratos (ya sean alifticos o aromticos), requiere de una variedad de enzimas deltipo glutatin-transferasas. Estas enzimas son localizadas en la fraccin soluble de las clulas En la Figura 3.3.1 se muestra esquemticamente el proceso completo de conjugacin conglutatin, en donde en primera instancia est la participacin de la glutatin-transferasa para elsubstrato respectivo; a continuacin se lleva a cabo la ruptura metablica de los residuos glutamily glicinil del glutatin y por ltimo la acetilacin del conjugado con cistena para formar elcorrespondiente derivado del cido mercaptrico. En este proceso generalmente el grupo sulfidrilo(tiol) del glutatin acta como un nucleoflico, atacando el centro electroflico reactivo delcomponente extrao.

La conjugacin con glutatin, es con frecuencia un proceso muy importante en ladestoxificacin de diferentes compuestos. Sin embargo, debido al amplio rango de substratos quese pueden conjugar, el mecanismo de formacin de conjugados puede variar un poco; as, loshidrocarburos aromticos, los haluros de alquilo, los haluros de arilo, los aril-epxidos, los alquilepxidos y los nitroaromticos, pueden todos ellos ser conjugados con glutatin y excretadoscomo derivados del cido mercaptrico. No obstante que la eliminacin va conjugacin conglutatin es por medio del cido mercaptrico, en ocasiones conjugados del propio glutatin o decistenil-glicina pueden ser excretados por la bilis. Precisamente a travs de la conjugacin con glutatin se pueden eliminar los epxidos,como es el ejemplo clsico de la conjugacin del naftaleno que es un hidrocarburo aromtico, yque se observa en la Figura 3.3.2. Tambin, la conjugacin con glutatin se ha observado que sepresenta con los hidrocarburos aromticos policclicos y las aflatoxinas

3.4.

OTROS PROCESOS DE CONJUGACIN

Hay otros procesos de conjugacin; sin embargo, la conjugacin con cido glucurnico esla de mayor capacidad en los animales superiores. Dentro de otros procesos de conjugacin cabedestacar la acetilacin, ya que es un proceso importante en el metabolismo de las aminasaromticas, sulfonamidas e hidrazinas. Las enzimas que cataliza la acetilacin de aminas sedesigna como Acetil CoA: amina N-acetiltransferasa, teniendo como cofactor a la acetil coenzima A. La enzima responsable de esta conjugacin se encuentra en el citosol de las clulas dediversos tejidos; un dato importante es que los perros y especies relacionadas, son deficientes eneste sistema de conjugacin y por lo tanto son incapaces de acetilar a un amplio nmero desubstratos. En la figura 3.4.1 se ilustra el tipo de aminas que pueden sufrir la acetilacin.

Otra reaccin importante de fase II, es la conjugacin de compuestos con un grupocarboxilo; en este caso, hay una amplia variedad de aminocidos para llevar a cabo laconjugacin, y consecuentemente son excretados como pptidos. El aminocido mscomnmente utilizado es la glicina, pero tambin se observan conjugados con ornitina, taurina yglutamina. La reaccin involucra la acilacin del grupo amino del aminocido por parte delcompuesto extrao; a su vez, el grupo carboxilo del compuesto xenobitico tiene que formar underivado con la coenzima A, como puede observarse en la Figura 3.4.2 donde se ilustra laconjugacin del cido benzico con glicina

4. INTEGRACIN DEL PROCESO DE BIOTRANSFORMACIN.

Si bien el propsito del proceso de biotransformacin es la eliminacin de sustanciasextraas que llegan a penetrar al organismo, por lo cual es un proceso detoxificante al evitar suacumulacin, tambin se pueden presentar fenmenos de bioactivacin, siendo, estos ltimosms bien casos excepcionales. El proceso de biotransformacin es muy complejo, donde tiene gran relevancia el factorgentico; as, tenemos que sobre un mismo agente xenobitico hay diferencia tanto cualitativacomo cuantitativa de los metabolitos formados por diferentes especies. Por lo tanto, la Toxicologa Comparativa, nos indica las similitudes y diferencias de la respuesta hacia un agente xenobitico,por las diferentes especies animales y el hombre. Como ejemplo de lo anterior, tenemos elproceso de biotransformacin del fenol que se muestra en la Figura 4.1, complementndose ste,con los datos del Cuadro 4.1; donde se observa la gran diferencia tanto cualitativa comocuantitativa de los metabolitos formados.