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Venado Rojo 1.pt - Es
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CSIROPUBLICACIÓN
ciencia de la producción animal, 2013,53, 472–477
http://dx.doi.org/10.1071/AN12247
Luciana Diniz RolaA,B, Eveline dos Santos ZanettiAy José Mauricio Barbanti DuarteA
Abstracto.En los últimos años ha crecido el concepto de bancos de recursos genómicos como una forma de mantener la variabilidad
genética de las poblaciones, mientras que la calidad de la criopreservación de los gametos determina la efectividad de dichos bancos, sin
embargo, la ausencia de conocimientos básicos sobre la fisiología de las especies y las características de su semen dificulta el
establecimiento de biotecnologías reproductivas. Así, este trabajo tuvo como objetivo determinar ciertas características fisicoquímicas
(volumen, color, apariencia, pH y osmolaridad) y microscópicas (movimiento de masa, motilidad, vigor, concentración, morfología y
morfometría espermática) del semen de la especiemazama americano. Para lograrlo se utilizaron cinco machos de la especie y se
recolectaron tres muestras de semen por macho (electroeyaculado) a intervalos de 2 semanas. El volumen, pH y osmolaridad del
eyaculado fueron 0,39 - 0,14 mL, 6,90 - 0,74 y 297,74 - 19,10 mOsm/kg, respectivamente, mientras que los valores obtenidos para
movimiento de masas, motilidad, vigor y concentración fueron 3,33-0,82; 69,6-8,92%; 3,53- 0,50 y 244,07-98,65·107/mL, respectivamente.
En cuanto al color del eyaculado, cinco muestras fueron clasificadas como marfil, dos amarillentas, dos blanquecinas y seis blancas. En
cuanto a la apariencia, siete muestras se consideraron cremosas y ocho lechosas. La morfología se analizó en cámara húmeda bajo
microscopía de contraste de fase y 73,50 - 5,57% de las células presentaron morfología normal, 8,37 - 3,15% presentaron defectos
mayores y 18,13 - 6,46% presentaron defectos menores. Para determinar la morfometría espermática se utilizó un microscopio óptico
(LeicaDM5000B) y el programa analizador de imágenes LeicaQwin, resultando 8.09-0.40, 4.65-0.30, 2.81 - 0.44 y 30.25 - 3.02metrom para
longitud, ancho mayor, ancho menor y área, respectivamente.
Recibido el 20 de julio de 2012, aceptado el 30 de octubre de 2012, publicado en línea el 22 de febrero de 2013
Introducción
Como otras especies brasileñas,M. americanaha sufrido presiones
Hay ocho especies de la familia.cérvidosen Brasil y cinco de ellos respecto a su hábitat (Duarte2005), y dado su fuerte descenso
pertenecen al géneromazama. Las especiesM. nana yM. americanaestán demográfico, es necesario iniciar medidas para su protección. Teniendo
clasificados en la Lista Roja de la UICN (2011) los datos deficientes,M. en cuenta las dificultades que entraña la conservación de los entornos
nemorivagayM. gouazoubira como menor preocupación ym.bororolos naturales, las técnicas de reproducción asistida (por ejemplo,
vulnerables La actividad reproductiva en los ciervos machos suele estar inseminación artificial,in vitrofecundación, transferencia de embriones,
impulsada por ritmos endógenos y sensibilidad a los cambios en el transferencia intrafalopiana de gametos, transferencia nuclear, inyección
fotoperíodo (Pereira2010), pero para intracitoplasmática de espermatozoides, clonación, etc.) asociados a
M. americanano se identificaron diferencias en el intercambio anual estándar bancos de recursos del genoma (semen, ovocitos, embriones,
de asta y secreción de andrógenos (Versiani y otros.2009), lo que sugiere que fibroblastos, etc.) son herramientas importantes paraen el lugary ex situ
la estacionalidad reproductiva está relacionada con la provisión de alimentos programas de conservación (Holt y Pickard1999).
para la descendencia. Dado que la disponibilidad de alimento es continua Sin embargo, la aplicación exitosa de técnicas de reproducción
durante todo el año, estas especies se consideran estacionales (Merinoy otros. asistida y la construcción de bancos de genoma dependen del
1997; Pinder y Leeuwenberg1997). conocimiento sobre la fisiología básica de la hembra y el macho.
El venado colorado habita en los bosques tropicales y subtropicales Con respecto al macho, la comprensión de los eventos fisiológicos
de América del Sur. Estos animales son difíciles de observar y se es esencial para el éxito de las técnicas de recolección, evaluación y
desconoce el tamaño de la población salvaje. En la actualidad no existe criopreservación de esperma (Wildt1996). Ciertos factores,
un libro genealógico del corzo rojo, pero se conocen pocos animales en incluyendo el número limitado de estudios, la gran variedad de
cautiverio y los más importantesex situpoblación de esta especie se especies, el pequeño número de ciervos individuales disponibles
encuentra en el Centro de Investigación y Conservación de Ciervos para la investigación y su comportamiento reactivo, limitan la
(NUPECCE-UNESP-Brasil) (Varelay otros.2010), actualmente con siete reproducción de estas especies (Ashery otros.2000), obstaculizando
hombres y nueve mujeres. el desarrollo de biotecnologías reproductivas.
Tabla 1. Media y desviación estándar (sd) de las características fisicoquímicas (volumen, pH, osmolalidad) y microscópicas
(movimiento de masa, motilidad, vigor y concentración) de los eyaculados de cinco machos de la especiemazama americano(tres
colecciones/norte=15)
Los valores entre paréntesis representan rangos como valores mínimo-máximo y los coeficientes de variación (CV) entre machos y
dentro de los hombres para los cinco hombres se presentan como porcentaje
caracteristicas del semen media ± DE CV entre CV dentro de los hombres para cinco hombres (%)
Volumen (ml) 0,39 ± 0,14 (0,14–0,68) 36,9 48,1 - 22,2 - 45,9 - 31,6 - 10,5
pH 6,90 ± 0,74 (6–8) 10.7 3,9 – 4,6 – 10,4 – 6,7 – 0
Osmolaridad (mOsm/kg)A 297,74 ± 19,10 (274,30–326,30) 6.4 3,3 – 6,4 – 5,5 – 1,2 – 5,6
Movimiento de masas (0–5) 3,33 ± 0,82 (2-4) 24.6 17,3 - 0 - 15,7 - 0 - 15,7
Motilidad (%) 69,60 ± 8,92 (56-90) 12.8 9,1 – 18,4 – 4,2 – 8,2 – 5,6
Resistencia (0–5) 3,53 ± 0,50 (2,8–4,4) 14.2 15,6 – 10,8 – 9,6 – 10 – 18,8
Concentración (·109/mL) 2,44 ± 0,99 (1,12–4,41) 40.4 37,6 - 55,1 - 33,3 - 8,4 - 13,5
defectos menores (blom1973). Cuando se observaron anomalías Tabla 2. Clasificación en relación al color y apariencia de los
mayores y menores juntas, solo se registraron los defectos principales. eyaculados de cinco machos de la especiemazama americano(tres
Para evaluar la morfometría se realizaron tres frotis por muestra con colecciones/norte=15)
Análisis estadísticos
El análisis de datos se realizó de forma descriptiva y los datos se blanquecinos se clasificaron como lechosos, con la excepción de una muestra
presentan como media - desviación estándar (DE). Los coeficientes que se clasificó como blanca y cremosa.
de variación (CV) entre machos y dentro de machos para los cinco En cuanto a la morfología de los espermatozoides, 73,50 - 5,57% de las
machos se calcularon para proporcionar alguna medida de células presentaron morfología normal, mientras que 8,37 - 3,15%
variabilidad debido al bajo número de machos utilizados en este presentaron defectos mayores y 18,13 - 6,46% presentaron defectos menores.
estudio y para dar al lector una idea de esta variabilidad. Las patologías identificadas en las especies de brocket rojo se describen en la
Tabla3.
En cuanto a la morfometría espermática, la especieM. americana
Resultados
presentó un área de cabeza de 30.25 - 3.02metrom (CV entre machos =
Se obtuvo eyaculado en todos los intentos de recolección, totalizando 15 10%, CVdentro de machos para los cinco machos = 0,3, 1,2, 2,2, 7, 0,8%).
muestras. En algunas colecciones se observó eyaculación durante la Las medidas de largo de cabeza, ancho mayor y menor en la especie
extracción de heces del recto, antes de la introducción del electrodo. Los fueron 8.09 - 0.40metrom (CV entre machos = 4,9%, CV dentro de
valores medios de las características fisicoquímicas (volumen, pH, machos para los cinco machos = 0,5, 1,5, 0,4, 2,1, 0,7), 4,65 - 0,30metrom
osmolalidad) y microscópicas (movimiento de masas, motilidad, vigor y (CVentrehombres = 6,5 %, CVdentro de hombres para los cinco hombres
concentración) del semen de la especie =1,7, 0,7, 0,8, 4,8, 1,0 %) y 2,81-0,44metrom(CVentre machos = 15,7%,
M. americanase presentan en la Tabla1. La osmolaridad media se CVdentro de machos para los cinco machos = 1,7, 4,1, 5,3, 5,7, 1,5%),
calculó en base al promedio de tres mediciones de 13 muestras, respectivamente.
porque el osmómetro de presión se descalibró durante la
evaluación de dos muestras. Los CV entre machos y dentro de
machos para los cinco machos, para estas características, también
Discusión
se presentan en la Tabla1. En este experimento, semen de la especieM. americanafue
En cuanto al color y apariencia de los espermatozoides (Tablados), todas recolectado exitosamente por electroeyaculación, similar a lo
las muestras clasificadas como de color marfil o amarillento se consideraron descrito para otros ciervos neotropicales (Zanettiy otros.2010). El
de aspecto cremoso, con la excepción de una muestra clasificada como marfil eyaculado no estaba contaminado con orina, lo que confirma la
y lechosa. Las muestras clasificadas como blancas o idoneidad del protocolo anestésico utilizado en el experimento.
Características del semen demazama americano ciencia de la producción animal 475
Tabla 3. Morfología espermática [expresada como porcentaje medio- el mismo macho. La alta desviación estándar, cercana al valor medio
desviación estándar (sd)] de los eyaculados de cinco machos de la especie obtenido para ciertas características, y el alto CV muestran la alta
mazama americano(tres colecciones/norte=15)
variación (Chengy otros.2004).
Los defectos mayores y menores de las células que presentaban ambos simultáneamente fueron
Aunque se debe considerar que parte de esta alta variabilidad podría
calculado en esta tabla
deberse al bajo número de machos utilizados en el presente estudio,
también se determinaron amplias variaciones en los parámetros del
morfología del esperma media ± DE
semen para otras especies neotropicales de venados y para venados de
defectos mayores 8,37 ± 3,15% granja (Tabla4). Además del bajo número de animales salvajes
defectos de la cabeza
disponibles para la investigación, un desafío adicional es encontrar un
acrosomal 0,20 ± 0,53% lugar que mantenga una gran cantidad de animales en condiciones de
Subdesarrollado 0,93 ± 0,78% manejo similares, un factor importante para los estudios reproductivos.
Delgado en la base 1,47 ± 1,48% El aspecto de las muestras parece estar relacionado con la concentración
Piriforme 0,50 ± 0,42% espermática, ya que las muestras consideradas cremosas presentaron valores
nudoso 0,17 ± 0,24% medios de 2,92 - 0,98·109sptz/mL (norte=7), valores superiores en
Gotitas citoplasmáticas proximales 2,17 ± 1,20% comparación con los obtenidos para las muestras consideradas lechosas, que
Formas teratológicas 0,77 ± 0,73%
presentaron valores medios de 1,8- 0,48·109sptz/mL (norte=8).
Defectos en piezas intermedias El pH de las muestras presentó un rango ligeramente mayor al
Desfibrilación, fractura, pseudogota 1,57 ± 1,33% descrito para bovinos (7.8–6.4) y ovinos (7.3–5.9) (Hafez2004). Es posible
defectos de la cola que esta diferencia esté relacionada con el uso de cintas para medir el
Severamente doblado o 0,63 ± 0,64% pH, pues favorecen la subjetividad en la interpretación de los colores que
curvado Doblado con gota 0,93 ± 1,65 % definen qué rango de valores de pH se ajusta a la muestra. Además, las
Rizado en la cabeza 0,10 ± 0,28%
cintas utilizadas se clasifican en intervalos de 0,5, lo que es menos
Defecto de Dag 0,23 ± 0,42%
preciso que un medidor de pH. El pequeño volumen de eyaculado
defectos menores 18,13 ± 6,46%
obtenido de la especie en cuestión impidió el uso de un medidor de pH.
defectos de la cabeza
La osmolaridad media determinada fue inferior a los valores
gigante 0,03 ± 0,13%
obtenidos paraC. elaphus hispanicusen muestras recolectadas por
pequeños normales 2,92 ± 1,98%
electroeyaculación (336 - 44 mOsm/kg) y en muestras recolectadas
normal aislado 0,67 ± 0,86%
del epidídimo (387 - 27 mOsm/kg) (Martínez-Pastory otros.2006). El
Defectos de implantación y cola
conocimiento sobre la osmolaridad del semen de una especie es
abaxial 14,00 ± 8,95%
importante, ya que investigaciones recientes han demostrado la
doblado o rizado 1,87 ± 1,44%
Gotitas citoplasmáticas distales 0,23 ± 0,37% sensibilidad del semen de venado a la osmolaridad de los
Espermatozoides normales 73,50 ± 5,57% diluyentes, lo que indica que los diluyentes isosmóticos o
ligeramente hiperosmóticos promueven el mayor porcentaje de
espermatozoides móviles y viables (Martínez-Pastory otros.2006;
como se informó anteriormente para la especieM. nana(Abreúy otros. Fernández-Santosy otros. 2007).
2009). En cuanto a la morfología espermática, los resultados
El volumen obtenido presentó mayor variación que lo reportado para obtenidos en este estudio son similares a los de Favorettoy
la misma especie por Duarte y García (1995) y el volumen medio otros. (2012) para la especieM. americanaen relación al número
obtenido fue similar al informado por Favoretto y otros. (2012) (Mesa4), de defectos morfológicos menores (18,13 - 6,46 vs 19,46 -
utilizando el mismo método de recopilación. La concentración media de 9,94%); sin embargo, en cuanto a la cantidad de defectos
espermatozoides fue similar a la obtenida por Favorettoy otros. (2012) y morfológicos mayores, el valor determinado en el estudio
superior a la reportada por Duarte y García (1995) (Mesa4). La motilidad anterior es casi el doble del valor obtenido en este trabajo (8,37
y el vigor también fueron similares a los obtenidos por Favorettoy otros. - 3,15 vs 15,08 - 9,35%).
(2012); sin embargo, las muestras mostraron variaciones entre machos y El número total de espermatozoides anormales en este estudio también fue
entre colecciones para menor que el reportado en otros estudios realizados en zonas neotropicales.
Cuadro 4. Volumen y concentración de neotropicales (géneromazama) y especies templadas (Cervus unicolor swinhoeiy
Cervus nippon taiouanua)
AEspermatozoides/mL.
476 ciencia de la producción animal L. Diniz Rolay otros.
venado (35–70%) (Duarte y García1995; Abreúy otros.2009; Peroniy del osmómetro de presión, ya la Dra. Marcia Rita Fernandes Machado por
otros.2010). Es probable que esto esté relacionado con la realización cedernos el uso del microscopio y procesador de imágenes Leica. Este trabajo
de al menos una colecta de semen antes del inicio del experimento, recibió apoyo financiero de la FAPESP – 2009/18610–4.
a las medidas morfométricas, los valores obtenidos para propuesta de una nueva clasificación del seminograma toro.Medicina
Veterinaria de Nordisk25, 383–391.
M. americanason similares a los obtenidos paraC. elaphus (longitud de la
Cheng FP, Wu JT, Chan JPW, Wang JS, Fung HP, Colenbrander B, Tung KC
cabeza, 8,53metrometro; ancho de la cabeza, 4,63metrometro; y área de la
(2004) El efecto de diferentes diluyentes sobre la supervivencia del esperma después de
cabeza, 32.56metrometrodos– Martínez-Pastory otros.2006). La morfometría
la descongelación, la integridad acrosomal y la longevidad en el semen criopreservado
espermática permite establecer el rango normal de tamaño de los de ciervos Sika de Formosa y ciervos Samba de Formosa.teriogenología61, 1605-1616.
espermatozoides para una especie, lo que facilita la identificación de ciertos Duele:10.1016/j.teriogenología.2003.07.015
defectos morfológicos del semen, como cabezas subdesarrolladas y cabezas Duarte JMB (2005) Captación, conservación y multiplicación de recursos
gigantes, al tiempo que predice el potencial del semen congelado. genes en animales salvajes: el ejemplo del ciervo.Agrociencia 9,
541–544.
Duarte JMB, Garcia JM(1995)Reproducción asistida en cérvidos brasileños.
Revista Brasileña de Reproducción Animal19, 111–121.
Conclusiones
Favoretto SM, Zanetti ES, Duarte JMB (2012) Criopreservación de tinto
Aunque el tamaño de la muestra fue limitado, los resultados de semen de venado colorado (mazama americano): comparación entre tres
este estudio tienen aplicaciones prácticas, considerando la extensores.Revista de medicina de zoológicos y vida silvestre43, 820–827. Duele:
escasez de información sobre las especies.M. americana. 10.1638/2011-0195R1.1
La caracterización del semen de esta especie facilita el análisis seminal Fernandes CE, Oliveira AR, Miranda PAB, Lopes SCP, Moraes SS, Morais
MG, Abreu UGP, Landim-Alvarenga FC (2009) Cambios en la
de rutina, brindando indicaciones sobre el patrón de normalidad del
morfología espermática en toros de carne con y sin suplemento de
eyaculado y auxiliando en el diagnóstico de enfermedades en el ámbito
zinc en la mezcla mineral.Ciencia Animal Brasileña10, 1074–1083.
reproductivo. Además, el estudio aclara un poco más sobre la fisiología
Fernández-Santos MR, Martínez-Pastor F, García-Macías V, Esteso MC,
reproductiva de los machos, lo que debe ayudar a las técnicas de Soler AJ, De Paz P, Anel L, Garde JJ (2007) El aumento de la osmolalidad y la
reproducción asistida y a la construcción de bancos de recursos del suplementación con azúcar ejercen un efecto complejo en la
genoma, ya que contribuye a mejorar el análisis de las muestras de criopreservación del ciervo ibérico (Cervus elaphus hispanicus)
semen antes de su procesamiento y la elección de un diluyente que se espermatozoides del epidídimo.teriogenología67, 738–753. Duele:10.1016/
adapta mejor a las características del semen de la especie, lo que j.teriogenología.2006.10.005
conduce a una mejor capacidad de congelación. Freneau GE, Duarte JMB (2001) Biometría y características testiculares
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(Facultad de Ciencias Agrarias y Veterinarias, FCAV) UNESP, 143–150. Duele:10.1530/ror.0.0040143
Jaboticabal , SP, Brasil. UICN (2011) Lista Roja de Especies Amenazadas de la UICN. Versión 2011.2.
Disponible en http://www.iucnredlist.org [Verificado el 28 de mayo de
2012] Martínez-Pastor F, Martínez F, García-Macías V, Esteso MC, Anel E,
Expresiones de gratitud
Fernández-Santos MR, Soler AJ, De Paz P, Garde J, Anel L (2006) Estudio piloto
Los autores desean agradecer a Ellen Fatima Peroni MV, Marina Suzuki sobre la calidad posdescongelación de espermatozoides de ciervo ibérico
Cursino MSc, Mauricio Barbosa Salviano MSc y Maurício Durante Christofoletti (epididimal y electroeyaculado) en función de la concentración de glicerol y la
MSc por su asistencia durante las colecciones de esperma. Los autores osmolalidad del diluyente.teriogenología66, 1165–1172. Duele:10.1016/
también agradecen al Prof. Dr. Pedro Luis da Costa A. Alves por la cesión j.teriogenología.2006.03.027
Características del semen demazama americano ciencia de la producción animal 477
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