PRACTICA No.

16 MEDIO DE CULTIVO PARA EL AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE ENTAMOEBA HISTOLYTICA
Tipo de práctica: Individual OBJETIVOS:
1. Que el alumno aprenda a realizar el medio de cultivo LES (suero de huevo

de Locke) de Boeck y Drbohlav.
2. Observar las formas morfológicas de E. histolytica en un cultivo.

INTRODUCCION: La E. histolytica es un protozoo peteneciente a la familia Entamoebidae, orden amébida, clase lobosea, phyllum sacomastigophora, descubierta en 1875 por Lösch en las heces de un ruso que presentaba disentería grave, este parasito causante de la amebiasis que es una infección que se manifiesta a nivel intestinal y extraintestinal ya que es invasiva y recurrente, E. histolytica ocupa el primer lugar de los protozoos entéricos que atacan al hombre. E. histolytica presenta una morfología en su trofozoíto con un tamaño de 15 a 20 micras, con una movilidad activa en progresión, presenta pseudópodos grandes en forma de dedos, un núcleo que difícilmente se logra observar. Los primeros éxitos logrados para el cultivo de E. histolytica, los obtuvieron Boeck y Drbohlav en 1925, con su medio. Ellos han descrito dos variantes: LES (suero de huevo de Locke) y LEA (Albúmina de huevo de Locke) los cuales se diferencian en la composición del sobrenadante. Los medios de cultivo son de gran ayuda para realizar un diagnostico completo en las protozoos humanas aunque en la mayoría de laboratorios de Parasitología no se utilizan. MUESTRAS BIOLOGICAS REQUERIDAS: 1 Muestra de materia fecal

0............. 2............0 ml Cloruro de sodio NaCl ..............0......... 0.. 1................... 0.............................2g Cloruro de magnesio MgCl2 .....000............MATERIAL  1 matraz erlenmeyer  1 matraz aforado de 1000 ml  2 tubos de ensayo  2 vasos de precipitados  1 pipeta Pasteur con bulbo  3 aplicadores  4 huevos  5 perlas de vidrio REACTIVOS  Alcohol        Agua destilada ... 9 g Cloruro de potasio KCl ............2g Dextrosa ...4g  Suero humano estéril EQUIPO  Autoclave  Incubadora TECNICA: Medio de cultivo LES (suero de huevo de Locke) de Boeck y Drbohlav PROCEDIMIENTO PARA PREPARAR LA SOLUCION DE LOCKE .2g Bicarbonato de sodio .........4g Cloruro de calcio anhidro..............

Se prepara el sobrenadante con una mezcla de 8 partes de solución de Locke estéril son una parte de suero humano estéril e inactivado a 56°C durante 30 minutos. se rompen y se vacían en un matraz con perlas de vidrio 2.2. Por separado se disuelven 2. Se agregan 2.1.1. 2. PROCEDIMIENTO PARA EL MEDIO DE CULTIVO 1.4 g de cloruro de potasio 1. 0. 0. Proceso de Esterilización 1.1.3. de tal manera que se inclinen los tubos a 30° 4.2. 9 g de cloruro de sodio 1. se limpian con alcohol. Se lavan 4 huevos. 0. Se sacan los tubos y se esterilizan en autoclave a 15 lbs de presión. 3. Se colocan los tubos en un coagulador y se calienta a 70° C hasta que se solidifique. Recomendaciones: . Se disuelven en 500 ml de agua destilada 1. Se coloca suficiente mezcla de huevo con Locke. Se mezclan las dos soluciones 3.1.2 g de bicarbonato de sodio.4 g de dextrosa 3. Se vacía la mezcla a un matraz aforado de 1000 ml y se afora hasta la marca.2 g de cloruro de calcio anhidro. durante 20 min. Se agregan 50 ml de solución de Locke y se agita enérgicamente 3.

Sembrado  El inoculo se hace de la muestra preferentemente donde haya moco. Un gramo será suficiente para la inoculación RESULTADOS: Dibuje o pegue lo que observo en la práctica. Si las heces son formadas la inoculación deberá hacerse con un aplicador de madera 2.En caso de que se dude de la esterilidad del suero. Si son liquidas con una pipeta Pasteur 2. Se incuba durante 24 hrs para comprobar su esterilidad. sangre o ambos. se filtra a través de una membrana. 1.1. OBSERVACIONES . Se coloca el sobrenadante en cantidad suficiente para cubrir la parte inclinada.

48 y 72 horas. ¿ Durante que periodos de tiempo un cultivo de E.__________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ CONCLUSIONES __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ CUESTIONARIO 1. ¿ De acuerdo al control de esterilidad cuales son los factores a los que se debe de conservar el cultivo? Debe incubarse durante 24 horas a 37 °C 2. histolytica? El quiste tetranucleado 3. ¿Cuál es la fase infectante de E. histolytica debe ser analizado? Se revisan microscópicamente a las 24. tomando una gota del sedimento que se forma en el fondo del bisel para buscar trofozoítos. . generalmente un cultivo positivo aparece a más tardar a las 48 horas.

Gafas de Seguridad . Cabello Largo . Los desperdicios biomédicos deben ser depositados en las bolsas rotuladas y . Higiene . De tener alguna duda de su localización o uso. Manejo y Localización del Equipo de Seguridad . El calzado también está incluido con la vestimenta. debe manejar la misma en las campanas de extracción localizadas en el laboratorio. no dudes en preguntar al instructor del laboratorio. el mismo tiene que estar recogido todo el tiempo que trabaje en el laboratorio. B. 3. Todo estudiante que tenga sandalias. ducha de seguridad y lavadero de cara y ojos. frazada (manta) para sofocar llamas en la ropa. Entre ellos puede encontrar: extintor de incendio. deberá tener sus gafas de seguridad adecuadas. chancletas o zapatos abiertos en la cual su piel queda expuesta. Materiales y Equipo de Uso Personal 1.Durante todo el tiempo que esté llevando a cabo su ejercicio de laboratorio.La vestimenta deberá ser apropiada para trabajar en el laboratorio. no podrá hacer su experimento. NO se permite dejar al descubierto áreas considerables de su piel cuando utiliza pantalones. 2. durante y después de terminar su práctica de laboratorio. FISICOS Y BIOLÓGICOS E.Todo el tiempo que permanezca en el laboratorio. Entre el ojo y el lente puede alojarse alguna sustancia nociva causando daño permanente a su visión. faldas o blusas cortas. debe utilizar bata de laboratorio. El instructor proveerá envases adecuados previamente rotulados para dicho propósito. de esta manera se minimiza la posibilidad de que caiga sobre las personas si ocurre un accidente y evitará cualquier intoxicación con los gases o vapores de los químicos.MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL A. La misma tiene que estar abrochada para que pueda proteger su ropa y su piel en caso de que alguna sustancia química o de organismos vivos se derrame sobre usted. así como también pueden reaccionar con algún compuesto volátil. están estrictamente PROHIBIDO mientras usted esté en el área de los laboratorios y pasillos cercanos. Desperdicios .Si tiene cabello largo. siendo ésta la manera más directa de intoxicarse con sustancias químicas o infecciosas. Ingerir cualquier tipo de alimento y fumar. comer o beber envuelve el acercar las manos a la boca. DISPOSICION DE DESECHOS QUIMICOS. C. Los espejuelos recetados no sustituirán las mismas. Recuerde que fumar. Vestimenta . Antes. Siempre que utilice cualquier sustancia química.Se recomienda que lave sus manos frecuentemente.Es indispensable que conozca donde están los equipos de seguridad del laboratorio.Se prohíbe descartar reactivos por los fregaderos. Bata de Laboratorio . 4. Tampoco puede utilizar los lentes de contacto.

TERCERA EDICION. 3. cerrar el frasco y desechar a la basura común. Diagnóstico morfológico de las parasitosis. Segunda edición. 2003. Medellín. Parasitosis Humana.destinadas para dicho propósito. 1998. Editorial Méndez Editores. Editorial: Mac Graw Hill 2008. Paz María y Cabrera Bravo Margarita. Marco Antonio Becerril. en otro vaso se debe de colocar los aplicadores de madera durante unos 30 minutos aproximadamente. Segunda edición. Colocar en tres vasos desechables solución e hipoclorito de sodio a una concentración de 5000 ppm y en uno colocar los tubos y lavar muy bien con hipoclorito de sodio para quitarle los residuos de materia fecal. . DAVID BOTERO MARCOS RESTREPO. Colombia. Parasitología Médica. Salazar Schettino. BIBLIOGRAFIA 1. 2. De Haro Arteaga. El frasco que contiene materia fecal adicionarle solución de hipoclorito de sodio a 5000 ppm o cal.

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