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Extracción de proteína de queratina de plumas de pollo

Artículo· Agosto 2012

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6 autores, incluido:

Arun Gupta Nuruldiyanah Binti Kamarudin

Universidad de Malasia Pahang Universidad de Malasia Pahang

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Gek Kee Chua RM Yunus

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J. Chem. química Ing. 6 (2012) 732-737
D DAVID PUBLICACIÓN

Extracción de proteína de queratina de plumas de pollo

Arun Gupta*, Nuruldiyanah Binti Kamarudin, Chua Yeo Gek Kee y Rosli Bin Mohd Yunus
Facultad de Ingeniería Química y de Recursos Naturales, University Malaysia Pahang, Gambang Campus, Pahang 25100, Malasia

Recibido: 14 de mayo de 2012 / Aceptado: 12 de junio de 2012 / Publicado: 25 de agosto de 2012.

Abstracto:La presente investigación se realizó para extraer proteína de queratina de plumas de pollo. La proteína es un nutriente importante que nuestro cuerpo necesita para mantener las estructuras corporales y es un ingrediente importante para los productos cosméticos. Las plumas de

pollo tienen un alto nivel de contenido de proteína de queratina y pueden convertirse en una fuente de proteína adecuada. Los principales procesos involucrados son, primero, disolver las plumas de pollo utilizando diferentes agentes reductores y luego separar la proteína de los productos

químicos. Los agentes reductores utilizados son cianuro de potasio, ácido tioglicólico y sulfuro de sodio. Una vez que las plumas se disuelven usando agentes reductores, se agrega solución de sulfato de amonio a la solución para la precipitación de la proteína. La proteína precipitada se lava

con agua varias veces y se usa solución de hidróxido de sodio para recuperar la proteína en forma de solución. De los tres agentes reductores diferentes utilizados, el sulfuro de sodio brinda la mayor eficiencia para disolver las plumas de pollo, ya que las plumas se disuelven en un período de

tiempo muy corto. El porcentaje de proteína queratínica se evalúa mediante prueba de biuret y análisis FTIR. El análisis por FTIR confirmó la presencia de ácido carboxilo y grupos amino en la solución de proteína. La prueba de biuret ayuda a determinar la concentración de proteína obtenida

por diferentes métodos. Así estas dos pruebas confirman la presencia de proteína en la solución. De esta investigación, se puede concluir que la proteína se puede extraer de las plumas de pollo. La solución de proteína de queratina se puede utilizar para varios fines, como crema

antienvejecimiento, champú y acondicionador, y para fines médicos, como reemplazo óseo e injerto óseo. el sulfuro de sodio brinda la mayor eficiencia para disolver las plumas de pollo, ya que las plumas se disuelven en un período de tiempo muy corto. El porcentaje de proteína queratínica se

evalúa mediante prueba de biuret y análisis FTIR. El análisis por FTIR confirmó la presencia de ácido carboxilo y grupos amino en la solución de proteína. La prueba de biuret ayuda a determinar la concentración de proteína obtenida por diferentes métodos. Así estas dos pruebas confirman la

presencia de proteína en la solución. De esta investigación, se puede concluir que la proteína se puede extraer de las plumas de pollo. La solución de proteína de queratina se puede utilizar para varios fines, como crema antienvejecimiento, champú y acondicionador, y para fines médicos, como

reemplazo óseo e injerto óseo. el sulfuro de sodio brinda la mayor eficiencia para disolver las plumas de pollo, ya que las plumas se disuelven en un período de tiempo muy corto. El porcentaje de proteína queratínica se evalúa mediante prueba de biuret y análisis FTIR. El análisis por FTIR

confirmó la presencia de ácido carboxilo y grupos amino en la solución de proteína. La prueba de biuret ayuda a determinar la concentración de proteína obtenida por diferentes métodos. Así estas dos pruebas confirman la presencia de proteína en la solución. De esta investigación, se puede

concluir que la proteína se puede extraer de las plumas de pollo. La solución de proteína de queratina se puede utilizar para varios fines, como crema antienvejecimiento, champú y acondicionador, y para fines médicos, como reemplazo óseo e injerto óseo.

Palabras clave:Pluma de pollo, agentes reductores, precipitación de proteínas, análisis.

1. Introducción- propiedades funcionales.

Las plumas son un recurso biológico con un alto contenido de

El presente trabajo de investigación trata sobre la extracción
proteína de más de 750 g por kg de proteína cruda. Los
de la proteína queratina natural de las plumas de pollo mediante
mataderos de aves producen grandes cantidades de plumas.
el uso de diferentes agentes reductores. Los agentes reductores
Además, quemar plumas en instalaciones especiales es
ayudan a disminuir la estabilidad de las fibras de queratina en la
económicamente ineficaz. La eliminación incontrolada de plumas
forma sólida que se encuentra en las plumas. Estos reactivos
es inaceptable desde el punto de vista medioambiental. El cinco
romperán los enlaces disulfuro, los enlaces de hidrógeno y los
por ciento del peso corporal de las aves de corral son plumas; el
enlaces salinos de las fibras de queratina para disolverlas en una
matadero con una capacidad de 50.000 aves, puede producir
solución de proteínas. Actualmente existe un interés creciente
fácilmente 2-3 toneladas de plumas secas por día.
por el desarrollo de materiales respetuosos con el medio
La queratina de las plumas muestra un contenido elevado de
ambiente, obtenidos a partir de recursos renovables. Los
los aminoácidos glicina, alanina, serina, cisteína y valina, pero
principales materiales renovables se obtienen a partir de
cantidades más bajas de lisina, metionina y triptófano. Los
polisacáridos, lípidos y proteínas. Las proteínas son polímeros
agentes reductores utilizados en esta investigación para la
formados por varios aminoácidos capaces de promover enlaces
reducción de los enlaces disulfuro son el ácido tioglicólico, el
intra e intermoleculares, lo que permite que los materiales
cianuro de potasio y el sulfuro de sodio. Los reductores actúan
resultantes tengan una gran variación en su
muy rápidamente y sin producir ninguna alteración química ni
*
Autor correspondiente:Arun Gupta, profesor titular, campos de perjuicio en el rendimiento proteico. Los productos preparados a
investigación: modelado y simulación, desarrollo de productos partir de las soluciones se comportan como verdaderas proteínas
biomédicos a partir de queratina, biocompuestos. Correo electrónico:
arungupta10@gmail.com . y no como productos de hidrólisis. Su
 Extracción de proteína de queratina de plumas de pollo 733

las soluciones se precipitan con precipitantes proteicos compuestos de masa molecular.

ordinarios como el ácido sulfosalicílico y el sulfato de Arai et al. [6] determinaron la secuencia de aminoácidos de
amonio. una sola cadena polipeptídica, B-4, a partir de púas de
La capacidad de flexionarse en múltiples direcciones sin plumas de aves. Se encontró que la cadena B-4 constaba de
desgarrarse es una cualidad importante de la queratina y 96 residuos de aminoácidos y tenía un peso molecular de
también proporciona una matriz resistente y fibrosa en los 10.206 en la forma S-carboximetilada.
tejidos [1]. Según David et al. [2], las queratinas de plumas de Blackburn et al. [7] ha estudiado el efecto de diferentes
pollo se pueden convertir en proteínas naturales solubles en ácidos orgánicos sobre la estructura de la proteína de lana.
álcali o ácido y digeribles por tripsina y pepsina. Esto se logró Hay dos tipos de queratina, alfa-queratina y beta-queratina.
rompiendo los enlaces disulfuro de la queratina. Las Las alfa-queratinas se encuentran en las fibras proteicas de
queratinas β de las plumas tienen láminas plegadas β los tejidos blandos de la lana, el pelo y la piel de las ovejas.
retorcidas juntas y luego estabilizadas y endurecidas por Está retorcido y formado como un hilo de cuerda. Secuencias
enlaces disulfuro. Entonces, al romper estos enlaces disulfuro de aminoácidos de alfa-queratinas ricas en cisteína y pobres
en las plumas, la fuerza de la queratina en las plumas de en hidroxiprolina y prolina. Las beta-queratinas se
pollo puede reducirse y volverse soluble y convertirse en encuentran en las fibras proteicas de los tejidos duros como
proteína natural. plumas de aves, uñas, escamas de pescado y otros. Las
En cuanto a David et al. [3] los agentes oxidantes como el secuencias de aminoácidos de beta-queratinas son ricas en
bromo, el permanganato y el óxido de hidrógeno actúan muy glicina y alanina pequeñas sin carga y pobres en cisteína,
lentamente al romper los enlaces disulfuro, lo que ralentiza el prolina e hidroxiprolina.
proceso de extracción de proteínas. Pero, por el contrario, los La queratina es insoluble en agua y compuestos orgánicos.
agentes reductores actúan muy rápidamente y disuelven la Las propiedades químicas de la queratina son ácidos y bases
queratina solo en reacción alcalina (pH 10 a 13), pero la acción no débiles. Se caracteriza por el contenido de cistina en la
se debe solo al álcali. Los productos preparados a partir de estas secuencia de aminoácidos de la queratina y puede
reacciones se comportan como verdaderas proteínas y no como hidrolizarse, reducirse y oxidarse. alta resistencia de
productos de hidrólisis.
Tabla 1 La composición de aminoácidos de las plumas de pollo.
Pocos otros investigadores anteriores han trabajado en el Aminoácidos uM/mg Proteína*1 Aminoácido en proteína %
proceso de extracción de queratina. Schrooyen et al. [4] han Ácido aspártico 0.358 4.76
estudiado el efecto de la adición de varias cantidades de SDS treonina 0.345 4.11
serina 1.292 13.57
sobre la tasa de agregación de las cadenas polipeptídicas y la
prolina 0.875 1.01
tasa de oxidación de los residuos de cisteína durante la Ácido glutamico 0.624 9.18
diálisis. Glicina 1.008 7.57
Yamauchi et al. [5] investigaron la extracción de queratinas alanina 0.411 3.66
Valina 0.618 7.24
de lana con una solución acuosa de urea, 2-mercaptoetanol y
cistina 0.088 2.11
SDS (dodecilsulfato de sodio). Descubrieron que el metionina 0.017 0.025
surfactante, SDS, aceleraba la extracción y aumentaba el isoleucina 0.376 4.93
rendimiento de extracción. También estabilizó la solución leucina 0.570 7.48
tirosina 0.102 1.85
acuosa de proteína después de la eliminación de la urea por
fenilalnina 0.267 4.11
diálisis contra agua que contenía 2-mercaptoetanol (0,08% en lisina 0.039 0.57
peso). El tensioactivo forma un complejo con la queratina y se histidina 0.001 0.016
Arginina 0.377 6.57
elimina por diálisis mucho más lentamente que otros de baja
* Basado en la muestra como 100 % de proteína;
1 Micro mol por miligramo de proteína.
734 Extracción de proteína de queratina de plumas de pollo
la queratina está influenciada por las dos moléculas de cisteína unidas
por enlaces disulfuro Krystyna et al. (2007). La fracción de proteína de
queratina se utiliza en la formulación de cremas de tratamiento
antiarrugas, alisadores de cabello con sulfito, champús
acondicionadores y otros productos de cuidado personal Kelly et al.
[8].
2. Experimento
2.1 Pretratamiento de las Plumas
Las plumas de pollo se recogen de las plantas de
procesamiento de pollo y se sumergen en éter durante 24 horas.
El propósito principal es limpiar las plumas de manchas, aceite y
grasa antes de procesarlas. A continuación, las plumas se lavan
con agua jabonosa y se secan al sol. Luego, las plumas secas se
mezclan y se guardan cuidadosamente en una bolsa de plástico
sellada.
2.2 Disolución de plumas de pollo
Se preparan 2 L de solución de sulfuro de sodio 0,5 M en
un matraz cónico de 2 L. Se pesan 50 g de las plumas de pollo
mezcladas y se añaden a la solución de sulfuro de sodio. La
solución se calienta a la temperatura de 30oC, el pH se
mantiene alrededor de 10-13 y la solución se agita
continuamente durante 6 h. A continuación, la solución se
filtra y se centrifuga a 10.000 rpm durante 5 min. El líquido
sobrenadante se recogió cuidadosamente y luego se filtró
usando papel de filtro para que no tuviera partículas.
2.3 Preparación de la solución de sulfato de amonio
Se disuelven 700 g de sulfato de amonio en 1 L de agua
desionizada. La solución se agita hasta que se disuelven
todas las partículas de sulfato de amonio. Luego, la solución
se filtra para que quede libre de partículas.
2.4 Precipitación de proteínas
La solución de filtrado de plumas recogida anteriormente se colocó
en un vaso de precipitados y se agitó. La solución de sulfato de
amonio se agrega lentamente gota a gota. La proporción de solución
de filtrado de plumas y solución de sulfato de amonio añadida es 1:1.
A continuación, la solución se centrifuga a 10.000 rpm durante 5 min y
las partículas sólidas se recogen cuidadosamente. El
los líquidos sobrenadantes se recogen por separado y los pasos 2
y 3 se repiten con ellos.
2.5 Purificación de proteínas
Las partículas sólidas recogidas se añaden a 100 ml de
agua desionizada y se agitan (lavado).
A continuación, la solución se centrifuga a 10.000 rpm
durante 5 min y los sólidos se recogen con cuidado. Las
partículas sólidas recolectadas luego se disuelven en 100 ml
de solución de hidróxido de sodio 2 M. A continuación, la
solución se centrifuga de nuevo a 10.000 rpm durante 5 min y
todos los líquidos se recogen con cuidado y se almacenan,
mientras que los sólidos se desechan. Los pasos de
precipitación, lavado y disolución se repiten 3 veces.
2.6 Prueba de Biuret
Se preparan una solución de sulfato de cobre al 1% y una
solución de hidróxido de potasio al 1%. Los 5 mL de la
solución recolectada se mezclan con solución de hidróxido de
potasio en proporción 1:1. Se agregan tres gotas de solución
de sulfato de cobre a la solución de la mezcla. Cambios en la
solución observados y registrados. La solución se analiza bajo
UV-vis para obtener su absorbancia.
2.7 Análisis de la Muestra
La solución recogida después de la purificación se analiza
en FTIR y se obtiene su gráfico de longitud de onda y se
compara con el gráfico estándar. La solución precipitó
completamente usando sulfato de amonio, los sólidos se
separaron, se pesaron y se registró su peso.
Todo el proceso se repitió con una solución de tioglicolato
0,5 M y una solución de cianuro de potasio 0,5 M en
sustitución de la solución de sulfuro de sodio. Tanto las
soluciones de tioglicolato como las de cianuro de potasio se
preparan con hidróxido de sodio 0,1 N.
3. Resultados y discusión
3.1 Observación
Plumas de pollo disueltas completamente en solución de
sulfuro de sodio, mientras que solo parcialmente disueltas en
cianuro de potasio y tiglicolato. Alrededor del 45%
 Extracción de proteína de queratina de plumas de pollo 735

las plumas en solución de cianuro de potasio y las plumas al

70% en solución de tioglicolato se pueden filtrar después de 6
horas de reacción. Esto concluye que el sulfuro de sodio
reduce las plumas de pollo de manera más eficiente que los
otros dos agentes reductores. Se siguió la prueba estándar
ASTM [9] para probar la presencia de proteína. La presencia
de proteína se confirma mediante la prueba de Biuret. La
solución se volvió púrpura después de agregar el reactivo y
esto solo es posible si hay enlaces peptídicos en ella. Cuantos
más enlaces peptídicos contenga, mayor será la intensidad
Muestra A Muestra B Muestra C
del color púrpura como se ve en la Fig. 1. También se puede Figura 1 Diferencias visibles de las soluciones de biuret de los tres.

ver la diferencia entre los colores púrpura de las diferentes muestras

soluciones en la Fig. 1. Esto está de acuerdo con la

absorbancia del biuret solución y cantidad de proteína
obtenida al final de la investigación.

3.2 Absorbancia de las soluciones de prueba de Biuret

Según la ley de Beer Lambert: A = εІc A=

absorbancia;
ɛ=coeficiente de absorción molar (mol-1·md3·cm-1). I=
longitud de la solución que atraviesa la luz (cm); C=
Figura 2 Porcentaje de proteína mediante el uso de diferentes reductores
concentración de la solución (mol·dm-1). agentes

Fig. 3 Resultado FTIR obtenido para el producto final.

736 Extracción de proteína de queratina de plumas de pollo
Cuadro 2 Absorbancia de las soluciones de prueba de biuret y cantidad de proteína obtenida.
Muestras de proteínas Absorbancia
A (solución de tioglicolato) B 0.326
(solución de cianuro de potasio) C 0.742
(solución de sulfuro de sodio) 1.435
La absorbancia es proporcional a la concentración de una
solución. Por lo tanto, aumentar la absorbancia también
muestra una mayor concentración de proteínas. Se observó
que la absorbancia más alta está en la solución de reacción
con sulfuro de sodio y la más baja está en la solución de
reacción con ácido tiglicólico. La velocidad de disolución de
las plumas en solución de tioglicolato y solución de cianuro
de potasio es baja porque la reacción será más alta solo si la
solución es altamente alcalina con un pH de la solución en el
rango de 10 a 13. Esto se debe a que en el estado alcalino el
protón se eliminará del grupo amino y el enlace iónico se
formará por atracción electrostática de los NH+grupo de los
diaminoácidos y el COO-
grupo de los ácidos dicarboxílicos se puede romper. Por
algunas razones, estos enlaces iónicos deben romperse
primero para reducir los enlaces disulfuro de la queratina y
disolver las plumas. La solución de sulfuro de sodio es
rápidamente alcalina, no como la solución de tiglicolato o la
solución de cianuro de potasio en la que se debe agregar
hidróxido de sodio para alcalinizarla con un pH entre 10 y 13.
Esto explica por qué, aunque ambas soluciones son agentes
reductores, no pueden reducir el disulfuro. cautiverio. Debido
a que sin un estado alcalino, el protón no se puede eliminar,
por lo que no se puede romper el enlace iónico. Entonces, el
hidróxido de sodio juega un papel importante en la
disolución de las plumas. Entonces, para maximizar la
capacidad de disolución de la solución de cianuro de potasio
y tioglicolato, se debe calcular la cantidad exacta de hidróxido
de sodio.
La masa total de la proteína obtenida mediante el uso de
diferentes agentes reductores es la siguiente: sulfuro de sodio (53
%), cianuro de potasio (29,6 %) y ácido tioglicólico (8,8 %) como se
muestra en la Fig. 2. Esto está de acuerdo con el resultado de el
análisis UV-vis. La muestra de proteína también se analizó usando
espectroscopia infrarroja transformada de Fourier. El gráfico
obtenido coincidía con el gráfico estándar de la solución de
proteínas. la longitud de onda
Cantidad de proteína
4,42g
14,86 gramos
26,50 gramos
Los enlaces CN, NH y C=O obtenidos por espectroscopia
infrarroja se confirmaron en la muestra, por lo que la
presencia de grupos carboxilo y grupos amino, los dos
grupos que solo estarán presentes en los aminoácidos, es
innegable. Por lo tanto, la muestra confirmó la proteína
verdadera.
4. Conclusiones
La presente investigación se realiza para encontrar una fuente alternativa de proteína de
queratina. Dado que las plumas de pollo consisten en un 90 % de proteína cruda y plantean un
problema ambiental debido a su lenta descomposición, es un material ideal para obtener proteína
de queratina. Las plumas de pollo se disolvieron primero usando agentes reductores y la proteína
se precipitó de la solución usando sulfato de amonio. En esta investigación se utilizaron tres
agentes reductores diferentes, ácido tiglicólico, cianuro de potasio y sulfuro de sodio para disolver
las plumas de pollo. Se comparó la capacidad de disolución de los tres agentes y se encontró que
el sulfuro de sodio tiene la mayor eficiencia para disolver las plumas en comparación con otros
agentes reductores. También se observa que la capacidad de disolución del ácido tiglicólico y el
cianuro de potasio depende principalmente del pH de la solución, que está controlado por la
cantidad de hidróxido de sodio añadido a la solución. El sulfato de amonio, como se esperaba,
precipitó la proteína y al mismo tiempo se usó para purificar la proteína. La presencia de la
proteína fue confirmada primero por la prueba de biuret donde el reactivo cambió a color púrpura
en presencia de enlaces peptídicos. La FTIR (espectroscopia infrarroja por transformada de
Fourier) también confirmó la presencia de amino y un grupo carboxilo en la muestra, los dos
grupos confirman la presencia de aminoácidos. Así, el producto obtenido al final de la
investigación confirmó la proteína de queratina verdadera sin la presencia de ningún material
extraño. La presencia de la proteína fue confirmada primero por la prueba de biuret donde el
reactivo cambió a color púrpura en presencia de enlaces peptídicos. La FTIR (espectroscopia
infrarroja por transformada de Fourier) también confirmó la presencia de amino y un grupo
carboxilo en la muestra, los dos grupos confirman la presencia de aminoácidos. Así, el producto
obtenido al final de la investigación confirmó la proteína de queratina verdadera sin la presencia
de ningún material extraño. La presencia de la proteína fue confirmada primero por la prueba de
biuret donde el reactivo cambió a color púrpura en presencia de enlaces peptídicos. La FTIR
(espectroscopia infrarroja por transformada de Fourier) también confirmó la presencia de amino y
un grupo carboxilo en la muestra, los dos grupos confirman la presencia de aminoácidos. Así, el
producto obtenido al final de la investigación confirmó la proteína de queratina verdadera sin la
presencia de ningún material extraño.
 Extracción de proteína de queratina de plumas de pollo
Reconocimiento
Se extiende un agradecimiento especial a la Universidad de
Malasia Pahang por proporcionar el apoyo financiero y el laboratorio
para realizar los experimentos.
Referencias
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recubrimientos de queratina de lana. en películas y recubrimientos a
base de proteínas;Gennadios, A. Eds., Boca Raton, FL, EE. UU.: CRC
Press, 2002; págs. 253-274.
[2] David, RG; Leonor, M. Un estudio de la queratina.Revista
de Química Biológica1934,106,605-614.
[3] David RG; Leonor, M. Derivados de la Queratina.Revista de
Química Biológica1935,112,361-371.
[4] Schrooyen, PMM; Dijkstra, PJ; Oberthur, RC;
Ver estadísticas de publicación
737
Bantjes, A.; Feijen, J. Estabilización de soluciones de queratinas
de plumas por dodecilsulfato de sodio.Revista de ciencia de
interfaces y coloides2001,240,30-39.
[5] Yamauchi, K.; Yamauchi, A.; Kusunoki, T.; Khoda, A.;
Konishi, YJbiomedicina Mate. Res.1996,31,439.
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de aminoácidos de queratina de plumas de aves.
Revista Europea Bioquímica1983,32,501-510.
[7] Blackburn, S.; Lowther, AG La acción de los ácidos orgánicos sobre
algunas proteínas fibrosas: la oxidación de la queratina de lana.
bioquímica j.1951,49(4),554-559.
[8]Kelly, RJ; Roddick-Lanzilotta, AD Formulaciones para el cuidado
personal que contienen queratina. Patente de EE. UU., EE. UU.
20060165635, 26 de febrero de 2011.
[9] ASTM. Métodos de prueba estándar para el contenido de lana
en lana cruda.En Libro Anual de Normas ASTM;Designación
(D584-96), Filadelfia, 1997; págs. 1-5.