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Informe de Laboratorio de Ecotoxicologa

1.- TTULO:
Bioensayo de Toxicidad Aguda utilizando Daphinia magna Straus desarrollada en medio de cultivo modificado

2.- RESUMEN:
El Bioensayo tiene por objeto evaluar la toxicidad del cromo y cobalto( presentes en los compuestos CoCL2 y K2Cr2O7) en el organismo de la especie Daphnia magna, se exponen a los individuos en contacto con el medio contaminado con Cromo y Cobalto a diferentes concentraciones, luego de analizar su reaccin a las 24 y 48 horas y evaluar mediante el mtodo Probit la EC50 (Concentracin efectiva 50) de los txicos y comparar con el comportamiento del control negativo (agua potable sin cloro residual). Las condiciones ambientales para la realizacin del Bioensayo son de 16 horas con luz, 8 horas oscuridad y la temperatura del agua a 202C. Los resultados obtenidos en el Bioensayo son el 100% de individuos muertos para las concentraciones de Cromo de 0,3 y 0,03 mg/l. Se concluye que el CoCl2 es ms toxico cuando existe mayor tiempo de exposicin y que el K2Cr2O7 es altamente txico a ciertas concentraciones.

3.-TEORA:
Daphinia magna Straus
Los cladceros han sido denominados comnmente pulgas de agua, por una cierta similitud con estos insectos, tanto en la forma como en el movimiento. El grupo es predominantemente dulceacucola y son muy pocas las especies marinas. Abundan en el litoral de los lagos, y en el plancton tienen asimismo una amplia representacin. Su principal alimento son las microalgas. El tamao de los cladceros vara entre 200 y 3000 m. El cuerpo es bastante transparente y no presenta una segmentacin evidente. En la cabeza tienen un ojo compuesto, grande y mvil que posee un nmero variable de facetas. En la regin ventral de la cabeza van insertas dos pequeas antenas, adems de unas segundas antenas que son mucho ms robustas y van insertas a los lados de la cabeza. Los cladceros tienen cinco a seis pares de patas torcicas aplanadas y con gran cantidad de sedas y pelos. Se desplazan a saltos y para ello se impulsan con movimiento vigorosos de las segundas antenas. Su reproduccin es asexual, por partenognesis y tiene lugar durante la mayor parte del ao. Las hembras producen un nmero variable de huevos (de uno o dos hasta cuarenta). Cuando los huevos alcanzan la forma juvenil, similar a la del adulto, son entonces liberados. Luego de algunas mudas (seis como mximo), la hembra est en condiciones de reproducirse. La partenognesis continua hasta que por motivos no bien entendidos, pero que se reconoce estn vinculados a cambios en las condiciones ambientales, disminuye la produccin de huevos partenogenticos. En condiciones

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desfavorables los individuos se reproducen sexualmente, dando como resultado un huevo de resistencia denominado efipio, el cual puede estar en latencia 50 aos. La especie Daphnia magna ha sido extensamente utilizada para la evaluacin de toxicidad aguda y crnica de diversos compuestos, y para el establecimiento de criterios de calidad del agua, debido a las caractersticas que presenta, en cuanto a su reproduccin, ciclo de vida corto y alta sensibilidad a la presencia de bajas concentraciones de contaminantes, adems de ser uno de los cladceros de mayor tamao y fcil de identificar. Es una especie recomendada para bioensayos de toxicidad por agencias internacionales como la US. EPA. (1)

Toxicidad del Cromo


El cromo es un elemento que ocurre naturalmente en rocas, animales, plantas y en el suelo. Las tres formas principales del cromo son el cromo (0), cromo (III) y cromo (VI). Pequeas cantidades de cromo (III) son necesarias para mantener buena salud. Los compuestos de cromo (VI) son ms txicos que los compuestos de cromo (III). El problema de salud ms comn que ocurre en trabajadores expuestos al cromo involucra a las vas respiratorias. Estos efectos incluyen irritacin del revestimiento del interior de la nariz, secrecin nasal, y problemas para respirar (asma, tos, falta de aliento, respiracin jadeante). Los trabajadores tambin han desarrollado alergias a compuestos de cromo, lo que puede producir dificultad para respirar y salpullido en la piel. Las concentraciones de cromo en el aire que pueden producir estos efectos pueden ser diferentes para los diferentes tipos de compuestos de cromo. As, estos efectos ocurren con concentraciones de cromo (VI) mucho ms bajas que de cromo (III). Sin embargo, las concentraciones que causan problemas respiratorios en trabajadores son por lo menos 60 veces ms altas que los niveles que se encuentran normalmente en el ambiente. Animales expuestos a cromo en el aire han sufrido problemas de las vas respiratorias similares a los observados en trabajadores. La Agencia Internacional para la Investigacin del Cncer (IARC) ha determinado que los compuestos de cromo (VI) son carcinognicos en seres humanos. El undcimo Informe sobre Sustancias Carcinognicas del Programa Nacional de Toxicologa clasifica a los compuestos de cromo (VI) como sustancias reconocidas como carcinognicas en seres humanos. (2)

Toxicidad del Cobalto


El cobalto tiene efectos tanto beneficiosos como perjudiciales para la salud. El cobalto es beneficioso para seres humanos porque forma parte de la vitamina B12, que es esencial para mantener buena salud. El cobalto (0.16 a 1.0 mg de cobalto/kg de peso corporal) tambin ha sido usado como tratamiento para la anemia (reduccin significativa del nmero de glbulos rojos en la sangre), incluso en mujeres embarazadas, debido a que estimula la produccin de glbulos rojos. El cobalto tambin estimula la produccin de glbulos rojos en gente sana, aunque solamente a niveles de exposicin muy altos. El cobalto tambin es esencial para la salud de animales, como por ejemplo el ganado vacuno y las ovejas. La exposicin de seres humanos y animales a los niveles de cobalto que se encuentran normalmente en el ambiente no produce dao.

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Sin embargo, cuando el cuerpo absorbe demasiado cobalto pueden ocurrir efectos perjudiciales. Algunos trabajadores que respiraron aire que contena 0.038 mg de cobalto/m (aproximadamente 100,000 veces la concentracin que se encuentra normalmente en el aire) durante 6 horas sufrieron dificultad para respirar. Algunas personas expuestas a 0.005 mg de cobalto/m durante trabajo con una aleacin de carburo de cobalto-tungsteno sufrieron efectos graves del pulmn, incluyendo asma, pulmona y jadeo. Algunas personas expuestas a 0.007 mg de cobalto/m en el trabajo tambin han desarrollado alergia al cobalto que ha producido asma y salpullido en la piel. Sin embargo, es improbable que la poblacin general se exponga al mismo tipo o cantidad de polvo de cobalto que produjo estos efectos en los trabajadores. La exposicin al cobalto radiactivo puede ser muy peligrosa para la salud. Si usted est cerca de cobalto radiactivo, las clulas en su cuerpo pueden ser daadas por los rayos gama que pueden atravesar el cuerpo, aun sin necesidad de que usted toque al cobalto radiactivo. La radiacin emitida por el cobalto radiactivo tambin puede daar clulas en su cuerpo si usted come, bebe, respira o toca cualquier cosa que contiene cobalto radiactivo. La magnitud del dao depende de la cantidad de radiacin a la que est expuesto, la que a su vez depende de la actividad del material radiactivo y de la duracin de la exposicin. La mayor parte de la informacin acerca de los efectos de la exposicin a la radiacin proviene de exposiciones breves. Los efectos de la exposicin a niveles muy bajos de radiacin durante perodos prolongados no se conocen. Si usted se expone a suficiente radiacin, puede sufrir una reduccin del nmero de glbulos blancos, lo que puede disminuir la resistencia contra infecciones. Tambin puede sufrir ampollas y quemaduras de la piel y prdida del pelo del rea expuesta. Esto les ocurre a pacientes de cncer tratados con altas dosis de radiacin para destruir el cncer. La radiacin puede daar las clulas del sistema reproductivo y producir esterilidad transitoria. La exposicin a niveles de radiacin ms bajos puede producir nusea, mientras que los niveles ms altos pueden producir vmitos, diarrea, hemorragias, coma y aun la muerte. La exposicin a la radiacin tambin puede alterar el material gentico dentro de la clula, lo que puede conducir al desarrollo de ciertos tipos de cncer. (3)

4.- MATERIALES, EQUIPOS, REACTIVOS Y PROCEDIMIENTO:


4.1.- Materiales:
80 individuos de Daphnia magna 8 Vasos de precipitacin 3 Vasos de precipitacin de plstico 1 Pipeta 1 Micro Pipeta 1 Pera de Succin

4.2.- Reactivos:
Solucin de Dicromato de Potasio Solucin de Cloruro de Cobalto Agua Declarada Jugo de alfalfa

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4.3.- Procedimiento:
4.3.1.- Realizar las diluciones correspondientes para la solucin de Cloruro de Cobalto (100; 10; 1; 0,1; 0,001 mg/l), cada vaso de precipitacin contiene 10ml 4.3.2.- Colocar en cada vaso de precipitacin 10 individuos de Daphnia Magna 4.3.3.- Realizar las diluciones correspondientes al Dicromato de Potasio (0,3; 0,03; 0,003 mg/l), cada vaso de precipitacin contiene 10ml 4.3.4.- Realizar el control negativo diluyendo el jugo de alfalfa (3, 6, 12%) 4.3.5.- Colocar 5 individuos de Daphnia Magna en las diluciones del jugo de alfalfa 4.3.6.- Realizar las mediciones a las 24 y 48 horas de exposicin.

5.- DISCUSION DE RESULTADOS


Dosis de CoCl2 (mg/l) 100 10 1 0,1 0,01 Nmero de muertes 24 horas 4 0 0 0 0 48 horas 10 1 0 0 0

Tabla N1. Nmero de muertes de Daphnia magna con la exposicin de diferentes concentraciones de CoCl2 (24 y 48 horas)

Dosis de K2Cr2O7 (mg/l) 0,3 0,03 0,003

Nmero de muertes 24 horas 10 10 1

Tabla N2. Nmero de muertes de Daphnia magna con la exposicin de diferentes concentraciones de K2Cr2O7 en 24 horas

Exposicin Horas 24 48

EC 50 CoCL2(mg/L) 112,88 14,79

EC 50 K2Cr2O7(mg/L) 0,0043

Tabla N3. Concentraciones efectivas de los txicos empleados en la prctica

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La toxicidad del Cobalto es mayor a las 48 horas En las muestras expuestas a K2Cr2O7 en las diluciones de 0,3 y 0,03 mg/l del compuesto todos los organismos estaban muertos en un periodo de 24 horas. En la muestra expuesta a K2Cr2O7 en la dilucin de 0,003 mg/l de dicho compuesto un organismo expir. En el Control Negativo a las 24 horas todos estaban vivos, a las 48 horas el medio de cultivo estaba completamente seco y los organismos como petrificados en el mismo.

6.- CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:


6.1.- Conclusiones:
6.1.1.- En las muestras expuestas a K2Cr2O7 se pudo observar que ningn organismo sobrevivi en el perodo medido de 24 h (0,3 y 0,003 mg/l) por lo que se concluye que el compuesto es ms txico que el CoCl2. 6.1.2.- La EC50 del CoCl2 para el 50% de individuos en 24h es de 112.88 mg/l, mientras que para 48h es de 14.79 mg/l. 6.1.3.- La EC50 del CoCl2 para 24 horas es 7.63 veces ms grande que para 48h, lo que demuestra que a mayor tiempo de exposicin es ms txico. 6.1.4.- La EC50 del k2Cr2O7 para el 50% de individuos en 24 horas es de 0,0043 mg/l, esto indica lo toxico que es el compuesto a concentraciones bajas. 6.1.5.- El compuesto k2Cr2O7 es altamente txico para los individuos expuestos a condiciones determinadas en el laboratorio.

6.2.- Recomendaciones:
6.2.1.- Realizar el ensayo en agua potable declorada. 6.2.2.- Se deben escoger neonatos para el bioensayo y obtener resultados ms concretos y eficaces. 6.2.3.- Tomar en cuenta los parmetros despreciados en el laboratorio (ph, temperatura), para obtener resultados que satisfagan la investigacin. 6.2.4.- No estresar a las pulgas de agua para que puedan ser recolectadas con mayor facilidad 6.2.5.- Debido a la toxicidad de los elementos se recomienda utilizar equipos adecuados de seguridad, evitando cualquier accidente.

7.- BIBLIOGRAFA:
7.1.- Zarate Muoz Catherine; Evaluacin de riesgo ecotoxicolgico, asociado al uso de plaguicidas y su impacto sobre especies acuticas: http://www.digeo.cl/doc/Zarate_Munoz_Catherine.pdf; (2004)

Informe de Laboratorio de Ecotoxicologa 7.2. - ATSDR Agency for Toxic Substances and Disease Registry; Cromo (Chromium); http://www.atsdr.cdc.gov/es/phs/es_phs7.html 7.3. - ATSDR Agency for Toxic Substances and Disease Registry; Cobalto (Cobalt); http://www.atsdr.cdc.gov/es/phs/es_phs33.html

8.- ANEXOS:
Dosis de CoCl2 (mg/l) 100 10 1 0,1 0,01 Nmero de muertes 4 0 0 0 0 Porcentaje 40 0 0 0 0 Probit 4,75 0 0 0 0 log dosis 2 1 0 -1 -2

Tabla N4. Calculo del porcentaje de muertes y de los nmeros Probit con el compuesto CoCl2 en 24h.

Cobalto 24 horas
5 4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 0 0.5 1 1.5 2 2.5

y = 4.75x - 4.75 R = 1

Grfico N1. Probit vs Log Dosis CoCl2 en 24h.

Clculo de EC 50 para con el compuesto CoCl2 en 24h. Y= 4.75x-4.75 Y= 5 X= (5+4.75/4.75)= 2.05 LD50= anti log X= 112.88

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Dosis de CoCl2 (mg/l) 100 10 1 0,1 0,01

Nmero de muertes 10 1 0 0 0

Porcentaje 100 10 0 0 0

Probit 9 3,72 0 0 0

log dosis 2 1 0 -1 -2

Tabla N5. Calculo del porcentaje de muertes y de los nmeros Probit con el compuesto CoCl2 en 48h.

Cobalto 48 horas
10 8 6 4 2 0 -2 0 0.5 1 1.5 2 2.5 y = 4.5x - 0.26 R = 0.9901

Grfico N2. Probit vs Log Dosis CoCl2 en 48h.

Clculo de EC 50 para con el compuesto CoCl2 en 48h. Y= 4.5x-0.26 Y= 5 X= (5+0.26/4.5)= 1.17 LD50= anti log X= 14.79

Dosis de K2Cr2O7 (mg/l) 0,3 0,03 0,003

Nmero de muertes 10 10 1

Porcentaje 100 100 10

Probit 9 9 3,72

log dosis -0,52 -1,52 -2,52

Tabla N6. Calculo del porcentaje de muertes y de los nmeros Probit con el compuesto K2Cr2O7en 24h.

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Cromo 24 horas
12 10 8 6 4 2 0 -3 -2.5 -2 -1.5 -1 -0.5 0 y = 2.64x + 11.253 R = 0.75

Grfico N3. Probit vs Log Dosis Cromo en 24h.

Clculo de EC 50 para con el compuesto K2Cr2O7 en 24h. Y= 2.64x+11.253 Y= 5 X= (5-11.253/2.64)= LD50= anti log X=

-2.37 4.3*10^(-3)

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