Epa-8315a

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MÉTODO 8315A
DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE CARBONILO
POR CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTA RENDIMIENTO (HPLC)
1.0 ALCANCE Y APLICACIÓN
1.1 Este método proporciona procedimientos para la determinación de compuestos carbonílicos libres en varias
matrices por derivatización con 2,4dinitrofenilhidrazina (DNPH). El método utiliza cromatografía líquida de alta resolución
(HPLC) con detección ultravioleta/visible (UV/vis) para identificar y cuantificar los analitos objetivo. Este método incluye
dos procedimientos que abarcan todos los aspectos del análisis (desde la extracción hasta la determinación de la
concentración). El Procedimiento 1 es apropiado para el análisis de muestras acuosas, de suelo y de desechos y muestras
de pilas recolectadas por el Método 0011.
El Procedimiento 2 es apropiado para el análisis de muestras de aire interior recolectadas por el Método 0100. La lista de
analitos objetivo difiere según el procedimiento. El procedimiento apropiado para cada analito objetivo se enumera en la
siguiente tabla.
a b b
Compuesto No CAS. proc. 1 proc. 2
acetaldehído 75070 X X
Acetona 67641 X
acroleína 107028 X
Benzaldehído 100527 X
Butanal (butiraldehído) 123728 X X
crotonaldehído 123739 X X
ciclohexanona 108941 X
Decanal 112312 X
2,5dimetilbenzaldehído 5779942 X
Formaldehído 50000 X X
heptanal 111717 X
Hexanal (hexaldehído) 66251 X X
isovaleraldehído 590863 X
no anal 124196 X
Octanal 124130 X
Pentanal (valeraldehído) 110623 X X
Propanal (Propionaldehído) m 123386 X X
Tolualdehído o 620235 X X
Tolualdehído p 529204 X
Tolualdehído 104870 X
a
Número de Registro del Servicio de Resumen Químico.
b
Los dos procedimientos tienen listas superpuestas de compuestos objetivo que se han evaluado utilizando
modificaciones del análisis. Consulte el número de procedimiento respectivo al elegir la técnica de análisis
adecuada para un compuesto en particular.
1.2 Los límites de detección del método (MDL) utilizando el procedimiento 1 se enumeran en las Tablas 1 y 2. Los datos de
sensibilidad para el muestreo y el análisis mediante el uso del Método 0100 (procedimiento 2) se proporcionan en la Tabla 3. El MDL
CD ROM 8315A 1 Revisión 1

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para una muestra específica puede diferir del valor indicado, según las interferencias en la matriz de la muestra y el
volumen de muestra utilizado en el procedimiento.
1.3 El procedimiento de extracción para muestras sólidas se describe en la Sec. 7.1 de este método.
1.4 Cuando se utiliza este método para analizar matrices de muestras desconocidas, la identificación del
compuesto debe estar respaldada por al menos una técnica cualitativa adicional. Se puede utilizar un cromatógrafo de
gases/espectrómetro de masas (GC/MS) para la confirmación cualitativa de los resultados de los analitos objetivo,
utilizando el extracto producido por este método.
1.5 Este método está restringido al uso por, o bajo la supervisión de, analistas con experiencia en el uso de la
cromatografía y en la interpretación de cromatogramas. Cada analista debe demostrar la capacidad de generar resultados
aceptables con este método.
2.0 RESUMEN DEL MÉTODO
Este método contiene dos procedimientos que tratan con diferentes tipos de muestras.
2.1 Muestras líquidas y sólidas (Procedimiento 1)
2.1.1 Para desechos compuestos de sólidos y desechos acuosos que contengan más del uno por ciento de
material sólido, la fase acuosa debe separarse de la fase sólida y almacenarse, de acuerdo con la Sec. 6.2, para
un posible análisis posterior. Si es necesario, se reduce el tamaño de partícula de los sólidos en los residuos. La
fase sólida se extrae con un volumen de fluido igual a 20 veces el peso de la muestra. El fluido de extracción
empleado es función de la alcalinidad de la fase sólida del residuo. Se utiliza un extractor especial cuando se
extraen volátiles.
Después de la extracción, el extracto se filtra a través de un filtro de fibra de vidrio de 0,6 0,8 µm.
2.1.2 Si es compatible (es decir, no se formarán múltiples fases al combinarse), la fase acuosa inicial del
desecho se agrega al extracto acuoso y estos líquidos se analizan juntos. Si son incompatibles, los líquidos se
analizan por separado y los resultados se combinan matemáticamente para producir una concentración promedio
ponderada por volumen.
2.1.3 Un volumen medido de muestra acuosa (aprox. 100 ml) o una cantidad apropiada de extracto de
sólidos (aprox. 25 g), se tampona a pH 3 y se derivatiza con 2,4 dinitrofenilhidrazina (DNPH), usando el sólido
apropiado fase o una técnica de extracción líquidolíquido. Si se usa la opción de extracción en fase sólida (SPE),
el compuesto derivatizado se extrae usando cartuchos absorbentes sólidos y luego se eluye con etanol. Si se
utiliza la opción líquido líquido, el compuesto derivatizado se extrae en serie tres (3) veces con cloruro de
metileno. Los extractos de cloruro de metileno se concentran utilizando el método de la serie 3500 del procedimiento
apropiado y se intercambian con acetonitrilo antes del análisis por HPLC. Se describen las condiciones de HPLC
que permiten la separación y medición de varios compuestos carbonílicos en el extracto por detección de
absorbancia a 360 nm.
2.1.4 Si el formaldehído es el único analito de interés, la muestra acuosa y/o el extracto sólido de la muestra
deben amortiguarse a un pH de 5,0 para minimizar la formación de artefactos de formaldehído.
2.2 Muestras de gas de chimenea recolectadas por el Método 0011 (Procedimiento 1): Toda la muestra devuelta
al laboratorio se extrae con cloruro de metileno y el extracto se diluye o concentra a un volumen conocido. Una alícuota
del extracto de cloruro de metileno se intercambia con disolvente

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y concentrado o diluido según sea necesario. Se describen las condiciones de HPLC que permiten la separación y medición de
varios compuestos carbonílicos en el extracto por detección de absorbancia a 360 nm.
2.3 Muestras de aire interior por el Método 0100 (Procedimiento 2): Los cartuchos de muestras se devuelven al
laboratorio y se retrolavan con acetonitrilo en un matraz volumétrico de 5 ml. El eluato se diluye a volumen con acetonitrilo. Se
pipetean dos alícuotas del extracto de acetonitrilo en dos viales de muestra que tienen septos revestidos de politetrafluoroetileno
(PTFE). Se describen las condiciones de HPLC que permiten la separación y medición de los diversos compuestos de carbonilo
en el extracto por detección de absorbancia a 360 nm.
3.0 INTERFERENCIAS
3.1 Las interferencias en los métodos pueden ser causadas por solventes, reactivos, material de vidrio y otro hardware
de procesamiento de muestras contaminados que pueden generar artefactos discretos y/o líneas base de cromatograma
elevadas. Todos los materiales deben demostrar rutinariamente la ausencia de interferencias en las condiciones de análisis
analizando los reactivos en blanco de laboratorio como se describe en la Sec. 8.5.
3.1.1 La cristalería debe limpiarse escrupulosamente. La cristalería debe enjuagarse lo antes posible después de
su uso con el último disolvente utilizado. Esto debe ser seguido por un lavado con detergente con agua caliente y
enjuagues con agua del grifo y agua reactiva libre de orgánicos. Después de lavar, la cristalería debe escurrirse, secarse
y calentarse en un horno de laboratorio a 130 °C durante dos o tres horas antes de volver a usarla. Los enjuagues con
solvente con acetonitrilo se pueden sustituir por el calentamiento del horno. Después de secarse y enfriarse, la cristalería
debe almacenarse en un ambiente limpio para evitar la acumulación de polvo u otros contaminantes.
NOTA: No enjuague la cristalería con acetona o metanol. Estos disolventes reaccionan con
DNPH para formar interferencias.
3.1.2 El uso de reactivos y solventes de alta pureza ayuda a minimizar la interferencia.
Puede ser necesaria la purificación de disolventes por destilación en todos los sistemas de vidrio.
3.1.3 Se deben usar guantes de polietileno al manipular cartuchos de gel de sílice para reducir
la posibilidad de contaminación.
3.2 La contaminación por formaldehído del reactivo DNPH se encuentra con frecuencia debido a su amplia presencia en
el medio ambiente. El reactivo DNPH del Procedimiento 2 debe purificarse mediante múltiples recristalizaciones en acetonitrilo
de grado HPLC. La recristalización se logra, a 40 60EC, por evaporación lenta del solvente para maximizar el tamaño del cristal.
Los cristales de DNPH purificados se almacenan en acetonitrilo de grado HPLC. Los niveles de impurezas de compuestos
carbonílicos en el DNPH se determinan antes del análisis de la muestra y deben ser inferiores a 25 mg/L. Consulte el Apéndice
A para conocer el procedimiento de recristalización.
3.3 Las interferencias de la matriz pueden ser causadas por contaminantes extraídos conjuntamente de la muestra. El
alcance de las interferencias de la matriz será específico de la fuente y de la matriz. Si se producen interferencias en las
muestras posteriores, puede ser necesaria la modificación de la fase móvil o alguna limpieza adicional.
3.4 En el Procedimiento 1, se genera acetaldehído durante el paso de derivatización si hay etanol presente en la muestra.
Este fondo afectará la medición de los niveles de acetaldehído por debajo de 0,5 ppm (500 ppb).

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3.5 Para el Procedimiento 2, en las condiciones de análisis de dos columnas indicadas, la identificación y cuantificación
de butiraldehído puede ser difícil debido a la coelución con isobutiraldehído y metiletilcetona. Deben tomarse precauciones
y ajustarse las condiciones de análisis para evitar posibles problemas.
4.0 APARATOS Y MATERIALES
4.1 Cromatógrafo de líquidos de alta resolución (modular).
4.1.1 Sistema de bombeo Gradiente, con control de flujo constante capaz de 1,50 mL/min.
4.1.2 Válvula de inyección de alta presión con circuito de 20 µL.
4.1.3 Columna: 250 mm x 4,6 mm de DI, tamaño de partícula de 5 µm, C18 (Zorbax o equivalente).
4.1.4 Detector de absorbancia 360 nm.
4.1.5 Registrador gráfico de bandas compatible con detector Uso de un sistema de datos para
Se recomienda medir las áreas de los picos y los tiempos de retención.
4.1.6 Helio: para desgasificar disolventes de fase móvil (Procedimientos 1 y 2).
4.1.7 Depósitos de fase móvil y aparatos de filtración por succión: para retener y filtrar la fase móvil de HPLC.
El sistema de filtrado debe ser todo de vidrio y PTFE y utilizar un filtro de membrana de poliéster de 0,22 µm.
4.1.8 Jeringas: para carga de bucle de inyección de HPLC, con una capacidad de al menos cuatro veces el
volumen del bucle.
4.2 Aparatos y materiales para el Procedimiento 1
4.2.1 Recipiente de reacción: matraz Florence de 250 ml.
4.2.2 Embudo de decantación 250 ml, con llave de paso de PTFE.
4.2.3 Aparato KudernaDanish (KD) Ver Método 3510 u otro método apropiado de la serie 3500. (Se pueden
emplear otros aparatos de concentración si el laboratorio puede demostrar un rendimiento equivalente).
4.2.4 Virutas en ebullición: extraídas con disolvente con cloruro de metileno, malla aproximadamente 10/40
(carburo de silicio o equivalente).
4.2.5 Medidor de pH Capaz de medir hasta 0,01 unidades de pH.
4.2.6 Papel de filtro de fibra de vidrio: tamaño de poro de 1,2 µm (Grado Fisher G4 o equivalente).
4.2.7 Cartuchos absorbentes sólidos Embalados con 2 g C18 (Baker o equivalente).
4.2.8 Colector de vacío Capaz de extracción simultánea de hasta 12 muestras (Supelco o equivalente).

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4.2.9 Depósitos de muestra Capacidad de 60 mL (Supelco o equivalente).
4.2.10 Pipeta: capaz de administrar con precisión 0,10 ml de solución.
4.2.11 Baño de agua Calentado, con cubierta de anillo concéntrico, capaz de controlar la temperatura
(± 2CE). El baño debe usarse en una campana.
4.2.12 Agitador de muestras Incubador de temperatura controlada (± 2EC) con agitación orbital
(LabLine Orbit EnvironShaker Modelo 3527 o equivalente).
4.2.13 Jeringas 5 mL, 500 µL, 100 µL, (LuerLok o equivalente).
4.2.14 Filtros de jeringa: discos de filtración de 0,45 µm (Gelman Acrodisc 4438 o equivalente).
4.3 Aparatos y materiales para el Procedimiento 2
4.3.1 Jeringas: 10 ml, con adaptador tipo LuerLok, utilizadas para retrolavar los cartuchos de muestra por
alimentación por gravedad.
4.3.2 Gradilla para jeringas: hecha de una placa de aluminio con patas ajustables en las cuatro esquinas.
Se perforan orificios circulares de un diámetro ligeramente mayor que el diámetro de las jeringas de 10 ml a través
de la placa para permitir el procesamiento por lotes de cartuchos para limpieza, recubrimiento y elución de muestras.
Se recomienda una placa (0,16 x 36 x 53 cm) con 45 agujeros en una matriz de 5 x 9. Consulte la Figura 2 en el
Método 0100.
4.4 Matraces aforados 5 mL, 10 mL y 250 o 500 mL.
4.5 Viales: 10 o 25 ml, vidrio con tapones de rosca revestidos de PTFE o tapas engarzadas.
4.6 Balanza Analítica, capaz de pesar con precisión hasta 0,0001 g.
4.7 Embudos de vidrio
4.8 Guantes de polietileno utilizados para manipular cartuchos de gel de sílice.
5.0 REACTIVOS
5.1 Se utilizarán productos químicos inorgánicos de grado reactivo en todas las pruebas. A menos que se indique lo
contrario, se pretende que todos los reactivos cumplan con las especificaciones del Comité de Reactivos Analíticos de la
Sociedad Química Estadounidense, donde tales especificaciones estén disponibles. Se pueden usar otros grados, siempre
que primero se compruebe que el reactivo tiene una pureza suficientemente alta para permitir su uso sin disminuir la
precisión de la determinación.
5.2 Agua reactiva libre de orgánicos Agua en la que no se observa un interferente en el método
límite de detección para los compuestos de interés.
5.3 Formalina Solución de formaldehído (CH 2O) en agua reactiva libre de orgánicos, nominalmente 37,6
porcentaje (p/p). La concentración exacta se determinará para la solución madre en la Sec. 5.7.1.1.
5.4 Aldehídos y cetonas grado analítico, utilizados para la preparación de derivados de DNPH
estándares de analitos objetivo distintos del formaldehído. Consulte la lista de analitos objetivo.

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5.5 Procedimiento 1 reactivos
5.5.1 Cloruro de metileno, CH Cl grado
2 2HPLC o equivalente.
5.5.2 Acetonitrilo, CH CN grado
3 HPLC o equivalente.
5.5.3 Soluciones de hidróxido de sodio, NaOH, 1,0 N y 5 N.
5.5.4 Cloruro de sodio, NaCl, solución saturada Prepárelo disolviendo un exceso de sólido de grado reactivo
en agua reactiva libre de orgánicos.
5.5.5 Solución de sulfito de sodio, Na SO 2 3 ,
0,1 millones
5.5.6 Sulfato de sodio, Na SO granular,
2 4 anhidro.
5.5.7 Ácido cítrico, CH O 8 8 7 , solución 1,0 M.
5.5.8 Citrato de sodio, CH Na O C2H O3
, 7solución
2 dihidratada de sal trisódica 1,0 M.
sesenta y cinco
5.5.9 Ácido acético (glacial), CH CO H. 3 2
5.5.10 Acetato de sodio, CH CO Na.3 2
5.5.11 Ácido clorhídrico, HCl, 0,1 N.
5.5.12 Tampón de citrato, 1 M, pH 3 Prepárelo agregando 80 mL de solución de ácido cítrico 1 M a 20 mL
de solución de citrato de sodio 1 M. Mezcle bien. Ajuste el pH con NaOH o HCl según sea necesario.
5.5.13 Tampón de acetato de pH 5,0 (5 M): solo análisis de formaldehído. Se prepara añadiendo 40 mL de
solución de ácido acético 5M a 60 mL de solución de acetato de sodio 5M. Mezcle bien. Ajuste el pH con NaOH o
HCl según sea necesario.
5.5.14 2,4dinitrofenilhidrazina, [2,4(ON) CH ]NHNH (DNPH),
2 2 6 3 70 % en a2gua reactiva libre de orgánicos (p/p).
Prepare una solución de 3,00 mg/mL disolviendo 428,7 mg de 70% (p/p)
Solución de DNPH en 100 mL de acetonitrilo.
5.5.15 Líquido de extracción para el Procedimiento 1: diluya 64,3 ml de NaOH 1,0 N y 5,7 ml de ácido acético
glacial a 900 ml con agua reactiva libre de orgánicos. Diluir a 1 litro con agua reactiva libre de orgánicos. El pH debe
ser 4,93 ± 0,02.
5.6 Procedimiento 2 reactivos
5.6.1 Acetonitrilo, CH CN grado
3 HPLC.
5.6.2 2,4Dinitrofenilhidrazina, CHNO (DNPH)
recristalizar
6 6 4 4 al menos dos veces con acetonitrilo de grado
HPLC utilizando el procedimiento del Apéndice A.
5.7 Soluciones madre estándar para el Procedimiento 1
5.7.1 Stock de formaldehído (aproximadamente 1000 mg/L) Prepárelo diluyendo una cantidad apropiada de
formaldehído certificado o estandarizado (aproximadamente 265 µL) a 100 mL con agua reactiva libre de orgánicos.
Si no se dispone de una solución de formaldehído certificada

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o si hay alguna duda con respecto a la calidad de una solución certificada, la solución puede estandarizarse utilizando
el procedimiento de la Sec. 5.7.1.1.
5.7.1.1 Estandarización de la solución madre de formaldehído: transfiera una alícuota de 25 ml de
una solución de Na SO 0,1
2 M 3
a un vaso de precipitados y registre el pH. Agregue una alícuota de 25,0 mL de
la solución madre de formaldehído (Sec. 5.18.1) y registre el pH. Titular esta mezcla de nuevo al pH original
utilizando HCl 0,1 N. La concentración de formaldehído se calcula utilizando la siguiente ecuación:
(30.03)(NHCl)(mLHCl)
Concentración (mg/L) '
0.0250 L formaldehído
dónde:
NHCl =
Normalidad de la solución de HCl utilizada (en miliequivalentes/mL)
(1 mmol de HCl = 1 miliequivalente de HCl) mL HCl =
mL de solución estandarizada de HCl utilizada 30,03
=
Peso molecular del formaldehído (en mg/mmol)
5.7.2 Aldehído(s) y cetona(s) almacenado(s) Prepárelo agregando una cantidad apropiada del material puro
a 90 mL de acetonitrilo y diluya a 100 mL, para dar una concentración final de 1000 mg/L.
5.8 Soluciones madre estándar para el Procedimiento 2
5.8.1 Preparación de los derivados de DNPH para análisis HPLC
5.8.1.1 A una porción del DNPH recristalizado, agregue suficiente HCl 2N para obtener una solución
aproximadamente saturada. Añadir a esta solución el analito objetivo en exceso molar del DNPH. Filtrar el
precipitado derivado de DNPH, lavarlo con HCl 2N, lavarlo nuevamente con agua y dejar secar al aire.
5.8.1.2 Comprobar la pureza del derivado de DNPH mediante determinación del punto de fusión o
análisis HPLC. Si el nivel de impurezas no es aceptable, recristalizar el derivado en acetonitrilo. Repita la
comprobación de pureza y la recristalización según sea necesario hasta alcanzar el 99 % de pureza.
5.8.2 Preparación de estándares derivados de DNPH y estándares de calibración para análisis HPLC.
5.8.2.1 Soluciones estándar de stock: prepare soluciones estándar de stock individuales para cada
uno de los derivados de DNPH del analito objetivo disolviendo cantidades pesadas con precisión en
acetonitrilo. Se pueden preparar soluciones madre individuales de aproximadamente 100 mg/L disolviendo
0,010 g del derivado sólido en 100 mL de acetonitrilo.
5.8.2.2 Estándar(es) de dilución secundario(s) Utilizando las soluciones estándar madre
individuales, prepare estándares de dilución secundarios en acetonitrilo que contengan los derivados de
DNPH de los analitos objetivo mezclados. Las soluciones de 100 µg/L se pueden preparar colocando 100 µL
de una solución de 100 mg/L en un matraz volumétrico de 100 mL y diluyendo hasta la marca con acetonitrilo.

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5.8.2.3 Estándares de calibración: prepare una mezcla estándar de calibración de trabajo a partir del
estándar de dilución secundario, utilizando la mezcla de derivados de DNPH en concentraciones de 0,5 2,0 µg/
L (que abarca la concentración de interés para la mayoría de los trabajos de aire interior). Es posible que sea
necesario ajustar la concentración del derivado de DNPH en las soluciones de mezcla estándar para reflejar la
distribución de concentración relativa en una muestra real.
5.9 Almacenamiento estándar: almacene todas las soluciones estándar a 4EC en un vial de vidrio con una tapa
revestida de PTFE, dejando un espacio libre mínimo y en la oscuridad. Los estándares deben ser estables durante unas 6 semanas.
Todos los estándares deben revisarse con frecuencia para detectar signos de degradación o evaporación, especialmente justo
antes de preparar los estándares de calibración a partir de ellos.
5.10 Estándares de calibración
Prepare soluciones de calibración con un mínimo de 5 concentraciones para cada analito de interés en agua
reactiva libre de sustancias orgánicas (o acetonitrilo para el Procedimiento 2) a partir de la solución estándar madre.
La concentración más baja de cada analito debe estar en, o justo por encima de, los MDL enumerados en las Tablas 1
o 2. Las otras concentraciones de la curva de calibración deben corresponder al rango esperado de concentraciones
encontradas en muestras reales.
6.0 OBTENCIÓN, CONSERVACIÓN Y MANIPULACIÓN DE MUESTRAS
6.1 Consulte el material introductorio de este capítulo, Analitos orgánicos, sec. 4.1.
6.2 Las muestras deben refrigerarse a 4EC. Las muestras acuosas deben derivatizarse y extraerse dentro de los 3
días posteriores a la recolección de la muestra. Los tiempos de retención de los lixiviados de muestras sólidas deben
mantenerse al mínimo. Todos los extractos de muestra derivatizados deben analizarse dentro de los 3 días posteriores a la
preparación.
6.3 Las muestras recolectadas por los Métodos 0011 o 0100 deben refrigerarse a 4EC. Es
Recomendó que las muestras se extraigan y analicen dentro de los 30 días posteriores a la recolección.
7.0 PROCEDIMIENTO
7.1 Extracción de muestras sólidas (Procedimiento 1)
7.1.1 Todas las muestras sólidas deben hacerse lo más homogéneas posible removiendo y eliminando palos,
rocas y otros materiales extraños. Cuando la muestra no esté seca, determine el peso seco de la muestra utilizando
una alícuota representativa. Si es necesaria la reducción del tamaño de las partículas, proceda según el Método 1311.
7.1.1.1 Determinación del peso seco: en ciertos casos, los resultados de las muestras se desean en
función del peso seco. Cuando se deseen o requieran tales datos, se debe pesar una parte de la muestra para
la determinación del peso seco al mismo tiempo que la parte utilizada para la determinación analítica.
ADVERTENCIA: El horno de secado debe estar contenido en una campana o ventilado.
Una contaminación significativa del laboratorio puede resultar del secado de una
muestra de desecho peligroso altamente contaminada.

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7.1.1.2 Inmediatamente después de pesar la muestra para la extracción, pesar de 5 a 10 g de la
muestra en un crisol tarado. Determine el % de peso seco de la muestra secándola durante la noche a 105°C.
Deje enfriar en un desecador antes de pesar:
g de muestra
seca % peso seco ' ×100 g de muestra
7.1.2 Mida 25 g de sólido en una botella de 500 ml con tapa roscada revestida de PTFE o tapa engarzada y
agregue 500 ml de líquido de extracción (Sec. 5.5.15). Extraiga el sólido girando la botella a aproximadamente 30 rpm
durante 18 horas. Filtrar el extracto a través de papel de filtro de fibra de vidrio y almacenar en botellas selladas a 4EC.
Cada mL de extracto representa 0,050 g de sólido. Se pueden usar cantidades más pequeñas de muestra sólida con
volúmenes correspondientemente reducidos de fluido de extracción manteniendo la relación de masa a volumen de 1:20.
7.2 Limpieza y separación (Procedimiento 1)
7.2.1 Los procedimientos de limpieza pueden no ser necesarios para una matriz de muestra relativamente limpia.
Los procedimientos de limpieza recomendados en este método se han utilizado para el análisis de varios tipos de
muestras. Si determinadas muestras exigen el uso de un procedimiento de limpieza alternativo, el analista debe
determinar el perfil de elución y demostrar que la recuperación de formaldehído de una muestra enriquecida es superior
al 85 %. La recuperación puede ser menor para las muestras que forman emulsiones.
7.2.2 Si la muestra no es clara o se desconoce la complejidad, se debe centrifugar toda la muestra a 2500 rpm
durante 10 minutos. Decantar el líquido sobrenadante de la botella de centrífuga y filtrar a través de papel de filtro de
fibra de vidrio en un recipiente que pueda cerrarse herméticamente.
7.3 Derivatización (Procedimiento 1)
7.3.1 Para muestras acuosas, mida una alícuota de la muestra que sea adecuada para el rango de concentración
anticipado del analito (nominalmente 100 ml). Transfiera cuantitativamente la alícuota de la muestra al recipiente de
reacción (Sec. 4.2).
7.3.2 Para muestras sólidas, generalmente se requerirán de 1 a 10 mL de extracto (Sec. 7.1). La cantidad
utilizada para una muestra en particular debe determinarse mediante experimentos preliminares.
NOTA: En los casos en que el volumen de muestra o extracto seleccionado sea inferior a 100 ml, el volumen
total de la capa acuosa debe ajustarse a 100 ml con agua reactiva libre de sustancias orgánicas.
Registre el volumen de muestra original antes de la dilución.
7.3.3 La derivatización y extracción de los analitos objetivo se puede lograr utilizando los procedimientos líquido
sólido (Sec. 7.3.4) o líquidolíquido (Sec. 7.3.5).
7.3.4 Derivatización y extracción líquidosólido
7.3.4.1 Para analitos que no sean formaldehído, agregue 4 ml de tampón de citrato y ajuste el pH a 3,0
± 0,1 con HCl 6M o NaOH 6M. Agregue 6 ml de reactivo DNPH, selle el recipiente y colóquelo en un agitador
orbital calentado (40 °C) (Sec. 4.2.12) durante 1 hora.
Ajuste la agitación para producir un remolino suave de la solución de reacción.
7.3.4.2 Si el formaldehído es el único analito de interés, agregue 4 ml de tampón de acetato y ajuste el
pH a 5,0 ± 0,1 con HCl 6M o NaOH 6M. Agregar 6 mL de reactivo DNPH, sellar

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el recipiente y colóquelo en un agitador orbital calentado (40°C) (Sec. 4.2.12) durante 1 hora.
Ajuste la agitación para producir un remolino suave de la solución de reacción.
7.3.4.3 Ensamble el colector de vacío y conéctelo a un aspirador de agua o bomba de
vacío. Conecte un cartucho absorbente de 2 g al colector de vacío. Acondicione cada cartucho
pasando 10 ml de tampón de citrato diluido (10 ml de tampón de citrato 1 M disueltos en 250 ml de
agua reactiva libre de sustancias orgánicas) a través de cada cartucho absorbente.
7.3.4.4 Retire el recipiente de reacción del agitador inmediatamente al final de
el período de reacción de una hora y agregue 10 ml de solución saturada de NaCl al recipiente.
7.3.4.5 Transfiera cuantitativamente la solución de reacción al cartucho absorbente y
aplique vacío para que la solución atraviese el cartucho a una velocidad de 3 a 5 ml/min. Continúe
aplicando el vacío durante aproximadamente 1 minuto después de que la muestra líquida haya
pasado por el cartucho.
7.3.4.6 Mientras se mantienen las condiciones de vacío descritas en la Sec. 7.3.4.4, eluya
cada tren de cartuchos con aproximadamente 9 ml de acetonitrilo directamente en un matraz
volumétrico de 10 ml. Diluya la solución al volumen con acetonitrilo, mezcle bien y coloque en un
vial herméticamente cerrado hasta que se analice.
NOTA: Debido a que este método usa un exceso de DNPH, los cartuchos permanecerán
de color amarillo después de completar la Sec. 7.3.4.5. La presencia de este
color no es indicativa de pérdida de los derivados del analito.
7.3.5 Derivatización y extracción líquidolíquido
7.3.5.1 Para analitos que no sean formaldehído, agregue 4 mL de tampón de citrato y
ajuste el pH a 3,0 ± 0,1 con HCl 6M o NaOH 6M. Agregue 6 ml de reactivo DNPH, selle el recipiente
y colóquelo en un agitador orbital calentado (40 °C) durante 1 hora. Ajuste la agitación para producir
un remolino suave de la solución de reacción.
7.3.5.2 Si el formaldehído es el único analito de interés, agregue 4 ml de tampón de acetato
y ajuste el pH a 5,0 ± 0,1 con HCl 6M o NaOH 6M. Agregue 6 ml de reactivo DNPH, selle el
recipiente y colóquelo en un agitador orbital calentado (40 °C) durante 1 hora. Ajuste la agitación
para producir un remolino suave de la solución de reacción.
7.3.5.3 Extraiga en serie la solución con tres porciones de 20 mL de cloruro de metileno
utilizando un embudo de decantación de 250 mL. Si se forma una emulsión tras la extracción, retire
toda la emulsión y centrifugue a 2000 rpm durante 10 minutos. Separe las capas y proceda con la
siguiente extracción. Combine las capas de cloruro de metileno en un matraz Erlenmeyer de 125 ml
que contenga 5,0 gramos de sulfato de sodio anhidro. Agite el contenido para completar el proceso
de secado del extracto.
7.3.5.4 Ensamble un concentrador KudernaDanish (KD) conectando un tubo concentrador
de 10 mL a un matraz evaporador de 500 mL. Ver Sec. 4.0 del Método 3510. Vierta el extracto en el
matraz del evaporador teniendo cuidado de minimizar la transferencia de gránulos de sulfato de
sodio. Lave el matraz Erlenmeyer con 30 mL de cloruro de metileno y agregue lavado al matraz
evaporador para completar la transferencia cuantitativa.

diciembre de 1996
7.3.5.5 Concentrar el extracto hasta un volumen final de 5 mL, usando las técnicas KD, como se
describe en el Método 3510. Cambiar el solvente a acetonitrilo antes del análisis.
7.4 Extracción de muestras de los Métodos 0011 y 0100 (Procedimientos 1 y 2)
7.4.1 Muestras de gas de chimenea recolectadas por el Método 0011 (Procedimiento 1)
7.4.1.1 Mida el volumen de la fase acuosa de la muestra antes de la extracción (para la determinación
de la humedad cuando el volumen no se midió en el campo).
Vierta la muestra en un embudo de separación y drene el cloruro de metileno en un matraz volumétrico.
7.4.1.2 Extraer la solución acuosa con dos o tres alícuotas de metileno
cloruro. Agregar los extractos de cloruro de metileno al matraz volumétrico.
7.4.1.3 Llene el matraz aforado hasta la línea con cloruro de metileno. mezclar bien y
retirar una alícuota.
7.4.1.4 Si hay altas concentraciones de formaldehído, el extracto se puede diluir con la fase móvil; de
lo contrario, el solvente del extracto se debe cambiar como se describe en la Sec. 7.3.5.5. Si hay bajas
concentraciones de formaldehído, la muestra debe concentrarse durante el procedimiento de intercambio de
solvente.
7.4.1.5 Almacenar la muestra a 4EC. Si el extracto se almacenará durante más de dos días, debe
transferirse a un vial con una tapa roscada revestida de PTFE o una tapa engarzada con un septo revestido de
PTFE. Continúe con el análisis cromatográfico de HPLC si no se requiere más limpieza.
7.4.2 Muestras de aire ambiente recolectadas por el Método 0100 (Procedimiento 2)
7.4.2.1 Las muestras serán recibidas por el laboratorio en un bote con tapa de fricción que contiene
de 2 a 5 cm de carbón vegetal granular, y deben almacenarse en este bote, en un refrigerador, hasta su análisis.
Alternativamente, las muestras también pueden almacenarse solas en sus recipientes de vidrio individuales. El
tiempo entre el muestreo y el análisis no debe exceder los 30 días.
7.4.2.2 Retire el cartucho de muestra del tubo de cultivo etiquetado. Conectar
el cartucho de muestra (salida o extremo largo durante el muestreo) a una jeringa limpia.
NOTA: El flujo de líquido durante la desorción debe estar en la dirección opuesta al flujo de aire
durante la recolección de la muestra (es decir, retrolave el cartucho).
7.4.2.3 Coloque el cartucho/jeringa en la gradilla de jeringas.
7.4.2.4 Realice un retrolavado del cartucho (alimentación por gravedad) pasando 6 ml de acetonitrilo
de la jeringa a través del cartucho a un tubo de ensayo graduado oa un matraz volumétrico de 5 ml.
NOTA: un cartucho seco tiene un volumen de retención de acetonitrilo ligeramente superior a 1 ml. El
flujo de eluato puede detenerse antes de que el acetonitrilo de la jeringa se drene por
completo en el cartucho debido al aire atrapado entre

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el filtro de cartucho y la punta LuerLok de la jeringa. Si esto sucede,
desplace el aire atrapado con el acetonitrilo en la jeringa utilizando una pipeta Pasteur
desechable de punta larga.
7.4.2.5 Diluir hasta la marca de 5 ml con acetonitrilo. Etiquete el matraz con la muestra
identificación. Pipetee dos alícuotas en viales de muestra que tengan septos revestidos de PTFE.
7.4.2.6 Almacenar la muestra a 4EC. Continúe con el análisis cromatográfico de HPLC de la primera
alícuota si no se requiere más limpieza. Guarde la segunda alícuota en el refrigerador hasta que los resultados
del análisis de la primera alícuota estén completos y validados. La segunda alícuota se puede utilizar para análisis
de confirmación, si es necesario.
7.5 Condiciones cromatográficas recomendadas
7.5.1 Procedimiento 1: para muestras acuosas, muestras de suelo o desechos y muestras de gas de chimenea
recolectadas por el Método 0011.
Columna: C18, 4,6 mm x 250 mm DI, tamaño de partícula de 5 µm
Gradiente de fase móvil: Acetonitrilo/agua 70/30 (v/v), mantener durante 20 min.
Acetonitrilo/agua 70/30 hasta acetonitrilo al 100 % en 15 min. Acetonitrilo
al 100% durante 15 min.
Tasa de flujo: 1,2 ml/min
Detector: Ultravioleta, operado a 360 nm
Volumen de inyección: 20 µL
7.5.2 Procedimiento 2 Para muestras de aire ambiente recolectadas por el Método 0100.
Columna: Dos columnas de HPLC, 4,6 mm x 250 mm de DI, (Zorbax ODS o equivalente)
en serie
Gradiente de fase móvil: 60/40 CH CN/HO,
3 mantener
2 durante 0 min.
60/40 a 75/25 CH CN/HO,
3 linealmente
2 en 30 min. 75/25 a
100% CH CN, linealmente
3 en 20 min.
100% CH CN
3 durante 5 minutos.
100% a 60/40 CH CN/HO,
3 linealmente
2 en 1 min.
60/40 CH CN/HO
3 durante
2 15 minutos.
Detector: Ultravioleta, operado a 360 nm
Tasa de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyección de muestra: 25 µL (sugerido)
NOTA: Se recomienda a los analistas que ajusten sus sistemas de HPLC para optimizar las condiciones
cromatográficas para sus necesidades analíticas particulares. La separación de acroleína, acetona
y propionaldehído debe ser un criterio mínimo de optimización en el Procedimiento 2.

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7.5.3 Filtrar y desgasificar la fase móvil para eliminar los gases disueltos, utilizando el siguiente procedimiento:
7.5.3.1 Filtrar cada solvente (agua y acetonitrilo) a través de una malla de poliéster de 0.22 µm
filtro de membrana, en un aparato de filtración por succión todo de vidrio y PTFE.
7.5.3.2 Desgasifique cada solución filtrada purgándola con helio durante 10 a 15 minutos (100 ml/
min) o calentándola a 60 °C durante 5 a 10 minutos en un matraz Erlenmeyer cubierto con un vidrio de reloj.
Se debe colocar un restrictor de contrapresión constante (350 kPa) o 15 30 cm de tubería de PTFE de 0,25
mm de DI después del detector para eliminar la desgasificación de la fase móvil.
7.5.3.3 Coloque los componentes de la fase móvil en sus respectivos depósitos de solventes de
HPLC y programe el sistema de gradiente de acuerdo con las condiciones enumeradas en la Sec.
7.5.2. Permita que el sistema bombee durante 20 a 30 minutos a una velocidad de flujo de 1,0 ml/min con la
relación de mezcla de solvente inicial (60 %/40 % 3CH CN/HO).
2 Muestre la salida del detector en un registrador
de gráfico de tira o dispositivo de salida similar para establecer una línea de base estable.
7.6 Calibración
7.6.1 Establecer las condiciones de operación cromatográfica líquida para producir un tiempo de retención
similar al indicado en la Tabla 1 para la derivatización y extracción líquidosólido o en la Tabla 2 para la derivatización
y extracción líquidolíquido. Para la determinación de las ventanas de tiempo de retención, consulte la Sec. 7.5 del
Método 8000. Las condiciones cromatográficas sugeridas se proporcionan en la Sec. 7.5.
7.6.2 Procesar cada solución estándar de calibración mediante derivatización y extracción,
usando el mismo procedimiento empleado para el procesamiento de muestras (Secs. 7.3.4 o 7.3.5).
7.6.3 Analice un blanco de solvente para asegurarse de que el sistema esté limpio y libre de interferencias.
NOTA: Se debe permitir que las muestras y los estándares alcancen la temperatura ambiente antes del análisis.
7.6.4 Analice cada estándar de calibración procesado utilizando las condiciones cromatográficas enumeradas
en la Sec. 7.5 y tabule el área del pico frente a la concentración de la solución de calibración en µg/L.
7.6.5 Tabular el área del pico junto con la concentración estándar inyectada para determinar el factor de
calibración (FC) para el analito en cada concentración (ver Sec. 7.8.1 para las ecuaciones).
El porcentaje de desviación estándar relativa (% RSD) de la CF media de los estándares de calibración debe ser # 20
por ciento o se deberá realizar una verificación del sistema. Si una verificación de calibración después de la verificación
del sistema no cumple con los criterios, se deberá realizar una recalibración.
Si la recalibración no cumple con los criterios establecidos, se deben realizar nuevos estándares de calibración.
7.6.6 La curva de calibración de trabajo debe verificarse todos los días, antes y después de realizar los análisis,
analizando uno o más estándares de calibración. El factor de calibración obtenido debe estar dentro del ± 15 por
ciento del factor de calibración establecido inicialmente o se deberá realizar una verificación del sistema. Si una
verificación de calibración después de la verificación del sistema no cumple con los criterios, el sistema debe ser
recalibrado.

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7.6.7 Después de 10 análisis de muestras o menos, se debe volver a analizar uno de los estándares de
calibración para garantizar que los factores de calibración derivados de DNPH permanezcan dentro de ± 15 % de los
factores de calibración originales.
7.7 Análisis de muestras
7.7.1 Analizar las muestras por HPLC, utilizando las condiciones establecidas en la Sec. 7.5. Para los analitos
del Procedimiento 1, las Tablas 1 y 2 enumeran los tiempos de retención y los MDL que se obtuvieron en estas
condiciones. Para los analitos del Procedimiento 2, consulte la Figura 3 para el cromatograma de muestra.
7.7.2 Si el área del pico excede el rango lineal de la curva de calibración, se debe usar un volumen de inyección
de muestra más pequeño. Alternativamente, la solución final se puede diluir con acetonitrilo y volver a analizar.
7.7.3 Después de la elución de los analitos objetivo, calcule la concentración de analitos encontrados en las
muestras utilizando las ecuaciones que se encuentran en la Sec. 7.8 o el método de muestreo específico utilizado.
7.7.4 Si la medición del área del pico se ve impedida por la presencia de
interferencias, se requiere una mayor limpieza.
7.8 Cálculos
7.8.1 Calcule cada factor de calibración, factor de calibración medio, desviación estándar y
porcentaje de desviación estándar relativa de la siguiente manera:
FC ' Área de pico del compuesto en el estándar
Concentración del Compuesto Inyectado (en ug/L)
norte
jCFi _
i'1
significa CF 'CF'
norte
norte
2
j (CFi y CF)
i'1
DSR ' × 100
Dakota del Sur
DAKOTA DEL SUR '
n&1 FC
dónde:
__
CF = Factor de calibración medio utilizando las 5 concentraciones de calibración.
CFi = Factor de calibración para el estándar de calibración i (i = 15).
RSD = Desviación estándar relativa de los factores de calibración.
norte = Número de estándares de calibración.
7.8.2 Calcular las concentraciones en muestras líquidas de la siguiente manera:
(Área del pico de la muestra) × 100
Concentración de aldehídos (µg/L) '
FC × vs.

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dónde:
__
CF = Factor de calibración medio del analito.
Vs = Número de mL de muestra (sin unidades).
7.8.3 Calcular la concentración en muestras sólidas de la siguiente manera:
(Área del pico de la muestra) × 100
Concentración de aldehídos (µg/g) '
CF × vex
dónde:
__
CF = Factor de calibración medio del analito.
Vex = Número de ml de alícuota de líquido de extracción (sin unidades).
7.8.4 Calcular la concentración de formaldehído en muestras de gas de chimenea (Método 0011) de la
siguiente manera: (Procedimiento 1)
7.8.4.1 Cálculo del formaldehído total
Para determinar el formaldehído total en mg, utilice la siguiente ecuación:
(g/mol de formaldehído) × 10 y 3 l/ml
mg totales de formaldehído ' Cd × V × DF × (g/mol
derivado de DNPH)
dónde:
Cd = concentración medida de derivado de DNPHformaldehído, mg/L
V = volumen de extracto orgánico, mL
DF = factor de dilución
7.8.4.2 Concentración de formaldehído en el gas de chimenea
Determine la concentración de formaldehído en el gas de chimenea usando la siguiente ecuación:
K × (formaldehído total en mg)
CF en mg/m 3 '
Máquina virtual (estándar)
dónde:
K = 35,31 pies/m 3
3
3
, si Vm(std) se expresa en unidades inglesas
= 1,00 m/m 3, si Vm(std) se expresa en unidades métricas
Vm(std) = volumen de muestra de gas medido por un medidor de gas seco, corregido a
condiciones estándar, dscm (dscf)
7.8.5 Cálculo de la concentración de formaldehído y otros carbonilos de interior
muestreo de aire por el Método 0100. (Procedimiento 2)
7.8.5.1 La concentración del analito objetivo "a", en el aire en condiciones estándar (25EC y 101,3
kPa), Concstd en ng/L, puede calcularse usando la siguiente ecuación:

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(Área)(Vol)(MW)(1000
a a ng/ug)
a
en ng/L '
Conc a, × DF
estándar
(RF)(MWd)(VTotStd )(1000 mL/L)
dónde:
Área a =Área del pico de la muestra para el analito "a"
__
CF = Factor de calibración medio para el analito "a" de la calibración en µg/L. (Ver Sec.
7.8.1)
Vola = Volumen total del eluato del cartucho de muestra (mL)
MWa = Peso molecular del analito "a" en g/mol MWd = Peso
molecular del derivado DNPH del analito "a" en g/mol V = Volumen total de aire
muestreado
TotStd convertido a condiciones estándar en litros (L). (Para calcular la concentración
en las condiciones de muestreo, use Vtot.) (Ver Sec. 9.0 del Método 0100)
DF = Factor de dilución para el eluato del cartucho de muestra, si lo hay. Si no hay
dilución, DF = 1
7.8.5.2 La concentración objetivo del analito "a" en condiciones estándar puede ser
convertido a partes por billón por volumen, Conc en ppbv, usando
a la siguiente ecuación:
(Conca,estándar )(22.4)
Concentración
a
en ppbv '
(MW )a
dónde:
Conca,std = Concentración de "a", en condiciones estándar, en ng/L 22,4
= Volumen de la ley de los gases ideales (22,4 nL de gas = 1 nmol, en condiciones
estándar)
MWa = Peso molecular del analito "a" en g/mol (o ng/nmol)
8.0 CONTROL DE CALIDAD
8.1 Consulte el Capítulo Uno y el Método 8000 para conocer los procedimientos específicos de control de calidad (QC).
Cada laboratorio debe mantener un programa formal de aseguramiento de la calidad. El laboratorio también debe mantener
registros para documentar la calidad de los datos generados.
8.2 Los procedimientos de control de calidad necesarios para evaluar el funcionamiento del sistema HPLC se
encuentran en el Método 8000, Sec. 7.0 e incluyen evaluación de ventanas de tiempo de retención, verificación de calibración
y análisis cromatográfico de muestras.
8.3 Demostración inicial de competencia: cada laboratorio debe demostrar competencia inicial con cada combinación
de preparación de muestras y métodos determinativos que utilice, generando datos de exactitud y precisión aceptables para
los analitos objetivo en una matriz limpia. El laboratorio también debe

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repita las siguientes operaciones cada vez que se capacite a nuevo personal o se realicen cambios significativos en la
instrumentación. Ver Método 8000, Sec. 8.0 para obtener información sobre cómo realizar esta demostración.
8.4 Control de calidad de muestras para preparación y análisis: el laboratorio también debe contar con procedimientos
para documentar el efecto de la matriz en el desempeño del método (precisión, exactitud y límite de detección). Como mínimo,
esto incluye el análisis de muestras de control de calidad, incluido un método en blanco, una matriz, un duplicado y una muestra
de control de laboratorio (LCS) en cada lote analítico.
8.4.1 La documentación del efecto de la matriz debe incluir el análisis de al menos una muestra de matriz y un
duplicado de muestra sin enriquecer o un par de duplicados de matriz/punta de matriz.
La decisión de preparar y analizar muestras duplicadas o un duplicado de la matriz/punta de la matriz debe basarse en el
conocimiento de las muestras en el lote de muestras. Si se espera que las muestras contengan los analitos objetivo,
entonces los laboratorios pueden usar un análisis de matriz y un análisis duplicado de una muestra de campo sin análisis.
Si no se espera que las muestras contengan los analitos objetivo, los laboratorios deben utilizar un par duplicado de pico
de matriz y pico de matriz. Cada lote de muestras recolectadas por el método 0011 incluirá una muestra para usar como
muestra de matriz de picos.
Debido al alto costo de obtener muestras del Método 0011 y la desaconsejabilidad de dividir las muestras, será aceptable
usar el valor promedio de las otras muestras en el lote en lugar del análisis de un duplicado de matriz adicional sin
enriquecimiento.
8.4.2 Se debe incluir una muestra de control de laboratorio (LCS) con cada lote analítico.
El LCS consta de una alícuota de una matriz limpia (control) similar a la matriz de la muestra y del mismo peso o volumen.
El LCS se enriquece con los mismos analitos en las mismas concentraciones que el enriquecimiento de la matriz. Cuando
los resultados del análisis de picos de matriz indican un problema potencial debido a la propia matriz de muestra, los
resultados de LCS se utilizan para verificar que el laboratorio puede realizar el análisis en una matriz limpia.
8.4.3 Consulte la Tabla 4 para conocer los límites de aceptación de control de calidad derivados del método entre laboratorios.
estudio de validación del Método 8315.
8.4.4 Ver Método 8000, Sec. 8.0 para obtener detalles sobre cómo llevar a cabo el control de calidad de la muestra
procedimientos de preparación y análisis.
8.5 Se recomienda que el laboratorio adopte prácticas de garantía de calidad adicionales para usar con este método. Las
prácticas específicas que son más productivas dependen de las necesidades del laboratorio y la naturaleza de las muestras.
Siempre que sea posible, el laboratorio debe analizar materiales de referencia estándar y participar en estudios de evaluación de
desempeño relevantes.
9.0 RENDIMIENTO DEL MÉTODO
9.1 Los MDL para el Procedimiento 1 que se enumeran en la Tabla 1 se obtuvieron usando agua reactiva libre de orgánicos
y extracción líquidosólido. Los MDL para el Procedimiento 1 enumerados en la Tabla 2 se obtuvieron mediante extracción con
agua reactiva libre de orgánicos y cloruro de metileno. Los resultados informados en las Tablas 1 y 2 se lograron utilizando
volúmenes de agua reactiva fortificada de 100 ml. Se pueden obtener límites de detección más bajos usando volúmenes de
muestra más grandes.
9.1.1 El Procedimiento 1 de este método ha sido probado para determinar la linealidad de la recuperación del agua
reactiva libre de orgánicos enriquecida y se ha demostrado que es aplicable en el rango de 50 1000 µg/L.

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9.1.2 Para generar el MDL y los datos de precisión y exactitud informados en esta sección, los analitos se
separaron en dos grupos de adición, A y B. Los cromatogramas que usan extracción líquidosólido y líquidolíquido
se presentan en las Figuras 1 (a y b) y 2 (a y b), respectivamente.
9.2 La sensibilidad del muestreo del Procedimiento 2 (Método 0100) y el análisis se enumeran en la Tabla 3.
9.3 El Método 8315, Procedimiento 1, fue probado por 12 laboratorios usando agua reactiva libre de orgánicos y
aguas subterráneas enriquecidas en seis concentraciones en el rango de 302200 µg/L. Se encontró que la exactitud y la
precisión del método estaban directamente relacionadas con la concentración del analito y eran independientes de la matriz
de la muestra. En la Tabla 5 se presentan las ecuaciones de regresión lineal ponderada de la recuperación media, calculadas
como una función de la concentración pico, así como las ecuaciones de regresión de precisión generales y de un solo
analista, calculadas como funciones de la recuperación media. Estas ecuaciones se pueden usar para estimar la recuperación
media y precisión a cualquier valor de concentración dentro del rango probado.
10.0 REFERENCIAS
1. "Estándares de seguridad y salud de OSHA, industria general" (29 CFR 1910). Seguridad Ocupacional
and Health Administration (OSHA) (revisado, enero de 1976).
11.0 SEGURIDAD
11.1 No se ha definido con precisión la toxicidad o carcinogenicidad de cada reactivo utilizado en este método; sin
embargo, cada compuesto químico debe tratarse como un peligro potencial para la salud. Desde este punto de vista, la
exposición a estos productos químicos debe reducirse al nivel más bajo posible por cualquier medio disponible. El laboratorio
es responsable de mantener un archivo actualizado de conocimiento de las reglamentaciones de OSHA con respecto al
manejo seguro de los productos químicos especificados en este método. También se debe poner a disposición de todo el
personal involucrado en el análisis químico un archivo de referencia de hojas de datos de seguridad de materiales. Se
encuentran disponibles referencias adicionales sobre la seguridad en el laboratorio.
11.2 El formaldehído se ha clasificado tentativamente como carcinógeno humano o mamífero conocido o sospechado.

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TABLA 1
a
PROCEDIMIENTO 1 LÍMITES DE DETECCIÓN DEL MÉTODO UTILIZANDO
EXTRACCIÓN LÍQUIDOSÓLIDO
Tiempo de MDL
analito retención (minutos) (µg/L)a
Formaldehído 5,3 6,2

acetaldehído 7,4 43,7b
Propanal 11,7 11,0
crotonaldehído 16,1 5,9
Butanal 18,1 6,3
ciclohexanona 27,6 5,8
Pentanal 28,4 15,3
hexanal 34,1 10,7
heptanal 35,0 10,0
Octanal 40,1 6,9
no anal 40,4 13,6
Decanal 44,1 4,4
a
El límite de detección del método (MDL) se define en el Capítulo Uno. Con la excepción del acetaldehído, todos los
MDL informados se basan en análisis de 6 a 8 réplicas de los blancos enriquecidos con 25 µg/L.
b
El MDL informado se basa en análisis de tres réplicas en blanco fortificadas a 250 µg/L.

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TABLA 2
a
PROCEDIMIENTO 1 LÍMITES DE DETECCIÓN DEL MÉTODO UTILIZANDO
EXTRACCIÓN LÍQUIDOLÍQUIDO
Tiempo de MDL
analito retención (minutos) (µg/L)a
Formaldehído 5,3 23,2

acetaldehído 7,4 110,2b
Propanal 11,7 8,4
crotonaldehído 16,1 5,9
Butanal 18,1 7,8
ciclohexanona 27,6 6,9
Pentanal 28,4 13,4
hexanal 34,1 12,4
heptanal 35,0 6,6
Octanal 40,1 9,9
no anal 40,4 7,4
Decanal 44,1 13,1
a
El límite de detección del método (MDL) se define en el Capítulo Uno. Con la excepción del acetaldehído, todos los
MDL informados se basan en análisis de 6 a 8 réplicas de los blancos enriquecidos con 25 µg/L.
b
El MDL informado se basa en análisis de tres réplicas en blanco fortificadas a 250 µg/L.

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TABLA 3
PROCEDIMIENTO 2 SENSIBILIDAD (ppb, v/v) DE MUESTREO Y ANÁLISIS PARA
COMPUESTOS DE CARBONILO EN EL AIRE AMBIENTE UTILIZANDO UN CARTUCHO ADSORBENTE
SEGUIDO POR GRADIENTE HPLCa
Volumen de muestra (L)b
Compuesto 10 20 30 40 50 100 200 300 400 500
acetaldehído 1.36 0.68 0.45 0.34 0.27 0.14 0.07 0.05 0.03 0.03 1.28 0.64 0.43 0.32 0.26 0.13 0.06
Acetona 0.04 0.03 0.03 1.29 0.65 0.43 0.32 0.26 0.13 0.06 0.04 0.03 0.03 1.07 0.53 0.36 0.27
acroleína 0.21 0.11 0.05 0.04 0.03 0.02 1.21 0.61 0.40 0.30 0.24 0.12 0.06 0.04 0.03 0.02 1,22
Benzaldehído 0,61 0,41 0,31 0,24 0,12 0,06 0,04 0,03 0,02
butiraldehído
crotonaldehído
2,5dimetil
benzaldehído 0.97 0.49 0.32 0.24 0.19 0.10 0.05 0.03 0.02 0.02 1.45 0.73 0.48 0.36 0.29 0.15 0.07
Formaldehído 0.05 0.04 0.03 1.09 0.55 0.36 0.27 0.22 0.11 0.05 0.04 0.03 0.02 1.15 0.57 0.38 0.29
hexanal 0.23 0.11 0.06 0.04 0.03 0.02 1.28 0.64 0.43 0.32 0.26 0.13 0.06 0.04 0.03 0.03 1.02
isovaleraldehído 0.51 0.51 0.34 0.20 0.20 0.20 0.10 0.05 0.03 0.03 0.02 1.02 0.51 0.34 0.34 0.25 0.20
Propionaldehído m 0.10 0.00 0.03 0.03 0.02 0.02 0.51 0.34 0.25 0.20 0.10 0.10 0.05 0.03 0.03 0.03 0.02
Tolualdehído o 1.15 0.57 0.329 0.23 0.10 0.06 0.06 0.04
Tolualdehído p
Tolualdehído
Valeraldehído
a
Los valores de ppb se miden a 1 atm y 25EC. El cartucho de muestra se eluye con 5 ml de acetonitrilo y se
inyectan 25 µl en la HPLC. El flujo de muestreo máximo a través de un SepPAK recubierto con DNPH es de
aproximadamente 1,5 l/minuto.
b
También se analizó un volumen de muestra de 1000 L. Los resultados muestran una sensibilidad de 0,01 ppb para
todos los analitos objetivo.

diciembre de 1996
TABLA 4
DATOS DE RENDIMIENTO MULTILABORATORIO
Espiga Aceptación
a d
analito Concentración x g
b
RS
C
Límites, %
Formaldehído 160 154 30.5 39 153
Propanal 160 148 22.4 50 134
crotonaldehído 160 160 34.8 35 165
Butanal 160 151 22.7 52 137
ciclohexanona 160 169 39.2 32 179
hexanal 160 151 34.6 30 159
Octanal 160 145 40.1 15 166
Decanal 160 153 40,0 21 171
a
Concentración de picos, µg/L.
b
Recuperación media calculada usando el agua reactiva libre de orgánicos, recuperación media, ecuación de
regresión lineal, µg/L.
C
Desviación estándar general calculada utilizando el agua reactiva libre de orgánicos, ecuación de regresión lineal
de desviación estándar general, µg/L.
d
Límites de confianza del 99% calculados como
(G x ± 3RS) 100/concentración de pico.

diciembre de 1996
TABLA 5
ECUACIONES DE REGRESIÓN LINEAL PONDERADA PARA LA RECUPERACIÓN MEDIA
Y PRECISIÓN (µg/L)
Conc libre de orgánicos agua subterránea

analito aplicable Rango Agua Reactiva
39.2 2450 X 0,909C + 8,79 0,870C + 14,84

Formaldehído
sR 0,185X + 1,98a 0,177X + 13,85
sr 0,093X + 5,79 0,108X + 6,24
Propanal 31,9 2000 X 0,858C + 10,49 0,892C + 22,22

sR 0,140X + 1,63 0,180X + 12,37
sr 0,056X + 2,76 0,146X + 2,08a
crotonaldehído 32.4 2030 X 0,975C + 4,36 0,971C + 2,94

sr 0,185X + 5,15 0,157X + 6,09
sr 0,096X + 1,85 0,119X 2,27
Butanal 35,4 2220 X 0,902C + 6,65 0,925C + 12,71

sr 0,149X + 0,21 0,140X + 6,89
sr 0,086X 0,71 0,108X 1,63a
ciclohexanona 31.6 1970 X 0,962C + 14,97 0,946C + 28,95

sr 0,204X + 4,73a 0,345X + 5,02
sr 0,187X + 3,46 0,123X + 7,64
hexanal 34.1 2130 X 0,844C + 15,81 0,926C + 9,16

sr 0,169X + 9,07 0,132X + 8,31
sr 0,098X + 0,37a 0,074X 0,40a
Octanal 32,9 2050 X 0,856C + 7,88 0,914C + 13,09

sr 0,200X + 11,17 0,097X + 12,41
sr 0,092X + 1,71a 0,039X + 1,14
Decanal 33.2 2080 X 0,883C + 12,00 0,908C + 6,46

sr 0,225X + 5,52 0,153X + 2,23
sr 0,088X + 2,28a 0,052X + 0,37
a
La varianza no es constante en el rango de concentración.
X Recuperación media, µg/L, sin incluir valores atípicos.
sR Desviación estándar general, µg/L, sin incluir valores atípicos. sr
Desviación estándar de un solo analista, µg/L, sin incluir valores atípicos.

diciembre de 1996
FIGURA 1a
PROCEDIMIENTO 1
PATRÓN DE PROCEDIMIENTO LÍQUIDOSÓLIDO DE ANALITO DEL GRUPO A A 625 µg/L
Tiempo de retención (min) Derivado de analito
5,33 Formaldehído
11,68 Propanal
18,13 Butanal
27,93 ciclohexanona
36,60 heptanal
42,99 no anal

diciembre de 1996
FIGURA 1b
PROCEDIMIENTO 1
PATRÓN DE PROCEDIMIENTO LÍQUIDOSÓLIDO DE ANALITO DEL GRUPO B A 625 µg/L
7,50 acetaldehído
16,68 crotonaldehído
26,88 Pentanal
32,53 hexanal
40,36 Octanal
45,49 Decanal

diciembre de 1996
FIGURA 2a
PROCEDIMIENTO 1
PATRÓN DE PROCEDIMIENTO LÍQUIDOLÍQUIDO DE ANALITO DEL GRUPO A A 625 µg/L
5,82 Formaldehído
13,23 Propanal
20,83 Butanal
29,95 ciclohexanona
37,77 heptanal
43,80 no anal

diciembre de 1996
FIGURA 2b
PROCEDIMIENTO 1
PATRÓN DE PROCEDIMIENTO LÍQUIDOLÍQUIDO DE ANALITO DEL GRUPO B A 625 µg/L
7,79 acetaldehído
17,38 crotonaldehído
27,22 Pentanal
32,76 hexanal
40,51 Octanal
45,62 Decanal

diciembre de 1996
FIGURA 3
PROCEDIMIENTO 2
SEPARACIÓN CROMATOGRAFICA DE LOS DERIVADOS DE DNPH DE
15 COMPUESTOS DE CARBONILO
Identificación de picos
Número Compuesto Concentración (ng/µL)
Formaldehído 1.140
1 acetaldehído 1.000
2 acroleína 1.000
3 Acetona 1.000
4 Propanal 1.000
5 crotonaldehído 1.000
6 Butanal 0.905
7 Benzaldehído 1.000
8 isovaleraldehído 0.450
9 Pentanal o 0.485
10 Tolualdehído m 0.515
11 Tolualdehído p 0.505
12 Tolualdehído 0.510
13 hexanal 1.000
14 15 2,4dimetilbenzaldehído 0.510

diciembre de 1996
MÉTODO 8315A
DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS DE CARBONILO
POR CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTA RENDIMIENTO (HPLC)

diciembre de 1996
MÉTODO 8315A
continuación

diciembre de 1996
MÉTODO 8315A
continuación

diciembre de 1996
MÉTODO 8315A
continuación

diciembre de 1996
MÉTODO 8315A
continuación

diciembre de 1996
APÉNDICE A
RECRISTALIZACIÓN DE 2,4DINITROFENILHIDRAZINA (DNPH)
NOTA: Este procedimiento debe realizarse en una campana debidamente ventilada. La inhalación de acetonitrilo puede
provocar irritación de la nariz y la garganta (exposición breve a 500 ppm) o efectos más graves a concentraciones
más altas y/o exposiciones más prolongadas.
A.1 Prepare una solución saturada de DNPH hirviendo el exceso de DNPH en 200 ml de acetonitrilo durante
aproximadamente 1 hora.
A.2 Después de 1 hora, retire y transfiera el sobrenadante a un vaso de precipitados tapado en una placa caliente y
deje que se enfríe gradualmente a 40 a 60°C. Mantenga este rango de temperatura hasta que el 95% del solvente se haya
evaporado, dejando cristales.
A.3 Decantar la solución al desecho y enjuagar los cristales restantes dos veces con tres veces
su volumen aparente de acetonitrilo.
A.4 Transfiera los cristales a un vaso de precipitados limpio, agregue 200 ml de acetonitrilo, caliente hasta que hierva
y deje que los cristales crezcan lentamente entre 40 y 60 °C hasta que se haya evaporado el 95 % del solvente. Repita el
proceso de enjuague como en la Sec. A.3.
A.5 Tomar una alícuota del segundo enjuague, diluir 10 veces con acetonitrilo, acidificar con 1 mL de ácido perclórico
3,8 M por 100 mL de solución de DNPH y analizar con HPLC como en la Sec. 7.0 para el Procedimiento 2. Un nivel aceptable
de impurezas es inferior a 0,025 ng/µL de formaldehído en el reactivo DNPH recristalizado o por debajo del nivel de
sensibilidad (ppb, v/v) indicado en la Tabla 3 para el volumen de muestra anticipado.
A.6 Si el nivel de impurezas no es satisfactorio, pipetee la solución para desecharla, repita la recristalización como
en la Sec. A.4 pero enjuague con dos porciones de 25 mL de acetonitrilo. Preparar y analizar el segundo enjuague como en
la Sec. A.5.
A.7 Cuando el nivel de impurezas sea satisfactorio, coloque los cristales en una botella de reactivo de vidrio, agregue
otros 25 ml de acetonitrilo, tape y agite la botella. Utilice pipetas limpias cuando extraiga la solución madre saturada de DNPH
para reducir la posibilidad de contaminación de la solución.
Mantenga solo un volumen mínimo de la solución saturada adecuada para la operación diaria para minimizar el desperdicio
del reactivo purificado.

diciembre de 1996

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5.5.7 Ácido cítrico, CH O 8 8 7 , solución 1,0 M.

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Formaldehído 5,3 6,2

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Formaldehído 5,3 23,2

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Compuesto 10 20 30 40 50 100 200 300 400 500

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Formaldehído 160 154 30.5 39 ­153

Propanal 160 148 22.4 50 ­134

crotonaldehído 160 160 34.8 35 ­165

Butanal 160 151 22.7 52 ­137

ciclohexanona 160 169 39.2 32 ­179

hexanal 160 151 34.6 30 ­159

Octanal 160 145 40.1 15 ­166

Decanal 160 153 40,0 21 ­171

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Conc libre de orgánicos agua subterránea

39.2 ­ 2450 X 0,909C + 8,79 0,870C + 14,84

Propanal 31,9 ­ 2000 X 0,858C + 10,49 0,892C + 22,22

crotonaldehído 32.4 ­ 2030 X 0,975C + 4,36 0,971C + 2,94

Butanal 35,4 ­ 2220 X 0,902C + 6,65 0,925C + 12,71

ciclohexanona 31.6 ­ 1970 X 0,962C + 14,97 0,946C + 28,95

hexanal 34.1­ 2130 X 0,844C + 15,81 0,926C + 9,16

Octanal 32,9 ­ 2050 X 0,856C + 7,88 0,914C + 13,09

Decanal 33.2 ­ 2080 X 0,883C + 12,00 0,908C + 6,46

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Número Compuesto Concentración (ng/µL)

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Formaldehído 160 154 30.5 39 153

Propanal 160 148 22.4 50 134

crotonaldehído 160 160 34.8 35 165

Butanal 160 151 22.7 52 137

ciclohexanona 160 169 39.2 32 179

hexanal 160 151 34.6 30 159

Octanal 160 145 40.1 15 166

Decanal 160 153 40,0 21 171

CD ROM 8315A 22 Revisión 1

39.2 2450 X 0,909C + 8,79 0,870C + 14,84

Propanal 31,9 2000 X 0,858C + 10,49 0,892C + 22,22

crotonaldehído 32.4 2030 X 0,975C + 4,36 0,971C + 2,94

Butanal 35,4 2220 X 0,902C + 6,65 0,925C + 12,71

ciclohexanona 31.6 1970 X 0,962C + 14,97 0,946C + 28,95

hexanal 34.1 2130 X 0,844C + 15,81 0,926C + 9,16

Octanal 32,9 2050 X 0,856C + 7,88 0,914C + 13,09

Decanal 33.2 2080 X 0,883C + 12,00 0,908C + 6,46

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