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Prctica nmero 1 Clulas Procariontes y Eucariontes Nombres de los alumnos:___________________________,___________________________.

____________ _______________________________,____________________________________,_____ Objetivo Durante y al trmino de la prctica el estudiante: Identificar y distinguir las diferencias entre organismos procariotes y eucariotes. Identificar con ayuda de tcnicas de coloracin, los principales organelos de las clulas eucariontes y procariotes. Desarrollar las habilidades y destrezas en el manejo del material y equipo de laboratorio, y har observaciones precisas y confiables. Adquirir la destreza en el uso del microscopio ptico. Aprender las tcnicas de preparacin de frotis, de fijacin y coloracin ms utilizadas en el estudio microscpico de los mocroorganismos. Introduccin Debido al pequeo tamao de las bacterias, se requiere de un microscopio para su descripcin morfolgica. El microscopio es un instrumento ptico que amplifica la imagen de los objetos pequeos. En la actualidad existe un gran nmero de microscopios, pero todos parten del mismo principio: mediante un sistema de lentes y de iluminacin se logran hacer visibles organismos y objetos microscpicos, ya que puede aumentar su tamao de cien a cientos de miles de veces. Los microscopios pticos actuales surgieron a principios del siglo XIX y su caracterstica principal es que son compuestos, lo cual quiere decir que tienen dos lentes uno ocular y un objetivo. Las fuentes de luz que se emplean para este tipo de microscopios son diversas y de ah surge una gran variedad de tipos de microscopios pticos: Microscopio ptico de campo claro Microscopio confocal Microscopio ptico de contraste de fases Microscopio ultravioleta Microscopio de fluorescencia Microscopio de luz polarizada. Todos los microscopios pticos tienen los siguientes componentes Sistema ptico: Objetivo: Lente situada cerca de la preparacin. Soporte: Mantiene la parte ptica. Tiene dos Ampla la imagen de sta. partes: el pie o base y el brazo. Ocular: Lente situada cerca del ojo del Platina: Lugar donde se coloca la preparacin. observador. Ampla la imagen del objetivo. Cabezal: Contiene los sistemas de lentes Condensador: Lente que concentra los rayos oculares. Puede ser monocular o binocular. luminosos sobre la preparacin. Revlver: Contiene los sistemas de lentes Diafragma: Regula la cantidad de luz que entra en objetivos. Permite, al girar, cambiar los el condensador. objetivos. Foco: Dirige los rayos luminosos hacia el Tornillos de enfoque: Macromtrico que aproxima condensador. el enfoque y micromtrico que Sistema mecnico consigue el enfoque correcto. Debido al pequeo tamao de las bacterias, se requiere de un microscopio para su descripcin morfolgica. Una vez desarrollado el microscopio, los bilogos comenzaron a estudiar las clulas. Descubrieron dos tipos bsicos de ellas: procariotas y eucariotas, esto dependiendo de su estructura interna. Los organismos que estn conformados por estos tipos de clulas se llaman procariotes y eucariotes (procariote y eucariote significan antes del ncleo y ncleo verdadero respectivamente). Los procariotes son organismos cuyas estructuras celulares internas carecen de membranas que los

rodeen. La mayora de los organismos procariotes son unicelulares, como las bacterias. Los eucariotes, son organismos cuyas clulas tienen estructuras internas membranosas. Estas estructuras reciben el nombre de organelos. Cada organelo tiene una membrana que lo rodea, tal que lo asla del resto de la clula. El organelo ms grande que se conoce es el ncleo, que contiene el cido desoxi-ribonuclico, ADN, de la clula y que coordina las funciones celulares (Biggs)1. La diferencia ms grande entre las clulas procariotas y las eucariotas es que el ADN de las primeras no est contenido en el ncleo, sino en una regin limitada que se denomina rea nuclear o nucloide, sin membrana, adems de no contener otros organelos membranosos. Sin embargo poseen membrana plasmtica que limita el contenido de la clula a un compartimiento interno. Algunos de los organelos membranosos de las clulas eucariotas son los cloroplastos o las mitocondrias entre otros. Los numerosos organelos especializados de las clulas eucariotas, les permiten superar algunos de los problemas relacionados con el tamao de las clulas, por lo que las eucariotas son ms grandes que las procariotas (Solomon)2.

Material de laboratorio Microscopio ptico 1 Mechero de Bunsen o lmpara de alcohol 1 Porta y cubreobjetos 3 Portaobjetos de gota suspendida 1 Asa bacteriolgica 1 Aguja de diseccin 1 Gotero Hisopos Papel seda Pao limpio y seco Material Biolgico y Reactivos Cultivo de bacterias (yogurt casero)

Cultivo de protozoarios (agua estancada) Muestra de epitelio bucal Frasco gotero con azul de metileno o violeta de genciana Frasco gotero con fuchsina Frasco gotero con alcohol puro Frasco gotero con xilol Frasco gotero con agua Aceite de inmersin Medidas de seguridad Bata bien abotonada Lentes

PROCEDIMIENTO:(observacin procariontes) Preparacin de frotis 1. Los portaobjetos deben estar limpios y libres de grasa. Lavarlos con detergente y posteriormente con alcohol y secados con una toalla de papel. Marcar cada portaobjeto a ser utilizado con el nombre del microorganismo a ser observado: (improvisado en el laboratorio,describirlo ms adelante detalladamente) 2. Prender el mechero y esterilizar el asa en la flama del mechero hasta que se ponga al rojo vivo. 3. Dejar enfriar el asa para evitar que al tomar la muestra los microorganismos sean destruidos. Despus acercar al mechero el tubo de cultivo, quitarle el tapn y flamear rpidamente la boca del mismo. Introducir el asa en el tubo de cultivo y tomar cuidadosamente la muestra. 4. Para el caso de cultivos lquidos, colocar la muestra en el centro del portaobjetos, extenderla suavemente en un rea circular de 2 cm de dimetro aproximadamente y esterilizar nuevamente el asa. Dejar secar el frotis al aire. 5. Si el cultivo es de medio slido, previamente se colocar en el centro del portaobjetos una gota de agua destilada en la que se mezcla una pequea muestra del cultivo que se toma siguiendo las indicaciones del paso 3. Extender suavemente y dejar secar al aire. 6. Para el caso del frotis de mejilla, frota con un palillo el interior de tu mejilla y frota despus el pasillo sobre la gota de agua. b) Fijacin del frotis 1. Fijar los frotis de cultivos lquidos con dos gotas de etanol absoluto y dejar secar al aire (hacer esto en zonas alejadas al mechero).

2. Los frotis de cultivos slidos, completamente secos se fijarn con calor. Para esto se pasar el frotis rpidamente 2-3 veces en el interior de la parte amarilla de la flama del mechero. 3. Palpar la parte inferior del portaobjetos con el dorso de la mano izquierda para enfriar y comprobar que no hubo sobrecalentamiento. c) Tincin simple(procariontes y eucariontes) Aade unas gotas de los colorantes pertinentes a las preparaciones y espera al menos 15 segundos. Lava el exceso de colorante con la pizeta, sobre tu recipiente de plstico. Deja secar la preparacin al aire. d) obtencin de muestras frescas(eucariontes)

cortar un fragmento del material muestra(hongo, animal, planta ) con la navaja de rasurar bajo un microscopio estereoscpico, lo ms delgado posible colocar la muestra en un portabjetos y seguir el procedimiento de la tincin simple.

Cubrir la muestra con un cubreobjetos y sellar s es el caso con esmalte de uas para preservar. e) Observacin al microscopio Colocar los portaobjetos en la platina y empezar a localizar la preparacin con el objetivo de 10X, posteriormente pasar al de 40X. Para la observacin con el objetivo de 100X, colocar previamente una pequea gota de aceite de inmersin sobre la preparacin. Cualquier paso incorrecto en el uso del microscopio ser sancionado. RESULTADOS: describe brevemente los resultados obtenidos. A continuacin dibuja cada una de las observaciones obtenidas en clase (ejemplo:)

Discusin: Si no pudiste observar nada, discute por qu (fallas del microscopio, problemas con las preparacionesetc.) Conclusiones De los resultados obtenidos investiga cules son las estructuras celulares o molculas responsables de la tincin simple realizada. Da ejemplos de otros colorantes que podran utilizarse. O bsca cada una de las partes que observaste Qu es el aceite de inmersin? Por qu se utiliza? Cules son las desventajas o limitaciones de la tincin simple? Bibliografa: