PURIFICACION DEL DNA EN PEQUEÑA ESCALA (mini prep) (Maniatis 1.

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1- Las colonias blancas obtenidas a partir de la transformación de células E. Coli

fueron aisladas y crecidas con agitación, en tubos cónicos, conteniendo 3 ml de medio
líquido LB con ampicilina 50 µg/ml a 37ºC durante 16 hs.
2- Tomar 1,5 ml del cultivo trasvasarlo a un eppendorf de 1,5 ml, centrifugar a
máxima velocidad.
3- Descartar el sobrenadante y resuspender pellet en 100 µl de "buffer" Tris-EDTA-
Glucosa (TEG), con vortex suave.
TEG:
50 mM Glucosa
25 mM Tris-Cl (pH 8)
10 mM EDTA (pH 8) Autoclavar 15 min. Mantener a 4ºC
Para 50 ml: 0,45 gr de Glucosa, 1,25 ml Tris 1M pH: 8 y 1 ml EDTA 0,5M

4- Adicionar 200 µl de la solución II. Mezclar por inversión.

Solucion II:
Na(OH) 0,2N
SDS 1%
Preparar en el momento a partir de stock

5- Agregar 150 µl de una solución GAA. Invertir varias veces e incubar en hielo
durante 5 minutos.
GAA:
AcK 5M 60 ml
Ácido acético glacial 11,5 ml
Agua 28,5 ml
Para 50 ml: 30 ml AcK 5M, ác. ac. glacial 5,75 ml y agua 14,25 ml