Micropropagación de plantas

MEDIOS LÍQUIDOS Y SISTEMAS AVANZADOS DE MICROPROPAGACIÓN
Características de los medios líquidos Hiperhidricidad Bioreactores Reactores de Inmersión Temporaria

Dpto. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA

Micropropagación de plantas

Medios líquidos
• Menores costos • Mejor calidad de planta • Mecanización del proceso

Técnica ideal para producción masiva de plantas

Dpto. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA

Micropropagación de plantas

Ventajas

• • • • •

Mayores tasas de crecimiento Mayor superficie de contacto

Toma de nutrientes y reguladores mas eficiente Dispersión mas efectiva de metabolitos tóxicos Facilidad de limpieza del material de vidrio

Dpto. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA

Micropropagación de plantas

Medios líquidos
• • • • Formación de una capa estacionaria (“Nernst”). Tasa de absorción de iones limitada. Espesor depende de la agitación. Medios líquidos estáticos/agitación

Curtis, 2005. Dpto. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA

Dpto. • • Curtis.Micropropagación de plantas Medios líquidos • • • Concentración de oxígeno. principal factor limitante del crecimiento. Oxidación de azúcares determinante principal de la demanda biológica de oxígeno (BOD). Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA . Heterotrofia de tejidos vegetales en cultivo. 2005. Principal demanda: meristemos. Baja solubilidad del oxígeno en el medio de cultivo.

Dpto. Rotor para tubos de ensayo.Micropropagación de plantas Medios líquidos Shaker rotatorio para Erlenmeyer. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA .

Micropropagación de plantas Principal problemática: VITRIFICACIÓN O HIPERHIDRICIDAD Desorden fisiológico. metabólico y morfológico en condiciones de cultivo in vitro. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA . Dpto.

Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA . se quiebran fácilmente •Capacidad de enraizamiento reducida o nula Dpto.Micropropagación de plantas Características de los brotes hiperhídricos: •Apariencia turgente •Superficie acuosa •Órganos translúcidos •Coloración menos verde •Brotes frágiles.

Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA .Micropropagación de plantas Condiciones adversas • • Altas concentraciones de citoquininas Alta HR en el recipiente de cultivo • • Recipientes herméticos Bajas concentraciones de agar Dpto.

elongadas.Principales síntomas Micropropagación de plantas Morfológicos Entrenudos cortos Arrosetamiento Tallos de mayor diámetro Hojas mas gruesas. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA . arrugadas Hojas translúcidas y quebradizas Menor peso seco Color anormal Anatómicos Epidermis y cutícula delgadas Grandes espacios intercelulares Hipertrofia del parénquima cortical y médular Ausencia de parénquima en empalizada Menor desarrollo del sistema vascular Estomas anormales y en menor número Bioquímicos Hipolignificación Menor contenido de celulosa Mayor actividad de glutamato deshidrogenasa Menor contenido de Ca+2 Mayor absorción de agua Menor contenido de clorofila Menor capacidad fotosintética Dpto.

Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA .Micropropagación de plantas Planta normal Planta vitrificada Vaccinium corymbosum Dpto.

Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA .Micropropagación de plantas NORMAL VITRIFICADO Achyrocline flaccida Dpto.

Micropropagación de plantas NORMAL VITRIFICADO NORMAL VITRIFICADO Dpto. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA .

coumárico P-coumarato:CoA ligasa P-coumaryl-CoA FLAVONOIDES LIGNINA Dpto. 1993) . Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA (Adaptado de George. cinamico Ác.Micropropagación de plantas HIPOLIGNIFICACIÓN VÍA DE SÍNTESIS DE LIGNINA Y FLAVONOIDES REDUCIDA POR VITRIFICACIÓN Phenylalanine Ác.

Micropropagación de plantas Cambios morfológicos y anatómicos en Vanilla planifolia Dpto. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA Sreedhar et al. .. 2009.

. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA Sreedhar et al. . 2009.Micropropagación de plantas Cambios morfológicos y anatómicos en Vanilla planifolia Tejidos vasculares Endodermis Tejidos vasculares Parénquima en empalizada Dpto.

. Dpto. C) Aumento de B. D) Estructura de estomas.Micropropagación de plantas Cambios morfológicos y anatómicos en Vanilla planifolia A) Superficie del tallo. 2009.. B) Sistema vascular. mostrando engrosamiento de las paredes de los vasos. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA Sreedhar et al.

Aireación cultivo ETILENO HR Elasticidad Pared Celular Disponibilidad PGRs Densidad del medio Disponibilidad nutrientes Estrés aireación Constituyentes Pared Celular Efecto sobre microtúbulos Actividad enzimática Pared Celular Producción etileno Propiedades mecánicas Pared Celular Orientación microfibrillas Forma de la célula Engrosamiento Pared Celular Tamaño de la célula Funcionamiento Célula Guarda Aerénquima e hiperhidratación VITRIFICACIÓN Dpto. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA .

Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA .Micropropagación de plantas Como prevenirla • Medio de cultivo: – Incrementar la concentración de agar – Disminuir concentración de citoquinina • Tapado de recipientes: – Permitir intercambio gaseoso • Condiciones ambientales: – Enfriamiento basal – Incrementar la aireación • Otras medidas Dpto.

1993) .Micropropagación de plantas HIPOLIGNIFICACIÓN COMPUESTOS QUE CONTRARESTAN LA VITRIFICACIÓN VÍA DE SÍNTESIS DE LIGNINA Y FLAVONOIDES REDUCIDA POR VITRIFICACIÓN Phenylalanine Ác. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA (Adaptado de George. coumárico P-coumarato:CoA ligasa P-coumaryl-CoA Phloridzin FLAVONOIDES LIGNINA Dpto. cinamico Phloroglucinol Ác.

Dpto.Micropropagación de plantas Bioreactores • Requerimientos fisiológicos de los tejidos vegetales pueden se incompatibles con el diseño y funcionamiento de bioreactores tradicionales. Amplia gama de diseños. Curtis. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA • • . 2005. en función del tejido a propagar. etc. etc. demanda y transferencia de O2. Basados en los mismos principios de agitación. escala de producción.

Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA .Micropropagación de plantas Bioreactores para la propagación de plantas: •De inmersión temporal: •BIT ® •RITA ® •De inmersión permanente •Nalgene® •Life reactor ®. Osmotek Dpto.

Micropropagación de plantas Bioreactor de Inmersión Temporal (BIT®) Centro de Bioplantas. Dpto. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA . Cuba.

Micropropagación de plantas Bioreactor de Inmersión Temporal (BIT®) Centro de Bioplantas. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA . Sistema BIT® Dpto. Cuba.

Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA .Micropropagación de plantas Bioreactor de Inmersión Temporal (BIT®) • • • Volumen de medio/explanto Tiempo de inmersión Frecuencia de inmersión Dpto.

Dpto. 2005.Micropropagación de plantas EJEMPLOS DE APLICACIÓN Multiplicación de Musa sp. sistema BIT® 28 días Coeficiente de multiplicación se incrementó de 2 a 8 (promedio). Escalona. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA .

Dpto. 2009. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA Nápoles et al.Micropropagación de plantas Multiplicación de Psidium guajava en BIT® Efecto del volumen de medio y frecuencia de inmersión. de 1. en todos los tratamientos. El tiempo de inmersión fue de 3 min. Se utilizaron 20 explantos por recipiente.5 litros. .

Sistema Vegetal Dpto. Biología RITA FACULTAD DE AGRONOMÍA ® . Francia.Micropropagación de plantas Reactor de Inmersión Temporal Automatico (RITA®) CIRAD.

Biología RITA FACULTAD DE AGRONOMÍA ® .Micropropagación de plantas Reactor de Inmersión Temporal Automatico (RITA®) CIRAD. Francia. Sistema Vegetal Dpto.

Micropropagación de plantas Dpto. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA .

Un contacto estrecho entre la superficie de los explantes y el medio durante la fase de inmersión. Renovación completa del aire dentro del recipiente durante cada inmersión. Protección de cada recipiente contra la contaminación por los filtros. Mejor separación de los tejidos o células bajo el efecto de las burbujas.Las principales ventajas del sistema Rita® Disminución del costo de mano de obra . Control de los procesos morfológicos debido a la frecuencia y la duración de inmersión. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA . Dpto. debido a la facilidad de manipulación de los explantes y del cambio de medio. Abolición de los riesgos de contaminación cruzada. Por capilaridad. Permite una mejor nutrición mineral. una fina película de medio se mantiene sobre los explantes. Fuerte disminución de los problemas de asfixia o vitrificación de los tejidos en comparación con una inmersión permanente. Manipulación individual fácil.

Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA . tasa de multiplicación en medio sólido: 6-7 cada 3 meses.5 contra 3. • Otros: papa. • Banana. tasa de multiplicación 11. Phalaenopsis. etc. ananá. 700 a 1000 embriones somáticos por RITA.Micropropagación de plantas EJEMPLOS DE APLICACIÓN • Café.5 en sistemas convencionales. En RITA igual tasa en 5 semanas. • Eucalyptus grandis. Dpto.

sistema RITA® Dpto.Micropropagación de plantas Multiplicación de Musa sp. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA .

Micropropagación de plantas Regeneración de frutilla transgénica por organogéneis. 2007. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA Hanhineva. Dpto. . sistema RITA.

Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA . 1997. sistema RITA. Etienne.Micropropagación de plantas Embriogénesis somática de Hevea brasiliensis. Embriones/g de callo: En medio sólido: 36 Sistema RITA: 255 Dpto.

Micropropagación de plantas Bioreactores de inmersión permanente Dpto. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA .

Micropropagación de plantas Bioreactores de inmersión permanente Nalgene® Dpto. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA .

2006. Dpto. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA Ross. . La tasa de multiplicación se incrementó de 4 a 28 (promedio). BR de inmersión permanente.Micropropagación de plantas EJEMPLOS DE APLICACIÓN Multiplicación de Vaccinium corymbosum.

2006.Micropropagación de plantas Multiplicación de Achyrocline flaccida. BR de inmersión permanente. Dpto. Ross. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA . La tasa de multiplicación se incrementó de 4 a 11 (promedio).

2006. . Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA 60 días Ross.Micropropagación de plantas RESULTADOS Explantos Instalación 30 días Dpto.

Micropropagación de plantas BIOREACTOR Tasa mult: 12/yema MEDIO SÓLIDO Tasa mult: 4/explanto 10 explantos 10 explantos 30 días 40 explantos 2 meses 30 días 480 microestacas 160 microestacas Dpto. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA .

L-1 de phloroglucinol. 2006. .Micropropagación de plantas RESULTADOS Cortes histológicos x x m m A B Cortes transversales de tallo: (A) Sin phloroglucinol. m: médula. (B) 40 mg. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA Ross. x: xilema Dpto.

. 2006. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA Ross.Micropropagación de plantas Enraizamiento Dpto.

Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA . Soporte. Osmotek Recipiente descartable de polietileno preesterilizado. Sistema airlift. purificación y humidificación del aire.Micropropagación de plantas Lifereactor ® . 1. Dpto. Accesorios para mantener esterilidad del sistema.5 o 5 litros.

Micropropagación de plantas Escalado Panax ginseng Dpto.. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA Paek et al. . 2005.

.Micropropagación de plantas Escalado a) y b) Manzana c) Chrysantemum d) Ajo e) Vid f) Bulbos de Lilium Dpto.. 2005. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA Paek et al.

Dpto.Micropropagación de plantas Embriones somáticos de Clematis sp. Biología Vegetal FACULTAD DE AGRONOMÍA .

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