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Manual de Prcticas de Hematologa

SERIE BLANCA:PRCTICA No. 7 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LEUCOCITOSIS Y DESVIACIN A LA IZQUIERDA
1.INTRODUCCIN. Un cambio en sangre perifrica que no est asociado con ningn cambio morfolgico celular pero que est asociado con enfermedad, es un incremento en las bandas. Esto puede ser referido como una " desviacin hacia la izquierda ", particularmente si formas an ms jvenes son encontradas en la circulacin. Normalmente la cuenta de neutrfilos tambin se encuentra aumentada, ya que si no es as, sto puede indicar un peor pronstico para el paciente, por lo que algunos autores se refieren a la primera circunstancia como un " cambio regenerativo hacia la izquierda ", y a la segunda , con cuenta normal baja de leucocitos, como un " cambio degenerativo hacia la izquierda ". Ocasionalmente, el aumento en la cuenta total de blancos y la aparicin de formas neutroflicas jvenes, es tan marcada, que pareciera la sangre perifrica que se analiza en pacientes con leucemia mieloctica crnica. Este exceso de salida de estas formas a la circulacin, de hecho s es debido a algn otro proceso patolgico y debe ser distinguido de leucemia. El trmino " Reaccin Leucemoide " es el indicado en esta situacin. En general, una cuenta de glbulos blancos elevada, se conoce como leucocitosis.Aunque ms frecuentemente se debe a un aumento en los neutrfilos ( neutrofilia ), no siempre es as: puede estar elevada a causa de un incremento en los linfocitos ( linfocitosis), en los eosinfilos ( eosinofilia ), y casi siempre se debe a alguna alteracin .

2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Se debern buscar tanto en el frotis sanguneo como por medio del recuento de glbulos blancos en el contador electrnico por el mtodo manual, el nmero aproximado de leucocitos en una muestra que previamente haya sido analizada y de la cual se haya reportado leucocitosis y desviacin a la izquierda. El hallazgo de un nmero aumentado de leucocitos y el de formas jvenes que incluyan principalmente formas en banda y metamielocitos, confirmarn dicho diagnstico .

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4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

ACTIVIDADES. - Reporte de resultados: _Aumento del n de cayados o bandas, que son los neutrfilos jvenes.
______Su aumento indica que en la mdula sea est aumentada su produccin por una infeccin reciente____________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 8 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON EOSINOFILIA


1.INTRODUCCIN. Como ya se ha mencionado, la elevacin de los glbulos blancos a partir de neutrfilos, es la ms comn. Sin embargo, puede haber un incremento en los eosinfilos que lleven a una leucocitosis. Aun cuando la cuenta de glbulos blancos no estuviera elevada, se podra decir que puede haber eosinofilia, y sto se determinar en base al clculo de los valores absolutos. Si los valores absolutos de los eosinfilos se encuentran por arriba de lo normal, se podra decir que hay eosinofilia. Son dos las causas ms comunes de esta condicin: las enfermedades y reacciones alrgicas, y ciertas parasitosis, sin embargo, no son las nicas.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Se analizarn muestras en las que exista el hallazgo de eosinofilia, hacindose el recuento diferencial as como la determinacin de los valores absolutos de los eosinfilos.

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con colorante de Wright

4. PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

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ACTIVIDADES. Realizar una lista de enfermedades en las que se encuentren elevados los eosinfilos. Enfermedades alrgicas y autoinmunes Asma bronquial Urticaria Edema angioneurtico Rinitis extrnseca Alergias alimentarias Periarteritis nudosa Granulomatosis de Churg-Strauss Colagenosis eosinoflica Dermatomiositis Endocarditis fibroplstica de Loffler Colitis ulcerosa Sarcoidosis Prpura anafilactoide Enfermedad del suero Infecciones y parasitosis Endocrinopatas Pnfigo Dermatitis herpetiforme Neurodermitis, dermatitis atpica Prurigos Leucemias Anemias perniciosas Enfermedad de Hodgkin Neoplasias Eosinofilia familiar de herencia recesiva Picaduras de insectos y serpientes Medicamentos

- Reporte de resultados : Aumento potencial de eosinofilos, esta indica una respuesta ante parasitos.___________ ______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 9 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON PICNOSIS Y MICROORGANISMOS INTRACELULARES
1.INTRODUCCIN. Picnosis. El ncleo del neutrfilo normalmente es algo picntico, pero pueden distinguirse la paracromatina y la cromatina.Las clulas muertas las que estn a punto de morir, sin embargo, tendrn un ncleo obscuro y redondo sin evidencia de estructura nuclear. Los lbulos pueden estar separados puede haber un nico y redondo ncleo en degeneracin. Las clulas pueden distinguirse como neutrfilas porque el citoplasma retiene el tiente rosa habitual. Estas clulas tambin pueden ser identificadas como necrobiticas. En una muestra fresca, estas clulas son evidencia de que el organismo est " perdiendo la batalla " en un paciente con infeccin; tambin pueden aparecer en pacientes que reciben quimioterapia. Estos cambios tambin pueden encontrarse como resultado de una prolongada exposicin al EDTA.

Organismos intracelulares. Esta es un tipo de inclusin muy rara de encontrar e indica la presencia del organismo infectante, ya que una sola clula que presente un microorganismo es significativo. Puede ser o bien una bacteria, bien una levadura, y puede observarse intra extracelularmente, e indica una septicemia abrumadora, de mal pronstico aunque podra ser un artificio originado por la toma de la muestra a travs de algn catter contaminado.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Se analizarn muestras en las que exista el hallazgo de picnosis y microorganismos intracelulares. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright

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4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

Picnosis

organismos intracelulares

ACTIVIDADES.

- Reporte de resultados . en la picnosis vemos una condensacin del material del ncleo celular en forma de una masa slida teida de color oscuro en una clula moribunda______ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 10 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON CAMBIOS MORFOLGICO-BENIGNOS: GRANULACIONES TXICAS, VACUOLIZACIONES, CUERPOS DE DOHLE Y AGRANULACIN CITOPLSMICA
1.INTRODUCCIN. Granulaciones Txicas. Este cambio representa la presencia de grnulos primarios no especficos, los cuales se tien de color azul-prpura con la tincin de Wright como sucede con los del promielocito. Pueden deberse al menor nmero de mitosis realizadas durante la maduracin celular. Algunas clulas pueden contener slo unos pocos grnulos, otras, pueden contener muchos. Las granulaciones txicas pueden ser vistas en una variedad de desrdenes inflamatorios txicos, como por ejemplo, en infeccin bacteriana, ataque al corazn, insuficiencia renal, gota, artritis reumatoide, as como en respuesta a una neoplasia. Una granulacin aumentada tambin puede ser vista cuando el frotis es teido por mucho tiempo. Si estos grnulos fueran realmente debidos a un proceso patolgico, no seran vistos en todas las clulas, y adems aquellas que en verdad presenten granulaciones txicas, lo harn en variedad de grados. Si todas las clulas se ven afectadas y en el mismo grado de intensidad, sto debe considerarse como un artificio del frotis. Vacuolizacin. Ya que la principal funcin de los neutrfilos es la fagocitosis, si existe actividad fagoctica aumentada, pueden haber numerosas vacuolas dentro del citoplasma como una evidencia de sto. Estas son identificadas morfolgicamente como " hoyos " dentro del citoplasma. Sin embargo, sto tambin puede ser el resultado de una exposicin prolongada al EDTA. Al igual que en las granulaciones txicas, si todas las clulas se ven afectadas en el mismo grado, debe sospecharse un artificio del frotis. La vacuolizacin puede encontrarse frecuentemente cuando el paciente tiene una infeccin bacteriana, especialmente con las bacterias pigenas . Tambin es frecuente observarlas junto con las granulaciones txicas. Cuerpos de Dhle. Estas inclusiones son a menudo encontradas junto con las granulaciones txicas y/ vacuolizacin, aunque no siempre. A veces pueden ser la nica evidencia de un proceso txico reactivo en un paciente. Los cuerpos de Dhle son pedazos de RNA residual ( retculo endoplsmico rugoso ) en el citoplasma. Tienen el caracterstico color azul tenue del RNA y se les encuentra frecuentemente cerca de la membrana citoplasmtica de la clula. En algunas clulas, pueden ser muy prominentes, y en otras, pequeos y muy tenues, y pueden pasarse por alto si el observador no tiene suficiente cuidado en la observacin. En ocasiones pueden observarse los tres tipos de cambios txicos en la misma clula.

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Agranulacin citoplsmica. En ocasiones, la nica evidencia de neutrfilos activados es una rea clara agranular en la periferia de la clula, que indica la formacin de un pseudpodo. Estas clulas tambin se distinguen por un borde citoplsmico irregular en contraste con el borde redondo usual del neutrfilo. Tambin sto puede ser visto junto con las granulaciones txicas, la vacuolizacin, y los cuerpos de Dhle, aunque cada uno de ellos puede verse individualmente, y a menudo estos cambios se asocian con aumento en las formas en banda y cuenta elevada de leucocitos, aunque no siempre. 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Se analizarn muestras con alteraciones en las que exista el hallazgo de varios cambios morfolgico-benignos. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 DESCRIPCIN Frois de sangre perifrica teido con Wright

4. PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

Granulaciones toxicas

vacuolizacion

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Cuerpos de Dhle

ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 11 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LINFOCITOS ATPICOS


1.INTRODUCCIN. El trmino " atpico ", ha sido utilizado para describir cualquier forma que vare del criterio morfolgico empleado para un linfocito normal. Debido a que varias formas son el resultado de infeccin viral, el trmino " reactivo" y el ms especfico de " virocito " han sido asociados con esta respuesta. Puede aplicarse el trmino " linfocitos variantes " ya que no todos los cambios son " reactivos " asociados con infeccin viral. La mayora de las formas variantes estn asociadas con infecciones virales, especialmente con el grupo herpes virus ( por ejemplo, el virus Epstein-Barr-la causa de mononucleosis infecciosa, citomegalovirus herpes simplex tipos 1 y 2 ), y virus de hepatitis B y C. Tambin pueden encontrarse en casos de toxoplasmosis, sfilis tuberculosis. Debido a que ocasionalmente puede encontrarse algn linfocito atpico y considerarse normal, algunos laboratorios los reportan como un porcentaje separado de leucocitos, por ejemplo, un porcentaje de linfocitos normales y un porcentaje de formas variantes. Otros pueden usar un mtodo semicuantitativo, como " 1+, 2+, 3+ " " leve, marcado severo ", para indicar su frecuencia relativa. Siempre que ms del 10% sean clasificados como variantes, el hallazgo es considerado clnicamente significativo y debe ser reportado. Otra de las formas se asemejan muy a menudo a un monocito. Son grandes, con citoplasma abundante y a menudo vacuolado, el cual puede ser ms gris, comparando con el usual color azul cielo del linfocito normal. El ncleo puede ser redondo, doblado, indentado lobulado y tiene una apariencia ms abierta y color ms tenue que lo usual. No presenta nucleolos. A veces, el citoplasma es predominantemente azul cielo, y contiene reas de un azul ms intenso, que tienden a irradiar del ncleo a concentrarse en la periferia de la clula, especialmente en donde hace contacto con las clulas que la rodean. A esta caracterstica se le conoce como basofilia radial basofilia perifrica, respectivamente. Estas clulas, como puede verse, pueden ser especialmente difciles de distinguir de los monocitos. Algunos rasgos tiles para distinguirlos es que los monocitos son clulas que empujan a otras y tienden a indentarlas cuando estn muy prximas a ellas. En cambio, los linfocitos ms fcilmente sufren esa indentacin . El ncleo del monocito, tpicamente es ms doblado lobulado, y el patrn cromatnico es ms delicado y fino. Por otro lado, si se est en duda, puede seguirse una regla general que menciona que si hay muchos linfocitos en el frotis, la clula que se sospecha ms seguramente es un linfocito tambin. En un momento dado, hay quien puede confundir estas clulas con formas malignas blastos. Debe recordarse entonces que en casos de leucemia, las clulas tienden a ser muy similares morfolgicamente, dando una apariencia montona, homognea, especialmente al observarse con pocos aumentos.En contraste, las enfermedades asociadas con formas variantes, demostrarn una apariencia muy heterognea.

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2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Se analizarn muestras en las que exista el hallazgo de linfocitos atpicos. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright

4. PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

ACTIVIDADES. - Reporte de resultados . Observe cmo las clulas rojas de la sangre o eritrocitos o glbulos rojos adoptan la forma de los linfocitos atpicos_____________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 12 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LINFOCITOS PLASMOCITOIDES


1.INTRODUCCIN. Una de las formas en que se presenta el linfocito atpico, comparte rasgos con la clula plasmtica, la cual no es encontrada normalmente en sangre perifrica. Ambas tienen un citoplasma azul muy intenso y pueden medir de 15-20 .Los dos pueden distinguirse por su patrn de cromatina nuclear. En el linfocito " plasmacitoide ", el ncleo tiene una apariencia abierta y laxa y tiene un color rojo-prpura ms tenue. Pueden verse tambin nucleolos. Esto es en contraste con la apariencia amontonada, abultada del ncleo de la clula plasmtica y su localizacin excntrica dentro de la clula. No hay una rea clara perinuclear en el linfocito plasmacitoide como la hay en la clula plasmtica. Los linfocitos plasmocitoides son comnes de encontrar en ciertas enfermedades virales como el dengue y las enfermedades exantemticas de la infancia.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Se analizarn muestras que tengan el hallazgo de linfocitos plasmocitoides. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright

4. PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

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ACTIVIDADES. - Reporte de resultados . Un linfocito plasmocitoide con un ncleo excntrico. Un linfocito plasmocitoide y un linfocito pequeo maduro___________________________ _________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 13 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON HIPERSEGMENTACIN NUCLEAR EN NEUTRFILOS
1.INTRODUCCIN. Los ncleos de los neutrfilos normalmente tienen de dos a cinco lbulos nucleares.La mayora tendrn dos tres. Si existe un aumento en las clulas con cuatro cinco lbulos, el observador debera buscar cuidadosamente clulas con ms de cinco lbulos.La presencia de una sola clula con seis distintos lbulos nucleares, puede tener significancia clnica. Por otro lado, si ms del 5% de los neutrfilos tienen cinco lbulos si la mayora tienen cuatro, sto tambin puede ser un hallazgo importante. Los neutrfilos hipersegmentados son la indicacin ms temprana en sangre perifrica de anemia megaloblstica ( por deficiencia de vitamina B12 de folatos ), y es importante que se reporten. Cuando menos deben identificarse seis lbulos distintos para que la clula sea identificada como hipersegmentada.En casos severos, pueden encontrarse clulas con nueve lbulos an ms.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Se analizarn muestras que tengan el hallazgo de hipersegmentacin nuclear en neutrfilos 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD DESCRIPCIN 1 Frotis de sangre perifrica teido con Wright

4. PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

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ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .es una anomala de los neutrfilos y eosinfilos que muestran una lobulacin mayor de lo norma__________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 14 ESTUDIO DE MDULA SEA


1.INTRODUCCIN. El estudio medular es un procedimiento especializado de gran utilidad clnica. Puede ser realizado tanto por aspirado (mielograma) como por biopsia percutnea segn las caractersticas clnicas del paciente y el diagnstico presuntivo. El estudio medular permite identificar las diferentes series hematopoyticas, estudiar el estroma medular y obtener material para estudios bacteriolgicos, micolgicos, de citometra de flujo y genticos entre otros. La decisin de solicitar un estudio de mdula sea debe basarse en la hiptesis de que los hallazgos que se esperan del estudio justifiquen someter al paciente al riesgo y la molestia, a pesar de stos ser mnimos. Los hallazgos medulares esperados (o inesperados) en parte dependen del cuadro clnico, de los hallazgos en sangre perifrica y de la informacin que se requiere en algunos casos especficos. En la actualidad el estudio medular hace parte integral del estudio sistematizado de un importante nmero de enfermedades hematolgicas, infiltrativas y neoplsicas que estn bien protocolizadas. Debido a que el aspirado de mdula sea est virtualmente libre de riesgo (excepto si se hace en el esternn) y que la biopsia medular es un procedimiento invasivo mnimo, el estudio se recomienda en todos los casos en donde se pueda justificar un probable beneficio con la informacin obtenida. Estudio medular . El tipo de procedimiento utilizado para el estudio de la mdula sea (aspirado, biopsia o ambos), depende de la sospecha clnica. En trminos generales se plantean cuatro posibilidades: Compromiso de precursores hematopoyticos con alteraciones citolgicas, como en las anemias y leucemias. En estos casos, est mejor indicado el aspirado medular o mielograma. Compromiso de las estructuras de soporte del tejido hematopoytico o del mismo hueso como en la mielofibrosis, metstasis o granulomas, o que haya disminucin del tejido hematopoytico y se requiera determinar con certeza la celularidad, como en la anemia aplstica. En estos casos est mejor indicada la biopsia medular. Fiebre de origen desconocido, en donde se debe solicitar un estudio de aspirado y biopsia. Sospecha clnica o se desee estudiar una enfermedad infecciosa por bacterias, micobacterias y hongos. En estos casos, se debe solicitar estudio de cultivos de material medular obtenido por aspirado. Algunos pacientes con coagulopata (especialmente los hemoflicos) requieren terapias de reemplazo para hacer el procedimiento cuando est indicado hacer el estudio. Como la mdula sea es un tejido blando, se pueden obtener muestras introduciendo una aguja adecuada en la mdula y aspirando con jeringa. Los sitios donde se puede obtener

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mdula sea en los adultos y nios mayores de un aos son: el esternn, las espinas ilacas superiores anterior o posterior; la cresta ilaca y las apfisis espinosas de las vrtebras. La puncin esternal, hasta donde sea posible, no se debe hacer de rutina, debido al riesgo de lesin cardiovascular. En nios menores de un ao se puede tomar material medular por aspirado en el tubrculo tibial. A partir del primer ao de vida se toma similar a la del adulto. Procedimientos especiales en el material medular Las muestras de mdula sea son coloreadas con Wright cuando son obtenidas por aspiracin y con hematoxilina-eosina, cuando es por biopsia; de acuerdo con los resultados obtenidos el hematlogo apoyado en los hallazgos de sangre perifrica y en el examen fsico, puede recurrir que tipo de procedimientos especiales estn indicados para confirmar el diagnstico.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . 1.1 Principio. Los extendidos de mdula sea se colorean con Wright siguiendo la tcnica usual. Inicialmente son observados macroscpicamente para determinar la presencia de partculas. Luego el extendido es examinado en bajo poder (10X) para apreciar la relativa cantidad de grasa y de contenido celular hematopoytico de acuerdo al cual la mdula se puede clasificar como: hipocelular, normocelular e hipercelular. Despus de la observacin en 10X el extendido se examina con objetivo de 100X localizando los campos donde se hallan las partculas y se procede al anlisis de las clulas sanguneas que habitan en la mdula sea. Se establece la relacin del nmero de las clulas blancas frente al nmero de clulas rojas nucleadas. Esta proporcin se denomina relacin mielo eritroide (M:E). Para estimar esta relacin es necesario la identificacin y tabulacin de 300 500 clulas nucleadas. Se observa aumento en la relacin mielo-eritroide, cuando se aumentan los precursores mieloides como sucede en los procesos inflamatorios agudos, leucemias o cuando se disminuyen los precursores eritroides como en la insuficiencia renal crnica. Una disminucin en la relacin mielo-eritroide se presenta cuando se disminuyen los precursores mieloides como en la anemia aplstica o cuando aumentan los precursores eritroides como en las anemias hemolticas y megaloblsticas. En forma simultnea se realiza una valoracin cuidadosa de la morfologa de las diferentes lneas celulares: serie eritroide, granuloctica, linfoide, monoctica, megacarioctica, clulas plasmticas y otras clulas.

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1.2 Metodologa

Estudio de Mdula Osea El estudio de mdula sea, comprende los siguientes aspectos:

2.2.1 Seco Dbil 10X. Celularidad Global, Ausencia Aumento del No. De Clulas grasas y/ megacariocitos. Celuraridad Hematopoytica -Normal -Aumentada: hiperceluraridad -Disminuda: hipoceluraridad aplasia.

2.2.2 Examen a Gran Aumento 100X. 2.2.2.1 Recuento Global: Serie Granuloctica con predominio:mielocitos y metamielocitos : Serie Eritroctica: Predominio: Policromatfilos y Ortocromticos. Serie linfoide, Monoctica y Megacarioctica:

60%. 20%. 20%.

2.2.2.2 Caractersticas Morfolgicas: -Aumento de Mieloblastos -Aumento de Linfocitos clulas plasmticas -Basofilia, Eosinofilia, aumento de clulas Cebadas de Macrfagos. -Megacariocitos: hipo hipersegmentacin nuclear; alteraciones de la madurez citoplsmica, megacariocitos de tamao muy pequeo. -Serie Eritoide con cambios Megaloblsticos diseritropoyesis. -Presencia de clulas no hematopoyticas: clulas metastsicas.

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2.2.3 Reporte del Mielograma y Valores Normales.

LMITES DE NORMALIDAD (%) Serie Blanca Mieloblastos Promielocitos Mielocitos Metamielocitos Bandas + segmentados Serie Roja Proeritroblastos Eritroblastos Basfilos Eritroblastos Policromticos Eritroblastos Ortocromticos Linfocitos Basfilos y Clulas Cebadas Megacariocitos Monocitos + macrfagos Plasmocitos Relacin Mieloide-Eritroide 50.4-70.3 0.2-1.5 2.1-4.1 8.4-17.0 10.0- 26.8 15.7 -31

0.2-1.3 0.5-2.4 17.9-29.2 0.4-4.6 11.1-23.1 0-0.2 0-0.4 0-0.8 0.4-3,9 1.5-3.3

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio 1 Microscopio de Luz

3.2 Material de Laboratorio CANTIDAD DESCRIPCIN 1 Laminillas y/ diapositivas con muestra de aspirado de mdula sea

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4.PROCEDIMIENTO. Observar las laminillas diapositivas y reportar el mielograma de acuerdo con el formato que aparece en el reporte de resultados. ACTIVIDADES. -Observacin de laminillas y/ diapositivas con imgenes de aspirados de mdula sea normal . -Reportar un mielograma normal. R E P O RT E Serie Blanca Mieloblastos Promielocitos Mielocitos Metamielocitos Bandas + segmentados Serie Roja Proeritroblastos Eritroblastos Basfilos Eritroblastos Policromticos Eritroblastos Ortocromticos Linfocitos 7.9 % Basfilos y Clulas Cebadas 0.06 % Megacariocitos 0.2 % Monocitos + macrfagos Plasmocitos 2.4 % Relacin Mieloide-Eritroide 1.9% 0.3 % DE MIELOGRAMA 0.8 % 3.3 % 14 % 20 % 25 %

1% 2% 25 % 1.5 %

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 15 INTRODUCCIN A LAS LEUCEMIAS Y EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LEUCEMIA GRANULOCTICA CRNICA
1.INTRODUCCIN. Las leucemias mieloides son neoplasias malignas del Sistema Hematopoytico. Como las neoplasias en general, las clulas leucmicas: Proliferan de manera independiente de sus factores de crecimiento ( producidos por las clulas estromales de su microambiente) Tampoco responden a factores que las inhiben pues estn protegidas de la apoptosis. Esta autonoma en la reproduccin celular se debe a mutaciones en los genes que codifican para: - factores de crecimiento - factores de transcripcin - protenas fosforiladoras( que meten a la clula en ciclo celular) - factores inhibidores de la apoptosis - factores inhibidores del ciclo celular

El trmino LEUCEMIA significa aumento de leucocitos neoplsicos en la sangre, por lo cual es un trmino inapropiado. Las LEUCEMIAS son neoplasias clonales que provienen de una sola clula maligna original la cual tiene una gran capacidad proliferativa, como la CTH las CFC: Las leucemias pueden ser agudas crnicas LEUCEMIAS CRNICAS En las Leucemias Crnicas, las clulas neoplsicas maduran terminalmente No producen la muerte en las etapas iniciales El nmero de clulas maduras es normal aumentado Segn el predominio de la lnea celular hacia la cual maduran pueden distinguirse: Leucemia Granuloctica Crnica Leucemia Mielomonoctica Crnica Policitemia Vera Trombocitemia esencial Mielofibrosis crnica idioptica con metaplasia mieloide.

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LEUCEMIA GRANULOCTICA CRNICA La mutacin original se produce en una CTH, que madura terminalmente hacia todas las lneas celulares, pero lo hace de predominantemente hacia la lnea granuloctica, y frecuentemente hacia la megacarioctica.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . 2.1 Datos Caractersticos en el Diagnstico: Leucocitosis generalmente por arriba de 50,000leucocitos totales, y en ms del 70% de los casos, por arriba de 100,000. Presencia de granulocitos en todas las etapas de maduracin. Eosinofilia y sobre todo basofilia absolutas Presencia de eritroblastos Anemia moderada ausencia de sta Plaquetas normales aumentadas Fosfatasa alcalina en leucocitos disminuda. Mdula ea con Hiperplasia de clulas granulocticas en todas las etapas de maduracin y con abundantes megacariocitos.

2.2 Datos Definitivos Para El Diagnstico Datos Citogenticos : Presencia del Cromosoma Philadelphia: translocacin recproca entre los cromosomas 9 y 22. ( aumento de tirosina kinasa intracelular) con formacin del gen hbrido BCR/abl

Presencia de translocacin 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio

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CANTIDAD 1 1

DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas

4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

Leucemia granulocitica crnica

ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .__ En esta prctica pudimos observas las deformaciones en estas clulas.___________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 16 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O. CON POLICITEMIA VERA Y MIELOFIBROSIS IDIOPTICA CON METAPLASIA MIELOIDE
1.INTRODUCCIN. En las leucemias mieloides crnicas, la CTH tienen todava ms capacidad de dividirse que una CTH normal. Si la maduracin predomina hacia la lnea de los eritrocitos, se tendr:Policitemia vera. Cuando la proliferacin es predominantemente hacia la lnea de los megacariocitos, pero stos se mueren en la etapa de megacariocito maduro, a esta neoplasia se le llama Mielofibrosis con Metaplasia Mieloide.

1.1 POLICITEMIA VERA Policitemia ( elevacin de los glbulos rojos masa eritroctica total) de orgen primario en la que hay que descartar otras causas de policitemia secundaria como son: Enfermedades con dificultad en la oxigenacin sangunea: tabaquismo crnico, sndrome de Pickwick. Fstulas arteriovenosas cardiopatas congnitas. Hemoglobinas anormales que producen hipoxi tisular. Tumores productores de eritropoyetina.

1.2 MIELOFIBROSIS CRNICA IDIOPTICA CON METAPLASIA MIELOIDE

Se origina tambin en una CTH que madura hacia todas las lneas mieloides pero predominantemente hacia los megacariocitos En la Mdula sea existe aumento de todas las lneas, pero predominantemente hacia los megacariocitos los cuales mueren en la etapa de megacariocitos maduros, liberando los factores de crecimiento fibroblsticos, lo cual lleva a la mielofibrosis. Al ocuparse el tejido medular por el tejido fibroso, se origina la hematopoyesis extramedular. En sangre perifrica usualmente hay un cuadro leucoeritroblstico.( elevacin del nmero de granulocitos inmaduros y muchos eritroblastos

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2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .

2.1 Criterios para el Diagnstico de Policitemia Vera: Proliferacin de la CTH hacia todas las lineas con predominio hacia la lnea eritroctica:plaquetas ,eritroblastos ,basofilia , eosinofilia, granulocitosis con clulas no ms inmaduras que los mielocitos.Sin embargo la Biometra Hemtica no es definitiva. Trombocitosis > 400,000/ l Leucocitosis > 12,000/ l sin fiebre infeccin Aumento de fosfatasa alcalina leucocitaria sin fiebre infeccin. Aumento de vitamina B12 srica transcobalamina Cromosoma Philadelphia negativo. Estudio de Cortes Histolgicos de Mdula sea en Policitemia Vera Hiperplasia notable, con aumento de todas las lneas celulares, principalmente eritroblastos y megacariocitos. Clulas Grasas disminudas ausentes. El 30% de pacientes desarrollan mielofibrosis con metaplasia mieloide. 2.2 Criterios para el Diagnstico de Mielofibrosis Idioptica Crnica con Metaplasia Mieloide. En mdula sea, aumento de todas las lneas, pero predominantemente hacia los megacariocitos. Mielofibrosis desde el principio en algunos pacientes, aunque no en todos, que se demuestra con gruesas fibras de colgena en mdula sea y sustitucin de la celuraridad normal por tejido fibroso, ocasionada por liberacin de factores de crecimiento fibroblstico por los megacariocitos malignos. En sangre perifrica puede haber elevacin o disminucin de plaquetas y granulocitos . En sangre perifrica, cuadro leucoeritroblstico ( granulocitos inmaduros y muchos eritroblastos , anemia y poiquilocitos ( sobre todo dacriocitos ). Realizar diagnstico diferencial con otras enfermedades que causan mielofibrosis.( los dems sindromes mieloproliferativos crnicos ).

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz

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3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas

4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

Policitemia vera

MIELOFIBROSIS CRNICA IDIOPTICA

ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .___En esta prctica vimos las anormalidades de estos dos tipos de leucemias que predominan en la lnea de los eritrocito_______________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 17 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O. CON LEUCEMIA MIELOMONOCTICA CRNICA Y TROMBOCITEMIA ESENCIAL
1.INTRODUCCIN. Cuando la maduracin de la CTH es predominantemente hacia los neutrfilos y monocitos, la leucemia se llama Leucemia Mielomonoctica Crnica. Cuando la maduracin predomina hacia las plaquetas, se trata de Trombocitemia esencial. 1.1LEUCEMIA MIELOMONOCTICA CRNICA Leucemia Mielomonoctica Crnica Mielodisplasia Tipo IV. Cuadro parecido al de la LGC, pero con un incremento en la maduracin hacia la lnea de los monocitos .

1.2 TROMBOCITEMIA

ESENCIAL ( Primaria Hemorrgica )

La clula que sufre la mutacin neoplsica, es la CTH, que madura hacia todas las lneas, pero con predominio hacia la lnea de megacariocitos-plaquetas.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . 2.1 Criterios para el Diagnstico de Leucemia Mielomonoctica Crnica. Monocitos displsicos, clulas hbridas entre mielocitos y monocitos. Menos del 15% de los granulocitos son inmaduros. Cambios displsicos +++.( apndices nucleares ; ncleos de neutrfilos muy largos ) Ms de 1000 monocitos /l ( ms del 3% ), Anemia leve. En mdula sea los mieloblastos son <20%.

2.2 Criterios para el Diagnstico de Trombocitemia Esencial Cuenta de Plaquetas por arriba de 600,000/l Hemoglobina < 13 g/dl Ausencia de Cromosoma Philadelphia del gen hbrido BCT/abl Fibrosis medular ausente menos de 1/3 de la biopsia

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Ausencia de otra causa de trombocitosis ( trombocitosis secundaria ) Mdula sea con hiperplasia moderada de las lneas eritroblstica y granuloctica y aumento marcado de megacariocitos. Descartar otras causas de Trombocitosis Secundaria, como:Deficiencia de Hierro,Hemorragias crnicas, Procesos inflamatorios infecciosos crnicos, Neoplasias malignas no hamatopoyticas, Pacientes esplenectomizados. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas

4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .__Observamos las diferencias de estas leucemias_____________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 18 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O. CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M0
1.INTRODUCCIN. LEUCEMIAS AGUDAS En las leucemias agudas, las clulas neoplsicas no maduran teminalmente; generalmente maduran hasta la etapa de blasto un poco ms all. Para que se consideren agudas deben tener > 20% de blastos en M.O. Las clulas blsticas inhiben la proliferacin de las clonas normales. Los pacientes tienen anemia, plaquetopenia, granulocitopenia. La muerte sobreviene por hemorragias, por la plaquetopenia e infecciones.

La Leucemia M0, es una leucemia aguda cuya cuenta tpica de Mdula Osea es la siguiente: 96% de Mieloblastos ( 1a) 4% de eritroblastos ( eritroblastos y granulocitos en maduracin: muy disminudos ). Por lo tanto: 0-3% de los blastos son positivos para tincin citoqumica de MIELOPEROXIDASA.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Criterios para el diagnstico de la Leucemia Aguda M0 Demostrar con anticuerpos anti-mieloperoxidasa, la presencia de esta enzima ( MPO) en el Retculo Endoplsmico Rugoso en el Aparato de Golgi. Demostrar la presencia de protenas de membrana CD13 CD33 con anticuerpos monoclonales . Demostrar la ausencia de esterasas especficas, que son propias de la serie monoctica, Demostrar la ausencia del marcador monoctico CD14 y que descartan la Leucemia M5a monoblstica . Demostrar la ausencia de marcadores megacariocticos como CD41 CD61, que descartan Leucemia M7 Megacarioblstica. Demostrar la ausencia de marcadores de linfocitos que descartan leucemia linfoblstica: de Precursores B: CD10, CD19, y TDT. Y de Precursores T: CD2, CD3, CD5, CD7 y TDT.

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3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y / diapositivas Aspirad de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas

4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

Leucemia aguda

ACTIVIDADES. - Reporte de resultados ._observamos como es una leucemia mieloide aguda y La lnea maduracion

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 19 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O. CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M1
1.INTRODUCCIN. La cuenta tpica de la leucemia aguda M1 es: Mieloblastos: 83% Promielocitos: 3% Mielocitos: 2% Eritroblastos: 12%

2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Los criterios para el diagnstico de la leucemia aguda M1, son: >3% y < 10% de clulas tienen grnulos MPO positivos bastones de Auer observables con la tincin citoqumica para MPO son clulas con un poco ms de maduracin . ( que pueden ser: mieloblastos 1b ( mieloperoxidasa + ) , mieloblastos 2, promielocitos , mielocitos. 90% de clulas son mieloblastos sin grnulos ( mieloblastos 1 =negativos para mieloperoxidasa ) Hay anemia, granulocitopenia, trombocitopenia

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD DESCRIPCIN 1 Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas 1 Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas

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4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .____esta se puede observar muy bien con un recuento diferencial de medual osea________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 20 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O. CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M2
1.INTRODUCCIN. La Leucemia mieloide aguda M2, presenta la siguiente cuenta tpica de Mdula Osea: Mieloblastos: 52% Promielocitos: 33% Mielocitos: 7% Granulocitos ms maduros: 3% Eritroblastos: 5%

2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Criterios para el diagnstico de la Leucemia Aguda M2: Entre 30 y 89% de clulas de mdula sea ( excluyendo eritroblastos ) son mieloblastos y > 10% de clulas son promielocitos granulocitos ms maduros. ) El rango puede ser: desde 20% de blastos con 80% de promielocitos clulas ms maduras , hasta 80% de blastos con 20% de promielocitos clulas ms maduras Las llamadas Leucemias Agudas de Eosinfilos, de Basfilos y de Clulas cebadas, son similares a la M2, aunque con diferenciacin a cada lnea respectiva

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas Aspirado de Mdula sea teido con Wright y/ diapositivas

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4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

ACTIVIDADES. - Reporte de resultados ._Aqui podemos identificar a la leucemia tipo M2________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 21 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O. CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M3
1.INTRODUCCIN. La leucemia M3 es una leucemia aguda, en la cual, la clula neoplsica original es la CFC GEMM y no la CTH. Y en donde el 90% de las clulas de mdula sea maduran hasta la etapa de promielocitos. Su complicacin principal y la causa de su gravedad es la CIVD, la cual se evita con el Acido Transretinoico, , que favorece la diferenciacin de las celulas malignas. 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA .

Criterios para el diagnstico de la leucemia aguda M3. 90% de clulas de Mdula Osea maduran hasta la etapa de PROMIELOCITOS , los cuales son anormales, y en mayor cantidad que los promielocitos normales; algunas clulas pueden madurar hasta neutrfilos segmentados y las clulas que maduran ms pueden presentar anomala de Pseudo-Pelger. Pueden ser de dos variedades:

1) Variedad de grnulos grandes, los cuales son observables, y cristalizan formando bastones de Auer, generalmente en cantidad mltiple, llamados faggots, en el 90% de las clulas )

2) La Variedad Microgranular, en la que los grnulos pueden no verse claramente, teniendo estos casos el ncleo plegado, de aspecto monocitoide, por lo que puede ser confundida con una leucemia M5b ( monoblstica ), por lo cual debe realizarse para su diagnstico, tinciones de Mieloperoxidasa Y esterasas dobles: MPO M3 M5b +++ + +++ Esterasas

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3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas

4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 22 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O. CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M4
1.INTRODUCCIN. En la leucemia M4, la maduracin de la clona neoplsica se dirige hacia dos lneas de manera simultnea: la de los granulocitos y la de los monocitos, por lo que la morfologa es compatible tanto con una M2 como con una M5. Cuenta tpica en Mdula Osea: Mieloblastos y promielocitos: Mielocitos: Monoblastos y promonocitos: Eritroblastos: 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Criterios para el diagnstico de la Leucemia Aguda M4 20% de las clulas son blastos, que inluyen: mieloblastos 1 y 2; monoblastos 1 y 2 y promonocitos ( ms de 5,000 clulas de estirpe monoltica ). Ms del 20% y < 80% de clulas son blastos, promonocitos y granulocitos ms maduros.( Los granulocitos y clulas de estirpe monoltica se encuentran en proporciones muy similares. Si > 80% de clulas fueran de estirpe monoctica, sera una M5 45% 8% 43% 4%

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANIDAD 1 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas

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4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 23 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O.CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M5
1.INTRODUCCIN. Se distinguen dos tipos de leucemias Monoblsticas: la M5a poco diferenciada, y la M5b bien diferenciada. El diagnstico se realiza al encontrar en M.O. > 80% de clulas de estirpe monoctica: monoblastos, promonocitos y monocitos en una cuenta sin eritroblastos. Cuenta tpica de la leucemia M5a: Monoblastos: Promonocitos y monocitos: Eritroblastos: Cuenta tpica de la leucemia M5b: Monoblastos: Promonocitos: Monocitos: Eritroblastos: 6% 85% 7% 2% 90% 6% 4%

2.PRINCIPIO Y METODOLOGA. Criterios para el diagnstico de la Leucemia M5. M5a > 80% de clulas son de estirpe monoctica: monoblastos, promonocitos y monocitos en una cuenta sin eritroblastos. >80% de clulas de estirpe monoctica son monoblastos M5b > 80% de clulas son de estirpe monoctica: monoblastos, promonocitos y monocitos en una cuenta sin eritroblastos. <20% de clulas de estirpe monoctica son monoblastos

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La M5a poco diferenciada ( equivalente a la M0) se forma de monoblastos 1 y constituye el 15% de los casos de M5a.Debe distinguirse de la M0 de la L2: -usando anticuerpos monoclonales para CD14 -Demostrando la presencia de esterasas no especficas en el RER con el microscopio electrnico, la ausencia de MPO. La M5a bien diferenciada, se forma de monoblastos 1b y 2 y ---es positiva para esterasas no especficas. -es positiva para anticuerpos monoclonales anti CD14, CD36 y CD68. -MPO negativa, pero ocasionalmente positiva.

> 80% de las clulas de estirpe monoctica son promonocitos y monocitos; stos se distinguen por sus grnulos azurfilos con Wright

Puede confundirse son la microgranular

M3 variedad

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD DESCRIPCIN 1 Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas 1 Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas

4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones. ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 24 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O.CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M6
1.INTRODUCCIN. En esta leucemia, tambin llamada eritroleucemia, la CTH maligna madura de manera simultnea hacia las lneas eritroblstica y granuloctica. 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Criterios para el diagnstico de la leucemia M6. Al menos 50% de clulas de Mdula osea deben ser eritroblastos que frecuentemente, pero no siempre, tienen anormalidades morfolgicas Y al menos 30% de clulas de la mdula sea deben ser mieloblastos promielocitos que pueden tener bastones de Auer. 30% -49% de clulas medulares sean eritroblastos con alteraciones morfolgicas notables Y que al menos 30% de clulas de Mdula Osea sean mieloblastos promielocitos O bien los siguientes criterios reunidos: Cuadro de leucemia aguda Severa anemia Otras citopenias La mayora de las clulas de la Mdula Osea sean eritroblastos muy anormales en distintas etapas de maduracin con predominio de eritroblastos. Frecuentemente no ms de 5% de mieloblastos, a lo que antes se llamaba MIELOSIS ERITRMICA, que por lo general evoluciona hacia una M6 tpica con > 30% de mieloblastos.

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 1 DESCRIPCION Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas

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4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 25 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O.CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA M7
1.INTRODUCCIN. Las clulas proliferantes en las M7 maduran hasta megacarioblastos y en ocasiones hasta promegacariocitos y megacariocitos.A este tipo de neoplasias , formadas casi exclusivamente por clulas de aspecto blstico sin diferenciacin morfolgica, y diagnosticables principalmente a travs de tcnicas inmunocitoqumica, se les llama leucemias megacarioblsticas M7.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . Criterios para el Diagnstico de la leucemia M7.

>30% de blastos en Mdula osea, de los cuales: >50% deben pertenecer a la lnea de los megacariocitos. Las clulas son positivas para los anticuerpos anti CD41 y CD61, que ponen en evidencia las glicoprotenas plaquetarias. ( tcnicas inmunocitoqumicas ) Mieloperoxidasa negativa en los blastos ( megacarioblastos ) Esterasas no especficas positivas focalmente en el aparato de Golgi. De acuerdo con la etapa hasta la cual llegan a madurar las clulas se consideran: M7a: La clona proliferante madura hasta la etapa de megacarioblasto. M7b: La clona proliferante madura hasta promegacariocitos e incluso megacariocitos. Pudiendo presentar plaquetas normales y aumentadas morfolgicamente anormales ( gigantes y sin grnulos. En ambas se observa tambin proliferacin de otras lneas celulares, especialmente de eritroblastos. Con frecuencia presentan fibrosis medular.

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz

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3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas

4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 26 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LEUCEMIA LINFOCTICA CRNICA Y LEUCEMIA DE CLULAS PELUDAS
1.INTRODUCCIN. Leucemia Linfoctica Crnica B Esta es la ms comn de las leucemias linfoides.Cursa con linfocitosis notable. En ella, el resto de la hematopoyesis se conserva normal.Se presenta con crecimiento ganglionar bilateral.El Linfoma de Linfocitos bien diferenciados es la manifestacin tisular (ganglionar ) de la misma enfermedad.Los linfocitos tienen pocas inmunoglobulinas de superficie. Leucemia de Clulas Peludas Las tricoleucemias o leucemia de clulas peludas se presenta generalmente con esplenomegalia, sin linfadenomegalias y con anemia citopenias.Las clulas proliferantes tienen una morfologa caracterstica que ayuda a su diagnstico. 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . 2.1Criterios para el diagnstico de la leucemia Linfoctica Crnica B. Hallazgo de linfocitosis y linfadenomegalias en pacientes de ms de 50 aos de edad, sin otra causa de linfocitosis. Rasgos Morfolgicos: numerosos linfocitos pequeos con escaso citolasma, cromatina gruesa, segmentada, como rebanadas de pastel. En su evolucin pueden aparecer prolinfocitos acompaados por citopenias variables. Inmunofenotpicamente, los linfocitos son positivos a CD19, CD20 y a CD5; ste ltimo los caracteriza por tener la capacidad de formar autoanticuerpos.

2.2 Criterios para el diagnstico de la Leucemia Linfoctica Crnica T CD8+ de Linfocitos Grandes Granulares. Linfocitosis menos notable. Clulas con grnulos azurfilos citoplsmicos y cromatina gruesa, pero no segmentada. Linfocitos con capacidad de inhibir la proliferacin de clulas hematopoyticas. El cuadro leucmico se acompaa de neutropenia pancitopenia.

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Inmunofenotpicamente son clulas positivas a CD2, CD3 y CD8

2.3 Criterios para el diagnstico de la Leucemia de Clulas Peludas. Rasgos morfolgicos caractersticos de ayuda al diagnstico por bases morfolgicas: Clulas pequeas Citoplasma muy plido y con muchas microvellosidades filiformes Ncleos pequeos como los de los linfocitos, pero cromatina no tan densa. Las clulas tienen caractersticamente grnulos con fosfatasa cida resistente al cido tartrico. La mdula sea es difcil de aspirar, ya que, como es tpico, tiene fibrosis. Inmunofenotpicamente son positivas para CD19 y CD20, CD11 y CD25.

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas

4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 27 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. CON LEUCEMIA LINFOBLSTICA


1.INTRODUCCIN. La clasificacin FAB seala 3 tipos fundamentales: L1, L2, y L3, independientemente de su inmunofenotipo. Leucemia L1. Corresponden al tipo ms comn de leucemia aguda infantil y es la que tiene el mejor pronstico de las 3. Leucemia L2.Tienen un peor pronstico que las L1 Leucemia L3. Casi todos los casos corresponden a clulas B.Tienen mal pronstico 2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . 2.1Criterios para el diagnstico de la Leucemia L1. blastos muy pequeos, en donde el ncleo ocupa la mayor parte de la superficie y por lo tanto hay muy escaso citoplasma, el cual carece de vacuolas presenta muy escasas; hay homogeneidad en cuanto al tamao celular y densidad cromatnica; la cromatina es fina, aunque no tanto como la de los mieloblastos Ocasionalmente, la cromatina es gruesa y pueden confundirse con linfocitos pequeos. Los linfoblastos ocasionalmente adquieren forma de raqueta de mano.

2.2 Criterios para el diagnstico de la Leucemia L2. Clulas muy variables en tamao Las clulas ms grandes tienen cromatina fina y nucleolos bien demarcados, como los de los mieloblastos; las de tamao intermedio, tienen cromatina ms gruesa, y las ms pequeas, tienen cromatina condensada. Con frecuencia, los ncleos tienen mltiples indentaciones cerebriformes ( en cuyo caso, si se acompaan de grnulos positivos a la fosfatasa cida y a -naftil acetato esterasa, corresponden a leucemias T y tienen un mal pronstico).

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Citoplasma ms abundante que en las L1, generalmente sin grnulos y con pocas ninguna vacuola.

2.3 Criterios para el diagnstico de la Leucemia L3 Clulas muy caractersticas, con citoplasma basfilo repleto de vacuolas claras, que contienen lpidos neutros, positivas con rojo oleoso y PAS negativas Ncleos con cromatina fina granular y enormes nucleolos. Las clulas son morfolgica e inmunofenotpicamente indistinguibles de las que proliferan en el linfoma de Burkitt.

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas

4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones. ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA:PRCTICA No. 28 EVALUACIN DE FROTIS DE S.P. Y M.O.CON MIELOMA MLTIPLE


1.INTRODUCCIN. Neoplasia hematopoytica, en la que proliferan clulas plasmticas, que han madurado independientemente de una estimulacin antignica.Cuando llegan a salir las clulas plasmticas a la circulacin, el diagnstico que se establece en el de Leucemia de clulas plasmticas. Dichas clulas forman inmunoglobulinas homogneas, monoclonales, que se reconocen por electroforesis de protenas.La proliferacin se restringe a la mdula sea, ocasionando zonas de ostelisis reconocidas por radiografas, y que se manifiestan clnicamente por dolor sea y fracturas patolgicas y por hipercalcemia.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . 2.1 Criterios para el diagnstico del Mieloma Mltiple. En el aspirado de mdula sea: Aumento notable de clulas plsmticas ( lo normal es <3%) Algunas clulas presentan ncleos irregulares y multilobulados. Clulas plasmticas con cristales mltiples intracelulares, constitudos por inmunoglobulinas cristales azurfilos alargados. Clulas plasmticas con bordes citoplsmicos irregulares y de color rojo ( clulas en flama).

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de Laboratorio Microscopio de Luz 3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1 1 DESCRIPCIN Frotis de sangre perifrica teido con Wright y/ diapositivas Aspirado de mdula sea teido con Wright y/ diapositivas

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4.PROCEDIMIENTO. Observar imgenes en laminillas y/ diapositivas correspondientes con estas alteraciones.

ACTIVIDADES. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA: PRACTICA NO. 29 TINCIN CITOQUMICA PARA MIELOPEROXIDASA


1.INTRODUCCIN La citoqumica constituye en la prctica hematolgica un complemento indispensable de la morfologa ptica convencional. Su finalidad es estudiar la presencia de ciertos componentes qumicos (enzimas o sustancias diversas) en el interior de las clulas sanguneas tanto hematopoyticas como circulantes en sangre perifrica. A menudo resulta difcil diferenciar los blastos leucmicos de la leucemia linfoblstica aguda de los de la leucemia mieloblastica (M1), monoblstica aguda (M5A) y la leucemia megacarioblstica aguda (M7) utilizando solamente extensiones con las coloraciones de MayGrnwald-Giemsa. Recientemente se ha propuesto estudiar las leucemias agudas basndose en tres niveles secuenciales de investigacin que son: los mtodos citoqumicos en primer lugar, el inmunofenotipo intracelular en segundo lugar y por ltimo el inmunofenotipo de membrana. Diversos procedimientos de tincin citoqumica contribuyen a llevar a cabo esta distincin. Cuando se utilizan las reacciones citoqumicas adecuadas junto con el aspecto morfolgico de las extensiones con tincin de Wright-Giemsa, puede establecerse un diagnstico preciso en la mayora de los casos. Desde el punto de vista tcnico todas las reacciones citoqumicas tienen en comn 3 etapas fundamentales: fijacin, incubacin y contraste. Estas tinciones pueden realizarse sobre sangre perifrica, extensiones de medula sea, preparaciones de ndulos linfticos u otros tejidos.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGA . La mieloperoxidasa se sintetiza en el retculo endoplasmtico rugoso, de donde pasa a las cisternas del aparato de Golgi quedando localizada fundamentalmente en la granulacin prim aria o azurfila. Dicha enzima se combina in vivo con perxido de hidrgeno transformndose en un potente agente bactericida, viricida y fungicida. As, muestra actividad en todos los estadios del desarrollo de los neutrfilos y se halla en los grnulos azurfilos. Los eosinfilos muestran una actividad intensa. Los linfocitos, basfilos y las formas eritroides no se tien. La tincin citoqumica de mieloperoxidasa es fundamental en el diagnstico diferencial de las leucemias agudas (positiva en las mieloblsticas y negativa en las linfoblsticas). La actividad peroxidasa puede faltar en algunos neutrfilos txicos de pacientes con infeccin y leucemia aguda, y en casos raros de deficiencia congnita de mieloperoxidasa.

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La demostracin citoqumica de esta enzima se basa en la accin oxidante de la peroxidasa sobre el substrato, bencidina, en presencia de perxido de hidrgeno, apareciendo un precipitado amarillo ocre en el lugar del citoplasma en donde se ha producido la reaccin. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS 3.1 Reactivos. NUM 1 2 3 4 5 6 7 8 NOMBRE DEL REACTIVO Formol Etanol absoluto Dihidrocloruro de bencidina ZnSO4.7H2O Acetato de sodio3H20 H202 NaOH Safranina CONCENTRACIN 37% CANTIDAD 10ml 90ml 0.3g 1ml 1g 0.7ml 1.5ml 0.2g

3.8% 3% 1.0N

3.2 Equipo de Laboratorio Balanza granataria Balanza analtica 3.3 Material de Laboratorio

CANTIDAD 2 2 1 2 1 2 10

DESCRIPCIN Vasos de precipitados de 100 ml Matraces aforados de 100 ml Pipeta graduada de 10 ml Pipetas graduadas de 5 ml Pipeta graduada de 1 ml Frascos de 250 ml Frotis de sangre perifrica

3.4 Preparacin de los Reactivos 3.4.1 Solucin Fijadora Formol al 37% Etanol absoluto 3.4.2 Solucin Colorante Modo de Preparacin:

10 ml 90 ml

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Etanol al 30% ( v/v en agua ) Dihidrocloruro de bencidina ZnSO4.7H2O al 3.8% Acetato de sodio 3H2O H2O2 al 3% NaOH 1.0 N Safranina

100 ml 0.3 g 1 ml 1 g 0.7 ml 1.5 ml 0.2 g

Los reactivos se mezclan en el orden indicado. La bencidina a veces contiene un material insoluble. Al aadir el sulfato de zinc se forma un precipitado que se disuelve al aadir los dems reactivos. El pH de la solucin debe ajustarse a 6.00 + 0.05. La solucin se filtra y se guarda a temperatura ambiente; puede usarse de manera repetida por meses. 4.PROCEDIMIENTO. 4.1 Tcnica: 4.1.1. 4.1.2 4.1.3 4.1.4 4.1.5 4.1.6 4.1.7 4.1.8 4.1.9 Los frotis se fijan por un minuto con la solucin formol etanol Lavar con agua de la llave Secar al aire PERFECTAMENTE Sumergir en la solucin colorante por 30 segundos. Lavar con agua de la llave Contrateir por 30 segundos con solucin acuosa de safranina al 1% Lavar con agua de la llave Secar al aire Sellar con resina sinttica y cubrir con cubreobjetos del #1

Actividades: -Practicar la tincin citoqumica para Mieloperoxidasa con frotis de sangre perifrica.

4.2 Resultados Esperados. - Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________

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SERIE BLANCA: PRACTICA NO. 30 ALFA NAFTIL ACETATO ESTERASA EN LEUCOCITOS


1. INTRODUCCIN. Las esterasas son un grupo de enzimas capaces de hidrolizar steres en sus componentes cidos y alcoholes. Existen diferentes variedades segn el substrato empleado. Se utilizan 4 substratos: naftol-AS-C-cloroacetato, naftol-AS-D-acetato, -naftil-acetato, -naftil-butirato, los cuales al ser hidrolizados en presencia de una sal diazoica dan un precipitado insoluble en el lugar de la reaccin. 2. PRINCIPIO Y METODOLOGA . Utilizando como substrato el naftol-AS-C-cloroacetato (CAE) se detecta una esterasa que es especfica de la granulopoyesis neutrfila en la que es positiva a partir del mieloblasto y se expresa en forma de un precipitado rojo anaranjado muy brillante. Su utilidad diagnstica se centra bsicamente en el reconocimiento de clulas blsticas mieloides, si bien su aparicin es ms tarda que la de la mieloperoxidasa aunque iguala a sta en especificidad. Utilizando como substrato el naftol-AS-D-acetato, se obtiene una intensa positividad en la serie monoctica que, a diferencia de las restantes clulas hematopoyticas, es fluoruro sensible. Dada su positividad ms restrictiva es preferente usar el substrato naftil-acetato o -naftil-butirato para marcar la serie monoctica y sus precursores, cuya positividad es intensa y se manifiesta en forma de un precipitado difuso por todo el citoplasma. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Reactivos. NUM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 NOMBRE DEL REACTIVO Na2HPO4 KH2PO4 Formaldehido Acetona Na2HPO4 KH2PO4 Cloruro de Pararosanilina HCl Alfa Naphthyl acetato Etiln glicol monometil Eter Nitrito de sodio CONC. CANTIDAD 20 mg 100mg 25 ml 45 ml 2.366 2.267 g 250 mg 1.25 ml 50 mg 2.5 ml 1.5 ml

37%

Concentrado

4%

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3.2 Equipo de Laboratorio Balanza granataria Balanza analtica

3.3 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 2 2 2 2 1 1 3 4 2 2 2 10 DESCRIPCIN Vasos de precipitados de 100 ml Vasos de precipitados de 500 ml Probetas de 100 ml Probetas de 500 ml Matraz volumtrico de 50 ml Tubo de 13X100 ml Pipetas de 10 ml Pipetas de 5 ml Goteros de 10 ml Goteros de 100 ml Frascos de 500 ml Frotis de sangre perifrica

3.4 Preparacin de Reactivos Soluciones de Fijacin 3.4.1 Solucin A Na2HPO4 KH2PO4 Agua destilada 3.4.2 Solucin de fijacin pH 6.6 Formaldehdo al 37% Acetona Solucin A ( #1 ) ( Esta solucin se guarda a 4C ) 25 ml 45 ml 30 ml 20 mg 100 mg 30 ml

3.4.3 Amortiguador de fosfatos 1/15 M pH 7.6 a) Na2HPO4 H2O destilada 2.366 g 250 ml

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b) KH2PO4 H2O destilada Preparacin del amortiguador: Solucion a) Solucin b) Soluciones de Tincin 3.4.4 Solucin de Pararosanilina Cloruro de Pararosanilina Agua destilada HCl concentrado

2.267 g 250 ml

42.5 ml 7.5 ml

250 mg 5 ml 1.25 ml

Disolver calentando suavemente y agitando. Dejar enfriar la solucin y filtrar ( Esta solucin se conserva a temperatura ambiente ) 3.4.5 Solucin de Alfa Naphthyl acetato Alfa Naphthyl acetato Etiln glicol monometil Eter 50 mg 2.5 ml

( Esta solucin se prepara fresca , en cada ocasin ). 3.4.6 Solucin de Pararosanilina hexazotizada Solucin de Pararosanilina Nitrito de sodio al 4% recin preparado 1.5 ml 1.5 ml

( Esta solucin se prepara fresca, en cada ocasin ). 3.4.7 Mezcla de incubacin. Buffer de Fosfatos 1/15 M, pH 7.6 Solucin de Pararosanilina hexazotizada Solucin de Naphthyl acetato Ajustar el pH a 6.1+ 0.3 con NaOH 1N y filtrar ( Esta solucin se prepara fresca , en cada ) 45 ml 3 ml 2.5 ml

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4.PROCEDIMIENTO. 4.1 Tcnica: 4.1.1. Fijar los frotis a 4C por 30 segundos 4.1.2 Lavar los frotis con agua de la llave 4.1.3 Dejar secar a temperatura ambiente 4.1.4 Colocar los fotis en la mezcla de incubacin a temperatura ambiente por 45 minutos en la oscuridad 4.1.5 Lavar con agua de la llave 4.1.6 Contrateir con hematoxilina de Gill por 10 minutos 4.1.7 Lavar con agua de la llave 4.1.8 Secar a temperatura ambiente 4.1.9 Sellar con resina sinttica y cubrir con cubreobjetos del #1

Actividades: -Practicar la tincin citoqumica para Esterasas con frotis de sangre perifrica.

- Reporte de resultados .______________________________________________________ __________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ _____________________________________________________________

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BIBLIOGRAFA 1 .BLOOD CELL MORPHOLOGY. Peripheral Smear Evaluation. Manual 1.Lynn Maedel and Sandra Sommer.American Society of Clinical Pathologysts.Chicago. 2.BLOOD CELL MORPHOLOGY. Benign or Reactive Changes in WBCs and Plateletes.Manual 3. Lynn Maedel and Sandra Sommer.American Society of Clinical Pathologysts.Chicago. 3.El Atlas de Hematologa.Dr. Joaqun Carrillo Farga

4.Manual de Tcnicas Bsicas para el Laboratorio de Hematopatologa.Instituto de Hematopatologa AVL Society. 5.Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa.Segunda edicin.Joan Lluis Vives.Josep Lluis Aguilar.Masson. 6.Citoqumica. http://web.udl.es/dept/medicina/citoweb/libro/pass/paginas/contenido/libro/citoquim.htm

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