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Tema 4
Tema 4
v Concepto de Crecimiento
v Expresión matemática del crecimiento Torulaspora delbrueckii
microbiano 10
población 6
v Cultivo continuo 4
ADN
Elongación celular
Una generación
21 ® 22 ® 23…………….…..2n
(escala logarítmica)
Número de células
(escala aritmética)
Número de células
1,5 8
2 16
2,5 32
3 64
3,5 128
4 256
5 1.024
6 4.096
- -
- -
10 1.048.576 Tiempo (h)
Parámetros del crecimiento exponencial
Tiempo de generación (g): tiempo que tarda una célula en dividirse
en dos células hijas
dNo/dt = µN
Constante específica de crecimiento (µ)
Un cultivo en crecimiento equilibrado sigue una cinética de primer orden: la
velocidad de aumento del número de bacterias en un tiempo dado es
proporcional al número de bacterias presentes en ese tiempo. La constante de
proporcionalidad ( µ ) es un índice de la velocidad de crecimiento y se denomina
constante específica de crecimiento o velocidad específica de crecimiento (h-1).
dN/dt = µN N = No eµ(t-to)
ln N - ln No
Ln N = ln No + µ(t-to) µ=
(t-to)
ln 2 0,693
µ= =
g g
Determinación del tiempo de generación (g) de una población creciendo
exponencialmente por representación gráfica
La población
se duplica
en 2 h
Pendiente = 0.15
Células/ml
g=2h
Tiempo (h)
µ = Pendiente x 2,3
La curva de crecimiento (cultivo discontinuo o en batch)
Concentración
nutrientes). Las concentraciones de
nutrientes disminuyen progresivamente,
mientras que la de los residuos Sustrato
aumentan.
Tiempo de cultivo
Fases de Crecimiento
Estacionaria
Log número de células viables
Exponencial
Muerte
Latencia
Tiempo
Fase de latencia (Lag)
Ocurre cuando:
Cámara de Petroff-Hauser
Cálculo del número células por ml de muestra:
Rejilla con 25 cuadrados grandes (14 células x 25 cuadrados grandes) / (0,02 x 10-3) ml=
=1,75.107 células/ml
Cubreobjetos
Portaobjetos
Suspensión bacteriana
Cubreobjetos
Portaobjetos
muestra 9 ml
original por tubo
Diluciones
Siembra
H2O
10ml 0,1ml
Aplicación al análisis 1ml
de aguas: Detección
de coliformes como
microorganismos
indicadores de
contaminación fecal 2X
Test del número más probable (NMP)
Crecimiento
(tubo turbio) No crecimiento
(tubo transparente)
Número de células
Tiempo
vTemperatura
vpH
vDisponibilidad de agua
vOxígeno
Temperatura
Tª óptima
Termófilo
Psicrotrofo Hipertermófilo Hipertermófilo
Psicrotolerante Mesófilo
Psicrófilo
Temperatura (ºC)
Límite de crecimiento -5ºC (Se forma hielo)
Clasificación de los microorganismo según Tª óptima
Hiper- 55 80-110 ?
En zonas calientes de
termófilo ambientes marinos
Clasificación de los microorganismo según Tª óptima
Adaptación molecular:
v Enzimas adaptadas al frío
v Membranas con transporte activo
(ácidos grasos insaturados)
Clasificación de los microorganismo según Tª óptima
Termófilos: ( >45ºC )
v Esterotermófilos (No crec < 37ºC)
v Facultativos (Si crec < 37ºC)
v Extremos o Hipertermófilos
(Si crec > 80ºC)
(Arroyos termales 100ºC, fumarolas volcánicas >150º,…)
Adaptación molecular:
-Enzimas y ribosomas estables a altas Tª
-Membranas con transporte activo:
ácidos grasos saturados o hidrocarburos (unidades de isopreno), monocapas
Aplicaciones Biotecnológicas de los Hipertermófilos
Thermus aquaticus
(Tª 55º-80º)
Manantial del Yellowstone National Park Se encuentra en los
calentadores domésticos
Taq polimerasa
Técnica de PCR
Límites de
crecimiento
pH
Presión vaporsol
ACTIVIDAD DE AGUA (aw) aw =
Presión vaporagua
0 < aw < 1
Alta aw, entrada masiva de agua Baja aw, salida masiva de agua
Alta Presión de turgencia Disminución volumen celular
Lisis celular Plasmolisis
Límites inferiores de aw para el crecimiento microbiano
Microorganismos que crecen a baja aw
Osmófilos: requieren altas [azúcares] MUCHOS HONGOS
No halófilo
Microorganismos que crecen a baja aw
Adaptación molecular:
trehalosa
Oxígeno
AEROBIO
Estricto (a) Necesario
Superóxido
Peróxido de hidrógeno
Radical hidroxilo
Total:
Enzimas que destruyen especies tóxicas de oxígeno
Catalasa
Gota de agua
oxigenada
(HO2)
Peroxidasa
BAL
Superóxido dismutasa
Contenido enzimático
+ SOD + SOD - SOD - SOD + SOD
+ Catalasa + Catalasa - Catalasa - Catalasa +/- Catalasa
(bajos niveles)
Otros sistemas protectores
Microbiología
Problemas TEMA 4- crecimiento
1- Un cultivo tiene 102 ufc/ml y un tiempo de generación de 2 h. Calcula el número
final de células (N) que tendrá el cultivo al cabo de 24 h.
SOLUCIÓN: N = 4,1 x 105 ufc/ml
2. Calcular el tiempo de generación de un microorganismo en un cultivo que pasa de
103 ufc/ml a 109 ufc/ml en 3 h. Expresar el resultado en minutos.
SOLUCIÓN : 9 min
3. Se inocula un matraz de 95 ml de medio con 5 ml de un cultivo a 104 ufc/ml.
Calcular el número inicial de células (No) por ml de este matraz una vez inoculado.
SOLUCIÓN : N0 = 5 x 102 ufc/ml
4. A partir de un cultivo con un densidad celular de 106 células/ml se diluyen 5 ml en
un matraz hasta 2 litos de medio fresco. Calcular el número inicial de células (No) por
ml de este matraz una vez inoculado.
SOLUCIÓN : N0 = 2,5 x 103 ufc/ml
5. El matraz inoculado del ejercicio anterior se incuba durante 12 horas a Tª óptima
obteniéndose una suspensión con 2 x 106 células/ml. Si se supone que el cultivo
necesita una hora para adaptarse al nuevo medio de cultivo, calcule el número de
generaciones (n) que transcurre y el tiempo de generación del cultivo.
SOLUCIÓN : n = 9,6 generaciones
SOLUCIÓN : g = 1,14 h
6. Calcular la tasa de crecimiento (μ, expresada en h-1) de un cultivo bacteriano que
pasa de 102 ufc/g a 106 ufc/g en 50 min.
SOLUCIÓN : µ = 11,05 h-1
7. Para la producción industrial de vino se inocula 10 g de masa de levadura con una
concentración de 108 ufc/gr en un volumen final de 10.000 litros de mosto. ¿Cuál es
la concentración inicial de células (No) por ml de esta cuba de fermentación?
SOLUCIÓN : N0 = 105 ufc/l
8. La tasa de crecimiento de un cultivo bacteriano es μ= 1.5 h-1. Si partimos de una
población inicial de 102 ufc/ml. ¿Cuál es el tiempo de generación del cultivo? .
SOLUCIÓN : g = 0,46 h
9. Teniendo en cuenta los datos del ejercicio anterior: ¿Qué número de bacterias por
mililitro (ufc/ml) habrá después de 10 h?
SOLUCIÓN : N = 102 x 221,73 = 3,4 x 108 ufc/ml
10. Una bacteria determinada tiene un tiempo de generación de 20 min a
temperatura ambiente en un alimento dado. Supongamos que partimos de una
carga microbiana de 102 bacterias por gramo y mantenemos el alimento a
temperatura ambiente durante 12 horas. Calcular el número de bacterias por gramo
después de las 12 horas.
SOLUCIÓN : N = 6,8 x1012 ufc/gr
TEST
4. ¿Cuál de las siguientes enzimas protegen a los microorganismos frente a productos tóxicos
derivados del oxígeno molecular?
o Catalasa
5. Que términos describen a los organismos que crecen mejor a la temperatura del cuerpo
humano y a pH 2
o Mesófilos, acidófilos
10. Se inocula un matraz que contiene 4950 ml de medio estéril con 50 ml de un cultivo con 10 4
cel/ml y se incuba a 28ºC durante 4 h. Calcular el numero inicial de células del cultivo (en
cel/ml)
o 2000
18. Un microorganismo que habita en ambientes fríos y muere por encima de 20ºC se denomina
PSICRÓFILO mientras que un microorganismo que habita en el cuerpo humano se denomina
MESÓFILO.
KAHOOT
1. Se inocula un matraz que contiene 1980 ml de medio con 20 ml de un inóculo con 106 cel/ml.
Calcular No:
o 104 cel/ml
2. G=30 minutos; Tiempo latencia 2h; No = 103 cel/ml. ¿número de células a las 3 horas?
o 4*103
6. Los microorganismos que no requieren oxígeno para crecer pero que crecen mejor en su
presencia se denominan:
o Anaerobios facultativos
9. Todos los microorganismos que respiran requieren de oxígeno como aceptor de electrones:
o Falso