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Artculo 059: Diagnstico de Distemper Canino.

Leonardo D. Mauro MV Profesional Independiente - Bs. As. Rep. Argentina El Distemper es una de las enfermedades infectocontagiosas caninas mas conocidas por los mdicos veterinarios. Si bien la vacunacin ha podido controlar la enfermedad durante los ltimos 30 aos, se ha visto recientemente un incremento en diversas partes de nuestro pas, la Argentina, en la incidencia de casos de Distemper, debido a la disminucin de los animales vacunados. Resumen El Distemper es una de las enfermedades infectocontagiosas caninas mas conocidas por los mdicos veterinarios. Si bien la vacunacin ha podido controlar la enfermedad durante los ltimos 30 aos, se ha visto recientemente un incremento en diversas partes de nuestro pas, la Argentina, en la incidencia de casos de Distemper, debido a la disminucin de los animales vacunados. Se comienza este trabajo, con un breve recordatorio sobre la presentacin clnica de la enfermedad, y luego se explican los diferentes mtodos directos e indirectos con los que cuenta el clnico practico, para poder lograr un diagnstico certero. Se proveen los conceptos bsicos para encontrar el mtodo adecuado de diagnstico, segn el momento evolutivo de la enfermedad en donde se encuentra el paciente, que tipo de muestra remitir y por ltimo poder interpretar correctamente los resultados, a veces ambiguos, de dichos estudios. Introduccin El Distemper canino es una enfermedad viral y altamente contagiosa. Es producida por un Paramixovirus del genero Morbilivirus, la vacunacin anual suele reducir pero no eliminar su presentacin, y en la medida que la poblacin se encuentre menos vacunada, aumentar la presentacin de casos clnicos. A pesar de ser una enfermedad muy conocida por todos, suele presentar cierta dificultad para la interpretacin de las pruebas de laboratorio complementarias, con el objeto de obtener un diagnstico preciso. Los tres elementos para su diagnstico son el historial clnico, el examen fsico y los estudios de laboratorio. Las manifestaciones clnicas de infeccin respiratoria o gastrointestinal son inespecficas, y el diagnstico no debera basarse solamente en la presentacin de estos signos. Es bastante dificultoso con los estudios actuales ante-mortem descartar categricamente la presencia del Distemper, pues todos los mtodos utilizados pueden dar algunos falsos negativos. Formas clnicas del Distemper La infeccin por el virus del distemper canino se presenta como una enfermedad multisistmica potencialmente fatal que puede involucrar al SNC. Los perros pueden desarrollar un infeccin clnica o subclnica. Se piensa que la mayora de las infecciones de CDV son subclnicas o agudos leves, y que no requieren tratamiento. La infeccin clnica se manifiesta de tres formas: aguda, subaguda y crnica. Aguda Es la forma ms comn. El perodo de incubacin (desde la infeccin hasta la aparicin de signos clnicos) normalmente es de 7 a 14 das. Entre los 3 a 7 das, se presenta fiebre y leucopenia que casi siempre pasan inadvertidas. La fiebre disminuye durante algunos das hasta que se desarrolla una segunda fase febril, que normalmente va acompaada de conjuntivitis, rinitis y anorexia. Los signos gastrointestinales y respiratorios como tos, diarrea, vmitos, anorexia, deshidratacin y prdida de peso pueden seguir a continuacin. Las infecciones bacterianas secundarias a menudo complican este cuadro. Subaguda Los signos del SNC pueden desarrollarse a partir de la enfermedad sistmica como una encfalo mielitis aguda. La presentacin neurolgica incluye: 1. Contracciones bruscas involuntarias localizadas de un msculo o grupo de msculos. 2. Paresia o parlisis que comienzan a menudo en miembros posteriores (ataxia). 3. Convulsiones, sialorrea, movimientos masticatorios, pedaleo de los miembros, miccin involuntaria y/o defecacin. 4. Hiperestesia, vocalizacin, reacciones de miedo. 5. Ceguera. Dependiendo de la severidad de la infeccin, todos o ninguno de los signos neurolgicos pueden ser evidentes. Despus de la recuperacin del distemper agudo o de una presentacin inaparente, los trastornos neurolgicos pueden tardar en presentarse algunas semanas o hasta meses. Pueden verse hiperqueratosis en las almohadillas plantares (Hard Pad Disease) y en la nariz.

Crnica Se han reconocido dos formas crnicas en perros adultos. La primera se presenta a consecuencia de un proceso inmunomediado que produce una encefalitis multifocal (Multi Distemper Encephalomyeltis) que progresa lentamente. Esta forma normalmente ocurre en los perros de 4 a 8 aos. Se presenta con debilidad en miembros posteriores, falta de respuesta a la amenaza, parlisis y temblores de la cabeza. La recuperacin de este tipo de infeccin CDV es posible. La encefalitis crnica del perro viejo (Old Dog Encephalitis) es un desorden progresivo que afecta usualmente a perros mayores de 6 aos. Se presenta con ataxia, movimientos en circulo, presin de la cabeza contra objetos y cambios en la personalidad (no hay respuesta a estmulos externos o no reconoce a los dueos). La persistencia del virus en el SNC produce una reaccin inflamatoria, instalndose una encefalitis crnica. Estos animales no son infecciosos. Diagnstico Hematologa En casos agudos la linfopenia (comn en la 1 semana) y la trombocitopenia (menos comn) son anormalidades que se presentan en forma habitual. Puede presentarse adems monocitosis. Otros cambios dependen de los rganos afectados y de la presencia o no, de infeccin bacteriana secundaria. En casos agudos, algunas inclusiones virales intracitoplasmaticas, pueden ser vistas a veces dentro de linfocitos y eritrocitos circulantes durante el recuento del hemograma. En casos subagudos o crnicos estas pruebas pueden resultar negativas, aunque no se deber descartar la presencia del virus. Estudios indirectos de diagnostico Serologa De todos los mtodos de diagnstico virolgicos para el Distemper, el serodiagnstico es el mas utilizado por los veterinarios, si bien las pruebas son confiables, el problema se produce al interpretar los resultados. Inmunofluorescencia indirecta (IFI) En base a clulas infectadas y la prueba de ELISA en base a virus purificados. Si bien estas dos pruebas se usan habitualmente, en la primera existe la intervencin de un operador para la interpretacin de los resultados, lo que hace que una misma muestra pueda dar valores diferentes, en dos laboratorios distintos. Seroconversin La medicin de anticuerpos sricos IgM (contra las protenas del ncleo viral NP y P) y las IgG (contra los antgenos de la cpsula H y F), pueden ayudar en el diagnstico de Distemper, pero la prueba no diferencia los anticuerpos pasivos maternales, los anticuerpos vacunales y los anticuerpos por infecciones subclnicas, de los anticuerpos que son producto de la enfermedad en cachorros, en animales previamente inmunizados y en los que han tenido contacto previamente con el virus. La deteccin de anticuerpos neutralizantes, precipitantes o citotxicos no es suficiente para el diagnstico. Perros no vacunados, infectados en forma aguda pueden morir sin aparicin de anticuerpos neutralizantes mientras que los infectados en forma subaguda o crnica, pueden tener niveles de anticuerpos comparables con los perros vacunados. La IgM puede ser detectada en perros infectados no vacunados, entre los 6 y 8 das post infeccin. La IgG aparece entre los 10 y 20 das. La prueba de ELISA para la deteccin de IgM especfica contra el virus de moquillo canino, es una prueba til, ya que la IgM en perros infectados persiste por 5 semanas a 3 meses dependiendo de la cepa y la respuesta del husped. En perros vacunados la IgM persiste por aprox. 3 semanas. Falsos negativos pueden observarse en perros que mueren en forma aguda, sin la presencia de respuesta inmunitaria, y puede darse adems, en presentaciones subagudas o crnicas.

Niveles de IgG e IgM en Perros, posteriores a la vacunacin.Waner, T. et. al. "Evaluation of a rapid dotELISA kit for CPV and CDV Immunoglobulin M (IgM) and G (IgG) antibodies. The Veterinary Record. Deteccin de IgG - Ttulos seriados de 2 muestras con 2 semanas de diferencia (los ttulos nicos son de escaso valor), son de valor en perros que no han sido vacunados dentro del mes anterior, un aumento de cuatro veces o mas, entre el suero de la fase aguda y convaleciente, es seal de una enfermedad activa. Anlisis serolgico del liquido cefalorraqudeo (LCR) (Encefalitis) Los signos neurolgicos suelen aparecer entre 1 y 3 semanas, luego que el perro se ha recuperado de los signos gastrointestinales y/o respiratorios. La determinacin de anticuerpos especficos contra el virus en LCR es diagnstico de encefalitis por Distemper. En ausencia de trauma vascular, los anticuerpos especficos no son detectados en LCR, an en animales previamente inmunizados. Pueden haber falsos positivos, cuando en la toma de la muestra hay contaminacin con sangre. No obstante si el ttulo de la muestra de LCR es mas alto que el del suero, se considera que esos anticuerpos se han producido localmente y demuestran una infeccin activa. Puede diagnosticarse Distemper en forma presuntiva, si hay aumento de la concentracin de protenas en LCR, pleocitosis linfocitaria, y son detectados anticuerpos especficos en una muestra no contaminada con sangre perifrica.

La inmunosupresin es frecuente durante la infeccin por Distemper, el titulo bajo de anticuerpos no puede eliminar la enfermedad y los animales mueren. Los anticuerpos maternales pueden persistir durante 2 o 3 meses, los cuales dan resultados serolgicos positivos, aunque no son indicativos de infeccin. Cualquier anticuerpo anti-distemper encontrado en LCR es de gran valor para el diagnstico definitivo de Distemper. Estudios directos de diagnstico Patognesis del Distemper

Deberamos recordar que cuando el animal se presenta en nuestros consultorios con la sintomatologa clnica de la fase aguda, ya han pasado entre 1 y 2 semanas como mnimo, desde que el animal ha estado expuesto por primera vez al virus, por lo tanto Es imperativo de acuerdo a los sntomas predominantes, intentar ubicar el lugar en donde pueda encontrarse el virus dentro del organismo, para poder identificarlo, si es factible, con los estudios directos de diagnstico. Diagnstico definitivo El diagnstico definitivo requiere de la demostracin de cuerpos de inclusin intranucleares e intracitoplasmticos eosinoflicos (Cuerpos de Lentz) por examen citolgico (coloracin de Shorr, Diff Quick), o por inmunofluorescencia directa de muestras citolgicas o histopatolgicas. Los cuerpos de inclusin se pueden ver en eritrocitos y leucocitos, sin embargo estas inclusiones estn presentes solo de 2 a 9 das luego de la infeccin, y no suelen estar presentes cuando los sntomas clnicos aparecen. Los cuerpos de inclusin pueden ser mas fcilmente visualizados en muestras de la costra flogstica o de aspirados de medula sea que en preparados de sangre perifrica. Las partculas virales pueden ser detectadas por anticuerpos fluorescentes (IFA) en clulas de las tonsilas, ganglios linfticos, rbol respiratorio, hisopados conjuntivales, sedimento urinario y LCR de 5 a 21 das post infeccin. El test es especfico, si da positivo, el perro tiene Moquillo. La partcula viral puede ser encontrada en las clulas del LCR, en animales con signos neurolgicos, en el 80% de los casos. En raras ocasiones la vacunacin reciente puede dar falsos positivos. Ms de una muestra puede ser necesaria para encontrar e identificar el virus, en casos subagudos o crnicos estas pruebas pueden resultar negativas, aunque no se descarta la presencia del virus. Da muchos falsos negativos. Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) Esta prueba ya disponible en nuestro pas, permite detectar la protena (NP) del nucleocpside viral y puede resultar positiva an cuando las pruebas de aislamiento y la Inmunocitoqumica no logren detectar al virus. Es un buen mtodo para diagnstico temprano en perros no vacunados recientemente. La tcnica consiste en tomar una porcin clave del ARN viral y por medios enzimticos multiplicarla de forma exponencial; si en una muestra hay una nica molcula de ARN (indetectable por cualquier otro mtodo), con esta reaccin, luego de 20 pasos (en ciclos de 3 a 5 minutos cada uno), podemos obtener 1 milln de molculas idnticas.

Comparadas con sta tecnologa, las pruebas tradicionales de identificacin y deteccin de anticuerpos, son casi obsoletas; un resultado positivo de PCR nos indica, casi sin margen de error, que el ARN del agente est presente en el animal y si est el ARN, la infeccin es segura. La sensibilidad de sta prueba ha sido incrementada notablemente, por medio de la tcnica de "nesting" (dos amplificaciones en secuencia, siendo la segunda para un segmento an ms especfico de ARN del agente). Una prueba de PCR puede detectar infecciones incluso al segundo da post-infeccin (no debemos esperar el tiempo necesario para que se produzca la seroconversin o respuesta inmune).

Es posible encontrar falsos positivos alrededor de 1 a 2 semanas luego de la vacunacin. Un resultado positivo es un buen indicador de enfermedad, sin embargo un resultado negativo, no descarta Distemper, sobretodo si la muestra se toma en forma tarda durante el curso de la enfermedad, o sea cuando la presencia y eliminacin del virus han disminuido. Biopsia de piel Un estudio reciente descubri que el virus del Distemper canino puede ser encontrado en biopsias superficiales de 1 cm de piel normal del cuello dorsal, es una prueba ante-mortem fiable (sensible y especfica). El efecto de la vacunacin en esta prueba, es incierto y probablemente sea menos confiable durante la fase neurolgica avanzada de la enfermedad. Enviar la muestra-biopsia en formol. Necropsia/histopatologa Se deben analizar muestras de bazo, amgdalas, ganglios linfticos, estmago, duodeno, vejiga y cerebro, por histopatologa e inmunohistoqumica, pues el Distemper puede localizarse en diferentes tejidos. Se puede diagnosticar con seguridad con un estudio histopatolgico hecho por un patlogo calificado. Si el Moquillo es un problema poblacional y el diagnstico definitivo no puede hacerse por otros mtodos, una necropsia es una inversin que vale la pena realizar en un perro muerto sospechoso, con el objeto de establecer si el Distemper est presente o no, en dicha comunidad. Conclusin Como hemos visto, existen numerosas pruebas para el diagnstico del Distemper, pero no existe una de eleccin, de acuerdo a diferentes variables, como la historia previa vacunal del animal, el estado evolutivo de la enfermedad, la presencia de signos neurolgicos, el acceso a laboratorios de referencia que cuenten con la tecnologa adecuada y la capacidad econmica del propietario para afrontar pruebas onerosas como por Ej. el PCR, es que definiremos cul o cuales son las pruebas mas convenientes a las que podemos recurrir, para llegar a un resultado adecuado. Bibliografa Distemper canino: estado actual M. J.G Appel and B. A. Summers James A. Baker Institute for Animal Health, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York, USA. Forma Neurologica del Moquillo, M. Vandevelde y M. Cachin - Berna, Suiza, Kirk Bonagura XI. Principios en la inmunizacin contra Distemper Canino, Leonardo Mauro, MV Diagnostic de la maladie de Carr par PCR, VF NEWS, N 1. Relation of clinical signs to pathological changes in 19 cases of canine distemper encephalomyelitis. Koutinas AF, Polizopoulou ZS, Baumgaertner W, Lekkas S, Kontos V. Clinic of Companion Animal Medicine, Faculty of Veterinary Medicine, Aristotle U. of Thessaloniki, Stavrou Voutyra 11, Thessaloniki, GR-54627, Greece. Canine Distemper Diagnosis - University of Saskatchewan, Saskatoon, Saskatchewan Canada, Switchboard (306) 966-4343 Canine distemper: Early immune responses in the CNS (14-Aug-1999) A. Tipold Small Animal Clinic, Bischofshaler Damm, Hannover, Germany. Canine Distemper IgM IFA Antibody Detection Kit, FULLER LABORATORIES 1135 E. Truslow Avenue Fullerton, CA 92631 USA

Detection of Canine Distemper Virus Nucleoprotein RNA by Reverse Transcription-PCR Using Serum, Whole Blood, and Cerebrospinal Fluid from Dogs with Distemper A. L. Frisk, M. Knig, A. Moritz, and W. Baumgrtner Institut fr Veterinr-Pathologie, Institut fr Virologie, Fachbereich Veterinrmedizin, and Medizinische und Gerichtliche Veterinrklinik, Justus-Liebig-Universitt Giessen, 35392 Giessen, Germany. Canine Distemper: Considerations in a Shelter, Center for Companion animals, Health UC Davis School of Veterinary Medicine. Distemper, WB Thomas DVM Dip. ACVIM (Neurology) University of Tennessee, Knoxville, TN Studies on manifestations of CDV infection in an urban dog population. Blixenkrone-Moller M, Svansson V, Have P, Orvell C, Appel M, Pedersen IR, Dietz HH, Henriksen P. Laboratory for Virology and Immunology, Royal Veterinary and Agricultural University, Denmark. Vet Microbiol 1993 Oct;37(1-2):163-73. Testing for Canine Distemper, Antech News. November o 2001 Canine distemper virus neutralizing antibodies in vaccinated dogs Rikula U, Nuotio L, Sihvonen L. National Veterinary and Food Research Institute, Department of Virology and Epidemiology, Helsinki, Finland. Vet Rec 2000 Nov 18;147(21):598-603 Overcoming maternal antibody interference with canine parvovirus vaccination Roy V. H. Pollock, DVM, PhD Michael J. Coyne, VMD, PhD Pfizer Animal Health 812 Springdale Dr. Exton, PA 19341 Serodiagnosis of Canine Distemper and Parvovirus, Immunocomb, Biogal Labs Clinical use of serum parvovirus and distemper virus antibody titers for determining revaccination strategies in healthy dogs Lisa Twark, DVM, and W. Jean Dodds, DVM Fuente: www.veterinaria.org