UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL Y RECURSOS NATURALES

ACTIVIDAD N 1: PREPARACIN DE UNA ENZIMA PURIFICADA

PRESENTACIN DE DATOS

1. Preparar la acetona con la levadura hmeda 48 hrs antes de realizar el experimento.

2. En el laboratorio se filtro la acetona en un vaso precipitado a travs del papel filtro que se coloco en la parte ancha del embudo. El sedimento que se quedo atrapado en el papel filtro lo pasamos sobre una luna de reloj. Lo dejamos en reposo, obteniendo as levadura pura.

3. Luego echar 0,1g de levadura pura en un tubo de ensayo agregndole 2ml de buffer-fosfato de pH=4.5, y despus de un tiempo pasarlo solo la parte liquida (enzima) en otro tubo de ensayo.
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Por otro lado se dispone de cuatro tubos de ensayo sobre la gradilla. 1. En el tubo A se agrega 1ml de sacarosa y en cada uno de los tubos B, C y D 0.5ml de agua, en seguida del tubo A se pasa 0.5ml al tubo B, agitar este, y ahora pasar de B al tubo C; hacer lo mismo para pasarlo de C al tubo D y tambin agitar para desechar 0.5ml de este ultimo tubo, finalmente tenemos con igual cantidad de volumen los cuatro tubos.

2. El siguiente paso es agregar 0.5ml de enzima a los cuatro tubos, y levarlos con toda la gradilla a la estufa y tenerlo all durante 15 minutos; con la finalidad de aumentar la temperatura y as hacer que la velocidad de la reaccin se d ms rpida.

3. Luego de sacar de la estufa agregar 1ml de reactivo de BENETH los cuatro tubos.

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4. Encender el mechero para flamear en la llama a cada uno de los cuatro tubos. Durante este proceso se observa el cambio de coloraciones diferenciadas entre los cuatro tubos; tal diferencia de color se debe a la concentracin del sustrato y la actividad realizada por la enzima sobre esta.
RESULTADOS

TUBO (1) (2) (3) (4)

COLORACION (EN LLAMA) Naranja intenso Verde claro Naranja claro Verde oscuro

CONCLUSIN: Si el color es intenso es porque hay ms sacarosa en el tubo, y que la enzima ha actuado muy poco (porque hay mucho sustrato)

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ACTIVIDAD N 2: METABOLISMO DE LAS LEVADURAS

PRESENTACIN DE DATOS

1. Se preparo la levadura en agua en un matraz y esperar por lo menos 10 minutos.

2. Se lleno de agua un vaso precipitado de 1000ml, y se instalo una bureta

invertida sobre esta con la ayuda de un soporte universal.

3. Se succiono agua por la parte superior de la bureta con una manguerita hasta que est completamente llena de agua y se cierra la llave logrando que el agua se quede sin descender.

4. Ahora en un tubo de ensayo de boca un poco ancha se ech la levadura preparada ms o menos las partes del tubo. Luego colocando un tapn que en el cual estaba instalada una manguerita (por el centro atravesando el tapn), y la otra parte libre se coloco por la parte baja (sumergida al agua) de la bureta.

5. La levadura en el tubo de ensayo toma el oxigeno (O2) que haba en la parte superior y luego respirando CO2 y este se expande a travs de la manguerita depositndose dentro de la bureta que est llena de agua, como
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este gas (CO2) tiene una densidad menor la del agua lquida comienza ascender dentro de la bureta y acumularse en la parte superior. A medida que pasa el tiempo el CO2 va desplazando el agua; es por eso se ve que el volumen del agua en la bureta disminuye.

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