Cerebellar Purkinje Cell Activ (1) .En - Es (1) AAPP2

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BREVE INFORME
La actividad de las células de Purkinje del cerebelo modula el

comportamiento agresivo
skyler l jackman1,2, Christopher H Chen1, Heather L Offermann1, Iain R Drew1, Bailey
Harrison1, Anna M. Bowman2, Katelyn M Película1, Isabel Flaquer1, Wade G Regehr1*
1 Departamento de Neurobiología, Facultad de Medicina de Harvard, Boston, Estados Unidos;

2 Instituto Vollum, Universidad de Ciencias y Salud de Oregón, Portland, Estados Unidos
ResumenAunque el cerebelo se asocia tradicionalmente con el equilibrio y la función motora, también desempeña
funciones más amplias en los comportamientos afectivos y cognitivos. La evidencia sugiere que el vermis cerebeloso puede
regular el comportamiento agresivo, aunque los circuitos cerebelosos y los patrones de actividad que influyen en la
agresión siguen sin estar claros. Utilizamos métodos optogenéticos para modular bidireccionalmente la actividad de las
células de Purkinje del cerebelo delimitadas espacialmente para evaluar el impacto en la agresión en ratones. El aumento
de la actividad de las células de Purkinje en el vermis redujo significativamente la frecuencia de los ataques en un ensayo
de residente-intruso. La agresión reducida no fue una consecuencia de la función motora deteriorada, porque la
estimulación optogenética no alteró el rendimiento motor. En experimentos complementarios, la inhibición optogenética
de las células de Purkinje en el vermis aumentó la frecuencia de los ataques. Estos resultados sugieren que la actividad de
las células de Purkinje en el vermis cerebeloso regula la agresión y respalda aún más la importancia del cerebelo en la
conducción de comportamientos afectivos que podrían contribuir a los trastornos neurológicos.
Introducción
Los déficits motores profundos, como la ataxia y la pérdida del control oculomotor, son las manifestaciones más
* Por correspondencia:
obvias del daño cerebeloso. Esto ha contribuido a la opinión popular de que el cerebelo está involucrado
wade_regehr@hms.harvard.edu principalmente en la función motora, pero esto está lejos de ser una visión completa de las funciones conductuales
del cerebelo. Los estudios de fMRI sugieren que algunas regiones de la corteza cerebelosa están dedicadas a la
Conflicto de intereses:Los
función motora, pero otras regiones están involucradas en la memoria de trabajo, el lenguaje, la emoción, la
autores declaran que no existen
función ejecutiva y muchas otras funciones no motoras.Stoodley y Schmahmann, 2009;Van Overwalle et al., 2014).
intereses contrapuestos.
El cerebelo también está implicado en el trastorno del espectro autista (Wang et al., 2014), ansiedad (Moreno-Rius,
Fondos:Ver página 11 2018), desorden de déficit de atención (Berquín et al., 1998), esquizofrenia (Andreasen y Pierson, 2008), y otros
Recibió:31 de octubre de 2019 trastornos neurológicos no motores (Philips et al., 2015).
Aceptado:20 abril 2020 La región del vermis posterior de la corteza cerebelosa es particularmente intrigante con respecto a la
Publicado:28 abril 2020 participación en conductas no motoras. El daño al vermis cerebeloso en adultos puede conducir a deficiencias en la
función ejecutiva, la cognición espacial, el procesamiento lingüístico, la regulación afectiva, la irritabilidad, la ira, la
Editor revisor:Vatsala
agresión y el llanto o la risa patológicos.Schmahmann y Sherman, 1998;Levisohn et al., 2000). También hay amplia
Thirumalai, Centro Nacional de
Ciencias Biológicas, India evidencia que sugiere que el vermis influye en la agresión. En estudios seminales que cartografiaron la
organización somatotópica de la corteza cerebelosa, el fisiólogo italiano Guisseppe Pagano descubrió que la
Derechos de autor Jackman et al.
inyección de curare en el vermis hacía que el animal "se pusiera repentinamente furioso y se arrojara sobre los
Este artículo se distribuye bajo los
presentes, tratando de morderlos" o "saltar en el aire, pugnando por morder quién sabe cuántos fantasmas de su
términos de laLicencia de atribución
psique agitada' (Pagano, 1904). Estudios de lesiones posteriores demostraron que la resección del vermis tenía la
de Creative Commons,que permite el
uso y la redistribución sin influencia opuesta en el comportamiento y producía un efecto calmante.Sprague y Chambers, 1959;Peters y
restricciones siempre que se acredite Monjan, 1971;Berman et al., 1974). Se ha demostrado que la estimulación eléctrica de los núcleos cerebelosos
el autor original y la fuente. profundos impulsa comportamientos agresivos como la ira fingida (Zanchetti y Zoccolini, 1954) y ataque (Reis et al.,
1973). en clínica humana
Jackmanet al.eLife 2020;9:e53229.DOI: https://doi.org/10.7554/eLife.53229 1 de 14

Breve informe neurociencia
estudios, estimular la superficie del vermis mejoró el control emocional y redujo los arrebatos
agresivos (salud, 1977), y reducción de los sentimientos de ira (Cooper et al., 1976).
Estos estudios implicaron al vermis en la regulación de la agresión, pero han sido difíciles de interpretar. Las
células de Purkinje (PC), las únicas células de salida de la corteza cerebelosa, disparan continuamente hasta 100 Hz
e inhiben las neuronas en los núcleos cerebelosos profundos (DCN) que a su vez influyen en otras regiones del
cerebro. Las observaciones de que la estimulación eléctrica del vermis redujo la agresión (salud, 1977), mientras
que la estimulación de la DCN aumentó la agresión (Reis et al., 1973), son consistentes con las células inhibidoras
de la actividad de PC en el DCN (Telgkamp y Raman, 2002;Alviña et al., 2008). Esto conduce a la interpretación de
que la actividad de PC elevada y la actividad de DCN disminuida suprimen la agresión y, por el contrario, la actividad
de DCN elevada (y, por implicación, la actividad de PC disminuida) suprime la agresión. Sin embargo, es difícil
conciliar los estudios de estimulación con el efecto de domesticación observado en los estudios de lesiones.Sprague
y Chambers, 1959). Las lesiones del vermis disminuirán la inhibición de PC de la DCN y, por lo tanto, se espera que
promuevan la agresión al elevar el disparo dentro de la DCN. En cambio, suprimen la agresión.
Numerosos factores hacen que los experimentos de estimulación eléctrica y lesiones sean difíciles de
interpretar y podrían contribuir a la aparente discrepancia entre estos dos enfoques. La estimulación eléctrica de la
corteza cerebelosa activa todo tipo de neuronas en la vecindad del electrodo, incluidas las PC. Las interneuronas de
la capa molecular también se activarán e inhiben la activación de PC (Heiney et al., 2014). La estimulación también
activa antidrómicamente las fibras musgosas, las fibras trepadoras y las entradas moduladoras de otras regiones (
Llinás y Sasaki, 1989;Baker y Edgley, 2006), lo que podría contribuir a las consecuencias conductuales de la
estimulación. Además, la estimulación eléctrica de las PC puede sincronizar la actividad, lo que paradójicamente
podría aumentar los picos en la DCN (Persona y raman, 2012a;Persona y raman, 2012b). Por estas razones, no está
claro cómo la estimulación eléctrica de la corteza vermal influye en el circuito del cerebelo. Para los estudios de
lesiones del vermis cerebeloso, no está claro cómo se alteró el disparo de las neuronas DCN corriente abajo.
Aunque se esperaría que la pérdida de inhibición aumentara la activación de DCN, se ha demostrado que la
ablación genética de las PC paradójicamente disminuye la activación en DCN.Baurle et al., 1997), lo que sugiere que
los mecanismos compensatorios regulan las propiedades de las neuronas DCN en ausencia de entrada de PC.
Además, estudios previos no cuantificaron la magnitud y el curso temporal de los efectos conductuales provocados
por las intervenciones en el cerebelo.
Para determinar el papel del cerebelo en la regulación de la agresión, utilizamos técnicas optogenéticas para controlar
selectivamente la actividad de PC en ratones. Utilizamos el ensayo residente-intruso, una medida de agresión territorial
natural en roedores, para proporcionar una medida de la extensión y el curso temporal de un comportamiento agresivo (
Koolhaas et al., 2013). Manipular el disparo de PC en el vermis, pero no en otra región del cerebelo, permitió un control
rápido y bidireccional de la agresión. Este estudio proporciona evidencia de que en el vermis cerebeloso, la activación de PC
elevada suprime la agresión, mientras que la supresión de la activación de PC promueve el comportamiento agresivo.
Resultados
Para modular selectivamente la actividad de las PC en el vermis cerebeloso, usamos ratones PCP2-cre (Zhang et al.,
2004) para restringir la expresión de las opsinas microbianas ChR2 (channelrhodopsin-2, [Boyden et al., 2005]) y
NpHR3.0 (halorrodopsina, [Zhang et al., 2007]) a PC. Registros electrofisiológicos in vitro (Figura 1a) confirmaron
que la estimulación de ChR2 podría impulsar aumentos graduales en la activación de PC que escalaron con la
intensidad de la luz (Figura 1b), como se informó anteriormente (Guo et al., 2016). De manera similar, la
estimulación con halorodopsina disminuyó las tasas de disparo de PC de una manera dependiente de la intensidad
de la luz (Figura 1c). Para manipular la actividad de PC in vivo, se implantaron crónicamente fibras ópticas en
ratones PCP2-cre::ChR2 o PCP2-cre::NpHR machos adultos (>P42) sobre la superficie del vermis cerebeloso. Las
fibras se colocaron en la línea media sobre el lóbulo VII (Figura 1—suplemento de figura 1), una región sugerida
para desempeñar un papel en el procesamiento emocional (Stoodley y Schmahmann, 2009). Grabaciones in vivo
posteriores a través de una craneotomía adyacente en animales anestesiados confirmaron la capacidad de la luz de
la fibra óptica implantada para aumentar o disminuir de manera confiable la tasa de disparo de las PC putativas
que expresan ChR2 o halorodopsina, respectivamente (Figura 1d–f). Al igual que con la estimulación eléctrica, la
estimulación optogenética tiene el potencial de inducir pausas en el disparo de PC. Si se producen pausas
sincrónicamente entre varias PC que inhiben una neurona DCN, podría promover la activación en la DCN (Persona y
raman, 2012a). Examinamos el tiempo de disparo de las PC evocado ópticamente y descubrimos que había
respuestas temporales complejas en diferentes PC, aunque no hubo una pausa en

Figura 1.Control optogenético de la actividad de las células de Purkinje. (a)Esquema de registro para registro in vitro y estimulación optogenética. (b)Tasas de disparo provocadas por la
estimulación de ChR2 a diferentes intensidades (destellos de 0,5 ms, 50 Hz, n = 6). (C)Inhibición de PC a diferentes intensidades de luz (iluminación sostenida, n = 4). (d)Esquema para
registrar la actividad de la PC durante la estimulación in vivo a través de un implante crónico de fibra óptica. (mi)Arriba: Grabación representativa de una sola unidad durante la estimulación
de ChR2 y (abajo) tasa de disparo promedio (n = 6). (F)Grabaciones de una sola unidad durante la estimulación con halorodopsina (n = 6). Barras de escala, 100 ms (horizontal), 20 mV
(vertical, (antes de Cristo),0,2 mV (vertical, (e, f). (gramo)Esquema para registrar la actividad de DCN durante la estimulación in vivo en animales despiertos. (h)Tasa de disparo normalizada
promedio de neuronas DCN durante la estimulación de ChR2 de PC vermales (n = 4). (i)Activación promedio de neuronas DCN durante la inhibición mediada por halorhodopsina de PC
vermales (n = 11). Los datos promedio en todas las figuras representan la media±SEM. La versión en línea de este artículo incluye los siguientes datos de origen y suplemento(s) de figura
para la figura 1:
Fuente de datos 1.Datos de modulación de disparo optogenético.

Figura suplemento 1.Imágenes fluorescentes de la expresión de ChR2-YFP en (a)un cerebro completo y (b)una sección sagital del cerebelo de un ratón PCP2-cre::Ai32,
con lóbulos marcados con VX.
Figura suplemento 2.Análisis a escala de milisegundos de las tasas de activación inducidas por la estimulación in vivo en animales PCP2-cre::Ai32.
disparo promedio de PC (Figura 1—suplemento de figura 2). Pasamos a registrar las respuestas de las neuronas en los núcleos
cerebelosos profundos (DCN) a las manipulaciones optogenéticas de la activación de PC en animales despiertos (Figura 1g). El
aumento de la activación de PC con ChR2 disminuyó la activación de las neuronas DCN (Figura 1h,Figura 1—suplemento de figura 2),
mientras que la disminución de la activación de la PC con halorhodopsina aumentó la activación de las neuronas en la DCN (Figura 1i
). Las magnitudes de los cambios en la activación de las neuronas DCN fueron relativamente

Figura 2.La manipulación de la actividad de las células vermales de Purkinje no afecta la coordinación, la locomoción ni la ansiedad. (
a)Tiempo de caída para los ensayos rotarod durante la excitación mediada por ChR2. Los ratones se probaron en dos ensayos
consecutivos y se asignaron al azar para recibir estimulación durante el primer o el segundo ensayo. (n = 13) (b)Igual que en (a),pero
para la inhibición mediada por halorhodopsina de la descarga de PC vermal. (n = 16) (C)Esquema para el ensayo de campo abierto
con estimulación optogenética. (d)Datos de seguimiento representativos a lo largo de períodos alternos con estimulación (azul) y sin
(gris). (mi)Distancia total recorrida y tiempo pasado en el centro de la arena para ratones durante épocas con y sin estimulación de PC
vermales (n = 13). (f, g),Igual qued), (e)pero para la inhibición mediada por halorhodopsina de las PC vermales (n = 17).
La versión en línea de este artículo incluye los siguientes datos de origen y suplemento(s) de figura para la figura 2:
Fuente de datos 1.Datos de campo abierto (ChR2).

Fuente de datos 2.Datos de campo abierto (Halo).
Fuente de datos 3.Datos rotarod paraFigura 2A.
Figura suplemento 1.La manipulación de la activación de las células vermales de Purkinje no afecta la locomoción.

modesto. Esto puede reflejar en parte las mayores tasas de activación de las neuronas en animales despiertos.
Además, fue un desafío registrar las neuronas DCN que eran objetivos de la población de PC que fue influenciada
por la luz y otras neuronas en DCN pueden ser un objetivo más fuerte y sufrir cambios más grandes en la actividad
que los informados aquí. Por esta razón, los efectos sobre la activación de DCN deben considerarse límites
inferiores.
Después de permitir al menos 1 semana para la recuperación de las cirugías de implantación de fibras, los animales se
colocaron en un campo abierto y se estimularon con intensidades de luz crecientes para determinar si la manipulación de la
actividad de la PC producía déficits motores manifiestos o consecuencias conductuales. En ratones que expresan ChR2, una
fuerte estimulación vermal utilizando las intensidades de luz más altas (~110 mW/mm2en la cara del implante de fibra
óptica) a menudo resultó en efectos motores claros, lo que provocó que los ratones se quedaran inmóviles o mostraran una
actividad distónica y similar a una convulsión. Este comportamiento se parecía a descripciones previas de actividad similar a
una convulsión impulsada por una fuerte estimulación eléctrica de la corteza vermal (Clarck, 1937;Cámaras, 1947). Por lo
tanto, para todos los ensayos posteriores, adaptamos la intensidad de la luz entregada a cada animal a la intensidad
máxima donde los animales permanecieron móviles en el campo abierto y no mostraron signos de deterioro motor
(intensidad media 90±3,9 mW/mm32). Por el contrario, los animales que expresan halorodopsina no mostraron efectos
conductuales obvios en respuesta a la estimulación con la máxima intensidad de luz proporcionada por la fuente de luz LED
acoplada a fibra (61 mW/mm2). Este valor se utilizó para todos los ensayos posteriores.
Debido a que el cerebelo desempeña funciones bien establecidas en el control motor y el equilibrio, y se ha demostrado
que la manipulación optogenética de las PC en el lóbulo simplex perturba los movimientos de las extremidades anteriores.
Lee et al., 2015), primero probamos si la manipulación del disparo de PC vermal causaba alteraciones motoras más sutiles
que las descritas anteriormente, que podrían interferir con la expresión de otros comportamientos. Para evaluar la
coordinación, los animales se sometieron a pruebas en ensayos rotarod acelerantes durante dos pruebas consecutivas
durante las cuales recibieron estimulación óptica o ninguna estimulación. Ni la excitación con ChR2 (Figura 2a) ni la
inhibición con halorhodopsin (Figura 2b) afectó el rendimiento del rotarod. Luego evaluamos la locomoción durante los
ensayos de campo abierto. Los animales recibieron bloques alternos de 3 min de excitación optogenética (Figura 2c).
Seguimiento automatizado de animales (Figura 2d) revelaron que la activación optogenética de las PC no tuvo efecto sobre
la distancia recorrida, ni sobre el tiempo que los animales pasaron en el centro de la arena, una medida de ansiedad (Figura
2e). Para evaluar el efecto de la estimulación en la locomoción con una mayor resolución temporal, promediamos la
velocidad de los animales en todos los bloques de estimulación dentro de la prueba, nos centramos en el inicio de la
estimulación y descubrimos que la estimulación no indujo ningún cambio transitorio en la locomoción (Figura 2—
suplemento de figura 1). De manera similar, la inhibición optogenética no afectó la locomoción o el tiempo que los animales
pasaron en el centro de la arena (Figura 2f–gy Figura 2—suplemento de figura 1). Juntos, estos datos sugieren que la
manipulación de la activación de PC vermales no afecta fuertemente la coordinación, la locomoción o la ansiedad, aunque la
estimulación optogenética de PC a intensidades de luz fuertes (mayores que las utilizadas para los ensayos de
comportamiento) provocó un deterioro motor profundo, como se describió previamente para la estimulación eléctrica
vermal. (Cámaras, 1947).
Para evaluar el impacto de la actividad cerebelosa en los comportamientos agresivos y sociales, realizamos ensayos de
residente-intruso mientras manipulamos optogenéticamente la actividad de PC en el animal residente (agresor) (Figura 3a).
Aunque los ratones residentes muestran comportamientos agresivos de manera confiable en los ensayos de intrusos
residentes, los ataques ocurren a una tasa relativamente infrecuente de <1 ataque por minuto.Leypold et al., 2002; Yang et
al., 2013;Lewis et al., 2015). Con el fin de aumentar la agresión inicial, los ratones implantados con fibra se alojaron con
hembras, lo que les brindó la oportunidad de aparearse, y luego se alojaron individualmente durante al menos 1 semana
antes de los ensayos. Se introdujeron machos adultos de intrusos BALB/c en la jaula del residente durante 10 min. La
estimulación optogenética se administró a los residentes en bloques alternos de 1 min. Se registraron el inicio y la duración
de múltiples comportamientos, incluida la agresión (ataques, ruidos de cola, persecución y amenazas laterales), encuentros
sociales (contacto cara a cara y olfateo anogenital), así como el aseo personal por parte del residente (Figura 3b).
La activación optogenética de las PC vermales disminuyó significativamente el número de ataques (p = 0.003,

Student's emparejado de dos colas).t-prueba) (Figura 3c, verFigura 3—suplemento de figura 1para estadísticas
detalladas). La estimulación no afectó la frecuencia de las interacciones sociales (p = 0,7), o la tasa de ruidos de cola,
persecución o amenaza lateral, aunque sí aumentó la tasa de aseo personal por parte del residente (Figura 3—
suplemento de figura 2). Una ventaja del enfoque optogenético que hemos utilizado es que nos permite determinar
con precisión el curso temporal del efecto de la estimulación sobre el comportamiento agresivo con mayor
resolución temporal. Clasificamos los ataques en incrementos de 10 s y promediamos entre bloques alternos al
inicio de la estimulación. Aunque los ataques son poco frecuentes y estocásticos, este

Figura 3.Control bidireccional de la agresión por modulación optogenética de la actividad de las células vermales de Purkinje. (a)
Esquema para ensayos de residente-intruso con estimulación optogenética. (b)Puntuación representativa de conductas sociales y
agresivas. (C)Número promedio de ataques y encuentros sociales durante los ensayos de ChR2 (31 ensayos de 12 residentes). (d)
Histograma de tiempo de periestímulo de la probabilidad de ataques (arriba) e investigaciones sociales (abajo) dentro de intervalos
de 10 s durante épocas con y sin excitación mediada por ChR2 de PC vermales. (p.ej),Igual que en (b–d), pero durante la inhibición
mediada por halorodopsina de las PC vermales (34 ensayos de 15 residentes).
La versión en línea de este artículo incluye los siguientes datos de origen y suplemento(s) de figura para la figura 3:
Fuente de datos 1.Datos de Resident Intruder Halo Vermis. Fuente de datos

2.Intruso residente Sin datos de Opsin Vermis. Figura suplemento 1.
Significación estadística de los efectos conductuales. Figura 3 continúa en la
página siguiente

Figura 3 continuación
Figura suplemento 2.Efecto de la manipulación de la actividad de las células vermales de Purkinje en el aseo, el traqueteo de la cola y las
embestidas agresivas durante los ensayos de intrusos residentes.
Figura suplemento 3.La agresión no se ve afectada por la luz sola o por la estimulación de las células Crus II Purkinje.
Suplemento de figura 3—datos de origen 1.Datos paraFigura 3—suplemento de figura 3A.
Suplemento de figura 3: datos de origen 2.Datos paraFigura 3—suplemento de figura 3B.
El análisis reveló que la activación óptica de las PC redujo inmediatamente la frecuencia de ataque, y cuando se
detuvo la iluminación, la frecuencia de ataque aumentó gradualmente en el minuto siguiente (figura 3d). La
estimulación redujo la frecuencia de los ataques en un 56% en los 10 s inmediatamente posteriores al inicio de la
estimulación (figura 3d). Para poner esto en contexto, la ablación genética de las neuronas en el hipotálamo
ventromedial, una región del cerebro conocida coloquialmente como el "área de ataque" debido a su importancia
en la regulación de la agresión, disminuye la frecuencia del ataque en poco más del 50 % (Yang et al., 2013).
Para probar si la disminución de los ataques podría deberse a una influencia de distracción de la luz que escapa
de la fibra óptica implantada, realizamos ensayos de intrusos residentes con una cohorte separada de ratones de
tipo salvaje que no expresaban opsinas y descubrimos que la estimulación óptica no tuvo efecto en ninguno de los
ataques. o interacciones sociales (Figura 3—suplemento de figura 3). Para probar si el efecto sobre la agresión era
específico para estimular la actividad en el vermis posterior, repetimos los experimentos en animales que
expresaban ChR2 pero implantamos la fibra óptica sobre una región fuera del vermis. Se ha demostrado que las
manipulaciones optogenéticas de la actividad de las células de Purkinje en muchas regiones impulsan los
movimientos motores en ratones.Witter et al., 2013;Heiney et al., 2014;Proville et al., 2014;Lee et al., 2015), lo que
indirectamente podría afectar la expresión de la agresión y otros comportamientos. Para evitar la confusión de los
efectos motores, los implantes se colocaron sobre Crus II, una región que no se ha implicado en la regulación de la
agresión, pero donde la manipulación de la actividad neuronal no conduce a fenotipos motores evidentes en
roedores.Yamaguchi y Sakurai, 2016). En estos ratones, estimular la activación de PC no tuvo efecto sobre la
frecuencia de los ataques (Figura 3—suplemento de figura 3). Juntos, estos resultados sugieren que el aumento de
la activación de PC en el vermis cerebeloso da como resultado una disminución rápida y significativa de la agresión.
Si elevar la activación de PC en el vermis disminuye la agresión, ¿aumenta la agresión la supresión de la

activación de PC? No es posible abordar esta pregunta con estimulación eléctrica, pero es posible usando
optogenética. Inhibición de PC con halorodopsina (Figura 3e) tuvo efectos opuestos sobre la agresión, aumentando
significativamente el número de ataques (p=0,01) y disminuyendo las interacciones sociales (p=0,03) (Figura 3f). El
promedio de la frecuencia de ataque a lo largo de múltiples épocas de estimulación mostró que la frecuencia de
ataque casi se duplicó en los 10 s siguientes al inicio de la inhibición de las PC impulsada por halorhodopsina (
Figura 3g). Estos resultados indican que la actividad de las PC en el vermis cerebeloso ejerce una influencia
bidireccional sobre el comportamiento agresivo.
Discusión
Aquí demostramos que la actividad de las células de Purkinje en el vermis posterior impulsa cambios bidireccionales rápidos en el comportamiento agresivo. Varios aspectos de nuestro estudio
proporcionan avances importantes sobre estudios previos que implicaron al cerebelo en la regulación de la agresión. Primero, demostramos que la actividad del cerebelo regula la agresión de
los roedores en un ensayo establecido que es susceptible de cuantificación. Este enfoque abre la puerta a estudios cuantitativos en un modelo animal manipulable genéticamente y promete ser
beneficioso para futuros estudios sobre el control cerebeloso de la agresión. En segundo lugar, dado el papel del cerebelo en el control motor, era importante determinar si los efectos sobre la
agresión eran una consecuencia secundaria del deterioro de la función motora. Evaluamos esto utilizando ensayos de campo abierto y rotorrod, y encontró que la misma estimulación que
alteraba la agresión no afectaba el rendimiento motor. Estudios previos no realizaron una evaluación tan cuantitativa del rendimiento motor. En tercer lugar, la estimulación que usamos para
suprimir el comportamiento fue más selectiva de lo que se pudo lograr con la estimulación eléctrica empleada en estudios previos, que además de estimular directamente a las PC, puede
activar fibras moduladoras, fibras musgosas, fibras trepadoras y neuronas inhibitorias en el cerebelo. corteza. En consecuencia, en nuestros experimentos con ChR2, podemos atribuir la
disminución de la agresión a un aumento en la actividad de la PC. Cuarto, demostramos que en nuestros experimentos la estimulación que usamos para suprimir el comportamiento fue más
selectiva que la que se pudo lograr con la estimulación eléctrica empleada en estudios previos, que además de estimular directamente a las PC, puede activar fibras moduladoras, fibras
musgosas, fibras trepadoras y neuronas inhibitorias en la corteza cerebelosa. En consecuencia, en nuestros experimentos con ChR2, podemos atribuir la disminución de la agresión a un
aumento en la actividad de la PC. Cuarto, demostramos que en nuestros experimentos la estimulación que usamos para suprimir el comportamiento fue más selectiva que la que se pudo
lograr con la estimulación eléctrica empleada en estudios previos, que además de estimular directamente a las PC, puede activar fibras moduladoras, fibras musgosas, fibras trepadoras y
neuronas inhibitorias en la corteza cerebelosa. En consecuencia, en nuestros experimentos con ChR2, podemos atribuir la disminución de la agresión a un aumento en la actividad de la PC.
Cuarto, demostramos que en nuestros experimentos

los aumentos en los disparos de PC disminuyeron los disparos en el DCN y la disminución de los disparos de PC
hizo lo contrario. En quinto lugar, encontramos que la supresión de la actividad de la PC aumentó la agresión. Esto
es consistente con la observación de que estimular la DCN promueve la agresión (Zanchetti y Zoccolini, 1954;Reis et
al., 1973), pero difiere de la observación de que las lesiones cerebelosas suprimen la agresión. Los estudios en otras
regiones del cerebro han descrito diferencias de comportamiento similares entre los efectos de la actividad de
manipulación aguda y las lesiones.Hong et al., 2018). Es probable que las lesiones dentro del vermis se acompañen
de mecanismos compensatorios dentro del DCN.Baurle et al., 1997). Finalmente, al regular optogenéticamente el
disparo de PC, proporcionamos evidencia de que el cerebelo puede regular rápida y bidireccionalmente la agresión.
El presente estudio plantea una serie de preguntas importantes con respecto a la forma en que el cerebelo controla el
comportamiento. ¿Qué región específica de la corteza cerebelosa está involucrada? Encontramos que manipular la actividad de las
células de Purkinje en el vermis posterior es suficiente para modular significativamente la agresión. Esto es consistente con los
estudios clínicos que implican al lóbulo VII del vermis en el procesamiento afectivo.Stoodley y Schmahmann, 2009). Sin embargo, es
difícil determinar la región precisa del cerebelo que fue influenciada por nuestra estimulación optogenética. La luz que emana de la
cara de las fibras implantadas se dispersa y se dispersa en cientos de micras (Aravanis et al., 2007; Li et al., 2019). En consecuencia, es
probable que además del lóbulo VII, los lóbulos VIb y VIII recibieran una iluminación significativa, y que la actividad de PC en estas
regiones probablemente también estuviera modulada hasta cierto punto. Estudios más detallados que manipulen la actividad en
otras áreas del vermis de la línea media podrían agregar claridad a las regiones específicas de la corteza cerebelosa que regulan la
agresión. También es posible que una regulación más específica de la actividad de PC en la región que controla la agresión (por
ejemplo, sin afectar el disparo de PC en regiones vecinas que alteran otros comportamientos) conduzca a mayores efectos sobre la
agresión. Esto podría lograrse realizando experimentos similares a los descritos aquí, pero usando la expresión viral de ChR2 o
halorhodopsin para restringir la manipulación optogenética a regiones específicas de la corteza cerebelosa. Es más, ¿Cuál es la
naturaleza de los insumos que controlan esta región? Las diferentes regiones de la corteza cerebelosa suelen combinar entradas de
fibras musgosas de diversas fuentes, y será interesante determinar cómo se combinan estas entradas dentro del cerebelo para
controlar la agresión. Finalmente, ¿cuál es la vía de salida y los objetivos aguas abajo que en última instancia están regulados por la
actividad en esta región de la corteza cerebelosa? Los estudios anatómicos han descrito conexiones entre el cerebelo y las regiones
implicadas en la agresión, incluido el hipotálamo. ¿Cuál es la vía de salida y los objetivos aguas abajo que en última instancia están
regulados por la actividad en esta región de la corteza cerebelosa? Los estudios anatómicos han descrito conexiones entre el
cerebelo y las regiones implicadas en la agresión, incluido el hipotálamo. ¿Cuál es la vía de salida y los objetivos aguas abajo que en
última instancia están regulados por la actividad en esta región de la corteza cerebelosa? Los estudios anatómicos han descrito
conexiones entre el cerebelo y las regiones implicadas en la agresión, incluido el hipotálamo.Haines et al., 1997) y la corteza
prefrontal (Kelly y Strick, 2003;Suzuki et al., 2012). Los registros electrofisiológicos han encontrado que la estimulación del cerebelo
evoca respuestas en esas regiones, junto con estructuras límbicas como el hipotálamo, la amígdala y el hipocampo.Anand et al., 1959
;Snider y Maiti, 1976). Sin embargo, mientras que la organización somatotópica del cerebelo está bien caracterizada en regiones que
influyen en la función motora, las vías de salida de áreas como el vermis posterior aún no se han definido claramente.
Es interesante especular sobre la naturaleza del papel del cerebelo en el control del comportamiento agresivo.
El cerebelo se ha expandido en tamaño en relación con la corteza cerebral a lo largo de la evolución humana (
Tejedor, 2005), contiene más de la mitad de las neuronas del cerebro y posee innumerables conexiones con otras
regiones del cerebro. No sorprende que su influencia se extienda más allá del ámbito motor. Los experimentos
sobre el control motor sugieren que el cerebelo combina entradas para generar predicciones. Es natural pensar
que esta estrategia computacional podría ser utilizada por el vermis posterior del cerebelo para aprender cómo
responder a las señales y, en última instancia, decidir cuándo la agresión es la respuesta correcta. Quizás incluso las
disfunciones sutiles o la plasticidad mal dirigida dentro de esta región pueden conducir a un comportamiento
agresivo inapropiado. Por ejemplo, el daño cerebeloso a menudo ocurre en pacientes con PTSD (Rabellino et al.,
2018). A medida que surgen técnicas de estimulación no invasiva como la estimulación magnética transcraneal del
cerebelo como opciones de tratamiento clínico (Demirtas-Tatlidede et al., 2010), es cada vez más importante
comprender qué áreas del cerebelo controlan los comportamientos no motores (Kelly y Strick, 2003). El trabajo
futuro podría arrojar luz sobre las proyecciones anatómicas y el impacto fisiológico de las regiones no motoras del
cerebelo.

materiales y métodos
animales
Todos los experimentos se realizaron de acuerdo con las pautas y protocolos federales aprobados por el
Comité Permanente de Animales del Área Médica de Harvard. Se usaron ratones macho de las siguientes
cepas: los ratones residentes eran de tipo salvaje (WT) C57BL/6N (Charles River Laboratories) o ratones
Pcp2-cre (Jackson Laboratory, número de stock 010536) cruzados con ChR2-EYFP (Ai32, Jackson Laboratory,
024109) o ratones eNpHR3.0-EYFP (Halo) (Ai39 Jackson Laboratory, 014539). Los ratones intrusos fueron
BALB/c (Charles River Laboratories).
Fisiología in vitro
Se prepararon cortes sagitales del cerebelo a partir de ratones adultos (P30-P100) y se realizaron grabaciones como
se describió anteriormente (Jackman et al., 2014). Brevemente, los animales fueron anestesiados con isoflurano y
sacrificados por decapitación. Los cerebros se extrajeron en una solución de corte helada y oxigenada que contenía
(en mm): 82,7 NaCl, 65 sacarosa, 23,8 NaHCO3, 23,7 glucosa, 6,8 MgCl2, 2,4 KCl, 1,4 NaH2correos4y 0,5 CaCl2. Cortes
sagitales del vermis cerebeloso (250metrom de espesor) se prepararon en una solución de corte helada utilizando
un vibrotomo Leica VT1200s. Los cortes se transfirieron durante 30 min a LCR artificial oxigenado (ACSF) a 32 °C que
contenía lo siguiente (en mm): 125 NaCl, 26 NaHCO3, 25 glucosa, 2,5 KCl, 2 CaCl2, 1,25 NaH2correos4y 1 MgCl2, se
ajustó a 315 mOsm y se dejó equilibrar a temperatura ambiente durante >30 min antes del registro. PCP2-
Cre::ChR2-EYFP se utilizaron para todas las grabaciones de ChR2. Los registros de halorodopsina se realizaron en
ratones PCP2-Cre donde la expresión de opsina fue impulsada por inyecciones cerebelosas estereotáxicas (como se
describió previamente [Jackman et al., 2014]) de AAV9.EF1a.DIO.eNpHR3.0-eYFP.WPRE.hGH (Addgene26966).
Aunque estos ratones no se usaron para experimentos de comportamiento, se observó una sensibilidad óptica
similar en grabaciones realizadas para un estudio separado usando ratones PCP2-Cre::Ai39 (Guo et al., 2016).
Los datos se adquirieron utilizando un amplificador Multiclamp 700B (Molecular Devices) digitalizado a 10
kHz con un ITC-18 (Instrutech) y filtrado de paso bajo a 4 kHz. La adquisición y el análisis se realizaron con
un software personalizado escrito en IgorPro (proporcionado generosamente por Matthew Xu-Friedman,
SUNY Buffalo). Se obtuvieron grabaciones con pinza amperimétrica de células enteras o en células utilizando
pipetas de parche de borosilicato (2–4 MW),la solución interna contenía lo siguiente (en mm): 150 K-
gluconato, 3 KCl, 10 HEPES, 0,5 EGTA, 3 MgATP, 0,5 GTP, cinco fosfocreatina-tris2 y cinco fosfocreatina-Na2,
con el pH ajustado a 7,2 con NaOH . La estimulación óptica se entregó a través de la vía de excitación de un
microscopio vertical BX51WI (Olympus) mediante un láser azul de 473 nm controlable con DPSS de 50 mW
(MBL-III-473–50 mW, Optoengine), o un LED ámbar de 590 nm (160 mW, ThorLabs).
Implantación crónica de fibras y estimulación in vivo

Los implantes de fibra óptica se ensamblaron como se describió anteriormente (Esparta et al., 2012). Brevemente,
una fibra óptica multimodo (Thorlabs, NA 0.39, 200metrom core) se aseguró en virolas de cerámica (Thorlabs, 1,25
mm OD) con epoxi. Las fibras se cortaron para que sobresalieran 0,2 mm por debajo de la férula y se pulió el
extremo del conector. Solo se usaron fibras con >70% de transmisividad. Para determinar la intensidad de la luz
que sale de las fibras, se midió la salida de las fibras con un medidor de potencia (Ophir; Vega). Se usó un fotodiodo
para medir la intensidad relativa durante destellos cortos controlados por el disparador analógico del láser, y este
valor se usó para calcular la potencia de salida durante destellos cortos. La intensidad de la luz emitida in vivo se
calculó dividiendo la salida de luz total (4,1 mW para el láser de 473 nm, 2,3 mW para el LED de 590 nm) por el área
superficial de la fibra óptica. Para evitar la desensibilización de ChR2 y la conducción de las PC al bloqueo inducido
por despolarización, estimulamos a los animales que expresan ChR2 utilizando trenes de destellos de pulsos de 1 a
2 ms. Las fibras ópticas se implantaron como se describió anteriormente (Esparta et al., 2012). Brevemente, los
ratones adultos (P40–P80) fueron anestesiados con ketamina/xilazina (100/10 mg/kg) complementada con
isoflurano (1%–4%). Se realizó una incisión para exponer el cráneo, y el tejido conjuntivo y la musculatura por
encima del cerebelo se retiraron suavemente. Las coordenadas estereotáxicas utilizadas para dirigir los implantes
al vermis posterior y Crus II se determinaron inicialmente realizando craneotomías de prueba e inyectando
pequeños volúmenes de tinte fluorescente o vectores de expresión viral. Se sacrificaron los animales y se usó
microscopía de fluorescencia posthoc para determinar la ubicación de las craneotomías en relación con la
superficie del cerebelo. Para los implantes vermales, el sitio para la craneotomía se determinó utilizando una pipeta
fina unida a un dispositivo estereotáxico (Kopf). Después

localizando bregma, la pipeta se movió caudal al cerebelo, se bajó 2,0 mm con respecto a bregma, luego se avanzó
rostralmente hasta que tocó la superficie del cráneo expuesto. El sitio de las craneotomías Crus II se determinó de
manera similar, pero 1,5 mm ventral y 2,5 mm lateral de bregma. Se realizó una craneotomía en este sitio y se
colocaron los implantes en su lugar. Se aseguraron los implantes al cráneo con Metabond (Parkell) y se suturó la
herida. Se administró buprenorfina (0,05 mg/kg) por vía subcutánea después de la operación cada 12 horas durante
48 horas. Al finalizar los ensayos de comportamiento, algunos animales residentes fueron anestesiados con
ketamina y perfundidos transcardiacamente con paraformaldehído (PFA) al 4% en PBS. Se extrajo el cerebro, se fijó
posteriormente durante 24 h y se prepararon cortes sagitales del cerebelo utilizando un vibrotomo. Se tomaron
imágenes de la fluorescencia YFP en ratones Ai32 y Ai39 usando un microscopio de disección Olympus MVX10
Macro (para tejido fijo intacto) o Zeiss Axio Imager (para cortes de cerebro). Las imágenes se realzaron con
contraste en Fiji para su visualización. En algunos casos, la histología podría usarse para determinar la ubicación del
implante sobre la corteza cerebelosa.
Fisiología en vivo
Los ratones de los experimentos de comportamiento fueron intensamente anestesiados con isoflurano (2%). Se
mantuvo la anestesia para todos los procedimientos siguientes. Se realizó una craneotomía inmediatamente lateral
a la fibra óptica implantada para insertar un electrodo para registros extracelulares. Se cementó una placa frontal
(Metabond) anterior a la fibra óptica y se fijó la cabeza del ratón para las grabaciones. Se extrajeron electrodos de
vidrio de borosilicato (Sutter), se llenaron con ACSF y se insertaron en un ángulo de entre 20 y 45 grados para
registrar la actividad de una sola unidad debajo de la fibra óptica. La mayoría de las neuronas se registraron entre 1
y 2 mm desde este punto de entrada. Las señales se adquirieron a 20 kHz entre 0,2 y 7,5 kHz (Intan Technologies).
Las células de Purkinje se identificaron por la presencia de picos complejos, aumento característico del ruido a
medida que el electrodo entraba en la capa de células de Purkinje, y/o respuesta a la luz. Las unidades individuales
se clasificaron fuera de línea en Offline Sorter (Plexon) y se analizaron en Matlab (Mathworks).
Las grabaciones del DCN se realizaron en ratones PCP2-Cre::ChR2-EYFP y PCP2-Cre::Halo-EYFP despiertos y con la cabeza
restringida. Brevemente, los ratones se anestesiaron con isoflurano (2%) y se cementó una placa de cabeza (Metabond) en
la cara anterior del cráneo. Se realizó una craneotomía (6 mm posterior al bregma, 0,75–1,2 mm lateral desde la línea
media) para colocar el electrodo de registro en el DCN medial o interpuesto. Para los ratones PCP2-Cre::ChR2-EYFP, se
realizó una gran craneotomía sobre el vermis para facilitar la activación de las células de Purkinje. Para los ratones PCP2-
Cre::Halo-EYFP, la región sobre el vermis se adelgazó manualmente hasta que quedó visiblemente transparente bajo un
microscopio de disección. La estimulación óptica se entregó a través de una fibra óptica colocada por encima del vermis. La
luz se enfocó a un tamaño de punto de aproximadamente 2 mm de diámetro. Los parámetros de estimulación fueron
idénticos a los utilizados en los experimentos anestesiados anteriores, aunque en lugar de LED, estos experimentos
utilizaron un láser azul de 473 nm (MBL-III-473–50 mW, Optoengine) para la activación de ChR2, o un láser rojo de 647 nm
( MRL-III-635–500 mW, Optoengine) para la activación de Halo. Las grabaciones se realizaron utilizando una sonda de silicio
(E-series, Cambridge Neurotech), de ratones despiertos con la cabeza restringida sobre una cinta rodante cilíndrica. Las
DCN se identificaron por la profundidad de registro, la ausencia de actividad de las células de Purkinje y, en un subconjunto
de experimentos, la sonda de silicio se recubrió con DiI (Thermo Fisher Scientific) para confirmar que los sitios de grabación
estaban dentro de la DCN. Los datos se adquirieron y procesaron de forma idéntica a los experimentos anestesiados.
Comportamiento
Los ratones utilizados en los experimentos de comportamiento se alojaron en un ciclo inverso de luz-oscuridad de 12 h
(encendido de 7 p. m. a 7 a. m.). La línea de tiempo para los experimentos fue la siguiente: Se permitió que los ratones
residentes (agresores) se recuperaran de las cirugías de implantes durante al menos 7 días. Luego se emparejaron con una
hembra C57BL/6N adulta durante 7 a 12 días. Se retiró la hembra y el ratón residente permaneció en aislamiento social
durante al menos 7 días. No se realizaron cambios de jaula durante el aislamiento social para mejorar la posterior agresión
por dominio territorial. Los residentes primero fueron evaluados en busca de signos de disfunción motora inducida por
estimulación, luego analizados en campo abierto, rotarod y finalmente agresión (residente-intruso) en el transcurso de
varias semanas. Antes de los experimentos de comportamiento, los animales se colocaron en una habitación oscura y se les
permitió habituarse durante al menos 1 hora.
Para los experimentos relacionados con la estimulación optogenética, la fuente de luz se conectó a un cable de fibra
óptica a través de un conmutador giratorio (FRJ_1 - 1_FC-FC, Doric Lenses) para permitir la libertad de movimiento. El cable
de fibra óptica se unió al implante con una funda de férula (Thorlabs) y se permitió que los ratones se aclimataran al cable
adjunto durante 30 minutos. Todos los ensayos se realizaron bajo iluminación roja tenue.

La coordinación sensoriomotora se evaluó con un aparato rotarod automatizado (UgoBasile). Los ratones se
colocaron en un rotarod con una rotación constante de 4 RPM y se les permitió aclimatarse durante 1 min, después
de lo cual la barra se aceleró a 60 RPM a una velocidad de 20 RPM/min. El tiempo de caída se calculó desde el
comienzo de la aceleración. Todos los ratones se sometieron a dos ensayos consecutivos con 4 minutos de
descanso entre ensayos, y los animales se asignaron al azar para recibir estimulación óptica durante el primer o el
segundo ensayo. La estimulación óptica comenzó 10 s antes del inicio de la aceleración y continuó hasta que el
animal cayó. Los ensayos de campo abierto se realizaron en un recipiente cuadrado de plástico blanco opaco (46 -
46 cm), y las regiones centrales se definieron como un cuadrado de un tercio de la dimensión del área. El
seguimiento automatizado se realizó en Matlab utilizando idTracker2.1.
Para los ensayos de residente-intruso, los residentes se conectaron a la fibra óptica y se les permitió aclimatarse
en su cambio de hogar durante 30 minutos. Se introdujo un intruso BALB/c (más o menos de la misma edad) en la
jaula de la casa, y las interacciones se filmaron y calificaron manualmente. Los ensayos se detenían en caso de que
alguno de los animales resultase herido por un ataque, o si el residente atacaba continuamente durante más de 60
s. Los residentes se sometieron a hasta cinco ensayos de residente-intruso con al menos 2 días entre ensayos, con
un nuevo intruso utilizado para cada ensayo. Los residentes fueron retirados del estudio si no atacaban o si el
intruso atacaba (Leshner y Nock, 1976). Para establecer un nivel de línea base de agresión, se omitieron del análisis
los ensayos con menos de tres ataques o más de 20 ataques. Se estimuló un subconjunto de animales que
expresaban halorodopsina (4/15) en intervalos de 5 min en lugar de los intervalos estándar de 1 min. Los ensayos
de intrusos residentes fueron puntuados manualmente por un experimentador cegado al genotipo del ratón y las
longitudes de onda de estimulación, y anotados utilizando el software de código abierto BORIS (Friard y Gamba,
2016). Se calificaron los siguientes comportamientos; aseo personal por parte del residente, interacciones sociales
(incluido el contacto cara a cara, aseo mutuo y olfateo anogenital), ruidos en la cola, amenaza lateral, persecución
del intruso por parte del residente y ataques de mordeduras (Koolhaas et al., 2013).
El análisis de datos se realizó con Igor Pro (Wavemetrics). Todos los resultados se expresan como media±error estándar de la
media. Los datos de cada comportamiento se sometieron a prueba de normalidad para cada condición experimental (prueba de
Shapiro-Wilk). Para comparar las diferencias de encendido/apagado de la luz dentro de los grupos, los datos que no cumplían el
criterio de normalidad se analizaron mediante el rango con signo de Wilcoxon no paramétrico, mientras que los datos normalmente
distribuidos se analizaron mediante el método de Student pareado de dos colas.t-prueba. De manera similar, las comparaciones
entre grupos se probaron mediante la prueba de Student no pareada de dos colas.t-o la prueba no paramétrica de Wilcoxon-Mann-
Whitney. El criterio de significación estadística se fijó en p<0,05.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el Fondo de Investigación GVR Khodadad para el Estudio del Egoísmo Excesivo
(Patológico) y el Comportamiento Agresivo. Deseamos agradecer especialmente a Ghahreman Khodadad tanto por
su apoyo financiero como por sus debates estimulantes. También agradecemos a Jasmine Vazquez por las
ilustraciones y a Michelle Ocaña y al Neurobiology Imaging Center por su ayuda con la microscopía. Esta instalación
cuenta con el apoyo parcial del Neural Imaging Center como parte de una subvención del NINDS P30 Core Center
(NS072030). Este trabajo fue apoyado por una beca posdoctoral Nancy Lurie Marks para SLJ, una beca posdoctoral
NIH F32NS101889 para CHC y una subvención NIH NINDS R35NS097284 para WGR.
Información Adicional
Fondos
financiador Número de referencia de la subvención Autor
Oficina del Director de los NIH R35NS097284 Wade G Regehr
El Fondo de Investigación Khodadah Wade G Regehr
Oficina del Director de los NIH F32NS101889 cristobal h chen
Fundación de la familia Nancy Beca posdoctoral skyler l jackman

Lurie Marks
Los financiadores no tuvieron ningún papel en el diseño del estudio, la recopilación e interpretación de datos, o la
decisión de enviar el trabajo para su publicación.

Contribuciones de autor
Skyler L Jackman, Conceptualización, Supervisión, Investigación, Metodología, Redacción - borrador original;
Christopher H Chen, Investigación, Escritura - borrador original; Heather L Offermann, Iain R Drew, Bailey M
Harrison, Anna M Bowman, Katelyn M Flick, Isabella Flaquer, Investigación; Wade G Regehr,
Conceptualización, Recursos, Supervisión, Adquisición de fondos, Redacción - borrador original
Autor ORCID
skyler l jackman https://orcid.org/0000-0002-6500-3937
Wade G Regehr https://orcid.org/0000-0002-3485-8094
Ética
Experimentación con animales: todos los experimentos se realizaron de acuerdo con las pautas y protocolos
federales (# 1493) aprobados por el Comité Permanente sobre Animales del Área Médica de Harvard.
Carta de decisión y respuesta del autor

Carta de decisiónhttps://doi.org/10.7554/eLife.53229.sa1
Respuesta del autorhttps://doi.org/10.7554/eLife.53229.sa2
Archivos adicionales
Archivos complementarios
. Formulario de informes transparente
Disponibilidad de datos
Se han proporcionado archivos de datos fuente para las Figuras 1, 2 y 3.
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La actividad de las células de Purkinje del cerebelo modula el

1 Departamento de Neurobiología, Facultad de Medicina de Harvard, Boston, Estados Unidos;

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Jackmanet al.eLife 2020;9:e53229.DOI: https://doi.org/10.7554/eLife.53229 2 de 14

Fuente de datos 1.Datos de modulación de disparo optogenético.

Jackmanet al.eLife 2020;9:e53229.DOI: https://doi.org/10.7554/eLife.53229 3 de 14

Fuente de datos 1.Datos de campo abierto (ChR2).

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La activación optogenética de las PC vermales disminuyó significativamente el número de ataques (p = 0.003,

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Fuente de datos 1.Datos de Resident Intruder Halo Vermis. Fuente de datos

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Si elevar la activación de PC en el vermis disminuye la agresión, ¿aumenta la agresión la supresión de la

Cuarto, demostramos que en nuestros experimentos

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Implantación crónica de fibras y estimulación in vivo

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El Fondo de Investigación Khodadah Wade G Regehr

Oficina del Director de los NIH F32NS101889 cristobal h chen

Fundación de la familia Nancy Beca posdoctoral skyler l jackman

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Carta de decisión y respuesta del autor

Se han proporcionado archivos de datos fuente para las Figuras 1, 2 y 3.

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Jackmanet al.eLife 2020;9:e53229.DOI: https://doi.org/10.7554/eLife.53229 13 de 14

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