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EL MTODO DE WINKLER MODIFICADO Y SU APLICACIN

EN EL CONSUMO DE OXIGENO DE ORGANISMOS ACUTICOS
Sergio Hernndez H
1
y Carlos Herrera C
2
1. Departamento de Qumica Ambiental, hernande@ucsc.cl
2. Departamento de Biotecnologa, cherrera@ucsc.cl
Facultad de Ciencias, Universidad Catlica de la Santsima Concepcin
Casilla 297, Concepcin
1. Introduccin
El oxigeno disuelto en las aguas naturales. proviene principalmente de dos Iuentes: por absorcion
desde la atmosIera con ayuda de vientos y de produccion por procesos Iotosinteticos que ocurren
en la zona Iotica de las aguas. Por otra parte la variacion de la concentracion de oxigeno esta
inIluenciada por procesos de respiracion. oxidacion de moleculas organicas disueltas y accion
bacteriana sobre la materia organica (Spiro. 2004) .
La solubilidad del oxigeno en el agua es baia y el equilibrio O
2
(g) ~ O
2
(aq) esta desplazado
hacia la izquierda. gobernado por la presion de acuerdo a la ley de Henry y Iuertemente aIectado
por la temperatura de los cuerpos de agua (Baird. 2001 ). El oxigeno disuelto en las aguas es
indispensable para los procesos metabolicos de los organismos acuaticos. en especial para
aquellos que realizan respiracion branquial. quienes son sensibles a las minimas de oxigeno.
causadas por distintos eventos que ocurren en el medio hidrico. Por lo tanto el conocimiento de la
concentracion de oxigeno disuelto en las aguas naturales. es de trascendental importancia. debido
a que proporciona inIormacion acerca de la calidad de los cuerpos de agua. en lo que se reIiere a
condiciones de aerobicidad. grado de contaminacion. impacto en los procesos biologicos. etc
(Romero. 1999).
Diversos estudios se han realizado. reIerente al consumo de oxigeno de organismos acuaticos y el
tipo de metabolismos que presentan (Moreno. 1971). ademas de los eIectos de temperatura y
salinidad en la tasa metabolica de crustaceos (Zuiga. 1983) y el proceso de respiracion de
crustaceos en el desplazamiento de los equilibrios del CO
2
(Hernandez. 2005).
De los diversos metodos existentes y ampliamente utilizado para medir el oxigeno disuelto en
aguas. es el metodo de Winkler el mas utilizado; esta basado en reacciones de oxidacion
reduccion. Este metodo ha suIrido diversas modiIicaciones en el tiempo. en lo que respecta
principalmente a cantidad de reactivos a utilizar y eliminacion de interIerencias. pero ha
conservado su practicidad y precision (Jenkins. 1983.. Millan. 1994.. Guiteras. 2003).
En este trabaio se presenta de manera detallada las reacciones quimicas mas importantes del
metodo de Winkler. con sus modiIicaciones y las relaciones matematicas que permiten
determinar de manera simple el consumo de oxigeno de los organismos acuaticos presentes en
cualquier cuerpo de agua natural. Al mismo tiempo se muestra los resultados de una aplicacion
del metodo. a un caso de estudio con la especie &LFORJUDSVXVFLQHUHXV. crustaceos marinos de la
VIII Region. Chile.
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2. Materiales y mtodos
Materiales
Recipientes de vidrio o plastico de 5 litros de capacidad. manguera delgada y Ilexible. Irascos
con tapa esmerilada de 100. 250 o 300 mL. caia de plumavit. matraces erlenmeyer de 125 mL.
buretas de 25 mL. soporte universal. pipeta aIorada de 50 mL y 5 mL. pipetas parciales. bomba
aireadora. lampara.
Disoluciones y Reac tivos
A). SulIato de Manganeso (II) : Disolver 120 g MnSO
4
4H
2
O en 100 mL de agua destilada y
aIorar a 250 mL. Si no dispone de sulIato. utilizar 150 g de MgCl
2
.
B) Alcali-yoduro-azida: Disolver en 250 mL de agua 250 g de NaOH. 67.5 g NaI. 5 g NaN
3
. Si
no se dispone azida de sodio. mezclar solo los reactivos anteriores). pero si la muestra tiene
nitritos habra error en la determinacion.
C) Acido sulIurico concentrado 98 . d 1.84
D) Almidon 1 . Disolver 1 g de almidon en agua destilada hirviendo. continuar la ebullicion por
unos minutos. Preparar cada vez que se utiliza.
E) TiosulIato de Sodio Pentahidratado Na
2
S
2
O
3
5H
2
O 0.01 N: Pesar 1.24 g de esta sal. disolver y
aIorar con agua hasta 500 mL. Para obtener resultados precisos esta disolucion debe
estandarizarse con KIO
3
.
F) Yodato de Potasio KIO
3
0.01 N: Pesar 0.36 g de la sal. disolver y aIorar a 1000 mL.
3. Procedimiento
Este experimento se realizo con crustaceos marinos de la especie &LFORJUDSVXV FLQHUHXV.
colocados en una botella plastica con 5 litros de agua de mar saturada de oxigeno. Por un periodo
de diez horas. con observacion permanente de la movilidad de los organismos. se mantuvo un
sistema de control sin organismos y en el otro se colocaron cinco crustaceos de similar tamao.
Cada una hora. se tomaron muestras de agua en duplicado. mediante una manguera y sin
turbulencia en botellas de 100 mL. inmediatamente se Iiio el oxigeno. agregando 1 mL de
disolucion de sulIato de manganeso y 1 mL de disolucion alcali-yoduro azida. se taparon.
agitaron y se guardaron las botellas en la oscuridad. en una caia de plumavit por un tiempo
minimo de tres horas (puede analizarse el contenido de las botellas hasta una semana).
Si el experimento se realiza en terreno en un cuerpo de agua estancado o caudal. debe sumergirse
la botella de muestreo baio la superIicie del agua. en un angulo de 45 hasta llenarla
completamente sin turbulencia y Iiiar rapidamente el oxigeno.
10
El analisis de las muestras se realizo de la siguiente manera: Se destapo una botella y se agrego
rapidamente 1 mL de acido sulIurico concentrado. luego se tapo y agito hasta disolver el
precipitado. posteriormente se midio una alicuota de 50 mL y se titulo desde una bureta con
disolucion de tiosulIato de sodio 0.01 N. en presencia de almidon como indicador. cuyo viraie va
desde el amarillo palido al azul.
Para realizar la titulacion del blanco. se lleno completamente una botella con agua destilada. a
continuacion se agrego 1 mL de acido sulIurico concentrado. 1mL de disolucion alcali-yoduro-
azida y 1mL de disolucion de sulIato de manganeso. se tapo y agito entre cada adicion.
Einalmente se midio una alicuota de 50 mL y se titulo con la disolucion de tiosulIato de sodio en
presencia de almidon. Para la estandarizacion de la disolucion de tiosulIato de sodio con yodato
de potasio. se midio una alicuota de 50 mL de la solucion obtenida en el blanco y se agregaron 5
mL de disolucion de yodato de potasio 0.01 N y se titulo con la disolucion de tiosulIato en
presencia de almidon.
3. Resultados y Discusin
1. Mtodo de Winkler
3.1. Ecuacion de precipitacion
Mn
2+
(aq) + 2OH
-
(aq) >Mn(OH)
2
(s)
3.2. Eiiacion de oxigeno y ecuacion de oxido-reduccion
4 Mn(OH)
2
(s) + O
2
(aq) > 4 MnO(OH)(s) + 2H
2
O
3.3. Disolucion del precipitado y ecuacion de oxido-reduccion
2 MnO(OH)(s) + 6 H
+
+ 3 I
-
(aq) > 2 Mn
2+
(aq) + 4H
2
O + I
3
-
(aq)
3.4. Titulacion de oxido-reduccion
2S
2
O
3
2-
+ I
3
-
(aq) > S
4
O
6
2-
+ 3 I
-
Se requieren 4 mmoles de S
2
O
3
2-
por cada mmol de O
2
o bien 1meq S
2
O
3
2-
1meq O
2
1 mmol S
2
O
3
2-
mmol I
3
-
1 mmol Mn(III) mmol O
2
Estandarizacin de la disolucin de Tiosulfato de Sodio
IO
3
-
+ 6 H
+
+ 8I
-
> 3 I
3
-
(aq) + 3 H
2
O
1 mmol IO
3
-
3 mmol I
3
-
6 mmol S
2
O
3
2-
o bien 1meq IO
3
-
1 meq S
2
O
3
2-
Interferencia de Nitritos y Hierro(III)
Los nitritos presentes en la muestra de agua. reaccionan segun la siguiente ecuacion:
2 NO
2
-
(aq) + 3I
-
(aq) + 4H
+
> I
3
-
(aq) + 2 NO(g) + 2H
2
O
Se evita agregando azida. segun:
N
3
-
(aq) + NO
2
-
(aq) + 2H
+
>N
2
(g)+ N
2
O(g) + H
2
O
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El hierro (III) reacciona segun:
2Fe
3+
(aq) + 3I
-
(aq)> 2 Fe
2+
(aq) + I
3
-
(aq)
El Ee(III) se evita agregando H
3
PO
4
concentrado antes de titular .
Frmula para clculos aproximados
8000 proviene dell peso equivalente del O
2
que es del peso molecular. debido a 4 e
-
en su reduccion: 32/ 4 8 y 1000 cantidad de mL en 1 litro.
V(mL) Gasto de tiosulIato en la titulacion
VM(mL) Volumen de la alicuota de titulacion.
Formula corregida para clculos m s precisos
Y Volumen de la botella de muestra. En el momento de agregar las disoluciones A y B para
Iiiar el oxigeno de la muestra. por ser estas mas densas. se rebasa agua desde la botella;
normalmente se agrega 1 mL de cada una. por lo tanto desplazaria aproximadamente 2 mL de
muestra y sus Iactores de correccion serian:
- para una botella de 300 mL 300/ 298 1.006. botella de 250 mL 250/ 248 1.008. botella
de 100 mL 100/ 98 1.020. El volumen de la botella aIecta muy poco en la determinacion
pero es conveniente usar botellas entre 250 y 300 mL.
Eactor de correccion de la disolucion de tiosulIato. al titularla con disolucion de yodato de
Potasio E
3 2 2
3
O S Na mL
KIO de mL
Este Iactor normalmente deberia ser 1
Blanco de Reactivos (B). Esta valor se obtiene acidiIicando previamente el agua contenida
en una botella y adicion de los reactivos de manera inversa a la muestra y su posterior
titulacion. El gasto de la disolucion de tiosulIato de sodio deberia ser muy baio.
Y Volumen de la botella. 2 Volumen desplazado
E Eactor de correccion de la solucion de TiosulIato con Yodato de Potasio
mg O
2
x L
-1
V(mL) x N S
2
O
3
2-
x 8000
VM(mL)
mg O
2
x L
-1
( Y ) F [V(mL) - B(mL)] x [ N S
2
O
3
-2
x 8000 ]
Y-2 VM(mL)
12
V Volumen gastado de TiosulIato de sodio
B Volumen gastado de TiosulIato de sodio gastado en el blanco
N Normalidad de la solucion de TiosulIato de sodio
VM Alicuota de titulacion de la muestra
Consumo de oxgeno
Metabolismo activo o estndar
1. Estudio de Caso: Crustceos Marinos( &LFORJUDSVXVFLQHUHXV).
En la tabla 1 se presenta la concentracion de oxigeno disuelto en el agua de los sistemas. en el
control la variacion de la concentracion del oxigeno disuelto es minima durante todo el periodo
del experimento. En el sistema que contiene los crustaceos. se observa que la concentracion de
oxigeno disuelto es alta en las primeras horas y va disminuyendo en el tiempo. Al inicio del
experimento. los organismos presentan movilidad. sin embargo cuando el oxigeno disuelto tiende
al minimo. permanecen inmoviles. probablemente en una condicion de stress debido a la
aproximacion de la anoxia.
Tabla 1. Promedio para n2 de oxgeno disuelto en el control, y sistema -organismos
Tiempo Sistema Control Sistema - Organismos
Horas
; mg O
2
(h x L)
1-
; mg O
2
(h x L)
1-
0 9.38 9.38
1 9.38 8.47
2 9.38 7.53
3 9.37 6.54
4 9.37 5.67
5 9.37 4.74
6 9.35 3.86
7 9.35 3.09
8 9.35 2.65
9 9.34 2.38
10 9.33 2.12
mg O
2
(L x h x organismo)
-1
c mg O
2
movilidad o Inmvil
N Organismos
mg O
2
(L x h)
-1
(mg O
2
hora inicial - mg O
2
hora final) - mg O
2
control
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En la tabla 2 se observa que el consumo de oxigeno es alto desde el inicio hasta la sexta hora.
debido a la movilidad los organismos. lo que implica un gasto energetico mayor en el sistema.
Tabla 2. Consumo de oxgeno en el sistema control y de los crustceos en el sistema
Tiempo Sistema Control Sistema -Organismos Observacion
Horas mg O
2
x (h x L)
-1
mg O
2
x (h x L)
-1
1 0.00 0.91 Movilidad
2 0.00 0.94 Movilidad
3 0.01 0.98 Movilidad
4 0.00 0.87 Movilidad
5 0.00 0.93 Movilidad
6 0.02 0.86 Movilidad
7 0.00 0.77 Inmoviles
8 0.00 0.44 Inmoviles
9 0.01 0.26 Inmoviles
10 0.01 0.25 Inmoviles
A partir de la septima hora el consumo de oxigeno disminuye. debido a que los organismos
permanecen inmoviles. gastando la minima energia posible.
En la tabla 3 se presentan los dos tipos de metabolismos de los crustaceos. calculados con los
promedios de los consumos de oxigeno. considerando la movilidad de los organismos en el
sistema. Los mayores valores de consumo de oxigeno se observan cuando los organismos
presentan movimientos y corresponde al metabolismo activo entre la primera y sexta hora. El
promedio de los valores mas baios de consumo de oxigeno se presenta a partir de la septima hora.
cuando los organismos permanecen inmoviles y corresponde al metabolismo estandar.
Tabla 3. Metabolismo activo y estndar de los crustceos
Metabolismo mg O
2
(h x L)
-1
mg O
2
(h x L x organismo)
-1
Activo 0.92 0.184
Estandar 0.43 0.086
4. Conclusiones
De acuerdo a los resultados obtenidos en este trabaio se concluye lo siguiente:
La modiIicacion al metodo de Winkler y las relaciones matematicas propuestas. permiten obtener
mediciones rapidas y de Iacil aplicacion. por lo tanto puede ser utilizado en cualquier nivel de
14
enseanza. tanto en el laboratorio como en terreno. En lo que se reIiere al caso de estudio. la
aplicacion de la metodologia. permitio de manera sencilla determinar el consumo de oxigeno y su
estimacion del metabolismo de uno o un coniunto de crustaceos en su medio acuatico.
5. Bibliografa
Spiro. T..W. Stigliani. 2004. Quimica Medioambiental. Editorial Pearson. Espaa. p.325-
327.Baird. C.2001. Quimica Ambiental. Editorial Reverte S.A. Espaa. p.435-437.
Romero. J.A.1999. Calidad del Agua . Editorial AlIaomega. 2 Edicion. Mexico. p.123-124.
Moreno. C. 1971. Metodo practico para determinar cuantitativamente el consumo de oxigeno en
animales acuaticos. Revista de Educacion. Chile. p.305-306.
Zuiga. O.. R. Wilson. y E. Oyarce. 1983.EIectos de la temperatura y salinidad en la tasa
metabolica de Rhynchocinetes typus. Estud. Oceanol. 3 (1):21-30.
Hernandez. S.. C. Herrera . 2005. Desplazamiento de los equilibrios del CO
2
en bioensayos como
producto de la respiracion. Ciencia Ahora. N5. ao 8. p.18-22.
Jenkins. D.. V. L. Snoeyink.. J. Eergunson y J. Leckie. 1983. Quimica del Agua. manual de
Laboratorio. Editorial Limusa. Mexico. p 117-123.
Millan. C.1994. Analisis de agua. Universidad de Concepcion. p.75-80.
Guiteras. J.. R. Rubio y G. Eondorona . 2003. Curso Experimental en Quimica Analitica.
Editorial Sintesis. Espaa. p.145-146.