INTRODUCCIN El ojo humano slo tiene un poder de resolucin de aproximadamente 1/10 milmetros, o 100 micrmetros.

El poder de resolucin es una medida de la capacidad para distinguir un objeto de otro; es la distancia mnima que debe haber entre dos objetos para que sean percibidos como objetos separados. Esta limitacin del ser humano ha llevado a los cientficos ha desarrollar uno de los inventos ms importantes de la historia : el microscopio. Este invento ha permitido el descubrimiento y observacin de innumerables de organismos y componentes de cuerpos vivos. Gracias al microscopio se han logrado desarrollos de la medicina, fsica, y qumica impensables para el hombre de hace dos siglos; logrando incluso en la actualidad la visualizacin de tomos , partculas elementales de la materia . En el siguiente trabajo explicar el funcionamiento de los microscopios, detenindome sobre todo en los electrnicos, que son los que nos ocupan y los que nos fueron enseados en el centro de microbiologa del Instituto de Salud Carlos III de Majadahonda. Tipos de Microscopios Microscopio: Cualquiera de los distintos tipos de instrumentos que se utilizan para obtener una imagen aumentada de objetos minsculos o detalles muy pequeos de los mismos. Dependiendo de la fuente energtica que utilizan, se pueden distinguir dos tipos de microscopios: Microscopio ptico o fotnico, utilizan la luz como fuente energtica. Microscopio electrnico, emplean un haz de electrones. Ambos tipos de microscopios permiten la observacin gracias a su capacidad de aumento (la cantidad de veces que se incrementa el tamao de la imagen del objeto observado) y de resolucin (capacidad del microscopio que permite distinguir como separadas dos estructuras que se encuentran muy prximas) . Microscopios pticos o fotnicos: este tipo de microscopios utilizan la luz como fuente de energa y las propiedades de los lentes pticos que permiten aumentar el tamao de los objetos observados. El microscopio ptico ms simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta quince veces. Por lo general se utilizan microscopios compuestos que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios pticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2000 veces. Dentro de los microscopios fotnicos existen varios tipos, distinguidos por pequeas diferencias, aunque el principio bsico de funcionamiento es el mismo: Microscopio de campo claro o compuesto: Es el microscopio ms comnmente usado, consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo est compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes de los microscopios estn dispuestas de forma que el objetivo se encuentra en el punto focal del ocular. El aumento total del microscopio depende de las longitudes focales de los dos 1

sistemas de lentes. La muestra que se va a observar debe ser teida con algn colorante que permita hacerla destacar sobre el fondo claro o brillante que proviene de la fuente luminosa. Otros tipos son: Microscopio de campo oscuro Microscopio de fase Microscopio de fluorescencia Microscopio petrogrfico o de polarizacin Microscopio de luz ultravioleta Microscopio de campo cercano La fotomicrografa, que consiste en fotografiar objetos a travs de un microscopio, utiliza una cmara montada en el mismo microscopio. La cmara suele carecer de objetivo ya que el microscopio acta como tal. El trmino microfotografa , utilizado a veces en lugar de fotomicrografa, se refiere a una tcnica de duplicacin y reduccin de fotografas y documentos a un tamao minsculo para guardarlos en un archivo. Los microscopios que se utilizan en entornos cientficos cuentan con varias mejoras que permiten un mejor estudio de la muestra. Dado que la imagen de la muestra est ampliada muchas veces e invertida, es difcil moverla en forma manual. Por ello los soportes del los microscopios cientficos de alta potencia estn montados en una plataforma que puede moverse con tornillos micromtricos. Algunos microscopios cuentan con soporte giratorio. Todo los microscopios de investigacin cuentan con tres o ms objetivos montados en un cabezal mvil que permite variar la potencia de aumento. Microscopios electrnicos: La potencia amplificadora de un microscopio ptico est bastante limitada en comparacin con la del microscopio electrnico, que utiliza electrones para iluminar un objeto, pudiendo mostrar estructuras mucho ms pequeas. Los principios bsicos de los microscopios electrnicos son similares a los microscopios pticos, las diferencias estn dadas en la fuente de luz (electrones ) y en el tipo de lente, ya que los electrnicos emplean lentes electromagnticas. La gran diferencia de los dos tipos de microscopios es la potencia que tiene cada cual, ya que el microscopio ptico es capaz de aumentar unas 2000 veces y una resolucin de 0,2 micrones ( 0,0001 mm. ) mientras que el electrnico aumenta hasta un 1000000 de veces con una resolucin de 0.1 nanmetros ( 0,0000001 mm.). Todos los microscopios electrnicos cuentan con varios elemento bsicos. Disponen de un can de electrones que emite los electrones que chocan 2

contra la muestra, creando una imagen aumentado. Se utilizan lentes electromagnticas para crear campos que dirigen y enfocan el haz de electrones, junto con un sistema de vaco al interior del microscopio, para que las molculas de aire no desven los electrones. Existen dos tipos bsicos de microscopios electrnicos: Microscopio electrnico de transmisin (TEM) : se utiliza para ver secciones o cortes de tejidos, dirige un haz de electrones hacia el objeto que se desea aumentar; una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada de la muestra. Para utilizar un TEM debe cortarse la muestra en capas finas con un grosor entre 50 a 200 nanmetros. Dicha muestra se coloca en una redecilla que se untroduce en el tubo con una pieza alagargada que se introduce por un lateral Para el funcionamiento de este microscopio se utiliza un haz de electrones, obtenido desde una lmpara especial de tungsteno. El tubo tiene vaco en su interior, para impedir que nada dificulte el paso de los electrones. Un fallo en este vaco ocasiona la aparicin de cuerpos extraos en el visor. Luego de ser enfocados por las lentes electromagnticas, los electrones inciden sobre la muestra, formando la imagen que se obtiene en blanco y negro, la cual puede proyectarse sobre una pantalla especial o pelcula fotogrfica. El TEM examina partes grandes de la muestra. ste microscopio obtiene imgenes en dos dimensiones, que luego pueden ser plasmadas en fotografas si interesa. ste es el tipo de microscopio electrnico ms utilizado en investigacin, ya que obtiene muy buenos resultados y tiene gran potencia. TEM Microscopio electrnico de barrido (SEM): Este permite la observacin de superficies sin la necesidad de realizar cortes microscpicos, explorando la superficie de la imagen punto por punto. Su funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un haz muy concentrado de electrones, de forma parecida al barrido de un haz de 3

electrones por la pantalla de una televisin. Los electrones del haz pueden dispersarse de la muestra o provocar la aparicin de electrones secundarios, ambos son recogidos y contados por un dispositivo electrnico situado a los lados de la muestra. Cada punto ledo de la muestra corresponde a un pxel en un monitor de televisin. Cuanto mayor sea el numero de electrones contados por el dispositivo, mayor ser el brillo del pxel en la pantalla. Como consecuencia del barrido electrnico se genera una imagen con apariencia tridimensional, que permite estimar parmetros celulares como tamao y forma, dndole ventajas en este sentido sobre el TEM. Las desventajas del SEM es su menor capacidad de aumento ya que slo puede a unas 100000 veces y tambin tiene una resolucin 1000 veces menor que el TEM. Eso y que slo permite ver el exterior de la muestra. Tambin se han desarrollado otro tipo de microscopio electrnico: microscopio electrnico de barrido y transmisin el cual combina los elementos de un SEM y un TEM, pudiendo mostrar los tomos individuales de un objeto. Es bastante moderno y relativamente raro, pero tambin vimos uno en el centro. Otros tipos son: Microscopio sonda de barrido Microscopio de tnel de barrido Microscopio de fuerza atmica SEM Preparacin de muestras Tanto en el microscopio ptico como en el microscopio electrnico de transmisin, la formacin de una 4

imagen con un contraste perceptible exige que diferentes partes de la clula difieran en su transparencia al haz de iluminacin, ya sean rayos de luz o electrones. Las partes de la muestra que permiten el paso de la luz o los electrones, aparecen brillantes, mientras que las partes que bloquean el paso del haz de iluminacin aparecen oscuras. En el microscopio electrnico de barrido, las reas que aparecen claras son aquellas que desvan los electrones a la imagen; las partes que aparecen oscuras son aquellas que no estn bien iluminadas por el haz electrnico o que desvan los electrones fuera del detector. Para crear suficiente contraste cuando se usa el microscopio ptico, las clulas deben ser tratadas con colorantes u otras sustancias que se adhieran diferencialmente a lugares especficos, o reaccionan con ellos, produciendo regiones de opacidad diferente. Para el microscopio electrnico los especmenes se tratan generalmente con compuestos de metales pesados. Despus que un espcimen ha sido teido, todo el colorante que no se haya adherido a estructuras especficas debe ser lavado. Sin embargo, las clulas son bastante frgiles y cualquier tratamiento enrgico deshara su estructura. Para resolver este problema, los espcimen biolgicos, generalmente se fijan antes de teirlos. Este procedimiento implica un tratamiento con compuestos que amarran las estructuras a su lugar, habitualmente con la formacin de enlaces covalentes adicionales entre las molculas . Los especmenes para el microscopio electrnico tambin deben deshidratarse, ya sea por mtodos qumicos, o por mtodos de 5

congelacindesecacin parecidos a los que se usan para hacer el caf deshidratado. Este paso es necesario debido a las propiedades de los electrones que forman el haz de iluminacin. Si atraviesan una cmara que contiene molculas gaseosas, los electrones son desviados por las molculas y no pueden enfocarse en un haz. As que, como ya dije, todo el aire debe ser evacuado del interior de la cmara interna de un microscopio electrnico, crendose un vaco. Si las muestras no deshidratan primero, las molculas de agua que se evaporan y penetran en la cmara, destruirn el vaco y el haz de electrones enfocado. Los procedimientos requeridos para preparar la mayora de las muestras para el microscopio ptico o para el electrnico, habitualmente producen la muerte de las clulas constituyentes. Para el SEM, la muestra debe estar recubierta de un metal tal que oro para permitir la refraccin de los electrones.