INTRODUCCIN: La unin de distintos grupos funcionales a la cadena de carbono determina un conjunto de molculas que son esenciales para la vida,

denominadas BIOMOLECULAS. Los tipos principales de biomolculas orgnicas en la clula son las protenas, formadas por cadenas lineales de aminocidos; los cidos nucledos, cuyas unidades estructurales son los nucletidos; los carbohidratos, formado por unidades de azucares estructurales llamados monosacridos y los lpidos constituidos por cidos grasos. Las unidades estructurales de las biomolculas son los monmeros, que se unen unas a otras mediante enlaces covalentes. Las animales incorporamos la mayor parte de esta biomolculas a partir de otros seres vivos, que son los nutrientes contenidos en los alimentos. OBJETIVOS: Reconocer la presencia de algunas biomolculas provenientes de los seres vivos. Fundamentar el empleo de reactivos universales para el reconocimiento de los compuestos qumicos. Diferenciar las diferentes biomolculas, sus caractersticas, propiedades e importancia. MATERIALES Y PROCEDIMIENTO 1. CAROHIDRATOS Son compuestos orgnicos solubles en agua formados por carbono, hidrgeno y oxgeno, son importantes porque representan la principal fuente de energa de la clula y tambin son constituyentes estructurales importantes para la pared celular y de las sustancias intracelulares. Se pueden clasificar segn el nmero de monmeros que contienen, en monosacridos, disacridos, oligosacridos y polisacridos. Los polisacridos son grandes polmeros de carbohidratos constituidos por unidades llamadas monosacridos, que son las unidades de azcar ms simples. Los oligosacridos son compuestos formados por unos pocos residuos de monosacridos que pueden estar unidos por protenas. Los oligosacridos juegan un papel fundamental en lo que se refiere al funcionamiento y estructura celular. (Ejm: azcares, almidones, quitina y celulosa). Los carbohidratos estn muy difundidos en la naturaleza, sobre todo en el reino vegetal, ya que constituyen los productos finales de la fotosntesis en las plantas verdes. Los animales, aprovechan las sustancias acumuladas por las plantas como fuente energtica y de reserva. Los carbohidratos se presentan en forma de azcares, almidones y fibras, y son uno de los tres principales macronutrientes que

aportan energa al cuerpo humano. Actualmente est comprobado que al menos el 55% de las caloras diarias que ingerimos provienen de los carbohidratos. El almidn es un polmero de D-glucosa que se forma en las plantas. Aunque su estructura consiste en repeticiones del monmero, nutricionista consideran al almidn como un carbohidrato complejo. La glucosa y la sacarosa son carbohidratos simples. El almidn se encuentra en muchas plantas y productos derivados de plantas como la harina. 1. Determinacin de Glucosa. MATERIALES Papas fritas Mayonesa Papaya Pan Chocolate Hamburguesa frita Reactivo de Benedict Solucin de glucosa al 10% 7 tubos de ensayo Sistema de Bao Mara Gradilla, varillas de vidrio, mortero, beakers, pipetas, petris, plumn indeleble

PROCEDIMIENTOTUBO CONTROL: Vertimos 5ml de la solucin de Benedict en un tubo de ensayo, se aadi 3ml de solucin de glucosa, y coloc el tubo a Bao Mara durante 3 a 5 minutos. MUESTRAS PROBLEMA: Rotulamos los tubos restantes y repetimos la operacin reemplazando el reactivo con cada uno de los alimentos que ha trado a la prctica. Anotamos los resultados. REACCION POSITIVA: Esta reaccin es especfica para azcares con grupos reductores libres como los monosacridos y algunos disacridos como la maltosa y lactosa (excepto la sacarosa). Un precipitado rojizo confirma la presencia de azcares en la solucin. La coloracin vara desde un color verdoso (cuando la concentracin de azcar es pequea de 0.1 a 0.3% de azcar reductor) hasta un rojo ladrillo (cuando la concentracin de azcar es alta, es decir supera el 1.5%-

1. Determinacin de almidn. MATERIALES Papaya Man molido Yogurt Pollo molido crudo Cualquier snack Pan 5 diferentes tipos de hot dog Gradilla , Varilla de vidrio Lugol Solucin de almidn al 5% 7 tubos de ensayo

Gradilla, mortero, pipetas, petris, varilla de vidrio, plumn indeleble, cuchillo. PROCEDIMIENTO TUBO CONTROL: Aadimos 3ml de solucin de almidn en un tubo de ensayo y luego agregamos unas cuantas gotas de solucin de yodo (Lugol), observamos el cambio de coloracin. MUESTRAS PROBLEMAS: Rotulamos los tubos restantes y reemplazamos el almidn por uno de los alimentos que trajo a la prctica. Anotamos los resultados. REACCION POSITIVA: Este mtodo se utiliza para identificar polisacridos. El almidn en contacto con el reactivo Lugol toma un color azul-violeta. 2) LPIDOS Son compuestos orgnicos formados principalmente por carbono, hidrgeno y oxgeno. Se les caracteriza por ser un grupo de molculas insolubles en agua y solubles en solventes orgnicos. Tales propiedades se deben a que poseen largas cadenas hidrocarbonadas alifticas o anillos bencnicos, que son estructuras no polares e hidrofbicas. Los lpidos ms comunes son los triglicridos, los fosfolpidos los glicolpidos y los esteroides. Los lpidos pueden estar, constituidos por cidos grasos insaturados, las grasas se presentan como aceites, tal es el caso de los vegetales. Si contienen cidos grasos saturados dan lugar a grasas slidas o semislidas, como ocurre en los animales (sebos y mantecas). Desde el punto de vista nutritivo son la mayor fuente de caloras, siendo utilizadas como reserva energtica de uso no inmediato. Adems, son portadoras de vitaminas liposolubles (A, D, E, K) y contienen los llamados cidos graso esenciales , de gran importancia par el buen

funcionamiento del organismo. Algunos lpidos como el colesterol, forman parte importante de las membranas celulares. MATERIALES Papaya Man molido Yogurt Pollo molido crudo Cualquier snack Pan Reactivo de Sudan III Aceite vegetal 7 tubos de ensayo Gradilla, varillas de vidrio, mortero, plumn indeleble, varillas de vidrio.

PROCEDIMIENTO TUBO CONTROL: Aadimos unas cuantas gotas de Sudan III a un tubo de ensayo conteniendo 3ml de aceite con agua. Agitamos suavemente y observamos los resultados. MUESTRAS PROBLEMA: Rotulamos los tubos restantes y reemplazamos el aceite por los productos biolgicos que trajo a la prctica. Dejamos reposar cada tubo de ensayo 5 minutos antes de tomar las lecturas de coloracin. REACCIN POSITIVA: El colorante Sudan III en presencia de lpidos forma fases, una fase superior de color rojo cereza (Sudan III + aceite) y una fase inferior transparente (alcohol). 3) PROTENAS Las protenas constituyen elementos de mayor importancia en los animales y vegetales. Estn constituidas por la unin de varios aminocidos por medio de enlaces qumicos llamados encales peptdicos. Hay una gran variedad de protenas y cada una desarrolla una funcin especfica que puede ser de reserva, sostn, transporte, estructural, etc. La hidrlisis total de una protena se produce 10 a 20 aminocidos distintos y su eso molecular varia desde algunos miles hasta varios millones. Las propiedades biolgicas de las protenas dependen de la integridad de sus estructuras. Cuando estn estructuras se alteran, la protena pierde sus propiedades funcionales, fsicas y qumicas. Este proceso se denomina desnaturalizacin. Los agentes desnaturalizantes como los cidos fuertes, lcalis fuertes, el calor mantenido por sobre 50C alteran las estructuras secundaria y terciaria. La protena desnaturalizada presenta una solubilidad disminuida y origina una precipitado que dependiendo de lo drstico puede aparecer como una simple floculacin o un precipitado franco, produciendo un gran sedimento en el fondo del tubo de ensayo.

MATERIALES: Clara de huevo Papaya Man molido Yogurt Pollo molido crudo Cualquier snack Pan 7 tubos de ensayo Reactivo Biuret Gradilla, varillas de vidrio, mortero, pipetas, petris, plumn indeleble.

PROCEDIMIENTO: TUBO DE CONTROL: Colocamos 5ml de Reactivo de Biuret en un tubo de ensayo y aadimos la clara de huevo. Observamos y anotamos los resultados. MUESTRA PROBLEMA: Rotulamos los otros tubos y reemplazamos la clara de huevo por los materiales que llevamos para la prctica. REACCION POSITIVA: Se produjo por presencia de pptidos y protenas, pero no por aminocidos libres, ya que el Biuret vira un color violeta ante la presencia de enlaces pepiticos.

DISCUSIN Prueba de Benedict en glucosa Algunos azcares tienen la propiedad de oxidarse en presencia de agentes oxidantes suaves como el Ion Fe3+ o Cu2+. Esta caracterstica radica en la presencia de un grupo carbonilo libre, el cual es oxidado y genera un grupo carboxilo. Por lo tanto, aquellos azcares con un grupo carbonilo libre son llamados azcares reductores y aquellos en los que el grupo carbonilo se encuentra combinado en unin glicosdica se conocen como azcares no reductores. Existen varias reacciones qumicas que permiten determinar si se est en presencia de un azcar reductor o no. La prueba de Benedict es una de ellas y se basa precisamente en la reaccin o no de un azcar con el Ion Cu2+. El reactivo de Benedict contiene soluciones de carbonato de sodio, sulfato de cobre, y citrato de sodio. El Na2CO3 confiere a la solucin un pH alcalino necesario para que la reaccin pueda llevarse a cabo. El citrato de sodio mantiene al Ion Cu2+ en solucin ya tiene la propiedad de formar complejos coloreados poco ionizados con algunos de los metales pesados. Con el cobre produce un complejo de color azul. Si se le agrega al reactivo una solucin de azcar reductor y se calienta hasta llevar la mezcla a ebullicin, el azcar en solucin alcalina a elevadas temperaturas se convertir en D-gluconato y su ene-diol, rompindose luego en dos fragmentos altamente reductores, los cuales con sus electrones expuestos, reaccionarn con el Cu++. Se obtiene entonces un azcar oxidado y dos iones Cu+. Posteriormente el Cu+ producido reacciona con los iones OH- presentes en la solucin para formar el hidrxido de cobre: Cu + + OH - Cu (OH) (precipitado amarillo) El hidrxido pierde agua 2Cu (OH) Cu2O (precipitado rojo ladrillo) + H2O

La aparicin de un precipitado amarillo, anaranjado, o rojo ladrillo evidencia la presencia de un azcar reductor. Lugol en carbohidratos (almidn) Es una reaccin especifica del almidn, el reactivo de lugol se intercala por la molcula de almidn y esto se detecta por la coloracin violeta que toma la mezcla. Este polisacrido esta formado por molculas de glucosa y es exclusivo de las clulas vegetales. Realmente est formado por dos tipos de polmeros ambos de glucosa: la amilosa que es la que realmente se tie con el yodo del lugol y la amilopectina. La coloracin producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la molcula de almidn. No es por tanto, una verdadera reaccin qumica, sino que se forma un compuesto de inclusin que modifica las propiedades fsicas de esta molcula, apareciendo la coloracin azul violeta. Sudan III en Lpidos El colorante Sudan no reacciona con los lpidos de ninguna forma. Se trata de un colorante rojo o rojo-amarillento que tiene una alta afinidad por lpidos, graso, triglicridos y ceras. Cuando me refiero a alta afinidad, es que se une a ste tipo de sustancias qumicas de forma no covalente. No hay un enlace qumico como tal entre los lpidos y el rojo Sudn. Sino una serie de interacciones de tipo lipoflico (ya que tanto el colorante como la sustancia a la que se une son de baja polaridad). Por lo tanto el rojo Sudn sirve para indicar si en una muestra dada (alimento, extracto, tejido etc), sta tiene entre sus constituyentes una cierta cantidad de lpidos o grasas. Mtodo de Biuret en Protenas Se basa en la formacin de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptdicos en medio bsico. 1Cu2+ se acompleja con 4 NH. La intensidad de coloracin es directamente proporcional a la cantidad de protenas (enlaces peptdicos) y la reaccin es bastante especfica, de manera que pocas sustancias interfieren. La sensibilidad del mtodo es muy baja y slo se recomienda para la cuantificacin de protenas en preparados muy concentrados (por ejemplo en suero). BIBLIOGRAFA http://nocturno3.blogspot.es/

http://www.juntadeandalucia.es/averroes/recursos_informaticos/co ncurso2001/accesit_4/glucidos.html http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biolmol/pdfs/27%20M%C3%89TODOS%20PARA%20LA %20CUANTIFICACI%C3%93N%20DE%20PROTE%C3%8DNAS.pdf Principios de Qumica. Editorial Mdica Panamericana. http://es.scribd.com/doc/7185652/Guia-de-Estudio-Carbohidratosy-Lipidos

ANEXOS CUESTIONARIO 1. Explique el fundamento de cada reaccin y cules son los componentes de los reactivo Biuret, Benedict, Lugol y Sudan III. 2. Por qu es importante la identificacin de biomolculas en productos biolgicos? 3. Por qu los lpidos son energticamente ms importantes que los carbohidratos? 4. Qu otros reactivos nos permitiran realizar la misma identificacin de biomolculas? Por qu? 5. Por qu se utiliza la glucosa y el almidn como modelo para las determinaciones en esta prctica? Desarrollo 1. El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de protenas, pptidos cortos y otros compuestos con dos o ms enlaces peptdicos en sustancias de composicin desconocida. Est hecho de hidrxido potsico (KOH) y sulfato cprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4O64H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de protenas, y vira a rosa cuando se combina con polipptidos de cadena corta. El Hidrxido de Potasio no participa en la reaccin, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar. Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un mtodo colorimtrico que permite determinar la concentracin de protenas de una muestra mediante espectroscopa ultravioleta-visible a una longitud de onda de 540 nm (para detectar el in Cu2+).

Formula qumica del Biuret del Biuret

Representacin 3D

Procedimento Se toma un tubo de ensayo y se colocan tres centmetros cbicos de albmina de huevo, es decir la parte transparente. Se aaden 2 centmetros cbicos de solucin de hidrxido de sodio al 20%. Ms adelante se agregan 4 5 gotas de solucin de sulfato cprico diluida al 1%. El resultado es que la mezcla se torna de color violeta, indicando la presencia de protenas.

Reactivo de Benedict CuSO4 . 5H2O Citrato sdico Na2CO3 (anhidro) Agua destilada

Se disuelve todo en el agua destilada. Lugol Yodo Yoduro potsico Agua destilada Se mezclan los tres y se filtra la disolucin 3. Lpidos de almacenamiento de energa: Los lpidos (generalmente en forma de triacilgiceroles) constituyen la reserva energtica de uso tardo o diferido del organismo. Su contenido calrico es muy alto (10 Kcal/gramo), y representan una forma compacta y anhidra de almacenamiento de energa. A diferencia de los hidratos de carbono, que pueden metabolizarse en presencia o en ausencia de oxgeno, los lpidos slo pueden metabolizarse aerbicamente. Lpidos de reserva de agua:

Los lpidos representan una importante reserva de agua. Al poseer un grado de reduccin mucho mayor que el de los hidratos de carbono, la combustin aerobia de los lpidos produce una gran cantidad de agua (agua metablica). As, la combustin de un mol de cido palmtico puede producir hasta 146 moles de agua (32 por la combustin directa del palmtico, y el resto por la fosforilacin oxidativa acoplada a la respiracin). En animales desrticos, las reservas grasas se utilizan principalmente para producir agua (es el caso de la reserva grasa de la joroba de camellos y dromedarios). Lpidos de produccin de calor: En algunos animales (particularmente en aquellos que hibernan), hay un tejido adiposo especializado que se llama grasa parda o grasa marrn. En este tejido, la combustin de los lpidos est desacoplada de la fosforilacin oxidativa, por lo que no se produce ATP en el proceso, y la mayor parte de la energa derivada de la combustin de los triacilgliceroles se destina a la produccin calrica necesaria para los perodos largos de hibernacin. En este proceso, un oso puede llegar a perder hasta el 20% de su masa corporal. Lpidos de funcin estructural: El medio biolgico es un medio acuoso. Las clulas, a su vez, estn rodeadas por otro medio acuoso. Por lo tanto, para poder delimitar bien el espacio celular, la interfase clula-medio debe ser necesariamente hidrofbica. Esta interfase est formada por lpidos de tipo anfiptico, que tienen una parte de la molcula de tipo hidrofbico y otra parte de tipo hidroflico. En medio acuoso, estos lpidos tienden a autoestructurarse formando la bicapa lipdica de la membrana plasmtica que rodea la clula. En las clulas eucariotas existen una serie de orgnulos celulares (ncleo, mitocondrias, cloroplastos, lisosomas, etc) que tambin estn rodeados por una membrana constituda, principalmente por una bicapa lipdica compuesta por fosfolpidos. Las ceras son un tipo de lpidos neutros, cuya principal funcin es la de proteccin mecnica de las estructuras donde aparecen. Lpidos de la regulacin celular: Los organismos pluricelulares han desarrollado distintos sistemas de comunicacin entre sus rganos y tejidos. As, el sistema endocrino genera seales qumicas para la adaptacin del organismo a circunstancias medioambientales diversas. Estas seales reciben el nombre de hormonas. Muchas de estas hormonas (esteroides, prostaglandinas, leucotrienos, calciferoles, etc) tienen estructura lipdica. Lpidos de funcin cataltica:

Hay una serie de sustancias que son vitales para el correcto funcionamiento del organismo, y que no pueden ser sintetizadas por ste. Por lo tanto deben ser necesariamente suministradas en su dieta. Estas sustancias reciben el nombre de vitaminas. La funcin de muchas vitaminas consiste en actuar como cofactores de enzimas (protenas que catalizan reacciones biolgicas). En ausencia de su cofactor, el enzima no puede funcionar, y la va metablica queda interrumpida, con todos los perjuicios que ello pueda ocasionar. Ejemplos son los retinoides (vitamina A), los tocoferoles (vitamina E), las naftoquinonas (vitamina K) y los calciferoles (vitamina D) Los lpidos son biomolculas orgnicas formadas bsicamente por carbono e hidrgeno y generalmente tambin oxgeno; pero en porcentajes mucho ms bajos. Adems pueden contener tambin fsforo, nitrgeno y azufre. Es un grupo de sustancias muy heterogneas que slo tienen en comn estas dos caractersticas: 1. Son insolubles en agua. 2. Son solubles en disolventes orgnicos, como ter, cloroformo, benceno, etc. 4. Carbohidratos REACCION DE MOLISCH Este ensayo permite detectar la presencia de hidratos de carbono en una muestra; se basa en la accin hidrolizante y deshidratante que ejerce el cido sulfrico sobre estos compuestos. Como se sabe, los cidos concentrados originan una deshidratacin de los azcares para rendir furfurales, que son derivados aldehdicos del furano. Los furfurales se condensan con los fenoles para dar productos coloreados caractersticos, empleados frecuentemente en el anlisis colorimtrico REACCION DE BARFOED Este ensayo se emplea para diferenciar a los mono de los disacridos. Estos ltimos reaccionan ms lentamente con el acetato cprico, debido probablemente al tamao molecular, aunque tambin pueden estar implicados otros factores tales como una interaccin ms compleja con los dos anillos monosacridos. Reactivo de Fehling El reactivo de Fehling, tambin conocido como Licor de Fehling, es una disolucin descubierta por el qumico alemn Hermann Von Fehling y que se utiliza como reactivo para la determinacin de azcares reductores. Sirve para demostrar la presencia de glucosa en la orina. El licor de Fehling consiste en dos soluciones acuosas: Sulfato de cobre cristalizado, 35 g; agua destilada, hasta 1.000 ml.

Sal de Seignette(Tartrato mixto de Potasio y Sodio), 150 g; solucin de hidrxido de sodio al 40%, 3; agua, hasta 1.000 ml. Ambas se guardan separadas hasta el momento de su uso para evitar la precipitacin del hidrxido de cobre (II). El ensayo con el licor de Fehling se funda en el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehdo. ste se oxida a cido y reduce la sal de cobre (II) en medio alcalino a xido de cobre (I), que forma un precipitado de color rojo. Un aspecto importante de esta reaccin es que la forma aldehdo puede detectarse fcilmente aunque exista en muy pequea cantidad. Si un azcar reduce el licor de Fehling a xido de cobre (I) rojo, se dice que es un azcar reductor. Se utiliza como reactivo para la determinacin de azcares reductores, y es til para demostrar la presencia de glucosa en la orina, y tambin para detectar derivados de la glucosa como la sacarosa o la fructosa. Al reaccionar con monosacridos, se torna verdoso; si lo hace con disacridos, toma el color del ladrillo. Ensayo de Barfoed: Aparece un precipitado blanco de cido mcico galactrico. Sirve para identificar la galactosa los azcares que la contiene. Ensayo de Molish: Reaccin de furfural e hidroximetil-furfural con -naftol, dando lugar a derivados de color prpura. Es una prueba general de azcares. Ensayo de Bial: Reaccin del furfural e hidroximetil-furfural con orcinol en medio con HCl, dando lugar a derivados de color azul. Es una prueba especfica de pentosas. Ensayo de Seliwanoff: Reaccin del furfural e hidroximetil-furfural con resorcinol, dando lugar a derivados de color rosa-rojo. Es una prueba especfica de hexosas. Las cetosas en medio cido se deshidratan ms rpidamente que las aldosas, por lo que ambos grupos pueden diferenciarse en funcin del tiempo que tarda en aparecer el producto coloreado. Protenas Reaccin de Milln La reaccin del Milln se debe a la presencia del grupo hidroxifenilo en la molcula proteica. Cualquier compuesto fenlico que no est sustituido en la posicin 3,5 como la tirosina, el fenol y el timol producen resultados positivos en esta reaccin. De estos compuestos, slo la tirosina est presente en las protenas, de

manera que slo las protenas que tienen este aminocido ofrecen resultados positivos. En esta prueba los compuestos mercricos en medio fuertemente cido (cido ntrico del reactivo) se condensan con el grupo fenlico formando un compuesto de color rojo ladrillo o rojizo. La prueba no es satisfactoria para soluciones que contienen sales inorgnicas en gran cantidad, ya que el mercurio del reactivo del Milln es precipitado y se vuelve negativo, razn por la cual este reactivo no se usa para medir albmina en orina. Debe tomarse en cuenta que en el caso de que la solucin a examinar sea muy alcalina, debe ser previamente neutralizada, ya que el lcali precipitara al ion mercurio en forma de xidos amarillos. Adems, protenas como la ovoalbmina producen un precipitado blanco que progresivamente por accin del calor se torna rojo; pero, las peptonas, dan solamente una solucin de color rojo.