Extracción de proteínas

Frijol
Concentración de proteínas(mg/g)
Frijol bayo 8000mg/90g
Las proteínas de almacenamiento representan en el frijol el 50% de la proteína
que contiene el grano.
*Albúminas representan un 14.8-20.8%,
*Globulinas 33-45%
*Glutelinas 12.8-41.2%
*Prolamina en general menos del 1%
Método de extracción:
1.- Moler finamente y desgrasar con una mezcla de cloroformo-metanol
proporción 4.1(p/v) para lograr la creación de harina que se utilizara para la
extracción de proteínas.
2.-Pesar 0.1g de harina desgrasada y extraer con 1ml de solución amortiguadora
de tris-HCL (tri-hidroximetil-aminometano) 250mM(milimolar) pH 7 glicerol al
10% (v/v), SDS (compuesto para romper enlaces no covalentes) al 1% (p/v) y 2-
mercaptoetanol al 4%.
3.- Hervir 5 minutos en agua destilada y centrifugar a 13000rpm durante 5
minutos.
4.- Extraer el sobrenadante para someter a electroforesis en gel de
poliacrilamida.
5.-Fijar geles con una mezcla de metano -acido acético-agua (4:1:5) por 30
minutos (Emplear geles de poliacriamida al 10% en condiciones
desnaturalizantes con amortiguador de tricina).
6.-Teñir con azul de coomassie al 0.1%disuelto en acido acético al 10% por 2
hrs.
7.-Cuantificar por triplicado mediante el método de Brad Ford, usando curva de
calibración con albumina de suero bovino .