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ISSN 1816-0719

The Biologist (Lima). Vol. 8, Nº1, enero-junio 2010

ARTÍCULO ORIGINAL DESARROLLO EMBRIONARIO DE HELISOMA PERUVIANUM (BRODERIP 1832) (PULMONATA: PLANORBIDAE) BAJO CONDICIONES DE LABORATORIO EMBRYONARY DEVELOPMENT OF HELISOMA PERUVIANUM (BRODERIP, 1832) (PULMONATA: PLANORBIDAE) UNDER LABORATORY CONDITIONS
Cecilia Matzunaga1, Giannina Passuni2, Jose Pino1 & José Iannacone3
1 Laboratorio de Reproducción y Biología del Desarrollo. Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad Nacional Mayor de San Marcos (UNMSM), Lima, Perú. Casilla 11-058, Lima 11, Perú. Tel.: +51 6 197000 – 1529; fax: +51 6 197000 –1509. 2 Laboratorio de Biología y Sistemática de Invertebrados Marinos, Departamento de Zoología. Facultad de Ciencias Biológicas, UNMSM, Lima, Perú. 3 Laboratorio de Ecofisiología Animal. Facultad de Ciencias Naturales y Matemática. Universidad Nacional Federico Villarreal, Lima, Perú. Correo electrónico: matcce@hotmail.com (C. Matzunaga)

The Biologist (Lima) 8:35-42.

ABSTRACT The embryonic development stages of Helisoma peruvianum (Broderip, 1832) (Pulmonata: Planorbidae) reared under controlled conditions is described. 1 250 embryos located in 31 capsules (Mean = 40. 32) were maintained at 20 ± 1ºC, 24 h of continued artificial light. 7 embryonic stages were recognized: 2 cells, 4 cells, morulae, blastula, gastrula, trochophore "veliger" and juvenile. The greatest mortality occurs at 192 h after being placed on the juvenile. The number of eggs per capsule had a significant difference in comparison to H. trivolvis.
Key words: embryonic development, freshwater fauna, gastropod, Helisoma peruvianum, mortality.

RESUMEN
Se describe el desarrollo embrionario de Helisoma peruvianum (Broderip, 1832) (Pulmonata: Planorbidae) bajo condiciones de ambiente controlado. Se mantuvieron 1250 embriones localizados en 31 capsulas (promedio = 40,32) a 20 ± 1ºC y 24 h continuas de luz artificial. Se reconocieron 7 estadios embrionarios: 2 células, 4 células, mórula, blástula, gástrula, trocófora “veliger” y juvenil. La mayor mortalidad se produce a las 192 h post puesta en el estadio juvenil. Se obtuvieron diferencias significativas en el número de huevos por cápsula en comparación a H. trivolvis.
Palabras clave: desarrollo embrionario, fauna dulceacuícola, gasterópodo, Helisoma peruvianum, mortalidad.

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2007. compararlos con algunos detalles del desarrollo embrionario de H. Los huevos son de tipo telolecito y presentan segmentación en espiral (Baker 1945). peruvianum a una temperatura constante. Se juntaron parejas de caracoles de H. El desarrollo es planctotrófico y lecitotrófico (Beadle 1969. 2008).1mg· L . Recientemente Passuni et al. 8. (2008) estudió el efecto de cloruro de mercurio en el desarrollo embrionario de H. 2003). sin 36 embargo en H. Ecuador y Colombia (Kawano et al. peruvianum con un diámetro promedio de 18 mm. El género Helisoma es nativo de América del Norte. de esta manera tomando solo las hojas de la planta acuática con una pinza de relojero. trivolvis. El monitoreo del desarrollo . 1879) y Helisoma peruvianum (Broderip. juveniles y adultos (Arthur et al. 2003). Camargo & Alonso 2007). pero se ha registrado su presencia en la región Neotropical. Para facilitar la obtención de las cápsulas se agregó Elodea sp. el genero Helisoma esta representado por Helisoma trivolvis (Say 1817). Este género sirve de modelo en una amplia gama de estudios como: neurobiológicos (Jiménez et al. 2003. 1987. en el mes de julio de 2008. Cowie 2001). La concentración de cloro libre -1 fue 0. 2002). Nº1. tanto en estadio de huevos (Tchounwou et al. En el laboratorio. fueron aclimatados por 30 días en un recipiente rectangular de vidrio de 6 L de capacidad. 1991). El fotoperiodo empleado fue de 24 h de emisión de luz continua mediante 2 fluorescentes lineales (dayligth x 32 watts). Letelier et al. se los pudo trasladar a una placa de Petri para su posterior observación al microscopio estereoscopio. Perú. Cole et al.. Esta selectividad se debe por una parte a su distribución geográfica. Vol. los cuales se acondicionaron en recipientes cilíndricos (bocales) de 60 mm de alto y 100 mm de diámetro para el cruce y puesta de cápsulas. et al. ubicados en la costa norte y central (Ramírez et al. C. peruvianum y en H. 1985). Goldberg et al. 2004. trivolvis. a una temperatura 20 + 1 ºC y alimentados con comida balanceada para peces en forma de hojuelas. su participación en la cadena trófica en ambientes acuáticos y por su cápsula transparente donde se puede observar y seguir el desarrollo embrionario directamente (Passuni et al. Ramírez et al. 2007).The Biologist (Lima). El objetivo del presente trabajo fue estudiar los estadios embrionarios en H. ene-jun 2010 Matzunaga. con agua de grifo declorinada reposada por 7 días. taxonomía y ecología (Paraense 2003. 2006. En el Perú. Rupert & Barnes 1995. Vavoulis et al. peruvianum fueron colectados en acuarios de la ciudad de Lima. La temperatura fue similar a la de aclimatación. 2002). Helisoma duryi (Wetherby. 1832). embriones (AboulEla & Khalil 1987. Luego de 12 h se confirmó la presencia de cápsulas en cada recipiente (Góngora et al. duryi no existen reportes sobre su biología y desarrollo temprano. 2008) ecotoxicologicos. la tasa de mortalidad entre los diferentes estadios y. especialmente en los andes del Perú. INTRODUCCIÓN Los embriones de gasterópodos pulmonados siguen un desarrollo directo a partir de huevos fertilizados hasta caracoles juveniles dentro de una capsula llena de un fluido perivitelino albuminoide (Kuang et al. Los escasos trabajos en relación a estos caracoles se refieren solo a distribución. MATERIALES Y MÉTODOS Especímenes de H.

4 células. Los huevos estuvieron cubiertos por una membrana 37 . 1c) y blástula (1d). peruvianum bajo condiciones de laboratorio. 144 h y 192 h. mórula. Posteriormente (aproximadamente 1 h después) observamos el estadio de 4 células (Fig. 48.Whitney para comparar el número de huevos en las dos especies mediante el programa SPSS versión 15. El porcentaje de RESULTADOS En la Tablas 1 y 2 y en la Fig.g). donde se completa el desarrollo y sucede la eclosión (Tabla 1). gástrula. Hay que destacar que al final de este estadio se observa una rotación del embrión alrededor de la capsula por la presencia de cilios en la superficie externa del mismo. trivolvis se tomaron los datos de Passuni et al.The Biologist (Lima). a las 48 h: blástula. Para comparar el número de huevos por cápsula entre H. (2008). 8. Nº1. Se diferenciaron 7 estadios embrionarios: 2 células. Antes de las 4 h se observaron los estadios de dos células resaltando los blastómeros de igual tamaño (Fig. trocófora “larva veliger” y juvenil. Vol. debido a que las condiciones de cultivo de H. encontramos a las 24 h. 72 h. de las cuales se obtuvo el porcentaje total de cada estadio y el de la mortalidad. Los embriones se consideraron muertos cuando no mostraron movimiento de rotación durante aproximadamente 30 s (Passuni et al. La posición del embrión varió dentro de la capsula. ubicadas adheridas a la pared del recipiente o en las hojas de Elodea. encontrando este estadio hasta las 72 h (ver tabla I). El huevo fertilizado empieza el proceso de clivaje inmediatamente después de la puesta.4. 2008). vitelina. el proceso de gastrulación se inicia a partir de las 24 h. Para H. peruvianum y H. 1a). Se observo y fotografió el desarrollo embriónico dentro de las capsulas de los estadios de clivaje temprano hasta la respectiva eclosión mediante un microscopio de campo claro Carl Zeiss Jena® donde se adaptó una cámara digital Cannon/Leica®. La gástrula se caracteriza por un aplanamiento en uno de los polos del embrión (polo vegetal). Después del estadio de blástula. el núcleo fue más oscuro. peruvianum se evaluaron 31 cápsulas conteniendo un número total de 1 250 huevos con un promedio estimado de 40 huevos por cápsula. blástula. Se evaluaron un total 31 cápsulas obtenidas en tres replicas. g). Se utilizó la prueba estadística U de Mann. La mayoría de las puestas ocurrieron durante las horas nocturnas o tempranas en las mañanas. 1 se presentan los resultados del desarrollo embrionario y de mortalidad de H. trivolvis fueron similares. El pH promedio del agua fue de 7. 1b) y h después a la mórula (Fig. Los estadios larvales se caracterizan por la organogénesis y cefalización del embrión. a las 144 horas trocófora y “veliger” (Fig f) y finalmente a las 192 h: el estadio juvenil (Fig. La capsula consistió en una envoltura doble de naturaleza gelatinosa llena con un fluido albuminoide claro o ligeramente coloreado. 1a-d). estadios de mórula (Fig c). el citoplasma estuvo teñido de marrón oscuro a claro. gástrula y trocófora. 24 h. d) y gástrula (Fig. sugiriendo que el desarrollo es asincrónico iniciada el clivaje. blástula (Fig. ene-jun 2010 Desarrollo embrionario de Helisoma embrionario fue a las 0 h. e). a las 72 h: gástrula y trocófora. A) Clivaje (Fig. en consecuencia. B) Gastrulación y estadios larvales (Fig e .0.

03 18. La mortalidad al final del tratamiento fue de 17.34 + 6.27 5.92 35.58 ± 22. peruvianum durante 192 h post puesta.78 77. Nº1.71 38 . 37 + 10. trivolvis fue de 18.31 + 11.42 + 3.001) para el número de huevos en las dos especies.60 + 12.55 + 8.84 69.60 + 20.75 47. 35 + 12.01 + 5.09 + 35. con una diferencia significativa (U-Mann & Whitney. 24 h Mortalidad Mortalidad acumulada 2.70 + 20.15 + 12. 05 144 h 1.14 + 28.79 + 11. 26 48 h 0.32 y en 45 cápsulas de H. la segunda mayor mortalidad se encuentra a las 24 h (2. 00 12. 69 72 h 2.29 + 34.81 + 1.61 31. peruvianum el número promedio de huevos fue de 40. Vol.51 + 11. En 31 cápsulas de H.21 10. 0h 2 células 4 células Mórula Blástula Gástrula Trocófora Larva Velíger Juvenil 14.71 (Tabla 2).88 + 47.88.88 + 5. Porcentaje de desarrollo embrionario de H.87 7.13 85.46 + 39. peruvianum post puesta a 20 ± 1 ºC en condiciones de laboratorio.56 + 8. 21 13. p < 0.30 Tabla 2. 8.10). 10 17.The Biologist (Lima). C. 36 + 8. Porcentaje de mortalidad embrionaria de H. Tabla 1. 27 9.27). ene-jun 2010 Matzunaga.46 1. et al.54 + 8. mayor mortalidad se encuentra a las 192 h en el estadio juvenil (3.80 + 3.56 + 8.88 + 5.00 24 h 48 h 72 h 144 h 192 h 48.05 38. 65 10. 43 192 h 3.

Nº1. ene-jun 2010 Desarrollo embrionario de Helisoma A B C D E F G Figura 1. larvales y juveniles de H. D) blástula. B) cuatro células. C) Mórula. Estadios embrionarios. E) gástrula.The Biologist (Lima). Aumento 100X. A) dos células. 8. Vol. 39 . F) larva veliger y G) juvenil. peruvianum cultivados en condiciones de laboratorio.

C. de este modo se observó el estadio de 2 células. trivolvis. entre 2 hasta 3 embriones. incluyendo en este último los estadios de más de 4 células. El desarrollo embrionario de H. debido a que presenta una rotación característica y además posee un velo ciliado lo que es típico de este período de desarrollo. luego se observó una blástula con la presencia del blastocele. Los nemátodos (no identificados) tienen una acción más dañina. en ambos casos. era uno de los protozoos mas abundantes adheridos en el contorno de las cápsulas. similar periodo es descrito por Naranjo (2003) en H. 40 . Morelos.The Biologist (Lima). Durante el proceso de desarrollo se observó algunas anormalidades en los embriones. Para este estudio hemos considerado el estadio transicional trocófora-juvenil (Diefenbach et al. Los embriones de H. Vorticella sp. están individualmente compartimentalizados en cápsulas con un número variable (x=40. 8. trivolvis (Naranjo 2003). Los huevos son tipo telolecitos y presentan segmentación en espiral. en la trocófora hay un giro y rotación evidente. la región cefálica y pedal se distinguen muy bien. el desarrollo embrionario es determinado y directo. trivolvis que contiene en las masas de huevos entre 5 a 50 embriones (Goldberg 1995). et al.32) a ¯ diferencia de H. en la larva velíger. en la mayoría de los casos sólo uno de ellos desarrolló completamente y los otros no eran viables. ya que se introducen en la cápsula y matan a los embriones. Una diferencia observada con respecto a H. igualmente los órganos. La eclosión de los juveniles en H. Nº1. Vol. trivolvis fue que durante el desarrollo en una misma cápsula se puede tener diferentes estadios. Para evitar la contaminación de las demás cápsulas se eliminaron las que presentaron nemátodos. donde los estadios desde el cigote al juvenil se desarrollan dentro de la cápsula transparente. si bien indica en forma general una temperatura óptima mayor de 25 ºC. estos individuos no lograban eclosionar. finalmente se observa la etapa de juvenil donde el embrión está completamente formado y desaparece el velo y se abre paso a través de la cápsula para emerger al medio. 4 células y mórula como los estadios iniciales. peruvianum. México han demostrado que la autofecundación no es una forma alternativa de reproducción tan eficiente en esta especie (Paraense & Correa 1988). como también se dio el caso de que ambos embriones se desarrollaron y eclosionaron. ene-jun 2010 Matzunaga. peruvianum se efectúa en 8 días. donde el autor no precisa la temperatura utilizada. En el agua de cultivo se observó protozoarios y nemátodos que ocasionaron daños durante el desarrollo de los embriones. DISCUSIÓN Experimentos realizados con H. peruvianum es mas precoz que lo registrado en H. siendo crucial en el desarrollo embrionario. También se observó dentro de una misma cápsula mas de un embrión. Los estadios que tuvieron mayor duración fueron gástrula y trocófora debido a que en éstos hay organogénesis y rotación. mientras que los estadios de 2 y 4 células y juvenil son mas cortos debido a la rapidez inicial de la división celular y en el caso del estadio juvenil el embrión solo adquiere tamaño y peso. tamaño más pequeño o no formación de conchilla incompleta. trivolvis procedentes de Zempoala. 1991) como el estadio de “veliger”. seguido de una gástrula donde se puede observar la diferencia entre un ectodermo y mesodermo.

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